Sunteți pe pagina 1din 17

Morfologia Helicobacter pylori

H. pylori , un patogen uman dominant, este acum recunoscut ca primul membru al unui gen
ultrastructural divers.Forma morfologică predominantă a acestui gen este curbată până la
spirală; Totuși, unii membri au o formă de tijă scurtă sau conică. Toate helicobactele sunt motile
prin intermediul flagelului. Aceste caracteristici de bază ale morfologiei și motilității sunt
considerate a fi avantajoase pentru aceste organisme datorită localizării lor în stratul mucus al
tractului gastro-intestinal al oamenilor și al unei varietăți de animale. Acest capitol se va
concentra pe trăsăturile ultrastructurale ale H. pylori , cu descrieri limitate ale unor caracteristici
mai neobișnuite observate în ceilalți membri ai acestui gen. Anumite aspecte ale detaliului
ultrastructural al helicobacterelor, de exemplu, flagelul căptușit și ureaza de suprafață, au fost
implicate în capacitatea lor de a supraviețui în medii ostile cum ar fi mucoasa gastrică acută și
capacitatea lor de a induce boala.

Morfologia de bază

H. pylori in vivo și în condiții optime in vitro este o bacterie în formă de S, cu 1 până la 3 rotații,
cu lungimea de 0,5 x 5 μm, cu un trunchi de 5 până la 7 flageluri polarizate ( 40 , 51 ). Această
morfologie a fost corelată cu motilitatea maximă in vitro ( 106 ). Majoritatea helicobacterelor
posedă această morfologie de bază a unei forme S cu flagelul polar, păstrat, deși variațiile în
mărime și numărul de spirale / rotații sunt văzute ( Figura 1 ). Cu toate acestea, alte forme de
variante sunt observate într-o serie de alte specii ( 80 ). Helicobacter mustelae este o tijă scurtă
cu flagelălaterală și polară, în timp ce Helicobacter felis , Helicobacter
bizzozeronii , Helicobacter suis și Helicobacter heilmannii au o morfologie elicoidală și o
motilitate caracteristică a tirbușorului ( figura 1 ). Helicobacter bilis , Helicobacter
trogontum și Helicobacter rappini au o formă fuziformă, adică o tijă cu capete conice. Fibrele
periplasmice, care sunt în mod clar distincte de flagel, au fost observate pe H. felis , Helicobacter
muridarum , H. bilis, H. trogontum și " H. rappini " ( figura 1 ). Două dintre genurile recunoscute
în prezent, Helicobacter pullorum și Helicobacter rodentium , și o nouă specie
nouă, Helicobacter ganmani recent propuse, au toate flagelile neascrate (B. Robertson,
comunicare personală). În general, se consideră că morfologia spirală și flagelul sunt esențiale
pentru colonizarea mucusului gastric și intestinal ( 34 ).

figura 1

Morfologia helicobacterelor. (A) H. pylori în formă de S cu cinci până la șapte flageluri polare
acoperite. Emisie pe teren SEM, bar = 0,5 μm. (B) Detaliu al cârligului de flagel. Pată negativă,
bar = 0,05 μm. (C) Heliciforme H. felis cu periplasmic (mai mult ...)

Organizarea internă

Secțiunile subțiri ale H. pylori dezvăluie detaliul tipic al peretelui celular al unei bacterii gram-
negative care constă din membrane exterioare și interioare sau plasmatice separate de periplasm
cu o grosime de aproximativ 30 nm.Citoplasmă densă conține material nucleoid și
ribozomi. Analiza peptidoglicanului din H. pylori a arătat că are o compoziție unică de
muropeptide, fiind mai puțin complexă decât cea observată în alte bacterii gram-negative
( 26 ).În majoritatea speciilor helicobacter examinate, o zonă cu suprafețe luminoase este
localizată în regiunile terminale ( 57 ). Asociat cu această regiune și situat în apropierea locului
de introducere a flagelui este o "membrană polară".Aceasta este o bandă densă de electroni cu
densitate de 6 până la 8 nm, situată la 20 nm sub membrana plasmică, care este încă legată de
ea. Caracteristici similare au fost descrise într-un număr de alte genuri,
inclusiv Spirillum și Campylobacter ( 37 , 72 ). Brock și Murray au arătat că membrana polară
este un ansamblu de molecule ATPase situate probabil în acest loc pentru a genera energie
pentru motilitatea sau sinteza peretelui celular ( 19 ). O astfel de membrană nu a fost observată
în H. mustelae ; În schimb, O'Rourke și colab. A identificat o zonă densă de electroni de 80 ×
100 nm adiacentă sau sub punctul de inserție a flagelului și a propus ca aceasta să poată efectua o
funcție similară cu membrana polară observată în celelalte helicobactere ( 81 ).
Granulele intracelulare au fost observate la un număr de helicobacteri gastrici incluzând bacterii
asemănătoare cu H. heilmannii și H. felis . Cu toate acestea, Bode și colab. Le-au descris în
detaliu în H. pylori și le-a confirmat identitatea ca granule polifosfatice ( 17 ). Spectroscopia cu
pierderi de energie electronică (EELS) a identificat un semnal de fosfor proeminent în trei locații
diferite: citoplasma, stâlpul de flagel și asociat cu membrana celulară.Granulele (semnalul)
localizate în citoplasmă au fost cele mai mari, de 0,05 până la 0,2 pm în dimensiune, amorfe și
asemănătoare cu vacuole, și în general considerate ca o sursă de energie și un rezervor de
fosfor. Acelea situate în apropierea stâlpului de flagel au fost mai mici, cu dimensiuni de 0,02
μm, mai compacte și mai eterogene și, eventual, cu energie necesară pentru motilitatea
celulelor. Colorarea specifică cu săruri de plumb a fost necesară pentru a detecta granulele mici,
de mărime> 0,01 μm, asociate cu membrana celulară care au fost implicate în menținerea
membranei citoplasmatice.

Recent, studiile privind feritina din H. pylori au arătat că într-o tulpină de tip sălbatic cultivată
într-un mediu bogat în fier, pot fi detectate agregate citoplasmatice care conțin fier. Nu s-au
observat astfel de structuri într-un mutant care nu avea gena prf care codifică feritina ( 12 ). Două
forme de agregate ar putea fi identificate: agregate amorfe mari (0,05 până la 2 pm), care conțin
fier, fosfor, oxigen și carbon și o formă granulară mai mică (0,02 până la 0,1 pm) care conține
fier, oxigen, Și carbon. Sa sugerat că feritina este o componentă majoră a citoplasmei care
conține fier care ar putea fi utilizată de către bacterie dacă este necesar, astfel încât să permită
supraviețuirea în condiții de mediu dure.

Suprafața celulei

Ureaza, analogul GroEL și alte proteine din membrana exterioară

Studii timpurii efectuate de Jones și colab. A arătat că, după tratamentul cu sarcozinat, s-au putut
observa structuri mici "gogoasa" cu diametrul de 12 nm cu o gaură centrală de culoare 4-nm cu
culoarea închisă ( Fig.2 ) ( 51 ).Ulterior, s-a arătat din studiile in situ și din procedurile de
purificare a proteinelor că aceste structuri au reprezentat urează localizată pe suprafața celulară,
cu evidențierea eliminării acestei enzime de pe suprafața celulei ( 16 , 41 ). Ele au fost de
asemenea văzute pe H. mustelae ( 81 ). Examinarea acestor "gogoși" prin colorare și umbrire
negativă a arătat că acestea erau structuri macromoleculare care s-au așezat împreună în perechi,
care s-au stivuit din nou pentru a forma agregate de patru ( 9 ).

Figura 2

Structurile de suprafață ale H. pylori . Pată negativă a bacteriilor tratate cu sarcosinat care
prezintă urează, reprezentată de structurile mici, asemănătoare gogoșilor (săgeată mică) și baza
de inserție a flagelului (săgeată mare), bar = 0,1 μm.

O a doua proteină, identificată ca un homolog GroEL (Hp60K), a fost, de asemenea,


descrisă. Este foarte asemănătoare cu ureaza și apare ca o structură tip disc de 13 nm, cu o
simetrie de rotație de șapte ori, comparativ cu o simetrie triplu observată cu unele particule de
urează. Discurile Hp60K au format, de asemenea, stive regulate de patru ( 10 ). Prin excluderea
flagelinului, a ureazei și a lui GroEL din preparatele lor, Doig și Trust au putut descrie opt alte
antigene cu membrană externă de H. pylori , dintre care șase au fost expuse la suprafață. Două
dintre antigene au fost identificate ca lipopolizaharide (LPS) care au reacționat cu membrana
exterioară și teaca de flagelă și s-a găsit că variază în funcție de specificitatea antigenică în
funcție de tulpina H. pylori examinată. Trei dintre antigenii rămași au fost considerați a fi
proteine porin, fără o funcție identificabilă a celorlalte trei proteine ( 31 ).

Vaccinarea citotoxinei

Citotoxina vacuolară (VacA) a H. pylori a fost asociată cu o proteină> 600 kDa constând dintr-
un număr de polipeptide de 95 kDa care se formează din două subunități 37 și 58 kDa în
dimensiune. Studiile microscopice electronice au arătat că citotoxina seamănă cu o floare cu șase
sau șapte petale, de 5 până la 6 nm în diametru, cu o cantitate de 12 până la 15 nm în cavitatea în
sensul acelor de ceasornic și o cavitate centrală de inel de 12 până la 15 nm pentru a obține un
diametru total de 30 nm ( 27 , 64 ) . Au fost observate două forme, unul cu un inel central ridicat
și o formă plată. Lupetti și colab. A propus că aceasta sa datorat pierderii structurilor inelului
central după proteoliză ( 64 ). Cu toate acestea, aceasta a fost mai târziu provocată de către Cover
et al. ( 27 ). În ultimul raport, sa constatat că, după tratamentul cu acid, citotoxina a constat din
până la 12 petale fără inel central sau un număr de petale împrăștiate. Aceste structuri s-ar putea
reasocia în formația de flori de șase până la șapte petale după neutralizare. Cover et al. A propus
că citotoxina VacA a fost compusă din subunități de 12 ~ 90 kDa care au fost asociate pentru a
forma un dodecamer. Dodecamerul a constat din două matrice cu 6 membri care aveau două fețe
distincte, una plată și una cu inel central ridicat. Aceste două forme distincte orientate față în
față.

Asemănări au fost atrase de ambele grupuri de asemănare a acestui citotoxin cu toxinele AB


observate într-o serie de alte bacterii. Cu aceste toxine, subunitatea B se leagă de membrana
celulară, rezultând formarea unui canal ionic care permite internalizarea subunității active
A. Indiferent dacă acesta este un model adecvat și dacă VacA necesită activare acută, este nevoie
de clarificări suplimentare.

Flagella și fibrele periplasmice

Toate helicobactele sunt motile prin intermediul flagelui, care în majoritatea cazurilor sunt
acoperite, cu configurații variind de la un singur flagel polar până la smocuri bipolare de până la
20 de flageluri. Ultrastructural, sa demonstrat că flagelul este compus dintr-un corp bazal format
dintr-o tijă și patru inele concentrice situate în diferitele straturi ale complexului peretelui celular,
un cârlig care, la rândul său, se conectează la un filament ( fig.1b ) ( 30 ). Flagelul H. pylori are
un diametru de 30 nm, constând dintr-un filament interior cu diametrul de 12 nm, înconjurat de o
manta, a cărei membrană exterioară este continuă cu membrana exterioară a celulei
( 40 , 51 ). Un bulb terminal este văzut pe mai multe flageluri care este posibil un artificat din
cauza fixării. Un disc de 90 nm, considerat a fi corpul bazal al flagelului, poate fi văzut în mod
clar pe preparatele colorate negativ ale punctelor de inserție a flagelurilor. Acest disc poate fi
separat prin tratamentul cu sarcozinat și este degenerat prin tripsină ( 51 ). Procesele de
frământare a punctelor de inserție au evidențiat o structură convexă înconjurată de o matrice
regulată pentru a forma ceea ce a fost denumit "stud" și a fost văzut în multe bacterii
multiflagulate ( 72 ).
Caracterizarea proteinelor asociate cu componentele de flagelă indică faptul că proteina cârlig
(FlgE) are o dimensiune de 78 kDa, în timp ce filamentul constă din două proteine de flagelină,
FlaA (53 kDa) și FlaB (54 kDa).Mutantii lipsiti de gena flgE au fost nemotati si lipsiti
de filamente; Totuși, încă s-au produs flageline ( 82 ). Studiile microscopice cu microscopie au
arătat că FlaB este situat în apropierea cârligului, cu FlaA dominant care cuprinde restul
filamentului ( 54 ). Ambele subunități de flagelină s-au dovedit a fi necesare pentru motilitatea și
capacitatea de colonizare persistentă a mucoasei gastrice ( 52 ). Teaca de flagelă posedă o
membrană bilaterală, conține acizi grași caracteristice lipopolizaharidelor și este marcată în mod
specific cu un anticorp monoclonal care reacționează cu o proteină de 29 kDa ( 39 , 63 ).

S-au raportat fibre periplasmice la H. felis , H. muridarum , H. bilis , H. trogontum și " H.


rappini " ( 80 ). Ele sunt situate chiar sub mepmbrana exterioară în periplasm și variază în funcție
de specie. Au un punct de inserție diferit la flagelă. Se pot vedea benzi electronice dense, dându-
le un aspect striat ( Figura 1d ). Sa sugerat că acestea sunt proteine contractile implicate în
motilitate ( 57 ).

Formele de coccoid

În comun cu multe alte bacterii în formă de spirală, membrii genului Helicobacter "se ridică" și
formează celulele coccoide pe măsură ce îmbătrânesc. După 3 până la 4 zile, celulele coccoide
de cultură bacteriană domină, iar acest lucru este asociat cu o scădere dramatică a culturii,
determinată de numărul de CFU. Există controverse cu privire la faptul dacă aceste celule sunt
viabile, neviabile, dar latente sau doar morți. Ei au fost implicați ca rezervoare posibile de
bacterii expuse la condiții de mediu dure și implicate în transmiterea infecției sau ca celule in
vivo responsabile de eșecuri de tratament. Schimbările ultrastructurale care apar ca urmare a
vârstei de H. pylori în cultura in vitro au fost bine descrise și demonstrate a fi independente de
metoda utilizată pentru a induce formarea de coccoide ( Figura 3 ) ( 11 , 55 ). Inițial, există o
îngustare în periplasmul de pe o parte a organismului, cu o acumulare de material dens care are
ca rezultat formarea de celule în formă de U. Aceste forme "U" se transformă apoi în forma
coccoidă, cu o creștere a cilindrului protoplasmic și întreținerea sistemului dublu de
membrană. Analiza peptidoglicanului în timpul acestei conversii a evidențiat modificări
dramatice similare cu cele observate la speciile de Bacillus în timpul sporulării; Totuși, autorii au
legat aceste modificări mai degrabă de faza de creștere decât de modificările morfologice ( 26 ).
Figura 3

Forme coccoide de H. pylori . (A) Inițierea inițială în spațiul periplasmic care are ca rezultat
formarea de celule în formă de U. (B) Conversia la forma coccoidă. Secțiunea superioară, bar =
0,5 μm.

Dovezile care susțin conceptul că formele de coccoidă sunt degenerate și nu sunt capabile de
creștere provin dintr-o serie de studii care arată că, pe măsură ce vârsta celulelor, nivelurile de
exprimare a ADN-ului și ARN și mRNA scad cu degradarea acizilor nucleici, fragmentarea
nonrandom a ribozomului ARN și nici o dovadă a potențialului de membrană necesar pentru
procese precum fosforilarea oxidativă ( 55 , 70 , 74 ). Profilurile proteice ale formelor de coccoid
s-au schimbat de la original și s-au legat mai degrabă de procesarea și degradarea proteinelor
decât de sinteza proteinei de novo ( 55 ). Cu toate acestea, există dovezi contradictorii care susțin
conceptul de stare viabilă dar inertă, așa cum este indicat prin menținerea integrității celulare și a
sintezei ADN în culturi vechi de 3 luni. Elementele densitate electronică, identificate de EELS ca
conținând fosfor, indică faptul că metabolismul ar putea fi menținut în prezența polifosfatilor
detectați în celulele coccoide ( 18 ). Proteinele cum ar fi CagA și UreC s-au dovedit a scădea în
timp, în timp ce altele, de exemplu, 26-kDa și 16S rRNA, nu arată o scădere pe o perioadă de 21
de zile ( 87 ). De asemenea, respirația celulară a scăzut de-a lungul timpului, dar ar putea fi încă
detectată în 40% din celule după 45 de zile de cultură in vitro ( 23 ). A fost observată o reducere
a detectării unor proteine care leagă penicilina, dar nu toate, în timpul formării coccoidelor
( 29 ). De asemenea, sa constatat că antigenele specifice formelor de coccoidă sunt exprimate in
vivo ( 11 ).

Există date opuse privind capacitatea celulelor coccoide de a infecta o gazdă și de a induce
patologia, cu celulele coccoide capabile să infecteze șoarecii, dar nu purceii gnotobiotici
( 22 , 23 , 101 ). Rolul acestor forme de coccoide în patogeneza și transmiterea infecției necesită
clarificare, cu standardizarea aspectelor cum ar fi metodele utilizate pentru a induce formarea de
coccoide, determinarea viabilității celulare și resuscitare și durata de timp în care celulele au fost
expuse în condiții nefavorabile. Se demonstrează că celulele neviabile dovedite a fi capabile să
reinfecteze o gazdă și să poată fi cultivate din gazda infectată înainte ca formele de coccoidă să
poată fi considerate cu adevărat o formă inactivă capabilă de reinfecție.

Efectele in vitro ale agenților antimicrobieni

Au fost descrise efectele asupra ultrastructurii H. pylori de către un număr de agenți diferiți. S-a
arătat că o gamă de antibiotice β-lactamice induce formarea de celule sferice cu detalii mai
detaliate care arată formarea "bleburilor de perete celular", a veziculelor membranoase libere sau
a structurilor tubulare și dispariția parțială sau completă a membranei celulare externe
( 7 , 29 ). Aceste modificări morfologice au fost atribuite legării uneia sau mai multor proteine de
legare a penicilinei detectate în H. pylori, care au ca rezultat inhibarea enzimelor implicate în
sinteza peptidoglicanului. Acțiunea singurului monolactam testat, aztreonam, sa dovedit a fi
diferită, acest antibiotic provocând filamentare în celulele H. pylori , iar acest lucru a fost atribuit
faptului că acest antibiotic a fost singurul testat care se leagă preferențial la o singură penicilină
Care crede că este esențială pentru morfologia elicoidală ( 29 ).

Antibioticele cu antibiotice macrolide au condus la curățarea ariilor centrale ale celulelor și acest
lucru a fost asociat cu agregarea ribozomală și dezvoltarea depreciată a peretelui. Nu s-au
observat modificări structurale evidente în prezența metronidazolului, ranitidinei sau
bismutului; Cu toate acestea, cu acesta din urmă, particule complexe de bismut pot fi detectate
sub peretele celular ( 7 ). S-a arătat mai târziu că citratul de bismut induce fragmentarea și lizarea
celulară ca și citratul de bismut de ranitidină, acesta din urmă având ca rezultat o perturbare mai
severă a structurii intracelulare ( 105 ). Tratamentul cu inhibitorul de lansoprazol al pompei de
protoni a determinat alungirea celulelor și constricția și alterarea suprafeței celulare ( 73 ). Mulți
au susținut că aceste modificări in vitro ar putea indica schimbări ale H. pylori în mucoasa
gastrică umană în timpul tratamentului cu antibiotice.

Aspecte ultrastructurale ale țesuturilor infectate

Identificarea și caracterizarea caracteristicilor ultrastructurale ale țesutului infectat cu H.


pylori furnizează informații valoroase în patogeneza infecției cu Helicobacter . Cu toate acestea,
utilizarea acestor caracteristici pentru a evalua rezultatele clinice ale infecției este limitată. Acest
sondaj rezumă trăsăturile ultrastructurale care reprezintă interacțiunea factorilor de virulență H.
pylori cu mecanismele defensive ale gazdei.

H. pylori și bariera mucoasei gastrice

În tractul gastrointestinal superior, bariera mucoasei gastrice reprezintă prima linie de apărare
împotriva factorilor agresivi. Bacteriile devin în mod normal prinse în mucus și sunt excretate în
fecale ( 100 ). Cu toate acestea, expresia și motilitatea ureazelor permit H. pylori să
supraviețuiască tranzitoriu într-un mediu acid și să colonizeze persistent stratul mucus.

Mucus gastric

H. pylori este localizat, de obicei, în stratul mucos gros, în imediata apropiere a celulelor
epiteliale gastrice ( 78 ). A fost propusă o slăbire a barierului mucoasei de către H. pylori , ceea
ce duce, în unele cazuri, la colapsul acesteia, deoarece H. pylori posedă o genă care este aproape
identică cu o genă de mucinază a Vibrio cholerae ( 75 , 76 , 91 ).O astfel de activitate a
mucinazei poate fi responsabilă de dizolvarea structurii net-like a mucusului și a zonelor limpezi
asemănătoare cu peșteri, înconjurând H. pylori ( fig.4 ) observate in vivo prin tehnici
microscopice electronice ( 14 , 15 ). Cu toate acestea, studiile in vitro sugerează că pierderea
structurii gelului ar putea să apară și datorită pH-ului local ridicat generat de activitatea ureazei
de H. pylori mai degrabă decât de activitatea mucolitică ( 2 ). În plus, H. pylori poate inhiba
răspunsul secretor al celulelor mucoase in vitro, indicând un efect potențial dăunător asupra
cantității acestui mecanism primar de apărare a mucoasei gastrice ( 69 ).

Figura 4

Secțiunea ultrarapidă a colonizării mucusului gastric de H. pylori . Bar, 1 μm.

Gastronomie hidrofobică
O caracteristică a mucoasei gastrice care a fost implicată cu proprietatea de barieră este cea a
hidrofobiei ( 61 ). Acest surfactant este o componentă esențială a barierului mucoasei și se
datorează unui monostrat adsorbit sau unui strat multiplu de fosfolipide active pe suprafață
secretate de celulele mucoase gastrice ( fig.5 ) ( 46 ). Această proprietate a barierei nonwettable a
fost documentată pentru a fi prezentă într-o serie de specii de animale prin utilizarea unor metode
electronice specifice microscopice ( 53 ).

Figura 5

Agent tensioactiv gastric de mucoasă antrală umană. Colorarea specifică de iodoplatinat a


structurilor bogate în fosfolipide. Secțiunea ultrathin; Indicatorul de bari reprezintă 0,5 μm. Mg,
granule mucoase; Lu, lumen.

Studiile ultrastructurale precum și măsurătorile unghiului de contact la om indică faptul că H.


pylori poate acționa ca agent agresiv prin distrugerea acestui surfactant gastric și a proprietății
sale hidrofobe ( 45 , 67 , 94 ). Pe baza studiilor pe animale efectuate la șoareci, Lichtenberger et
al. Au concluzionat că infecția cu H. felis induce o transformare precoce a stomacului de la o
stare hidrofobă sensibilă la acid, care poate declanșa dezvoltarea ulterioară a gastritei
( 60 ). Această modificare cauzată de H. felis pare să fie un eveniment precoce, care apare în
primele 2 săptămâni de infecție. Mai mult, rezultatele indică faptul că reducerea observată în
hidrofobicitatea suprafeței mucoasei și concentrația fosfolipidelor observată la subiecții umani
infectați cu H. pylori are loc, de asemenea, la șoarecele infectat cu H. felis . Enzimele care
hidrolizează fosfolipidele prin generarea de lizofosfatidilcolină sau prin scăderea numărului de
molecule de surfactant adsorbite sunt susceptibile de a compromite acest strat. Prezența
activității fosfolipazei A2 (PLA2) și a fosfolipazei C (PLC) a fost demonstrată în tulpinile H.
pylori in vitro ( 56 , 102 ).

Consecințele aderării la celulele epiteliale


În general, adeziunea la suprafețele mucoasei este importantă pentru virulența completă a multor
agenți patogeni bacterieni în gazda umană. Legarea promovează eliberarea de toxine bacteriene
și deseori precede penetrarea celulelor epiteliale țintă de către organismele invazive. H.
pylori recunoaște receptorii celulelor epiteliale specifice, iar aderența pare a fi un proces activ
care include transcripția genetică ( 90 ).

Podeste

Sa demonstrat că adeziunea H. pylori la celule epiteliale gastrice are ca rezultat formarea


microvilliilor și a piedestalului. Acesta din urmă este asociat cu rearanjarea citoscheletului sub
bacteria aderentă și se numește atașare și ștergere ( 90 ). Termenul atașare și ștergere descrie o
formă intimă de interacțiune bacteriană cu membrana plasmatică a celulelor epiteliale care
rezultă din distrugerea citoscheletului microvilos. În plus, actina polimerizată în zonele de
atașare bacteriană se acumulează în piedestalurile de aderență la interfața gazdă a bacteriei
( 71 ). Aceste constatări sunt similare cu cele descrise pentru Escherichia coli enteropatogene
(EPEC), și acest lucru a fost asociat cu gene codificate pe o insulă patogenică ( 59 ). În plus, ca
EPEC, legarea H. pylori la celulele epiteliale induce fosforilarea tirozinei a proteinelor în celula
gazdă adiacentă la locul aderenței bacteriene ( 90 ). Cu toate acestea, informațiile privind
modificările morfologice și rearanjamentele citoscheletului induse de bacterie sunt contradictorii
( 32 , 49 , 92). Există încă o nevoie de studii ultrastructurale atentă asupra efectelor
atașamentului H. pylori la celulele epiteliale gastrice și evenimentele ulterioare declanșate de
acesta. Rezultatele contradictorii se pot datora liniilor celulare diferite utilizate în studii și
probabil se datorează diferențelor dintre studiile in vitro și in vivo.

Din cauza datelor contradictorii, pare important să se descrie caracteristicile ultrastructurale ale
infecției cu H. pylorila modelele animale și să se compare aceste constatări cu cele la
oameni. Recent, tulpina de H. pylori din Sydney a demonstrat că induce caracteristici
ultrastructurale asemănătoare într-un model standardizat de șoarece, adică un atașament apropiat
și formarea unor structuri echivalente cu "piedestale de adeziune" observate în infecția umană
cu H. pylori 58 ). Astfel de piedestaluri de aderență au fost observate și la dihori, care rezultă din
atașarea helicobacterului, H. mustelae , cu mucoasa gastrică ( 81 ).
Dezvoltarea site-urilor de atașament specializate reprezintă un aspect important al patogenității,
iar prezența și frecvența acestora trebuie să fie corelate cu gradul de gastrită. Se pare că toxinele
eliberate de bacterii sunt responsabile de deteriorarea celulelor și exercită un efect maxim atunci
când sunt concentrate în domenii precum membrana celulară sau spațiile intercelulare
( 20 , 44 , 77 ).

Efecte citotoxice

Biopsiile epiteliului gastric uman infectat cu H. pylori prezintă umflarea celulară, vacuolizarea
citoplasmatică și expansiunea compartimentelor endosomale. Cu toate acestea, aceste modificări
se găsesc într-o măsură mai mică in vivo decât în cazul experimentelor in vitro utilizând liniile
celulare ( 93 ). Acest lucru se poate datora interacțiunii mai intense a factorilor de virulență
izolați cu culturile celulare in vitro comparativ cu situația mai complexă in vivo, în care diferiți
factori pot interacționa.

Anticorpul genei asociate cu citotoxina (CagA)

Una dintre cele mai intens studiate proteine de H. pylori a fost CagA, însă funcția sa nu a fost
determinată. Proteina CagA poate fi administrată din bacterii atașate în citoplasma gazdă printr-
un sistem de secreție specific tipului H. pylori codificat de insula de patogenie ( cag PAI), unde
este fosforilată pe resturile de tirozină ( 95 ). Poate fi capabil să influențeze căile de transmitere a
semnalului eucariote și plasticitatea citoscheletică ( 8 , 89 ). PAI cag are semnificație biologică și
poate furniza o explicație pentru observația că H. pylori care produce CagA este mai interactivă
cu gazda decât cele care nu o fac. Cu toate acestea, aceste efecte nu sunt vizibile la nivel
ultrastructural și nu prezintă manifestări caracteristice.

Vaccinarea citotoxinei A (VacA)

Dovezile epidemiologice și experimentale au demonstrat în mod clar asocierea dintre producția


VacA și apariția leziunilor tisulare ( 98 ). Cel mai cunoscut efect VacA este capacitatea sa de a
induce vacuole citoplasmatice în diferite linii celulare eucariote prin modificarea traficului
membranar intracelular la nivelul endosomal / preliozomal târziu. Se sugerează că expresia
virulenței H. pylori este declanșată prin contactul cu celula gazdă. După cum se observă pentru
alte bacterii patogene, moleculele efectoare ale virulenței sunt secretate activ pe suprafața celulei
gazdă sau chiar translocate prin membrana celulară gazdă a mamiferelor ( 38 , 68 ).

Vacuolele apar ca structuri rotunde de până la câteva micrometri în diametru, o dimensiune care
poate fi atinsă numai după fuziunea mai multor compartimente mai mici ( figura 6 ). Toxina ar
putea promova fuziunea endosom-endosom, fie direct, fie prin stimularea unei proteine
fusogene. Cu toate acestea, se știe că amoniacul este, de asemenea, capabil să cauzeze
vacuolizarea celulară ( 84 , 88 ). Mecanismele specifice prin care VacA provoacă aceste efecte
nu sunt bine înțelese, dar studii recente indică faptul că VacA interacționează direct cu o
moleculă țintă citoplasmatică ( 83 ). Este bine stabilit faptul că funcția barieră epitelială depinde
de funcția corespunzătoare a citoscheletului celular și observarea faptului că VacA perturbă
citoscheletul și aderențele focale poate oferi o perspectivă asupra mecanismelor care stau la baza
acestor modificări.

Figura 6

Vaculii intracitoplasmatici (V) în celulele epiteliale gastrice induse in vivo de H.


pylori . Secțiunea ultrathin. Bar, 0,5 pm.

citoscheletului

Citozelul constă în microfilamente, microtubuli și filamente intermediare, care au proprietăți


contractile și participă la diferite funcții celulare. Mai multe toxine bacteriene, cum ar fi
toxina Clostridium botulinum sau toxina A de la Staphylococcus aureus , sunt cunoscute ca
provoacă modificări ale arhitecturii citoscheletale ( 1 , 103 ). Constatările lui Pai și
colab. Sugerează că citotoxina vaccinului H. pylori perturbă arhitectura citoscheletică și
aderențele focale, interferând astfel cu funcțiile celulare dependente de citoschelet și cu
transmiterea semnalelor legate de răspândirea și creșterea celulelor ( 83 ). Recent, sa demonstrat
că VacA este puternic implicat în interacțiunea cu filamente intracelulare, cum ar fi actina și, de
asemenea, între filamentele intermediare și compartimentele endosomale tardive
( 28 , 90 , 96 , 99 ). Rac, care aparține familiei Rho GTPase, reglează activitatea citotoxinei
VacA în citoplasmă, controlând astfel organizarea citoscheletului ( 47 ). Pentru acest proces este
necesară activarea genelor și sinteza proteinelor noi ( 28 ). Implicațiile biologice ale acestor
descoperiri sunt variate. Cu toate acestea, investigațiile morfologice se limitează la investigațiile
microscopice ușoare, iar studiile ultrastructurale lipsesc.

Strânse joncțiuni

Există doar două căi prin care moleculele pot traversa epiteliul: transcellular și
paracelulular. Celulele epiteliale gastrice sunt strâns legate între ele, formând o barieră continuă
care restricționează selectiv mișcarea substanțelor între compartimentele exterioare și
interioare. Joncțiunea strânsă pare a fi bariera limitatoare a vitezei care restricționează curgerea
prin calea paracellulară. Orice întrerupere sau modificare a arhitecturii epiteliale poate duce la o
descreștere a integrității acestei funcții de barieră ( 5 ). Ultrastructural, joncțiunea strânsă a fost
bine definită. Apare în secțiune subțire ca o serie de contacte individuale între membranele
plasmatice ale celulelor epiteliale adiacente. Aceste puncte de contact corespund preparatelor de
fracționare prin înghețare la o rețea variabilă complexă de fibre și toroane situate în planul
membranei plasmatice ( 5 ). Spre deosebire de ceea ce se poate aștepta din analiza micrografelor
electronice care sugerează un aranjament mai static, joncțiunile strânse intestinale sunt zone
foarte dinamice, iar permeabilitatea lor se poate schimba ca răspuns la stimulii externi și
intracelulari.

Sa demonstrat în studiile timpurii că H. pylori este asociat în mod constant cu joncțiunile


intercelulare in vivo și se sugerează că acest lucru se datorează prezenței metaboliților preferați
sau a factorilor de creștere ( 14 , 42 ). Ohkusa și colab. A investigat joncțiunile intercelulare în
mucoasa gastrică umană a pacienților cu ulcer gastric și a constatat o discontinuitate și o scădere
a numărului de fire joncționale strânse și Noach et al. A observat că bacteriile au fost adesea
găsite în jurul joncțiunilor intercelulare cu anomalii ale complexelor de joncțiune strânse ( Fig.7 )
( 77 , 79 ). În plus, Terres și colab. A arătat că H. pylori distruge funcția de barieră a unui epiteliu
model prin producerea unei creșteri rapide a permeabilității joncțiunilor strânse și o scădere
dramatică a rezistenței electrice transepiteliale (TER) ( 99 ). Modificările TER reflectă variația
integrității strânse a joncțiunii, așa cum se arată prin microscopia electronică ( 65 ).
Figura 7

Aspectul ultrastructural al nervurilor strânse. (A) țesut gastric normal de la un subiect


neinfectat; (B) prepararea dintr-un țesut infectat cu H. pyloridemonstrează un complex
rudimentar de joncțiune strânsă cu număr redus de fire de joncțiune strânse. (Mai Mult...)

Studiile in vitro ridică posibilitatea ca vacA să fie implicat în creșterea selectivă a permeabilității
ionilor și a moleculelor cu masă moleculară mică ( 85 , 86 ). S-a observat o scădere a TER, dar
acest lucru nu a rezultat neapărat din întreruperea intersecțiilor intercelulare. Nu s-au observat
semne de citotoxicitate acută sau de vacuolizare intracelulară. Prin urmare, trecerea mărită în
stratul epitelial trebuie să urmeze o cale transcelulare. Se sugerează că aderarea bacteriană la
celulele epiteliale este necesară pentru a induce acest pasaj transcelular. Totuși, modificările
observate ale joncțiunilor strânse in vivo pot fi în principal datorate acțiunii mediatorilor
inflamației eliberate de celulele inflamatorii în mucoasa gastrică ca răspuns la colonizarea H.
pylori . Recent, sa speculat că actina joacă un rol în permeabilitatea joncțiunii strânse
( 36 , 43 ). Mai multe toxine bacteriene par să afecteze bariera de joncțiune prin întreruperea
actinei și prin distorsionarea și acumularea fibrilelor joncționale, așa cum se observă în imaginile
cu fracturi de îngheț. Cu toate acestea, rolul jucat de VacA - dacă există vreunul - în acest proces
este încă neclar.

H. pylori intracelulare

H. pylori a fost considerat un colonizator extracelular, dar există date care susțin o localizare
intracelulară a bacteriilor in vivo și in vitro ( 3 , 4 , 14 , 35 , 62 ). În studiile histopatologice,
rareori se înregistrează invazia tisulară de către H. pylori , cu micile bacterii observate ocazional
în lamina propria, H. pylori a fost identificat în citoplasma celulelor epiteliale gastrice
( 6 , 66 ). În plus, antigene H. pylori au fost găsite în lamina propria a mucoasei gastrice
( 6 , 66 ).Deși H. pylori nu este în mod normal gândit ca un microorganism invaziv, studiile
microscopice electronice ale mucoasei gastrice infectate au arătat atât bacterii viabile intacte, cât
și formele degradate în celulele gazdă ( 6 , 24 , 107 ).

Bacteriile au fost găsite în vacuolele mucoase sau în lizozomii celulelor epiteliale. Bode și
colab. Au descris infiltrarea celulelor epiteliale gastrice de către H. pylori la 10% dintre pacienții
lor cu ulcerații duodenale active ( 14 ).Cu toate acestea, invazia a fost observată numai în
celulele mucoase de suprafață metaplastice ale duodenului.Internalizarea H. pylori de către
celulele epiteliale ar oferi o sursă gata de antigeni H. pylori și un răspuns imun susținut.

Aceste observații in vivo sunt compatibile cu experimentele in vitro utilizând culturi celulare
( 62 , 96 , 104 ). Evans și colab. Raportează că H. pylori ar putea intra în citoplasma celulelor
Hep-2 cultivate ( 35 ). Sa concluzionat că H. pylori a fost internalizat fie prin endocitoză mediată
de receptor, fie printr-o cale strâns legată. Birkness și colab. Au fost, de asemenea, în măsură să
demonstreze H. pylori în gropi acoperite și H. pylori care păreau că au fost luate în celulele
gazdă prin endocitoză ( 13 ). Odată ce a fost luat în celulă, H. pylori a fost observat în vacuole în
celulele epiteliale cultivate.

Relevanța observațiilor de mai sus și soarta organismelor intracelulare sunt încă necunoscute,
deși un studiu a arătat o corelație între densitatea bacteriană ridicată a colonizării, bacteriile
intracelulare și leziunile epiteliale severe ( 24 ). În plus, există observații că H. mustelae se
găsește, de asemenea, în citoplasma celulelor epiteliale la dihor. Aceste date privind
internalizarea bacteriană sunt, de asemenea, conforme cu observația clinică că terapeuții care
utilizează antibiotice incapabile să intre în celule eucariote, cum ar fi amoxicilina, sunt mai puțin
eficiente în eradicarea H. pylori, în pofida susceptibilității in vitro a organismului ( 48 ).

H. pylori , H. felis și " H. heilmannii " au fost, de asemenea, descrise în canaliculi de celule
parietale inactive, nonsecretoare și în celule parietale ( 24 , 50 , 97 ). Totuși, consecința
patofiziologică a interacțiunii celulelor parietale cu H. pylori nu este cunoscută, deși bacteria
eliberează diferiți factori capabili să inhibe celulele parietale ( 21 ). În plus, H. pylori este
fagocitozat de fagocite mononucleare și de granulocite ( figura 8 ). Cu toate acestea, bacteriile
internalizate nu sunt omorâte, iar motivele pentru acest defect de apărare a gazdei sunt neclare
( 3 , 25 ). Aceste date susțin ipoteza că H. pylori intracelulare reprezintă un rezervor de
organisme care contribuie la persistența bacteriană, la deteriorarea țesutului gazdă și, probabil, la
eșecul tratamentului.
Figura 8

H. pylori în citoplasma unui granulocit neutrofil. Secțiunea ultrathin. Nu, nucleu, săgeți, H.
pylori . Bar, 1 μm.

Concluzie
Studiile morfologice și ultrastructurale au furnizat date importante cu privire la natura
interacțiunilor H. pylori -host.Acestea au ajutat cercetătorii să caute să înțeleagă procesele
complexe care duc la boală. Aceste studii sunt, de asemenea, esențiale pentru interpretarea
datelor provenite din experimente pe animale.