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INTRODUCCION

El ADN está presente en todas las células y es el material hereditario que contiene toda la
información genética que la célula necesita. En 1953, James D. Watson y Francis Crick
descubrieron la forma de la molécula del ácido desoxirribonucleico o ADN. Esta molécula es
semejante a una escalera en forma de caracol o espiral y se le conoce como la Doble Hélice. La
escalera de ADN, está formada por dos cadenas que se unen por medio de peldaños. los peldaños
forman parejas gracias a cuatro pares de bases nitrogenadas llamadas nucleótidos que se conocen
como adenina (A), timina (T), guanina (G), y citosina (C). los ácidos nucleicos son de dos tipos,
púricas y pirimidínicas.

Un nucleótido tiene tres componentes: una base púrica o pirimídica, unida a través de uno de sus
nitrógenos, mediante un enlace N.glicósido, a un azúcar cíclico de cinco carbonos (la combinación
de la base con el azúcar se denominanucleósido) y un fosfato, esterificado con el carbono en
posición S del azúcar. Los nucleótidos existen también en formas activas, tipo di- y trifosfato, en
las que uno o dos grupos fostato estan unidos al nucleótido por enlaces de anhídrido fosfórico
(pirofosfato ).

Los nucleótidos se unen entre si para formar largas cadenas de polinuclóetidos, esta unión entre
monómeros nucleótidos se realiza mediante enlaces fosfodiéster entre los carbonos de las
posiciones 3’ de un nucleótido con la 5’

Cada hélice es una serie de nucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster en los que un grupo
fosfato forma un puente entre grupos OH de dos azúcares sucesivos (posiciones 3’ de un
azúcar y 5’ del siguiente).
Las dos hélices se mantienen unidas mediante puentes de hidrogeno producidos
entre las bases nitrogenadas de cada hélice. Siguiendo los datos de Chargaff (1959), la
Adenina de una hélice aparea con la Timina de la hélice complementaria mediante dos
puentes de hidrógeno. Igualmente, la Guanina de una hélice aparea con la Citosina de la
complementaria mediante tres puentes de hidrógeno.
Las dos hélices por razones de complementaridad de las bases nitrogenadas son
antiparalelas, teniendo secuencias de átomos inversas. Una hélice lleva la secuencia 5’P →
3’ OH , mientras que la hélice complementaria sigue la secuencia de átomos 3’OH → 5’P.
Desnaturalización
Las cadenas del DNA se separan cuando se rompen los enlaces de hidrógeno existentes entre las
bases. Esta fusión de la estructura secundaria puede llevarse a cabo en solución, aumentando la
temperatura ó bien por titulación con ácidos ó álcalis. Los ácidos protonizan los nitrógeno s del
anillo de A,G y C; los álcalis desprotonizan los nitrógeno s del anillo de G y T. La poco corriente
labilidad de los enlaces glicosídicos de la purina a bajo pH hace que la utilización de ácidos no sea
conveniente para los experimentos de desnaturalización. La estabilidad del duplex es una función
directa del número de pares G-C que contiene unidos por un triple enlace de hidrógeno; cuanto
mayor es la fracción molar de pares G-C, tanto más elevada es la temperatura o el pH de la fusión.
La temperatura correspondiente al punto medio de la fusión del DNA (Tm) está determinada por
su contenido en G-C

ABSORBANCIA A 260 nm
El estado físico de los ácidos nucleicos está relacionado con su
capacidad de absorción de la luz ultravioleta (UV) a 260nm. El menor grado de absorción se
produce en estado de doble hélice, la absorción aumenta cuando se produce la desnaturalización
pasando a estado de hélice sencilla (efecto hipercrómico, aumento de la absorbancia) y, por
último, si degradamos este ADN de hélice sencilla a nivel de nucleótidos libres, de nuevo
aumenta la absorbancia.

Figura 1. Espectro de absorción Figura 2. Efecto hipercrómico


característico del DNA de doble cadena.

Referencias:
http://smcg.ccg.unam.mx/enp-unam/01-IntrodYEvolucion/structfuncDNA.pdf