LABORATORIO MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRÁCTICA DE LABORATORIO
Filtración por membrana

MARCO TEORICO

Para la determinación de coliformes totales y fecales en agua potable, la

legislación colombiana en la resolución 2115 de 2007, recomienda entre otras
técnicas, la de filtración por membrana.
La técnica de filtración por membrana utiliza un mecanismo mediante el cual
se atrapan en la superficie de una membrana microorganismos cuyo tamaño es
mayor que el tamaño del poro (0.45 um); esto gracias a una bomba eléctrica
que ejerce una presión diferencial sobre la muestra de agua haciendo que se
filtre. Los microorganismos de tamaño menor que el especifico del poro pasan
la membrana o quedan retenidos en su interior, las bacterias que dan en la
superficie de la membrana y luego esta es llevada a medio enriquecido,
selectivo o diferencial, quien a través de intercambio metabólico y una
incubación evidencian el crecimiento de microorganismos y Unidades
Formadoras de colonia. AMANA VVPCF, 2000).
Esta técnica es altamente reproducible y proporciona resultados numéricos,
es una manera rápida y simple de estimar las poblaciones bacterianas en el
aguay especialmente útil al evaluar grandes volúmenes o al realizar
diariamente muchas pruebas de Coliformes (HACH, 2000).
Fin de la conversación

OBJETIVO:

Este método se utiliza para medir la calidad sanitaria del agua potable.
 Materiales

- Pipetas estériles de 1 ml
- Cajas de Petri
- Asa
- Mechero de bunsen
- Porta objetos
- Microscopio
- Agua destilada
- Cristal violeta
- Lugol
- Alcohol cetona
- Fushina
- Filtros de membrana (poro de 0.45 um)
- Pinzas

Equipos
- Incubadora de 35 ± 2 °C
- Balanza
- Contador de colonias
- Pipeteador
- Bomba de vacío 15 cm Hg y < 25 Bar de presión

Medios de cultivo
- Agar Brillance
- Agar plate count

Reactivos:
Trisulfato de sodio
 NOMBRE: AGUA PEPTONADA BUFFERADA

USO: Medio de cultivo empleado para el pre enriquecimiento de microorga-

nismos a partir de diferentes muestras.
FORMULA (g/L) FUENTE PREPARACION

Peptona de carne 10,0 CARBONO Y NITROGENO Disolver 20 g del

polvo en 1 litro de
agua purificada.
Cloruro de sodio 5,0 SODIO
Reposar 5 minutos.
Mezclar calentando
Fosfato disódico 3,5 FOSFORO hasta ebullición
durante 1 minuto y
distribuir en
Fosfato monopotásico 1,5 FOSFORO recipientes
apropiados.

INTERPRETACION: El crecimiento microbiano se observa por la turbidez del

medio de cultivo

NOMBRE: Agar plate count

USO: Medio de cultivo utilizado para examen bacteriológico de comida, agua,

leche y otros productos lácteos.
FORMULA (g/L) FUENTE PREPARACION

Caseína enzimática Disolver 20 g del

5,0 Aminoácidos
hidrolizada polvo en 1 litro de
agua purificada.
Dextrosa 1,0 Hidratos de carbono Reposar 5 minutos.
Mezclar calentando
Extracto de levadura 2,5 Complejo B hasta ebullición
durante 1 minuto y
distribuir en
Agar 15,0 Nutrientes recipientes
apropiados.

INTERPRETACION: Después de la incubación contar todas las colonias

presentes.
 NOMBRE: AGAR BRILLANCE

USO: Utilizado para el aislamiento de salmonellae, a partir de heces y otras

muestras clínicas.
FORMULA (g/L) FUENTE PREPARACION

Extracto de levadura 3,0 Nutrientes Disolver 20 g del

polvo en 1 litro de
agua purificada.
Peptona de proteosa bacto 10,0 Nitrógeno
Reposar 5 minutos.
Mezclar calentando
Lactosa 10,0 C. fermentador hasta ebullición
durante 1 minuto y
distribuir en
Sacarosa 10,0 C. fermentador recipientes
apropiados.

Cloruro sódico 5,0 Sodio

Rojo fenol 0,08 Indicador

Agar 20,0 Nutrientes

Verde brillance 12,5mg Inhibir

INTERPRETACION: Ausencia o presencia de microorganismos desarrollados en

muestra de alimento.
 Descripción del método

 Tomar 150ml de muestra agregando trio sulfato de sodio para neutralizar

el cloro

 Pasar agua estéril por el sistema de filtración para desinfectar

 Colocar la membrana usando pinzas estériles en la bomba de vacío
 Pasar la muestra por el sistema

 Cultivar en agar brillance para coliformes totales

 Cultivar en agar plate count para mesofilos
 Incubar a 35°c por 24 a 48 horas
 Recuento de microorganismos
FLUJOGRAMA
Resultados obtenidos de la muestra de agua en avicultura
Agar brillance:
6200 UFC

Agar Plate Count:

5000 UFC

Análisis De Resultados
Para la determinación de coliformes totales y mesofilos en aguas crudas del área de
avicultura.
Empleamos el método de filtración por membrana: es útil para controlar los problemas
del agua potable y agua para el consumo animal, La técnica de filtración por
membrana utiliza un mecanismo mediante el cual se atrapan en la superficie de una
membrana microorganismos cuyo tamaño es mayor que el tamaño del poro (0.45
um); esto gracias a una bomba eléctrica que ejerce una presión diferencial sobre la
muestra de agua haciendo que se filtre. Los microorganismos de tamaño menor que
el especifico del poro pasan la membrana o quedan retenidos en su interior, las
bacterias que dan en la superficie de la membrana y luego esta es llevada a medio
enriquecido, selectivo o diferencial, quien a través de intercambio metabólico y una
incubación evidencian el crecimiento de microorganismos y Unidades Formadoras de
colonia
Los resultados que obtuvimos de la muestra de agua de avicultura no fueron los
esperados ya que se excedieron del límite permitido en la NTC lo recomendable es
tener un previo almacenamiento del agua y para que los microorganismos no se
proliferen en el agua adicionar un reactivo como cloro para que el agua este en
óptimas condiciones para el consumo de las gallinas.
BIBLIOGRAFIA:

https://www.google.com.co/webhp?sourceid=chrome-instant&ion=1&espv=2&ie=UTF-
8#q=filtracion%20por%20membrana

http://www.academia.edu/4395247/Practica_1_Microbiologia_Predictiva_Desarrollo_de
_un_modelo_de_relacion_entre_D.O_vs_Recuento_en_Placa