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Objetivos
Após a realização desta prática, você deverá estar apto a diferenciar levedura de bolor, executar
cultivo em lâmina, executar técnica de lactofenol azul de algodão, descrever os principais aspectos
macroscópicos de uma colônia, descrever os aspectos microscópicos dos fungos e executar técnica
de coloração de cápsula.
Introdução
Observação macroscópica:
Material:
- Placas de ágar Sabouraud previamente expostas ao ar em diferentes ambientes.
Ágar Sabouraud
Peptona 1g
Extrato de Levedura 0,5 g
Glicose 2 g
Ágar 1,5 g
H2O destilada 100 ml
pH 6,5
Lactofenol
Fenol 20 g
Ácido Lático 20 g
Glicerina 40 g
Azul de metileno (ou de algodão) 0,05 g
Água destilada 20 ml
Execução:
- Colocar sobre a lâmina duas gotas de lactofenol (azul de algodão ou azul de metileno).
- Retirar com alça de platina em gancho, um pequeno fragmento das colônias dos fungos
filamentosos e colocar sobre a lâmina contendo o corante.
- Abrir as estruturas com auxílio de estilete e gancho. Cobrir com lamínula e observar com
objetivas de 10 e 40 vezes.
Leitura e interpretação
Observar as estruturas visualizadas
- Micélio vegetativo: Clamidoconídio ou artroconídio. Tipo de hifa: septada ou asseptada.
- Micélio reprodutivo: esporos endógenos em esporangióforos e esporos exógenos conídios em
conidióforos. Conídias: forma e tamanho
Tratamento
As Clamídias são suscetíveis às tetraciclinas, como doxicilina e a macrolídeos, como eritromicina e
azitromicina. A penicilina não é efetiva. A droga de escolha para doenças sexualmente transmissíveis
por C. trachomatis é a azitromicina.
Prevenção
Além do uso de preservativos, principal método para prevenção de DST’s, a melhor medida para
limitar a transmissão de C. trachomatis é o tratamento correto do paciente e do parceiro sexual,
inclusive de indivíduos assintomáticos.
Agar Fubá
Fubá 20 g
Tween 80 5 ml
Agar Bacteriológico 15 g
Água destilada 500 ml
Água destilada 20 ml
- Adicionar o fubá em 250 ml de água e ferver até borbulhar. Filtrar o fubá em gaze dobrada
em quatro. Dissolver o ágar em 250 ml de água. Restaurar o volume da infusão de fubá para 250 ml,
com água quente, juntar as suspensões, ajustar o pH para 6,6 – 6,8 e adicionar o Tween 80. Esterili-
zar em autoclave a 120°C por 15 minutos e distribuir em placas de Petri estéreis.
Execução
- A cultura fúngica a ser utilizada deve ser recente e cultivada em meio sólido;
- Transferir um bloco do ágar com o auxílio de uma pinça estéril para a lâmina montada sobre
o suporte de vidro (tubo em L) contido dentro de uma placa de Petri, sob condições de assepsia (Fi-
gura 1);
- Retirar pequenas porções da colônia e semear nos quatro lados do bloco de meio;
- Cobrir o bloco com uma lamínula estéril, com cuidado;
- Molhar o algodão com água destilada estéril (cerca de 2 mL). A placa funcionará como uma
câmara úmida;
- Incubar as placas a temperatura ambiente até a observação do crescimento da cultura;
- Quando houver desenvolvimento satisfatório, submeta à ação do formol (0,5 mL durante 1
hora), retirar a lamínula do microcultivo, transferindo-a para uma nova lâmina contendo o corante
lactofenol azul de algodão em quantidade suficiente para corar o material fúngico aderido na lamí-
nula. Alternativamente pode-se utilizar a lâmina do microcultivo (se houver crescimento).
Fungos leveduriformes
Leveduras são fungos predominantemente unicelulares que se reproduzem assexuadamente por
brotamento ou, raramente, fissão binária e sexuadamente pela produção de ascosporos e basidiós-
poros. Podem filamentar dependendo das condições ambientais, produzindo micélio verdadeiro ou
pseudo-micélio. A identificação tradicional das leveduras é baseada na observação de característi-
cas morfológicas e assimilação de provas bioquímicas como a fermentação de carboidratos (zimo-
grama) e a utilização de fontes de carbono e nitrogênio (auxonograma). As técnicas utilizadas para a
observação microscópica dependerão do objetivo do estudo, pode-se observar a estrutura fúngica
diretamente com o preparo de lâmina, ou fazendo-se o microcultivo, sendo que o primeiro método
é o mais utilizado, visto que o segundo é utilizado quando se necessita observar as pseudo-hifas e
esporos produzidos pelas leveduras. Há também a técnica para a coloração de cápsula, essa é feita
para permitir a visualização das leveduras capsuladas.
Observação macroscópica
A observação é feita seguindo o mesmo princípio da observação em fungos filamentosos, para a
qual é necessária uma placa de Petri previamente exposta no ambiente. Observa-se um aspecto
cremoso das colônias.
Material
- Culturas de Candida, Rhodotorula e Cryptococcus.
- Lâminas e lamínulas de microscopia.
- Alças de platina em anel.
- Tubos com salina estéril.
- Frascos com tinta da china a 50%.
- Bateria com corantes de Gram.
- Lâminas preparadas.
Execução
- Fazer esfregaço fino a partir de cultura de Rhodotorula ou Candida, espalhando, com mo-
vimentos circulares, o inóculo com a alça de platina em anel sobre uma gota de salina previamente
colocada na lâmina;
- Corar pelo GRAM;
- Examinar com objetiva de imersão;
- Observar as estruturas visualizadas, células arredondadas ou esféricas, GRAM positivas, e
brotamento ou gemulação.
Coloração de cápsula ou Método de Burri:
- Colocar pequena porção da cultura de Cryptococcus laurentii entre lâmina e lamínula com
duas gotas de tinta da china (1:1 em água destilada).
- Examinar ao MO com aumento de 10X e 40X.
Apostilas de aulas práticas dos cursos de Graduação de Enfermagem, Medicina, Fisioterapia, Veterinária, Odontologia,
Ciências Biológicas e Farmácia da UFMG.