MATERIALES Y MÉTODOS.

Se destilaron diferentes bebidas alcohólicas como mezcal, licor de caña, vodka, tequila, ron,
pulque y Whiskey, por 20 minutos a 78.5°C. Al destilado obtenido se le realizaron dos pruebas
presuntivas para detectar la presencia de alcoholes y metanol. En la primera prueba, para
identificar presencia de alcoholes, se usó dicromato de potasio al 10% en ácido sulfúrico. En la
segunda prueba, para identificar metanol, se añadió dicromato de potasio al 2.5% en ácido
sulfúrico al 50%, seguido por etanol, ácido cromotrópico y ácido sulfúrico, este último para
estratificar la muestra.

Para la prueba modificada por Deninges, se realizó una curva patrón a partir de 6 sistemas con
diferentes proporciones de metanol y etanol. En esta prueba se agregó al destilado y sistemas de
la curva patrón permanganato de potasio 2.5%, ácido sulfúrico, ácido oxálico (para decolorar la
solución) y reactivo de Schiff, incubando 3 minutos a 30-35°C antes de la lectura
espectrofotométrica a 540nm. Se dio tratamiento estadístico, por método de mínimos cuadrados,
a la curva patrón.

RESULTADOS.

Tabla 1.0. Resultados de diferentes bebidas alcohólicas ante la prueba presuntiva de alcoholes.

Equipo Muestra Resultado (+/-)

1 Mezcal sin marca +
2 Mezcal de Oaxaca sin marca +
3 Licor de caña +
4 Mezcal (Relicario) + Coloración azul
5 Vodka + intensa
6 Tequila artesanal +
7 Ron blanco (Bacardi) +
Imagen 1.0 Ejemplo de muestra positiva
8 Tequila (Cabrito) +
para prueba presuntiva de alcoholes. Se
9 Pulque +
observa una coloración azul en la solución.
10 Whiskey +
*Resultado positivo (+), Resultado negativo (-).

La totalidad de las muestra alcohólicas utilizadas dieron un resultado positivo a esta prueba,
determinando así, la presencia de alcoholes en ellas. No obstante, al ser presuntiva dicha prueba,
no se identifica el tipo ni la cantidad de alcohol contenido en la muestra.

Tabla 2.0. Resultados de diferentes bebidas alcohólicas ante la prueba presuntiva de metanol.

Equipo Muestra Resultado (+/-)

1 Mezcal sin marca +
2 Mezcal de Oaxaca sin marca +
3 Licor de caña + Halo violeta
 4 Mezcla (Relicario)
5 Vodka
6 Tequila artesanal
7 Ron blanco (Bacardi)
8 Tequila (Cabrito)
9 Pulque
10 Whiskey
+
-
+
- Imagen 2.0 Ejemplo de muestra positiva
- para prueba presuntiva de metanol. En
+ la prueba positiva se observa un halo violeta
+ en la interfase de las soluciones.

Otra prueba presuntiva realizada fue la determinación de metanol, en la cual se obtuvo un

resultado positivo para 7 de las 10 muestras trabajadas, indicando la posible presencia del alcohol
mencionado, metanol, en dichas bebidas alcohólicas. Para verificar la presencia esta sustancia y
conocer el porcentaje en el que se encuentra se realizó la prueba modificada de Deninges.

En la curva patrón de la prueba modificada de Deninges se obtuvo un coeficiente de

determinación de 0.9396, señalando que la linealidad de gráfico no es totalmente adecuada
debido a que se encuentra por debajo del coeficiente de determinación ideal 1 pero se encuentra
por encima del valor mínimo aceptable 0.75 (García, Ramos, Ruíz, 2008) por lo que se pueden
utilizar los datos obtenidos, ordenada al origen A=0.0559 y pendiente m=0.1541, para determinar
el porcentaje de metanol presente en las muestras con un grado de error pequeño.

Tabla 3.0 Curva patrón de prueba modificada de Deningues a 540nm.

Sistema Absorbancia Porcentaje de metanol (%)

0 0.116 0.05
1 0.431 0.1
2 0.532 0.3
3 0.770 0.5
4 0.793 0.7
5 0.930 0.9
 1.2

1 Abs = 0.1541(% metanol) + 0.0559%

R² = 0.9396
0.8
Absorbancia
0.6

0.4

0.2

0
0.05 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9
Porcentaje de metanol (%)

Gráfico 1.0. Curva patrón de prueba modificada de Deninges, siguiendo la función Abs = 0.1541
(% Metanol) + 0.0559%.

Tabla 4.0 Resultados de prueba modificada de Deninges en diferentes muestras alcohólicas.

Volumen de Porcentaje de mL metanol / mL de

Equipo Muestra Absorbancia
destilado metanol (%) muestra destilada
1 Mezcal sin marca 15 0.304 1.61 0.24
2 Mezcal de Oaxaca sin marca 24 0.864 5.24 1.25
3 Licor de caña 15 0.344 1.87 0.28
4 Mezcal (Relicario) 22 0.967 5.91 1.30
5 Vodka 29 0.883 5.37 1.56
6 Tequila artesanal 21
7 Ron blanco (Bacardi) 30 0.917 5.59 1.68
8 Tequila (Cabrito) 25 0.706 4.22 1.06
9 Pulque 10.1 0.317 1.69 0.17
10 Whiskey 25 0.863 5.24 1.31
*La absorbancia fue leída a 540 nm, La destilación se realizó por 20 minutos.

Mediante la curva patrón anterior se obtuvieron los porcentajes de metanol presentes en cada
bebida alcohólica analizada, por medio de la formula %metanol=(Absorbancia -0.0559%)/(0.1541).
En la tabla 4.0 muestra en general, que todas las muestras contienen metanol, siendo la bebida
con mayor porcentaje de metanol el Mezcal Relicario ® y, por otra parte, la muestra con menor
porcentaje es el Mezcal sin marca, trabajado por el Equipo 1.

DISCUSIÓN

Para llevar a cabo la experimentación, todas las muestras pasaron por un proceso de destilación
donde se buscó mantener la temperatura constante a 78°C, de forma que se lograra destilar
únicamente el metanol con un punto de ebullición de 65°C (Córdoba, 2006), así como el etanol
con un punto de ebullición correspondiente a la temperatura de destilación; todo esto con el fin
de obtener un destilado únicamente de dichos alcoholes y así evitar que otros productos como el
agua formaran parte del destilado final. Sin embargo, el uso de una cama de agua al recibir el
destilado, se utilizó para evitar la pérdida de gases destilados (si es que hubieran existido). Es
importante aclarar que a la cantidad de destilado final no se le restó la cantidad de agua (10 mL)
debido a que se llevó a cabo una disolución dentro de la cama de agua, en la cual se encontraba
una mezcla de ambos alcoholes (Etanol y metanol), los mismos que se encontraban formando
parte de la curva patrón. Por lo tanto, la cantidad de metanol y etanol destilada se encontraba en
10 mL de agua destilada.

Para la cuantificación de metanol en bebidas alcohólicas se llevaron a cabo diversas técnicas que
mostraron la presencia de dicho alcohol cualitativa y cuantitativamente. Primero, se realizó la
reacción presuntiva de alcoholes, prueba que resultó positiva para todas las muestras trabajadas
debido a la generación de un color azul-verde obscuro. Este color se generó debido a una reacción
de oxidación de un alcohol primario (en este caso el etanol) por acción del agente oxidante o
especie activa formada de la mezcla entre el K2Cr2O y el H2SO4 (Wade, 2011). Dicho agente,
probablemente ácido crómico o ión cromato ácido, convirtió los enlaces C-H en enlaces C-O
debido a la pérdida de átomos de hidrógeno, formando así un aldehído. Posteriormente, las
especies del cromo (IV) que se formaron (color naranja), continuaron reaccionando hasta generar
la forma estable reducida, cromo (III), en este caso, en el compuesto sulfocrómico, Cr2(SO4)3. Esta
última forma del cromo es de color azul-verde obscuro, lo cual indicó que las muestras de las
bebidas alcohólicas trabajadas sí contenían alcoholes primarios y/o secundarios (Tabla 1.0),
proporcionando una idea del contenido de las muestras para así conocer si en su contenido se
encontraba el metanol (Wade, 2011).

2𝐾𝑟2 𝐶𝑟2 𝑂7 + 8𝐻2 𝑆𝑂4 + 3𝐶𝐻3 𝐶𝐻2 → 2𝐶𝑟2 (𝑆𝑂4 )3 + 2𝐾2 𝑆𝑂4 + 3𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻 + 11𝐻2 𝑂

Figura 1. Ecuación general de la reacción oxido-reducción presuntiva de alcoholes en bebidas

alcohólicas.

Posteriormente, se llevó a cabo la prueba presuntiva para metanol, en la cual se buscó,

primeramente, transformar al metanol en formaldehído (Letourneau, 1952), mediante la
oxidación del metanol por la solución de K2Cr2O y H2SO4. Cabe destacar que la producción de calor
(reacción exotérmica) generó una mejor condición para que se llevara a cabo la oxidación del
metanol favoreciendo así la formación del formaldehído (Rao, 2004). Este paso es requerido
debido a la especificidad de la prueba por la presencia del ácido cromotrópico, ya que este último
reacciona de forma inmediata con el formaldehído en presencia de H2SO4 concentrado, generando
un color rojo a morado (Letourneau, 1952). Por lo tanto, las pruebas donde se observó el halo
color morado fueron aquellas que contenían formaldehído, producto formado a partir del metanol
probablemente contenido en dichas pruebas positivas.

Por otro lado, para verificar que las muestras positivas a la prueba presuntiva para metanol, en
efecto contuvieran dicho alcohol, se llevó a cabo la prueba modificada de Deninges. Dicha prueba
fue realizada en las muestras que probablemente contenían metanol, sin embargo también fue
realizada en las muestras negativas. Mediante esta técnica, se buscó oxidar al metanol presente
en las muestras con un oxidante fuerte, el permanganato de potasio acompañado de ácido
sulfúrico concentrado, para así generar al formaldehído (Wade, 2011). Debido a la coloración
morada excesiva de la solución por el uso del permangato, fue necesaria la aplicación de un
decolorante, el ácido oxálico, para evitar interferencias en la lectura espectrofotométrica
posterior. Finalmente, se adicionó reactivo de Schiff, una solución producto de la reacción que
incluye colorantes tales como la fucsina, bisulfito de sodio, pararosanilina (entre otros) que junto
con el ácido sulfúrico concentrado y en presencia del formaldehído forma una solución de
coloración fucsia. Mediante la aplicación de esta prueba se pudo demostrar que todas las
muestras alcohólicas contenían cierta cantidad de metanol debido a que todas se tornaron del
color fucsia característico aunque a diferentes concentraciones de color (Leira, 2013). Las
concentraciones de color son proporcionales a la concentración de metanol en la muestra, por lo
que a mayor cantidad de metanol contenido en los tubos más intenso fue el color.

De acuerdo a los datos obtenidos de las muestras de la prueba modificada de Deninges, se

determinó cuantitativamente mediante el uso de la ecuación de la línea recta (Abs = 0.1541 (%
Metanol) + 0.0559%.) que las muestras de Vodka, Ron blanco (Bacardi) y tequila (Cabrito) en
efecto contienen metanol, a pesar de que la prueba presuntiva para metanol resultara negativa
(Tabla 2.0). Además tanto la muestra de Vodka como la de Bacardi resultaron ser las muestras con
mucha más cantidad de metanol por mL de bebida que todas aquellas que sí resultaron positivas
a la prueba presuntiva de metanol. Estos resultados contradictorios, pudieron haberse debido a
diversos factores adversos durante la ejecución de la prueba presuntiva para metanol: la prueba
presuntiva para metanol no tiene una alta sensibilidad comparada con la prueba modificada de
Deninges; los reactivos no fueron agregados en el orden adecuado para llevar a cabo la reacción o
al momento de estratificar, el ácido sulfúrico fue agregado bruscamente por lo que no se generó el
halo. Sin embargo, se atribuye que los resultados falso negativos se debieron a errores
experimentales anteriores.

Continuando, en la tabla 4.0 se puede observar que el destilado de pulque obtenido fue muy bajo
y aun así se obtuvo una concentración alta de metanol (coloración morada intensa de la prueba
presuntiva para metanol), cuando relativamente esta bebida alcohólica no debería de contenerlo,
debido al proceso de fermentación por el que es obtenido (Sánchez, 2005). Con respecto a lo
anteriormente descrito, la baja cantidad de destilado y su alta concentración de metanol (con
respecto a la cantidad de muestra obtenida) pudo deberse a la consistencia del pulque, ya que al
no ser líquida, sino viscosa, evitó que el contenido de alcohol se destilara completamente y solo la
molécula de más bajo punto de ebullición, el metanol, pudiera volatilizarse mucho más rápido
provocando que se concentrara más en el destilado.

Por otra parte, la cuantificación de la cantidad de metanol en el tequila artesanal no se llevó a

cabo debido a que la absorbancia registrada (Tabla 4.0) se encuentra por arriba de la curva, es
decir, no se encuentra dentro de los límites del comportamiento lineal que llevan los datos
(García, Ramos, Ruíz, 2008). Este hecho se atribuye a que no se realizó una dilución anterior a la
lectura en el espectrofotómetro por lo que, las lecturas llevarían a datos inválidos. Por el contrario,
la cuantificación del Mezcal (Relicario) se lleva a cabo debido a la cercanía de los datos al punto
distante de la curva.

Finalmente, de acuerdo a la NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-142-SSA1-1995, la cantidad de

metanol máxima que puede encontrarse en bebidas destiladas y en fermentadas es de 300 mg por
cada 100 mL de bebida, por lo que para conocer si las bebidas trabajadas cumplían con dicha
regulación, se llevaron a cabo ciertos cálculos (Anexo) para conocer los mg de metanol por cada
100 mL de muestra. De esta forma, los mililitros de metanol por mL de bebida obtenidos a partir
de la prueba modificada de Deninges, se multiplicaron por 0.79 mg/mL, la densidad del metanol
(Córdoba, 2006) que resultaron en la cantidad de metanol en mg presente en 1 mL de bebida. Con
base a estos resultados, se buscó la cantidad contenida en 100 mL de bebida multiplicando los mg
obtenidos por 100. Todas las bebidas analizadas se encontraron dentro del límite de metanol
delimitado por la NOM-142-SSA1-1995, por lo que su consumo es permitido. Por último, cabe
mencionarse que el consumo de estas bebidas debe de realizarse con moderación, ya que, a pesar
de encontrase bajo los límites máximos permitidos, su consumo diario o excesivo puede generar
una intoxicación por metanol, por ejemplo en caso del Vodka y del Ron blanco (Córdoba, 2006).

CONCLUSIONES

Mediante la ejecución de dos pruebas de identificación (pruebas presuntivas de alcohol y metanol)

así como una prueba de cuantificación (Prueba modificada de Deninges) fue posible conocer el
contenido de alcohol, específicamente de metanol, de diversas bebidas alcohólicas. Además, se
llevó a cabo un control de calidad, en el cual se puso a prueba la concentración de metanol de
cada bebida para así identificar incumplimientos de acuerdo a la NOM-142-SSA1-1995, resultando
que todas las bebidas se encuentran por debajo del límite máximo, 300 mg MetOH/ 100 mL, por lo
que su consumo no implica una exposición a intoxicación por metanol.

REFERENCIAS.

1. Garcia, J., Ramos, G., Ruíz, C. 2008. Estadística administrativa. Universidad de

Cadiz: España. 115.
2. Córdoba Palacio, Darío (2006). Toxicología. 5ª ed. Bogotá. Manual Moderno.
3. Wade, Leroy. (2011). Química Orgánica. Volumen 1. 7ª ed. México. Pearson
Educación.
4. Letourneau, Duane; Krog, Norman. (1952). The use of chromotropic acid for the
quantitative determination of 2,4-dichlorophenoxy-acetic acid. [Documento en línea].
Consultado el 2 de septiembre de 2017 en: https://goo.gl/VfrWsR
5. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-142-SSA1-1995. BIENES Y SERVICIOS. BEBIDAS
ALCOHOLICAS. ESPECIFICACIONES SANITARIAS. ETIQUETADO SANITARIO Y COMERCIAL.
Consultada el día 2 de septiembre de 2017 en: https://goo.gl/Z28BN4
 6. Rao, Sanath; Shenoy , D. Shruthakirthi; Davis, Suraj; Nayak, Sudhakar. (2004). Detection of
formaldehyde in textiles by chromotropic acid method. Indian Journal of Dermatology,
Venereology and Leprology. Vol 70 (6). 342-344. Consultado en: https://goo.gl/MMSFuz
7. Leira, Angy M.; Ortíz F., Marco. (2013). Identificación de aldehídos y cetonas mediante
pruebas específicas. Universidad del atlántico. [Documento en línea]. Consultado el 2 de
septiembre de 2017 en: https://goo.gl/fh4amd
8. Sánchez Paz, Lidia Azucena. (2005). Determinación de metanol en bebidas alcohólicas
fermentadas tradicionales y populares de mayor consumo en dos regiones de la república
de guatemala por cromatografía de gases. Universidad de San Carlos de Guatemala:
Facultad de ciencias químicas y farmacia. Consultado el 2 de septiembre de 2017 en:
https://goo.gl/NSiVNJ

ANEXOS:

Cálculos de la cantidad de metanol en mg por cada 100 mL de bebida alcohólica y si es aceptada o

no de acuerdo a la NOM-142-SSA1-1995

Equipo Bebida alcohólica Cálculos Aceptada

1 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Mezcal sin marca 0.24 𝑚𝐿 ( ) = 0.19 (100 𝑚𝐿) = 19
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿
2 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Mezcal de Oaxaca sin marca 1.25 𝑚𝐿 ( ) = 0.98 (100 𝑚𝐿) = 98
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿
3 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Licor de caña 0.28 𝑚𝐿 ( ) = 0.22 (100 𝑚𝐿) = 22
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿
4 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Mezcal (Relicario) 1.30 𝑚𝐿 ( ) = 1.027 (100 𝑚𝐿) = 102.7
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿
5 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Vodka 1.56 𝑚𝐿 ( ) = 1.232 (100 𝑚𝐿) = 123.2
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿
6 Tequila artesanal 𝑆𝐼𝑁 𝐷𝐴𝑇𝑂𝑆 ---
7 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Ron blanco (Bacardi) 1.68 𝑚𝐿 ( ) = 1.33 (100 𝑚𝐿) = 133
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿
8 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Tequila (Cabrito) 1.06 𝑚𝐿 ( ) = 0.837 (100 𝑚𝐿) = 83.7
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿
0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻
9 Pulque 0.17 𝑚𝐿 (
1 𝑚𝐿
) = 0.134
𝑚𝐿
(100 𝑚𝐿) = 13.4
100𝑚𝐿
Sí
10 0.79 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑀𝑒𝑡𝑂𝐻 Sí
Whiskey 1.31 𝑚𝐿 ( ) = 1.034 (100 𝑚𝐿) = 103.5
1 𝑚𝐿 𝑚𝐿 100𝑚𝐿