UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

Carrera Cirujano Dentista

Alumno: Rodrigo Villatoro Maya

Grupo: 3355

TERCER AÑO
ÁREA BIOLÓGICA

Módulo
"Mecanismos Infecciosos y Respuesta Inmune del
Sistema Estomatognático"

Práctica: Práctica No. 3

REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN EN GEL
(Ouchterlony)
 INTRODUCCIÓN

La reacción de la precipitación se presenta cuando un antígeno multivalente en

estado soluble, se une con su anticuerpo específico y así da lugar a la formación de
un complejo insoluble. Esta reacción se utiliza ampliamente para demostrar y
cuantificar antígenos y anticuerpos y se puede llevar a cabo en medio de líquido o
semisólido.

Cuando la reacción se realiza en medio líquido, la cantidad de precipitado varía

según la proporción de los reactivos. Si se dispone de una serie de tubos capilares
que contengan el mismo volumen de suero y cantidades crecientes de antígeno,
puede observarse que el precipitado formado alcanza un máximo, después del cual,
progresivamente, se encuentra una disminución en la cantidad de precipitado.

La reacción de precipitación en medio semisólido, se efectúa en un gel y se conoce

como inmunodifusión. Esta consiste en la difusión, a través de un gel, de un
antígeno, y su anticuerpo homólogo con la consiguiente aparición de una banda de
precipitado en el sitio donde se alcanzan las concentraciones óptimas de ambos
reactivos.

Existen diferentes tipos de inmunodifusión; aquel en el que ambos reactivos

difunden libremente en el gel es llamado doble difusión o método de Ouchterlony,
el cual puede tener diversas aplicaciones, por ejemplo, la determinación de la
posible relación inmunológica entre dos antígenos y del número de sistemas
antígeno-anticuerpo presentes, así como la semicuantificación de un antígeno o de
un anticuerpo.
 FUNDAMENTO TEÓRICO

Antígeno

Cada anticuerpo se une a un antígeno específico de forma similar a una llave en

una cerradura. Un antígeno ("anti", del griego αντι- que significa 'opuesto' o 'con
propiedades contrarias' y "geno", de la raíz griega γεν, generar, producir [que genera
o crea oposición]) es una sustancia que desencadena la formación de anticuerpos
y puede causar una respuesta inmunitaria. La definición moderna abarca todas las
sustancias que pueden ser reconocidas por el sistema inmune adaptativo, bien sean
propias o ajenas.

Anticuerpo

Los anticuerpos son unas proteínas en forma de Y producidas por el sistema

inmunológico para identificar y neutralizar las sustancias dañinas y extrañas al
cuerpo, llamadas antígenos. Los anticuerpos los sintetizan un tipo de leucocito o
glóbulo blanco llamado linfocito B.

Cuando un anticuerpo reconoce un antígeno complementario se une a el y lo marca

para que sea atacado por otras células del sistema inmunitario. Estos complejos
antígeno-anticuerpo son fagocitados por los leucocitos de tipo granulocitos.

Los factores que contribuyen a la avidez del antisuero son complejos, pero uno muy
interesante es el derivado de la multivalencia del antígeno. La fuerza de unión de
un antígeno complejo multivalente a varios tipos de Ac es mucho mayor que la suma
aritmética de las fuerzas de unión de cada anticuerpo: La avidez refleja mejor la
situación fisiológica, pero la afinidad nos caracteriza lo que ocurre con cada tipo de
anticuerpo concreto en su interacción con el epítope.

La avidez es quizá una medida más informativa de toda la estabilidad o la fuerza

del complejo antígeno-anticuerpo. Esto es controlado por tres factores: la afinidad
anticuerpoepítope; las valencias de ambos, antígeno y anticuerpo; y el arreglo
estructural de las partes que interactúan. Cuando el anticuerpo y el antígeno pueden
formar complejos multivalentes, la fuerza de interacción es grandemente
incrementada. Estos factores definen la especificidad del anticuerpo, que es, la
probabilidad de que un anticuerpo particular se una a un preciso epítope del
antígeno.

Clasificación de inmunoglobulinas

Existen 5 tipos básicos de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD, IgE.

Son sintetizadas por los linfocitos B (IgM, IgD) y por las células plasmáticas
derivadas de ellos (IgG, IgA, IgE).

 IgM e IgG se detectan principalmente en el plasma sanguíneo y en el líquido

intersticial.
 Las IgA aparecen fundamentalmente en secreciones (saliva, lágrimas,
secreción intestinal, etc.), recubriendo mucosas expuestas al ataque de
agentes patógenos externos.
 La IgD es una inmunoglobulina asociada a la membrana de los linfocitos B.
Su función primaria de las es la de servir como detectores de antígenos para
las células B. Se detecta marginalmente en el plasma.
 Las IgE son anticuerpos que, si bien inicialmente se liberan al plasma por las
células plasmáticas, son integrados en la membrana de otras células
(mastocitos), participando en las reacciones de hipersensibilidad.

OBJETIVO

 Evidenciar la reacción de precipitación que se lleva a cabo cuando hay

interacción entre antígeno soluble con anticuerpo homólogo.
 Valorar la reacción de precipitación.
 Analizar la reacción antígeno-anticuerpo, y su utilidad como mecanismo de
defensa en la reacción de precipitación.
 MATERIAL Y REACTIVOS

1 portaobjetos con ion agar (oxoid)

1 caja de petri
1 aplicador de madera
1 pipeta Pasteur
Papel filtro
Solución de antígenos (suero humano), albúmina humana, gamaglobulina humana.
Solución de anticuerpos (antisuero humano total), antigamaglobulina humana.

SERVICIOS: agua, luz.

PROCEDIMIENTO

1. Realizar tres series de tres perforaciones en el agar, de forma que quede un pozo
en cada vértice de un triángulo equilátero formado. (Como lo muestra el esquema.):

2. Estos pozos se llenan con el antígeno y el anticuerpo con la ayuda de un tubo

capilar como le indique su profesor.

3. Se improvisa una cámara húmeda con una caja de petri a la cual se le pone papel
húmedo en la base y la tapa

4. Se colocan los portaobjetos preparados en la caja sostenidos por aplicadores de

madera.

5. Se incuba a temperatura ambiente durante 24 a 48 horas y se buscan bandas de

precipitación.
RESULTADOS