DIGESTIÓN DE MACROMOLÉCULAS

Objetivo:
-Entender y montar ensayos de degradación de polímeros por enzimas extracelulares
microbianas

La diversidad metabólica que hay entre los microorganismos, incluso entre algunos
cercanos filogenéticamente permite la realización de los ciclos biogeoquímicos. Sin la
intervención de los microorganismos no podrían llevarse a cabo los ciclos del carbono,
nitrógeno, azufre y oxigeno y la atmosfera tendría una composición diferente a la actual.

Agar Almidón
Medio usado para identificar microorganismos productores de amilasas. El almidón esta
compuesto por amilosa y amilopectina. Los polisacáridos como el almidón son demasiado
largos para ser transportados al interior de la célula, entonces los microorganismos excretan
amilasas que hidrolizan estos polímeros hasta monosacáridos que pueden usarse como
sustratos para crecer. La actividad amilolítica es revelada colocando al medio unas gotas de
lugol que forma un complejo con la amilosa y tiñe el almidón de azul y deja un halo claro en
el lugar donde el almidón fue digerido enzimáticamente.

Gelosa Gelatina
Medio usado para poner de manifiesto organismo productores de proteasas. La gelatina es
una proteína que tiene la capacidad de gelificar, cuando es hidrolizada por la gelatinasa de
los aminoácidos que la componen pierde su característica de gelificar.

Agar Leche Descremada

Medio usado para la identificación de microorganismos productores de proteasas
(caseinasa). Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de proteínas, la
caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco, cuando la caseína es
hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano.

Agar Yema de Huevo

Medio usado para determinar la hidrolisis de fosfolípidos (lecitina), poniendo como
manifiesto la produccion de lecitinasa. Algunos microorganismos producen lecitinasa que
hidroliza la lecitina (fosfolípido) que viene contenida en la yema de huevo, esta yema
contiene fosfolípidos polares hidrosolubles que al ser degradados por las fosfolipasas que
les eliminan el grupo fosfato que es el grupo polar, producen diglicéridos insolubles, estos
diglicéridos se agrupan por efecto hidrofóbico formando una delgada película opalescente
en torno a las colonias de microorganismos que producen las lipasas adecuadas, las
colonias productoras de lecitinasa producen una zona opaca a su alrededor.

Gelosa Sangre
Medio enriquecido y diferencial usado para cultivar microorganismos aerobios y anaerobios
y determinar la utilización de fosfolípidos.
Hemolisis alfa: Se produce con una coloración verdosa alrededor de la colonia debido a la
hidrolisis de los enlaces éster-fosfato.
Hemolisis beta: Se pone de manifiesto por un halo transparente alrededor de la colonia
provocada por la lisis completa de los eritrocitos, esto se debe a la hidrolisis de los enlaces
éster.
Hemolisis gamma: No utiliza los fosfolípidos membranales de los eritrocitos. Ausencia halo.
Resultados

Agar leche descremada Agar almidón

Hidrolisis de caseína por Bacillus subtilis Hidrolisis de almidón por Bacillus subtilis

Agar yema de huevo Gelosa sangre

Hidrólisis de lecitina por Bacillus subtilis Beta hemolisis por Bacillus subtilis

Leche Tornasolada

Alcalinización(tubo morado) por Klebsiella pneumoniae

Coagulación (tubo morado) por Klebsiella pneumoniae

Alcalinización (2do tubo de izquierda a derecha) por

Bacillus subtilis
Análisis de resultados
En esta práctica observamos la capacidad de Bacillus subtilis de hidrolizar almidón, esto
significa que produce amilasas que descomponen en monómeros al almidón, además
hidrolizó la lecitina, esto indica la producción de lecitinasa formando una película
opalescente den el medio por los diglicéridos hidrofóbicos. B. subtilis también dio como
resultado una beta-hemolisis por la lisis completa de los eritrocitos, esto de debe a la
hidrólisis de los enlaces éster y la utilización de los ácidos grasos. En el medio de leche
tornasolada alcalinizó el medio ya que adquirió un color violeta, esto se debe a que
desamino las sustancias nitrogenadas(caseína) liberando amoniaco y elevando el pH.
Proteus vulgaris hidrolizó la gelatina al secretar gelatinasa formando un halo alrededor de su
crecimiento y en gelatina en tubo resulto positivo ya que no solidificó la gelatina de nuevo.
Klebsiella pneumoniae puso en evidencia la alcalinización y coagulación en el medio de
leche tornasolada al virar el tubo a un color violeta y formar un coágulo semisólido, esto se
debe a la produccion de amoniaco al desaminar la caseína y la coagulación por la
precipitación de la caseína ya que producen ácidos orgánicos esto se produce a partir de la
fermentación de la lactosa.
Shigella flexneri se observo la reducción del tornasol en el medio al pasar el tubo de color
morado a blanco, se debe a la hidrolisis de la caseína que por actividad enzimática
proteolítica produce caseinato de calcio en un liquido claro ya que se secretaron caseasas.

Informe/cuestionario
Llene las tablas siguientes
Hidrólisis de la gelatina en tubo
Crecimiento Hidrólisis
Microorganismo 48 h 48 h
Escherichia coli + -
Bacillus subtilis + +
Pseudomonas aeruginosa + +
Salmonella thypi + -
Proteus vulgaris + -
Klebsiella pneumoniae + -
Shigella flexneri + -
Staphylococcus aureus + +

Hidrólisis de gelatina en placa

Microorganismo Crecimiento Hidrólisis
Escherichia coli ++ -
Bacillus subtilis ++ -
Pseudomonas aeruginosa +++ +
Salmonella thypi ++ -
Proteus vulgaris +++ +
Klebsiella pneumoniae ++ -
Shigella flexneri ++ -
Staphylococcus aureus + +
 Hidrólisis del almidón y caseína en placa
Microorganismo Crecimiento Almidón Caseína
Escherichia coli + - -
Bacillus subtilis + + +
Pseudomonas aeruginosa + + -
Salmonella thypi + - -
Proteus vulgaris + - -
Klebsiella pneumoniae + - -
Shigella flexneri + - -
Staphylococcus aureus + - -

Hidrólisis de fosfolípidos
Microorganismo Crecimiento Agar yema de huevo Gelosa sangre
Escherichia coli + -  hemólisis
Bacillus subtilis + + hemólisis
Pseudomonas aeruginosa + +  ó
Salmonella thypi + -  ó
Proteus vulgaris + -  ó
Klebsiella pneumoniae + -  ó
Shigella flexneri + -  ó
Staphylococcus aureus + +  ó

Acción sobre la leche tornasolada

Microorganismo Acidificación Coagulación Reducción Licuefacción Alcalinización
Escherichia coli + + - - -
Bacillus subtilis + + + - -
Pseudomonas
- + + - -
aeruginosa
Salmonella thypi - - + - +
Proteus vulgaris - + + + -
Klebsiella
+ + + + -
pneumoniae
Shigella flexneri + + + + -
Staphylococcus
- + + + -
aureus

Explique el significado de los términos: requerimiento nutricional, factor de crecimiento,

autotrófico, auxotrófico, heterotrófico.
Requerimiento nutricional: Son sustancias básicas que permiten realizar actividades
metabólicas a los microorganismos
Factor de crecimiento: Son sustancias capaces de favorecen el crecimiento.
Autotrófico: Solo utilizan al dióxido de carbono como fuente de carbono.
Auxotrófico: Microorganismo incapaz de convertir precursores biosintéticos en biopolímeros.
Heterotrófico: Utilizan como fuente de carbono a la materia orgánica.
¿Qué significa literalmente el termino hidrolítico? Que puede o tiene la capacidad de
descomponer materia orgánica por acción del agua.

Las enzimas extracelulares que rompen proteínas se llaman proteasas, las que rompen
polisacáridos glicosidasas y las que rompen lípidos esterasas.

Conteste falso (f) o verdadero (v) las siguientes aseveraciones:

V muchas enzimas extracelulares son hidrolíticas, pero no todas las enzimas hidroliticas son
extracelulares.

V Las peptidasas son enzimas extracelulares que hidrolizan proteínas de lato peso
molecular.

V Las glicosidasas hidrolizan enlaces éster en polisacáridos.

F Las membranas biológicas son sensibles a las lipasas.

Un ejemplo de polisacárido estructural es la celulosa. Un ejemplo de polisacárido nutricional

es el almidón.

La caseína es una proteína de origen animal y la gelatina es de origen animal.

Conclusión:
Si sabemos presuntivamente que tipo de metabolismo tiene los microorganismos que
queremos sembrar e identificar podemos escoger el medio para que su crecimiento sea
favorable y que tenga los nutrimentos y/o sustancias para diferenciarlos.

Bibliografía:

Gutiérrez Eduardo. “Medios De Cultivo, Tinciones Y Pruebas Bioquímicas” 2° edición,

editorial grupo revelación

MacFaddin, J. F. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de

importancia clínica. Ed. Médica Panamericana.