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VALDIVIA – CHILE
2012
PROFESOR PATROCINANTE:
____________________________________
Ernesto Moya Elizondo
Ph.D., M.CV., Ing. Agr.
Departamento de Producción Vegetal
Universidad de Concepción
PROFESOR COPATROCINANTE:
____________________________________
Ricardo Fuentes
M.Sc., Ing. Agr.
Instituto de Producción y Sanidad Vegetal
PROFESORES INFORMANTES:
___________________________________
Mauricio Schöebitz
Dr., Ing.Agr.
CEBAS SCIC Murcia, España
i
INDICE DE MATERIAS
Capítulo Página
RESUMEN 1
SUMMARY 2
1 INTRODUCCIÓN 3
2 REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 5
3 MATERIAL Y METODOS 17
3.3.4 Bioencapsulación. 21
3.6.2 Sustrato. 24
5 CONCLUSIONES 42
6 BIBLIOGRAFIA 43
7 ANEXOS 49
INDICE DE CUADROS
Cuadro Página
INDICE DE FIGURAS
Figura Página
INDICE DE ANEXOS
Anexo Página
RESUMEN
En este estudio se realizaron tres ensayos de los cuales el primero permitió evaluar el
comportamiento solubilizador de P de las cepas seleccionadas sobre distintas
concentraciones de roca fosfórica en sustrato de arena de cuarzo, luego un segundo
ensayo para evaluar la colonización de estas mismas dos cepas de las raíces de
plantas de trigo. El tercer ensayo evaluó el efecto de la inoculación con biocápsulas
de las dos cepas sobre plantas de trigo bajo distintas concentraciones deficitarias de
fósforo más roca fosfórica agregada a un sustrato arena de cuarzo para evaluar la
entrega adicional de fósforo que realiza dicha cepa bacteriana solubilizando la roca
fosfórica que se encontraba mezclada con el sustrato.
Se pudo observar una colonización exitosa de las bacterias a las raíces de las plantas
y un aporte adicional de fósforo a las plantas en el periodo de dos meses producido por
la solubilización de la roca fosfórica utilizada en el sustrato como fuente insoluble de
fósforo. Los resultados muestran un aumento significativo en la concentración de
fósforo en el tejido de las plantas crecidas bajo condiciones subóptimas de fósforo
soluble, pero no se presentan diferencias significativas en biomasa aérea, radical ni en
altura de plantas.
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SUMMARY
In this study, three experiments were conducted. The first experiment allowed to
evaluate the performance of the selected P solubilizer strains on different
concentrations of phosphate rock in quartz sand substrate. A second experiment was
conducted to evaluate the colonization of the two strains on wheat roots. The third test
evaluated the effect of inoculation with biocapsules of the two bacterial strains on wheat
plants under different concentrations of soluble phosphorus deficit plus phosphate rock
added to a substrate of quartz sand. This experiment evaluated the additional release
of phosphorus that makes the bacterial strains solubilizing the phosphate rock mixed
with the substrate.
It was observed a successful colonization of bacteria to the plant roots and an extra
supply of phosphorus to plants in the period of two months produced by solubilization of
phosphate rock used as an insoluble source of phosphorus in the substrate. The
results showed a significant increase in the phosphorus concentration in plant tissue
under phosphate deficit, but not significant differences were observed for aboveground
biomass, root biomass and plant height.
3
1 INTRODUCCION
Objetivos generales
Desarrollar una metodología para evaluar el efecto de la adición de bacterias
solubilizadoras de P sobre plantas de trigo crecidas bajo condiciones controladas en un
periodo de dos meses.
Objetivos específicos
- Determinar el efecto de las distintas cepas solubilizadoras de P sobre el desarrollo
y la biomasa total de las plantas de trigo.
- Determinar la concentración fósforo foliar para establecer la absorción de fósforo
como indicador de la solubilización realizada por distintas cepas bacteriales.
- Establecer que cepa tienen un mayor efecto promotor de crecimiento sobre los
cultivos de trigo.
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2 REVISION BIBLIOGRAFICA
El fósforo después del nitrógeno, es el nutriente inorgánico más requerido por plantas y
microorganismos y además, en el suelo es un factor limitante del desarrollo vegetal a
pesar de ser abundante tanto en formas inorgánicas como orgánicas (ALEXANDER,
1980). Las plantas deben absorberlo del suelo, donde se encuentra en muy baja
concentración, normalmente en niveles que varían entre 5 y 30 mg kg-1. Estos índices
bajos del nutriente se deben a que el fósforo soluble reacciona con iones como el
calcio, el hierro o el aluminio que provocan su precipitación o fijación, disminuyendo su
disponibilidad para los vegetales (RODRÍGUEZ Y FRAGA 1999). Los fosfatos
inorgánicos aplicados como fertilizantes químicos también son inmovilizados en el
suelo y como consecuencia no son solubles para ser aprovechados por los cultivos
(PEIX, et al. 2001). Por lo tanto se considera, que la solubilización de distintas rocas
fosfatadas y de otras fuentes de fósforo inorgánico por los microorganismos del suelo
es una alternativa fundamental para incrementar la cantidad de nutriente disponible
para las plantas (ILLMER Y SCHINNER 1992).
El fósforo, aplicado a los suelos como fertilizante para suplir los requerimientos del
cultivo, reacciona con la fase sólida quedando parte importante del P retenido en forma
no disponible; en consecuencia la disponibilidad del fósforo aplicado dependerá de la
capacidad de retención y deserción que presenten los suelos.
En los suelos de origen volcánico del sur de Chile, Andisoles y Ultisoles, el fósforo
reacciona con el alofan, óxidos hidratados de hierro y aluminio, lo que implica que se
presenten valores de retención de P aplicado superiores al 85% en los Andisoles y
alrededor de 70 % en los Ultisoles (HONORATO et al. , 1984). En Chile, el nivel de
suficiencia para el P disponible (P-Olsen) para un amplio grupo de cultivos ha sido
estimado en 16 mg kg-1 de P, entre ellos el cultivo de trigo en Andisoles (RODRÍGUEZ ,
1990).
6
Los altos rendimientos a alcanzar por un cultivo requerirán fertilizaciones debido a que
el suelo no es capaz de suministrar el total de nutrientes requerido. De esta forma se
corrigen deficiencias naturales de ciertos elementos en el suelo, como es el caso del
fósforo y adicionalmente devolver al suelo los elementos retirados producto de la
exportación producida por la cosecha de los cultivos (BATTEN, 1992).
La productividad a alcanzar es el rendimiento posible de obtener dependiendo de las
condiciones del agro ecosistema. Este rendimiento potencial se ve claramente reflejado
a través de dos tasas. La tasa de crecimiento y la tasa de desarrollo del cultivo
(PINOCHET, 2000)
Para conocer los requerimientos de fósforo por parte del cultivo de trigo es necesario
determinar la absorción fósforo del mismo. La absorción de fósforo del cultivo es una
variable derivada que resulta de la combinación entre la productividad de materia seca
y la concentración interna de fósforo del cultivo. A través de este parámetro derivado
se puede determinar la tasa de absorción de fósforo, la translocación de fósforo, la
absorción directa hacia los granos y el índice de extracción en la cosecha.
El fósforo se encuentra formando parte de dos fracciones: una fracción pasiva y otra
activa. El fósforo de la fracción pasiva es el resultado de reacciones de adsorción en
que el fósforo queda retenido en el interior de las arcillas y de óxidos de Fe y Al, de
reacciones de precipitación muy insolubles y de reacciones ligadas a la materia
orgánica muy estabilizada en el suelo. La fracción pasiva se caracteriza por no estar en
equilibrio directo con el fósforo que se encuentra en la solución y por no participar en la
disponibilidad de fósforo durante la temporada de cultivo. El fósforo de la fracción
activa proviene de las mismas reacciones de adsorción y precipitación, principalmente
en la superficie de las arcillas y se encuentra en un equilibrio rápido con el fósforo de la
solución del suelo. Por ello, el fósforo activo determina la disponibilidad de fósforo en el
suelo para los cultivos (RODRÍGUEZ et al., 2001). El fósforo en la solución se
encuentra en dos formas disponibles para la planta; H2PO4 y HPO4. La concentración
en la cual estén presentes estos va a depender del pH que presente el suelo, con
8
valores de pH mayor a 7,2 se hace presente la forma HPO4 y a su vez pH menor a 7,2
incrementa su concentración la forma H2PO4 (MENGEL y KIRKBY, 1982).
El fósforo extractable es medido por el método Olsen (NaHCO3, pH 8,5) que representa
la fracción de fósforo activo y esta correlacionado con el fósforo absorbido por los
cultivos. De este modo el P-Olsen es un indicador de la disponibilidad de fósforo en el
suelo (RODRIGUEZ et al., 2001). El fósforo luego de su aplicación comienza a
disminuir a través del tiempo como P-Olsen. Esto se debe a una adsorción hacia el
interior de la matriz coloidal. Esta disminución del fósforo extractable Olsen trae
consigo un incremento del fósforo no extractable Olsen y en consecuencia la dificultad
de los cultivos para absorber el fósforo activo del suelo. La fracción residual de fósforo
aplicado que permanece como fósforo extractable Olsen en el tiempo ha sido descrita
como una función potencial, la cual es dependiente del tiempo y temperatura e
independiente del tipo de suelo y de la cantidad de fósforo aplicado (RODRIGUEZ et
al., 2001).
A medida que los cultivos se van desarrollando, estos van generando una demanda de
nutriente, la cual se utiliza para satisfacer sus procesos metabólicos. Esta demanda es
variable para cada cultivo, la cual va a depender del potencial genético que ellos
tengan, por lo tanto, el cómo se exprese este potencial va depender del clima, suelo y
nivel tecnológico utilizado. Dicho de otra manera, la demanda, en este caso del fósforo;
va depender del rendimiento esperado del cultivo, el índice de cosecha y su
requerimiento interno.
eficiencia de absorción. Así el manejo del régimen hídrico del suelo, las condiciones
físicas por el excesivo laboreo en los cultivos, y las deficiencias de otros nutrientes,
modifican la eficiencia de absorción de los cultivos así como también la producción
máxima alcanzable (RODRIGUEZ, 1993).
2.2.5 Roca fosfórica como fertilizante en los sistemas agrícolas. Con el término
rocas fosfóricas se conoce a los minerales que contienen P como es el caso de las
apatitas, incluyendo fluorapatita, cloroapatita e hidroxiapatita. Hay grandes depósitos
10
en Rusia, Estados Unidos, África del Norte y China; también existen importantes
reservas en Brasil, Perú y México (SPERBER 1958a; HOFFLAND, 1992). Aunque no
tan importantes, los depósitos chilenos se ubican entre la II y IV Región (Cuadro 1).
Estos depósitos están conformados de fosforitas de origen sedimentario marino con
algunos depósitos de apatita asociados a rocas ígneas metamórficas. Se consideran
las reservas totales de fosforita en 3,7 x108 ton métricas con un contenido que varía
entre 6 y 30% P2O5, (ROJAS, 2006). En el cuadro 2 se hace una comparación de
contenido P2O5 y CaO de fertilizantes solubles y de diferentes fuentes de rocas
fosfóricas que se comercializan en la Región de Los Lagos y Los Ríos.
2.3 Obtención de bacterias rizosféricas que generan beneficios para los cultivos
agrícolas.
Existen varios mecanismos por los cuales PGPR afectan positivamente a las plantas,
tales como: capacidad de producir sustancias biológicamente activas o reguladores del
crecimiento vegetal (fitohormonas, ácidos orgánicos, sideróforos, etc.), fijación de
nitrógeno atmosférico, solubilización de fosfatos insolubles y producción de antibióticos
que suprimen microorganismos del suelo deletéreos. La producción de sustancias
biológicamente activas o de reguladores de crecimiento es uno de los principales
mecanismos a través del cual PGPR influyen en el crecimiento de las plantas y el
desarrollo (ARSHAD y FRANKENBERGER, 1998).
Se puede considerar a una rizobacteria como PGPR para ser usada en cultivos
agrícolas, cuando presente las siguientes cuatro características: (a) Que no requieran
13
Si bien muchos géneros bacterianos presentan esta capacidad para solubilizar fósforo
inorgánico, es de particular interés detectar esta habilidad en grupos que tengan otras
propiedades de promoción de crecimiento vegetal, como por ejemplo, capacidad para
fijar nitrógeno atmosférico. Se han aislado microrganismos como Azospirillum lipoferum
o Azotobacter chroococcum que además de ser fijadores libres de nitrógeno, son
capaces de promover el crecimiento vegetal mediante la solubilización de fosfatos
inorgánicos (MURTY y LADHA, 1988; KUNDU y GAUR, 1980). Además, distintas
especies de bacterias del suelo de los géneros Rhizobium y Bradyrhizobium, fijan
nitrógeno en asociación simbiótica con distintas fabáceas, y poseen además la
capacidad de solubilización de fósforo inorgánico (HALDER y CHAKRABARTTY, 1993;
SURANGE y KUMAR, 1993).
3 MATERIALES Y METODOS
Las cepas bacterianas 8b, 1A, B3, 11A, 1 y una cepa Serratia spp. T3 que muestran
actividad solubilizadoras de fósforo fueron sometidas a una prueba de patogenicidad,
para determinar si generan daños en tejidos vegetales. Las seis cepas mencionadas
fueron aisladas desde la rizósfera de plantas de trigo cv. Otto colectadas en diciembre
de 2010 en la localidad de Máfil (OSMAN, 2010).
recipiente fue inoculado separadamente con 7 ml de una solución bacterial del aislado
C139 (1,45x108 ml-1), y otro tratamiento inoculado con aislado T3 (7x108ml-1), y un
control basado en una solución de células bacterianas muertas del aislado C139
sometida a esterilización con autoclave (1 atm, 15 min a 120ºC ).
Previo a la inoculación, los aislados evaluados fueron incubados en medio caldo soya
tripticasa (CST) por 24 h a 30°C. Después del período de incubación se realizó un
recuento de unidades formadores de colonias (UFC) en medio Play Count (Sigma-
Aldrich) para determinar la concentración de bacterias.
Alginato: Producto Gelygum 7228, extractos naturales Gelimar, Planta Puerto Montt-
Calbuco.
Estas sustancias en una formulación sirven a las bacterias para protección ante
condiciones del ambiente o como sustrato nutritivo para su crecimiento en el suelo.
Estos productos fueron evaluados en dos grupos de mezclas en diferentes
concentraciones, la primera de carragenano mezclado con Cloruro de Calcio (CaCl2),
para determinar bajo que concentración de CaCl2, el carragenano generaba una
adecuada gelificación (Cuadro 3); y una segunda prueba de matrices de almidón
mezclado con alginato, el objetivo fue establecer que concentraciones de estos
productos gelificaba adecuadamente en CaCl2 al 1,5% (Cuadro 4). Todas las mezclas
fueron realizadas manualmente disolviendo los productos en un volumen menor de
agua hasta formar una pasta; cuando el producto estaba disuelto se agregó agua hasta
llegar a 1L y se homogenizó la mezcla. Las mezclas que lograron gelificar de forma
adecuada fueron determinadas visualmente, en virtud de su resistencia, forma y
tamaño.
20
Una vez obtenido los bioencapsulados con las bacterias solubilizadoras de fósforo,
antes de ser utilizadas en la inoculación de plantas se procedió a evaluar sus
características para su conservación y la viabilidad.
3.4.1 Análisis de actividad del agua. Se molieron10 cápsulas secas de las dos cepas
respectivas y fueron analizadas con un medidor de actividad de agua Paw-kit de marca
Decagon, que es un instrumento que determina la actividad del agua y que fue utilizado
para saber el grado de deshidratación de las capsulas. Se consideró que los niveles
de actividad de agua que son apropiados para una buena conservación fuesen de 0,25
aw, que es una medida del agua disponible, este nivel se recomienda ya que no
permite la formación de hongos y bacterias.
Para determinar si las bacterias colonizaban las raíces de las plantas, las cepas
bioencapsuladas en una matriz de alginato y almidón fueron inoculadas en plantas de
trigo cv. Pandora-INIA, que fueron pre-germinadas y sembradas en maceteros de 12
cm diámetro llenos con arena de cuarzo como sustrato. Se colocaron tres biocápsulas
por semilla y las plantas tuvieron un periodo de crecimiento de 30 días. Luego de este
periodo, se extrajeron las raíces de las plantas inoculadas con ambas cepas, y todas
las raíces de la planta fueron introducidas en tubos de ensayo que contenían 10 mL de
solución fisiológica estéril, y fue incubado a 30°C por 6 h y 150 rpm. Posterior a la
incubación del medio se generaron diluciones seriadas paras las muestras inoculadas
con las diferentes cepas, las diluciones -7 y -8 se sembraron en placas Petri con medio
Pikovskaya. Las placas fueron incubadas por dos días a 30°C en una incubadora y
luego se realizo RUFC. El medio cultivo Pikovskaya es un medio específico para
crecimiento de bacterias solubilizadoras de fósforo basado en una fuente insoluble de
P que es Ca3(PO4).
Las semillas fueron desinfectadas por 1 min con hipoclorito al 5% y enjuagadas tres
veces con agua destilada estéril para evitar la presencia de microorganismos. Las
semillas fueron pre-germinadas sobre papel absorbente humedecido con agua
destilada estéril y se utilizaron 4 semillas por cada maceta en el primer experimento,
mientras que 9 plantas fueron usadas en un segundo experimento.
3.6.2 Sustrato. El sustrato que se utilizó fue arena de cuarzo la cual fue escogida por
su bajo contenido de nutrientes, así las plantas solo se nutrieron a través de
soluciones nutritivas diferenciadas en sus concentración de P para cada tratamiento.
Previo a establecer las plantas, la arena de cuarzo se sometió a varios lavados con
agua para eliminar la materia orgánica presente con el objetivo de disminuir lo máximo
posible los nutrientes, para esto se sumergió el sustrato en 3M de ácido clorhídrico por
24 horas, realizando movimientos periódicos de la arena de cuarzo en contacto con el
ácido, luego se eliminó el ácido y se enjuago reiteradamente con abundante agua para
eliminar los restos de ácido en el sustrato. Finalmente se enjuago con agua destilada.
La arena de cuarzo se analizó finalmente a través de método Olsen por extracción con
solución de bicarbonato de sodio 0,5 mol/L a pH 8,5 y determinación colorimétrica del
azul de molibdeno (INIA Métodos de análisis recomendados para suelos de Chile
revisión 2006.) para determinar el nivel de P presente que alcanzó 0,3 ppm de P.
Para establecer las plantas se prepararon maceteros plásticos con un contenido de
800 g de sustrato. El lavado con ácido del sustrato permitió establecer el crecimiento
del cultivo en un sustrato inerte, sin presencia de materia orgánica, microorganismos ni
disponibilidad de nutriente lo cual permitió controlar la cantidad de fósforo de cada
tratamiento a través del uso de soluciones nutritivas que se describen más adelante.
3.6.4 Sistema de fertilización por soluciones nutritivas. Una vez establecidos los
maceteros con sustrato de cuarzo con 10 ppm de P como roca fosfórica y sembrados
con trigo e inoculados con las cepas bacterianas solubilizadoras de fosforo
encapsuladas, las plantas fueron crecidas por un periodo de dos meses. Después de
tres semanas de crecimiento se comenzó a regar con soluciones nutritivas con
distintos niveles de fosforo soluble.
Las soluciones nutritivas Hoagland fueron utilizadas para el riego del experimento,
estas fueron elaboradas en el Laboratorio de Fitoquímica de la Escuela de Agronomía
de la Universidad Austral de Chile. Para comprobar el efecto solubilizador de P de las
dos cepas inoculadas en el primer ensayo, se utilizarán dos formulaciones con
concentraciones diferenciales de P soluble, en la forma de H2PO4, en dosis de: 0 ppm;
3 ppm; de fósforo. En un siguiente ensayo se evaluó sólo la cepa Serratia spp. T3 la
cual se regó con soluciones nutritivas con menores concentraciones de P y
correspondieron a 0ppm, 0,25 ppm, 0,5 ppm, 1ppm y 3 ppm.
cuales las plantas de trigo fueron sometidas a una temperatura entre los 15° y 25° C
con foto-período de 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad.
Con el objetivo de comprobar las diferencias que existen entre los tratamientos debido
a la mayor o menor disponibilidad de fósforo para las plantas con diferentes tipos de
cepas bacteriales y los diferentes niveles de fertilización se evaluarán los siguientes
parámetros para ambos experimentos que utilizaron plantas de trigo:
3.7.1 Determinación peso seco. Las plantas fueron secadas en hornos de secado a
una temperatura de 70° C por 48 horas y luego se pesaron de forma separada la parte
aérea y la parte radical de cada unidad experimental en una balanza analítica.
Se utilizaron dos cepas solubilizadoras de fósforo, que habían sido aisladas a partir de
plantas de mora o murra (R. ulmifolius) cepa P. fluorescens C139 y evaluada en
plantas de trigo el año 2008 y otra cepa aislada el año 2011 desde un cultivos de trigo
cepa Serratia spp. T3, evaluada bajo condiciones in vitro. Se realizó un desarrollo
metodológico de varias etapas que permitieron la formulación y evaluación preliminar
en plantas de trigo de estas BSP. El desarrollo metodológico constó de dos etapas;
primero, se realizaron pruebas de patogenicidad, y se elaboró un procedimiento de
formulación que permitiera encapsular a las dos bacterias. Adicionalmente se
evaluaron las respuestas físicas y biológicas para el bioencapsulado, así se probaron
las condiciones y características de las distintas mezclas de matrices para encontrar la
más adecuada para el proceso de encapsulación. Principalmente se consideró en este
proceso encontrar un tamaño adecuado, resistencia después del proceso de secado y
que tuviera una forma esférica, además que no presentaran contaminación significativa
con otros microorganismos.
En las pruebas con las muestras de almidón y alginato, las diluciones que se
sembraron en placas con medio de cultivo AST se obtuvo crecimiento de bacterias
contaminantes. Para las diluciones de la solución de alginato se obtuvieron como
promedio d 33 UFC en la dilución 10-4, mientras las diluciones de la solución de
almidón obtuvieron un promedio de 167 UFC en la dilución 10-4, con esto se demuestra
que hay contaminación y debido a que lo necesario es que las biocápsulas solo
contengan los microorganismos solubilizadores de P ambos compuestos antes de
mezclarlos con el cultivo bacterial fueron esterilizados para elaborar la matriz de
gelificación.
Para carragenano y suero de leche no se realizaron estas pruebas ya que luego del
ensayo de matrices de encapsulación se determinó que no se utilizarías para formular
las matrices de bioencapsulación como se discutió anteriormente.
30
Como resultado en la prueba de patogenicidad se pudo observar que de las seis cepas
solubilizadoras de P aisladas y probadas en esta prueba (8b; 1B; B3; T3; 11A; 1), tres
produjeron pudrición y necrosis en los tejidos de tubérculos de papas, las cepas 8b;
1A; y B3 (Figura 1). Por lo cual fueron descartadas para su uso en posteriores ensayos
con plantas de trigo. De estas tres posibles cepas se escogió la cepa Serratia spp. T3
para el proceso de bioencapsulación e inoculación en plantas de trigo, ya que no fue
patogénica y en trabajos anteriores realizados in vitro por (OSMAN 2011), esta bacteria
presentó un marcado efecto solubilizador de fósforo.
Estos antecedentes concuerdan con los resultados obtenidos por (OSMAN, 2011),
quien demostró que la cepa Serratia spp. T3 produjo la mayor solubilización de P
desde una fuente fosforada insoluble en comparación a otras cepas solubilizadoras
aisladas. Sin embargo, los resultados obtenidos por la cepa P. fluorescens C139
fueron menos alentadores que los observados en estudios realizados por
(NIKLITSCHEK, 2008) en el cual se compararon distintas cepas solubilizadoras de P, y
en donde la mayoría de las cepas que obtuvieron un mayor índice de solubilización de
P incubadas en agar Pikovkaya a los 7 días, pertenecían al género Pseudomonas y
específicamente a la cepa C139.
32
En base a los datos observados en el Cuadro 6 se pudo estimar cuantas UFC de BSP
habían por gramo de cápsula y se pudo establecer el promedio de UFC por cápsula
que se utilizaron en experimentos posteriores.
La cepa bacterial solubilizadora de P que alcanzó una mejor colonización de la raíz fue
la cepa Serratia spp T3. El mayor crecimiento de esta cepa podría deberse a que esta
bacteria fue aislada de la rizósfera de plantas de trigo (OSMAN, 2011), por lo cual
podría mostrar mayor afinidad al ambiente rizosférico propio de este cultivo. Distintos
estudios han indicado que la presencia de plantas hospederas o genotipos influyen en
la comunidad microbiana debido a la respuesta diferencial de estos organismos a las
diferentes señales radicales y patrones de exudación, especialmente cuando las
plantas se encuentran bajo estreses ambientales (LYNCH Y WHIPPS, 1990;
RICHARDSON, 1994), como ha sido descrito con estrés causado por deficiencia de
fósforo (HINSINGER, 2001)
34
4.7 Resultados del ensayo para determina el efecto de las dos bacterias
solubilizadoras de fósforo (P), cepa P. fluorecens C139 y cepa Serratia spp.T3 en
cultivo de trigo bajo condiciones experimentales.
misma cepas solubilizadora de fosforo C139 aislada y probada en plantas de trigo por
Niklitshek (2008), además de la cepa Serratia spp. T3 aislada por Osman (2011). Los
datos de biomasa aérea no presentaron diferencias significativas para los tratamientos
entre cepas solubilizadoras y el tratamiento sin cepa (p <0,05; Cuadro 8). En el
tratamiento 0 absoluto y el que no fue tratado con P soluble en la solución (0 ppm) se
evidenció una mayor biomasa radical en las plantas inoculadas con la cepa Serratia
spp. T3, pudiendo existir algún efecto hormonal que promueva el crecimiento de la
parte radical. No obstante lo anterior, estas diferencias no fueron significativas entre
los tratamientos en dichos niveles de disponibilidad de P. Finalmente en los resultados
obtenidos para altura de planta tampoco presentaron diferencias significativas.
Letras diferentes indican diferencias significativas entre tratamientos para cada nivel de fósforo contenido
en el sustrato (p<0,05;Test LSD).
En ensayos de solubilización in vitro establecido por (OSMAN, 2011) con otras cuatro
cepas para probar la solubilización en distintos medios de P insoluble que contenían
Ca3 (PO4)2; Al (PO4)2; Fe (PO4)2. Con respecto al medio que contiene Ca3 (PO4)2, la
cepa Serratia spp. T3 logró un crecimiento óptimo al séptimo día a diferencia del resto
de cepas (OSMAN, 2011). Además esta cepa T3 mostró la mayor solubilización de
fosfato (175,6 mg/L) al séptimo día de incubación entre las cuatro cepas
seleccionadas. En este ensayo utilizando plantas de trigo se pudo comprobar el efecto
que producía la cepa Serratia spp. T3 influenciando una mayor concentración de P en
los tejidos debido a la solubilización realizada.
38
Sin inoculación
0 Absoluto 0,27 (±0,05)2 0,17 (±0,04) 15,48 (±1,71) 0,18(±0,02)
1
0 ppm Sol. N +R.F 0,37 (±0,04) 0,24 (±0,05) 16,40 (±1,57) 0,19(±0,02)
0,25 ppm Sol. N + R.F 0,52 (±0,04) 0,31 (±0,04) 21,10 (±2,25) 0,19 (±0,01)
0,5 ppm Sol. N + R.F 0,49 (±0,03) 0,31 (±0,08) 16,20 (±1,44) 0,19 (±0,01)
1 ppm Sol. N + R.F 0,47 (±0,10) 0,41 (±0,06) 19,34 (±1,06) 0,24 (±0,04)
3 ppm Sol. N + R.F 0,70 (±0,03) 0,54 (±0,18) 25,44 (±3,33) 0,25 (±0,02)
Serratia spp. cepa T3
0 Absoluto 0,27 (±0,07) 0,19 (±0,05) 15,74 (±0,92) 0,19 (±0,03)
0 ppm Sol. N +R.F 0,50 (±0,06) 0,26 (±0,07) 18,90 (±1,32) 0,23 (±0,01)
0,25 ppm Sol. N + R.F 0,57 (±0,03) 0,39 (±0,06) 21,78 (±1,14) 0,25 (±0,03)
0,5 ppm Sol. N + R.F 0,49 (±0,03) 0,49 (±0,03) 16,70 (±1,04) 0,23 (±0,02)
1 ppm Sol. N + R.F 0,52 (±0,05) 0,41 (±0,03) 19,84 (±2,16) 0,26 (±0,03)
3 ppm Sol. N + R.F 0,71 (±0,05) 0,57 (±0,07) 26,22 (±2,01) 0,32(±0,03)
1
Sol. N + R.F: Tratamientos que utilizaron riego con solución nutritiva (Sol. N) con concentraciones
variables de fósforo soluble más 10 ppm de roca fosfórica (R.F), que fueron mezclada en un sustrato de
arena de cuarzo.
2
Desviación estándar para cada tratamiento
39
Cabe destacar que el periodo de dos meses fue suficiente en este segundo
experimento para generar diferencias de absorciones de P, pero se requirió aumentar
al doble el número de plantas por macetero y además disminuir las concentraciones de
P solubles aportadas a través de riego. Con este aumento en la cantidad de semillas
se produjo una mayor demanda de P por parte de las plantas y con la disminución de
las concentraciones de P soluble se favoreció la generación de un sistema deficiente
en P para el experimento. Esta mayor demanda en un sistema deficiente aumentó la
absorción principalmente de los fosfatos solubilizados por las bacterias a partir de la
roca fosfórica ya que existía poco fósforo soluble aportado por el riego. Así se pudo
observar el efecto solubilizador de P de la cepa Serratia spp. T3.
5 CONCLUSIONES
- El estudio demostró que ambas cepas evaluadas solubilizaron fósforo que pudo ser
absorbido por las plantas de trigo y que la solubilización de la roca fosfórica producida
por la cepa Serratia spp. T3 fue mayor en presencia o ausencia de las plantas de trigo.
6 BIBLIOGRAFIA
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ANEXOS
Agar Pikovskaya
10 g glucosa; 5g Ca3PO4; 0,5g (NH4)2SO4; 0,2g NaCl; 0,1g MgSO 4*7H2O; 0,2g KCl;
0,5g FeSO4*7H2O; 0,02g Azul de bromocresol (Indicador de pH); 15 g Agar, 1000ml
H2O destilada.
Esterilizar a ¾ atm durante 15 minutos.
Alginato
Es un polisacárido derivado de algas marrones de origen marino (Phaeophyceae), se
encuentra formando parte de la pared celular de las algas, de forma análoga a la
celulosa y pectina en la pared celular de las plantas terrestres (MANCINI y MCHUGH,
2000). El ácido algínico es un co-polímero insoluble y de bajo peso molecular de los
ácidos gulurónico (G) y manurónico (M), forman geles rápidamente en presencia de
calcio, experimentando cambios conformacionales dando lugar al modelo de gelación
conocido como “caja de huevo” debido a esto presentan buenas características para
ser empleados en encapsulación de sustancias (ROJAS y MARTIN, 2006).
Entre los polisacáridos, el alginato constituye uno de los biopolímeros más usados
debido a unas propiedades coloidales únicas y a su habilidad para formar geles fuertes
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Características Químicas.
Fósforo total 17 - 19 % (como P2O5)
Reactividad* 90 % (como P2O5)
Fósforo soluble en agua 0,037 % (como P2O5)
Calcio 30,0 % (como CaO)
Magnesio 1,2 % (como MgO)
Potasio 0,6 % (como K2O)
Azufre 3,00 % (como SO4)
Boro 0,05 % (como B)
Carbonato de Calcio 7 - 10
*La reactividad corresponde al porcentaje de fósforo soluble en ácido cítrico al 2%, con
dos extracciones, respecto al fósforo total.
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Análisis de varianza para biomasa aérea de plantas, inoculadas con cepa Serratia
spp. T3.
Análisis de varianza para altura de plantas, inoculadas con cepa Serratia spp. T3.