OBJETIVOS

1. Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la

prueba de Molish.
2. Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos
específicos.

RESUMEN

En esta práctica se realizaron diferentes pruebas de identificación de carbohidratos,

como también se probó su solubilidad en agua.

I. Para la prueba de solubilidad se depositó agua en tubos de ensayo con glucosa,

sacarosa y almidón; obteniendo resultados positivos de solubilidad para todas
las muestras a excepción del almidón que es poco soluble.
II. Para la prueba de identificación de Molish se colocó glucosa, leche y miel en
tubos de ensayo diferentes, luego se añadió reactivo de Molish seguido de ácido
sulfúrico a cada muestra. Dicha prueba dio positiva para las tres muestras
formando un anillo color violeta en la parte inferior del tubo.
III. Prueba de Selliwanoff: en dos tubos diferentes se agregó una pequeña cantidad
de fructosa y glucosa, luego se añadió el reactivo de Selliwanoff a cada muestra
y se llevó a baño maría. La prueba fue positiva para la fructosa, dando una
coloración rojiza a la solución.
IV. Para realizar la prueba de tollens se agregó glucosa, sacarosa y fructosa en
diferentes tubos, después de añadirle un poco del reactivo de tollens y llevarlo a
baño maría se obtuvo que: la glucosa y la fructosa reaccionaron ambas al mismo
tiempo formando un espejo de plata, en cambio la sacarosa tardó más tiempo en
reaccionar formando también un espejo de plata.
V. En la prueba de Fehling se utilizó glucosa, fructosa y sacarosa como
carbohidratos, a los cuales se les agregó un poco del reactivo de Fehling y se
calentó en baño maría. Dicha prueba fue positiva para la glucosa y la fructosa.
VI. En la prueba de Barfoed se utilizaron como muestra la sacarosa, glucosa,
fructosa y almidón. Luego de agregarles el reactivo se llevaron a baño maría,
 dando como resultado positivo solamente para la glucosa y la fructosa
presentando un precipitado de color rojizo.
VII. Prueba para sacarosa: para esta prueba se agregó HCl a la sacarosa y se calentó,
luego se agregó NaOH y se dividió la solución en dos partes y se realizaron
pruebas de Salliwanoff y Fehling por separado. Dando negativo para la prueba
de Salliwanoff y positivo para Fehling presentando una coloración café-rojiza
con un precipitado café.
VIII. Para la prueba de polisacáridos se mezcló una solución de almidón con yodo
dando una coloración azul oscuro indicando que dicha prueba fue positiva.
 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Y RESULTADOS

I. Prueba de solubilidad en agua.

1. En tres tubos de ensayo limpios se
colocó una pequeña cantidad de
carbohidratos: glucosa, sacarosa y almidón.
2. Se añadieron 2 ml de agua a cada tubo
y se agitó.
Resultado: al agitar los tubos de ensayo se
observó que todas las muestras son solubles
en agua, a excepción del almidón que es poco
soluble.

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

II. Prueba de Molish.

1. Se colocó 1 ml de tres muestras:
glucosa, leche y miel en tubos de ensayo
(cada muestra en tubos diferentes).
2. Se agregaron 5 gotas del reactivo de
Molish a cada muestra.
3. Se añadió cuidadosamente por las
paredes del tubo 1 ml de ácido sulfúrico
concentrado hasta formar dos capas y se
observó.
Resultado: dio positiva para las tres
muestras formando un anillo color violeta
en la parte inferior del tubo.
III. Prueba de Selliwanoff.

1. En un tubo de ensayo se adicionó 0.5

ml de solución de fructosa y en un
segundo tubo se adicionó 0.5 ml de
solución de glucosa.
2. Se adicionó 1 ml del reactivo de
Selliwanoff a cada tubo.
3. Se calentó por 1 minuto en un baño de
agua hirviendo.
Resultado: la prueba dio positiva
únicamente para la fructosa, presentando
una coloración rojiza.
IV. Prueba de Tollens.
1. Se agregó glucosa, fructosa y sacarosa
en diferentes tubos.
2. Después se añadieron 2 goteros del
reactivo de tollens a cada tubo.
3. Por último, se llevó a baño maría.
Resultado: se obtuvo que la glucosa y la
fructosa reaccionaron ambas al mismo
tiempo formando un espejo de plata, en
cambio la sacarosa tardó más tiempo en
reaccionar formando también un espejo
de plata.
V. Prueba de Fehling.
1. Se tomaron tres tubos de ensayo y se enumeraron del 1 al 3.
2. Se agregó 1 ml de las siguientes soluciones: solución de glucosa al 2% al
tubo 1; 1ml de solución de fructosa al 2% al tubo 2 y 1 ml de solución de
sacarosa al 2% al tubo 3.
 3. Se agregó 0.5 ml del reactivo de Fehling A y 0.5 ml de reactivo de Fehling
B a cada uno de los tubos.
4. Se colocaron los tres tubos al mismo tiempo en un baño maría.
Resultado: la glucosa y la fructosa reaccionaron rápido observándose en
ambas una oxidación, dando la formación de un precipitado color rojo
ladrillo. En cambio, la sacarosa fue una reacción lenta, se fue oxidando
poco a poco hasta formar una solución color naranja.

VI. Prueba de Barfoed.

1. En 4 tubos de ensayo se adicionó: al primero 0.5 ml de solución de
sacarosa, al segundo 0.5 ml de solución de glucosa, al tercero 0.5 ml de
solución de fructosa y al cuarto 0.5 ml de solución de almidón.
2. Se agregó 1 ml del reactivo de Barfoed a cada tubo.
3. Se calentó en baño maría por 2 minutos y se dejó reposar.
Resultado: la glucosa y la fructosa fueron pruebas positivas por la
formación de un precipitado de color rojo ladrillo indicando la presencia
de monosacáridos. Con la sacarosa se observó la formación leve de un
precipitado rojo; por otra parte, con el almidón no hubo reacción.
VII. Prueba para Sacarosa.
1. A 2.5 ml de una solución de sacarosa se agregaron 3 gotas de HCl
concentrado.
2. Se calentó durante 5 minutos en un baño de agua hirviendo.
3. Se enfrió y se agregó NaOH 1M hasta neutralizar la solución.
4. Se dividió la solución en dos partes y se realizaron por separado las
pruebas de Fehling y Salliwanoff.

Resultado: Prueba de Fehling: al agregar el Fehling a la solución se formó

un precipitado muy colorido; luego del calentamiento la solución se puso
color café-rojizo con un precipitado café.
Prueba de Selliwanoff: al agregar el reactivo de Salliwanoff a la solución,
esta se puso incolora y después de su calentamiento adquirió una
coloración naranja.
 Antes del calentamiento Después del calentamiento

VIII. Prueba para Polisacáridos.

1. A 1 ml de solución de almidón se
añadieron unas gotas de solución de yodo.

Resultado: se observó la producción de

un color azul oscuro en la solución.
 ANÁLISIS DE RESULTADOS

I. Prueba de solubilidad.
La glucosa y la sacarosa son carbohidratos solubles en agua debido a que forman
puentes de hidrógeno con el agua, por la disponibilidad de grupos OH que
poseen. La glucosa es un monosacárido y la sacarosa un disacárido por lo tanto
son altamente solubles en agua.
Los carbohidratos con peso molecular alto son insolubles en agua, como lo es el
almidón, ya que es un polisacárido.
II. Prueba de Molish.
Es una prueba cualitativa para identificar la presencia de carbohidratos. Esta
prueba es una prueba de hidrólisis en la que se rompen los enlaces de los
disacáridos y polisacáridos, para dar monosacáridos que luego son
deshidratados dando furfural. Estos reaccionan con α-naftol (del reactivo de
Molish) originando un complejo púrpura.
En el caso del tubo de ensayo con leche lo que ocurre al agregar el H2SO4 es la
hidrólisis del carbohidrato principal de la leche (la lactosa). El enlace que se
rompe es de la glucosa y la galactosa, estos dos compuestos se condensan por
separado con el α-naftol para dar un complejo coloreado azul purpura.
En el caso de la sacarosa lo que ocurre es la separación de sus dos monosacáridos
(glucosa y fructosa) para luego deshidratarse y reaccionar con el α-naftol.
III. Prueba de Selliwanoff.
La prueba de Selliwanoff es una prueba química que se usa para distinguir
aldosas y cetosas. Si el azúcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si
contienen un grupo aldehído, es una aldosa. Esta prueba se basa en el hecho de
que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas más rápido que las aldosas.
Entonces, comprobamos que la fructosa es una cetosa, ya que posee un grupo
cetona en se fórmula; la cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol (El
reactivo de Selliwanoff consiste en resorcinol y ácido clorhídrico concentrado)
para producir un color rojo en la solución, indicando que la prueba es positiva.

Reacción de la fructosa.

Por lo tanto, como la glucosa posee un grupo aldehído es una aldosa, por lo que
tarda mucho tiempo en deshidratarse al calentarse y no hay reacción.

IV. Prueba de Tollens.

Al agregar el reactivo de Tollens a los tubos de ensayo se observó la formación
del espejo de plata en la fructosa y glucosa debido a que son monosacáridos, los
cuales se reducen fácilmente, oxidando la plata a plata elemental.
Esta prueba de Tollens es una reacción de oxidación en la cual se identifican a
los monosacáridos llamados aldosas (como la glucosa) ya que los
monosacáridos conocidos como cetosas no reaccionan. Sin embargo, la fructosa
(la cual es un monosacárido conocido como cetosa) reduce el reactivo de Tollens
debido a que se isomeriza fácilmente en una mezcla de aldosas.
 Reacción de la fructosa.

Reacción de la glucosa.

La sacarosa, por su parte no debió de reaccionar debido a que sus grupos

aldehídicos y cetónicos no están libres. Sin embargo, luego de calentar la
solución la prueba dio positiva ya que el compuesto se hidrolizó, quedando en
solución la glucosa y fructosa.

V. Prueba de Fehling.
Al igual que la prueba de Tollens, la prueba de Fehling se fundamenta en el poder
reductor del grupo carbonilo en las aldosas, debido a que tienen una estructura
química abierta necesaria para actuar como agentes reductores.
El precipitado rojo que se observó el tubo de ensayo de la glucosa y fructosa es
debido a que el grupo aldehído que poseen dichos compuestos se oxida a ácido
y reduce al Cu2+ a Cu+, formando así en solución, óxido de cobre.

Reacción de la glucosa.
 Reacción de la fructosa.

Para la sacarosa, esta es una prueba negativa debido a su estructura química. Se

observó que la sacarosa se oxidó un poco dando una coloración naranja; dicha
oxidación se dio debido a la hidrólisis que hubo en la reacción por el exceso de
calor suministrado.

VI. Prueba de Barfoed.

Al agregar el reactivo de Barfoed se pudo observar un precipitado rojizo en los
tubos con glucosa y fructosa, pero no con el almidón. Esto se debe al poder
reductor que posee la glucosa y fructosa; esta reacción es muy similar a la
reacción con Fehling debido a que en ambas reacciones se da la reducción del
cobre II a cobre I en la solución, ya que el reactivo de Barfoed contiene acetato
cúprico el cual es reducido a óxido cuproso por la glucosa y fructosa.
VII. Prueba para Sacarosas.
La primera reacción que se lleva a cabo en esta parte al agregar calor y HCl a la
sacarosa es:
 La sacarosa es un disacárido compuesto por glucosa y fructosa; al agregar HCl y
calor rompemos el enlace que mantiene unidos a estos dos monosacáridos.
Después de agregar reactivo de Fehling a la solución, esta se torna café-rojiza
debido a que la glucosa y fructosa reaccionan reduciendo el Cu2+ a Cu+ y el
precipitado formado es el óxido cuproso.

VIII. Prueba para Polisacáridos.

Esta reacción es el resultado de la formación de cadenas de poli yoduro a partir
de la reacción del almidón con el yodo presente en la solución de yodo. La
amilosa, es el componente del almidón de cadena lineal, que forma hélices donde
se juntan las moléculas de yodo, formando así un color azul oscuro a negro.
 CUESTIONARIO

1. Explique estructuralmente, ¿porqué la maltosa es un azúcar reductor y porqué el

almidón no lo es, según sus observaciones?
R/= Esto se debe a que la maltosa es un disacárido, cuyos grupos OH están menos
impedidos en comparación con el almidón, el cual es una macromolécula cuyos
grupos aldehídicos y cetónicos están impedidos o comprometidos. Además, la
maltosa está compuesta por monosacáridos y el almidón está compuesto por
polisacáridos.

2. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los

carbohidratos.
R/= Bulimia y anorexia, diabetes tipo 1 y 2, obesidad y enfermedades
cardiovasculares.

3. ¿Por qué la celulosa a pesar de estar formada por moléculas de glucosa es insoluble
en agua?
R/= Debido a que su estructura es fibrosa (lineal), en la que se establecen múltiples
puentes de hidrógeno entre los grupos hidroxilo de distintas cadenas yuxtapuestas
de glucosa, haciéndolas impenetrables para el agua.

4. ¿Por qué la sacarosa es un azúcar no reductor?

R/= No contiene ningún átomo de carbono anomérico libre, puesto que los
carbonos anoméricos de sus dos unidades monosacáridas constituyentes se hallan
unidos entre sí, covalentemente mediante un enlace o-glucosídico. Por esta razón,
la sacarosa no es un azúcar reductor y tampoco posee un extremo reductor.
5. Consulte el fundamento de otras técnicas usadas para la determinación de la
glucosa en el laboratorio.
R/= Reacción de Braun: sirve para el reconocimiento de azúcares reductores como
la glucosa. En medio alcalino se puede reducir el picrato de color amarillo, a
picramato de color rojo en medio alcalino (Na2CO3).
 CONCLUSIONES

o La prueba de Molish es una prueba cualitativa que permite detectar la presencia

de carbohidratos en una muestra, cuando esta prueba resulta positiva se forma
en solución un complejo púrpura. Este hecho se pudo observar al realizar la
prueba con leche y sacarosa cuyas soluciones se tornaron púrpura luego de
agregar el reactivo de Molish y ácido sulfúrico.

o Algunos carbohidratos necesitan pruebas específicas para ser identificados del

resto, por ejemplo: la sacarosa es el único disacárido común no reductor, por lo
tanto, no reduce las soluciones alcalinas de cobre.