Diana Aylin Toscano Pizarro

Mat #135060
Equipo #2
Laboratorio de Microbiología

Practica #1 Microscopia

El microscopio óptico es un instrumento utilizado para observar objetos extremadamente

pequeños que el ojo humano no puede percibir a simple vista. La ciencia de investigación de
objetos pequeños utilizando el microscopio, se le llama microscopia. La microscopia fue
descubierta por un comerciante de telas cuyo nombre fue Anton van Leeuwenhoek, pulía
lupas y colocaba una sobre otra. El primer microscopio fue creado por el mismo después de
haber visto atravez de sus lupas microorganismos en las gotas de lluvia así fue como se
curiosidad empezó a crecer.

PALABRAS CLAVE: Microscopio, Microorganismo, Diafragma, Revolver, Oculares,

Lupas, Inmersión, Eucariotas, Procariotas, Platina, Micrométrico.

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA. el fundamento de las diferentes clases

Que el alumno se familiarice con las de microscopios.
partes del microscopio de luz, con su El microscopio es el instrumento más
manejo y sus cuidados y que conozca utilizado en laboratorio de
microbiología ya que proporciona un campo claro, campo obscuro,
agrandamiento y amplificación en los contraste de fases y de fluorescencia.
microorganismos los cuales no El microscopio electrónico del de luz
podríamos ver a simple vista y de los emplea haces de electrones la cual
cuales nunca hubiéramos tenido produce una imagen amplificada hasta
noción de saber que existían. de un millón de veces. Esto hace
Existen dos tipos de microscopios los posible la observación de
ópticos de luz y los microscopios microorganismos tan pequeños como
electrónicos. El microscopio óptico los virus.
tiene sus variantes las cuales son de Las partes de el microscopio son:

• Porta objetos
Revolver • Lupas

• Pinza para sujetar muestra

• Platina
Brazo • Condensador
• Tornillos macro y
micrometricos

•Lampara de tugsteno
•Boton de
Base encendido/apagado
•Cable

• Diafragma
Oculares • Lupas

• Espejos
Cabezal
Los materiales utilizados en esta
práctica serán:
 Microscopio óptico Zeiss
 Muestra de bacterias en
laminilla
 Aceite de inmersión
 Bata blanca
EJERCICIO DE TRANSPORTE Y
MANEJO DEL MICROSCOPIO:
Para transportarlo de la mesa de
microscopios a la mesa de trabajo se
debe de tomar con cuidado, con una
mano se toma del brazo y con la otra
mano se sujeta de la base del
microscopio, Se debe ubicar en el
centro de la mesa de trabajo para
evitar accidentes. Una vez en la mesa
de trabajo se debe conectar el cable
a la fuente de luz.
EJERCICIO DE ENFOQUE
1 Se Encenderá el microscopio.
2 Se moverá el revólver y se colocara
en objetivo 10x para evitar cualquier
accidente de quebrar la laminilla al
momento que tope cuando estemos
enfocando.
3 Se colocara en la platina un
portaobjetos con en este caso
bacterias y lo ajustaremos con el
tornillo macrometico lo acercaremos
el objetivo a la platina hasta que tope,
posteriormente iremos alejándolo
hasta que obtengamos una imagen ,
posteriormente moveremos el tornillo
METODO
micrométrico para afinar la imagen y
se pueda ver mas nítida.
4 Para poder lograr una imagen mas
cercana mueva el revólver
lentamente para retirar el objetivo de
10X y cambie al objetivo de 40 X.
Ajuste el enfoque con el tornillo
micrométrico.
5 Para poder ver con el ultimo
enfoque nuevamente mueva el
revólver lentamente para retirar el
objetivo de 40X, coloque una gota de
aceite de inmersión sobre la
preparación. A continuación mueva
de nuevo el revólver con cuidado,
dejando que la lente del objetivo de
100 X quede en contacto con el
aceite. Ajuste el enfoque con el
micrométrico. El aceite aumenta la
cantidad de luz que pasa a la lente
del objetivo.
6 Cuando terminemos, movimos el
revólver antes de sacar la
preparación y enseguida limpiamos el
aceite del lente, con papel seda. Se
limpia del enfoque 10x primero para
proseguir con el 40x y por ultimo el
100x que es el que contiene la mayor
cantidad de aceite.
RESULTADOS
Discusión
En la practica de microscopia
pudimos ver las capacidades del
microscopio su uso y funcionamiento,
viendo las desigualdades topológicas
de cada objeto con mayor
profundidad en este caso, vimos
bacterias y pudimos diferenciar que
en el enfoque de 10x llamado seco
devil prácticamente no se logran notal
bien los microorganismos solamente
se ven islas de bacterias las cuales
tampoco se diferencia muy bien la
tinción dada. Luego cambiamos a
enfoque de 40x seco fuerte donde se
ve mas claramente los
microorganismos los cuales podemos
diferencial o suponer que su forma es
cilíndrica y hay tanto monococos
como diplococo y estreotococos etc.
Para poder lograr un enfoque aun
mayor cambiamos a 100x llamado
inmersión el nombre dado ya que
utilizamos aceite de inmersión en
esta vista se observa aun mayor
enfoque y nitidez y podemos decir
que se utilizo la tinción de gram y se
logra ver una gran isla de bacterias
unidas entre si.
Conclusion
Existen microscopios mucho mas
modernos como lo son los
electrónicos pero en este caso los
microscopios ópticos son de gran
ayuda para poder analizar muestras y
asi poder conocer los diferentes tipos
de microorganismos y sus
características los cuales tienen
contacto con nosotros todos los días
pero no nos detenemos a pensar en
ellos, es muy interesante poder tener
un aparato que nos ayude a tener
una visión mas amplia que en nuestra
vida diaria nuestros ojos no logran
alcanzar a ver, en nuestra vida se
encuentra un mundo de
microorganismos los cuales solo con
un microscopio podemos observar.
Cuestionario.
1 Cómo se forma la imagen del
microscopio?
La imagen en un microscopio se
forma por la transmisión de los rayos
provenientes de una fuente luminosa
a través del objeto. Los rayos
luminosos atraviesan el diafragma,
que a manera de iris, delimita el
diámetro del haz lumínico que
penetra por el condensador. Este
último, está formado por un sistema
de lentes convergentes que
concentra y proyecta el haz lumínico
sobre el objeto a examinar, a través
de la abertura de la platina. El
objetivo recoge la luz que atravesó el
objeto examinado y proyecta una
imagen real, invertida y aumentada
que se forma dentro del tubo y que es
recogida por el ocular que es la
segunda lente, la cual forma una
imagen virtual, invertida y aumentada
del objeto examinado.
2 Por qué se usa el aceite de
inmersión con el objetivo de 100 X
sólamente.
Porque los objetivos de mayor
aumento, tienen una distancia focal
muy pequeña y además el lente del
objetivo es de pequeño diámetro y al
intercalar, entre el objetivo y el
cubreobjetos una gota de aceite de
cedro, de índice de refracción casi
igual al vidrio, los rayos emergentes
ya no se apartan de la normal, si no
que continúan su camino sin
desviación, consiguiendo así que una
mayor cantidad de luz llegue al
objetivo, mejorando la visión.
3 Consulte la literatura y describa
otras clases de microscopio no
mencionadas.
Microscopio de luz transmitida
Los microscopios de luz transmitida
sirven para contemplar preparados
transparentes y muy finos.
Cuanto más fino sea el preparado,
con más precisión podrá
observarlo. Sin embargo, puede usar
los microscopios de luz
transmitida para ver la superficie de
muestras de cuerpos
opacos, como por ejemplo,
granulados o sedimentos. En
tales casos, el preparado se observa
como un juego de luz y
sombras. En este tipo de
microscopios el rayo de luz suele
proyectarse desde abajo,
atravesando el preparado, cuando
este seatransparente.
Microscopio de luz reflejada
microscopio óptico
En este tipo de microscopio se
ilumina el preparado desde
la parte superior a través del objetivo
o lateralmente. La luz reflejada en el
preparado es captada por el objetivo.
Gracias a esta técnica es posible usar
preparados opacos o espesos. Los
microscopios de luz reflejada se usan
con frecuencia en la microscopía de
fluorescencia o en la mineralogía.
Microscopio estereoscópico
(microscopio óptico)
Los microscopios es
tereoscópicos son básicamente
microscopios de luz reflejada. El
preparado se suele iluminar desde la
parte superior o inferior. La mayoría
de los microscopios estereoscópicos
permiten iluminar también desde
la parte inferior.
Los microscopios estereoscópicos se
diferencian de otros microscopios en
que disponen de dos entradas de luz
separadas, que están ordenados en
un ángulo determinado. Cada entrada
de luz integra su propio objetivo y
ocular.
Microscopio de fluorescencia
(microscopio óptico)
Aquí se suele excitar desde un
colorante fluorescente en la muestra
mediante una luz con una
determinada longitud de onda desde
el exterior. El colorante
fluorescente emite la luz. Esa luz
tiene una longitud de onda más larga
que la luz excitada (Soke’sShift). En
la trayectoria del rayo se puede
separar mediante filtros ópticos la luz
fluorescente de la luz excitada, y
reenviarla al ocular o la cámara.
El límite de resolución de un
microscopio de fluorescenciapuede
estar muy por debajo de un
microscopio óptico convencional, lo
que permite contemplar con precisión
las estructuras de una
célula o los procesos de células
vivas.
Microscopio confocal
Este tipo
de microscopía es una forma
particular de la microscopía óptica o
fluorescente. En este caso
se escanea secciones ópticas muy
finas y se compone una imagen
tridimensional. Como cada sección
es una imagen muy nítida, se
consigue una imagen 3D muy bien
enfocada.
Microscopio STED
(Stimulates Emmision Depletion)
(Microscopio de fluorescencia)
Este tipo de microscopía es un
método más reciente aún de la
microscopía de fluorescencia, con la
que se puede eludir el límite de
resolución definido por Abbe
. La ventaja es que en comparación
con un microscopio óptico
convencional, el límite de
reproducciónes muy superior, lo que
permite enfocar con mucha nitidez
detalles de estructuras. Con el
microscopio STED consigue una
resolución mejor que con un
microscopio láser convencional. En
octubre de 2014, el investigador
Stefan Hell fue galardonado con el
premio Nobel de la química por sus
trabajos de investigación con el
microscopio STED.
Microscopio electrónico
Dicho de forma muy sencilla, la
microscopía electrónica usa haz de
electrones en vez de luz. Como ya se
sabe, estos tienen una longitud de
onda mucho más corta que la luz
visible, por lo que se consigue una
resolución más alta en el rango de las
estructuras atómicas. Existe una
Catalá de Alemany. Valencia 1961
amplia variedad de electrones. Aquí
indicamos sólo los tipos más
comunes.
Tipos de microscopía electrónica
Microscopio electrónico de
transmisión (TEM)
En este caso un objeto es irradiado
por electrones. Los microscopios
TEM (microscopios electrónicos de
transmisión) son como los
microscopios de luz transmitida,
donde la absorción juega un papel
importante. Actualmente la resolución
que se consigue es de aprox. 0,05
nm
.
Microscopio electrónico de barrido
(REM),
Scanning Elektron Microscopy(SEM)
Aquí se dirige un haz de electrones
finamente concentrado en una
retícula
determinada sobre la prueba
metalizada. Los electrones
secundarios (contraste) emitidos
desde la superficie se miden como
señal y se convierten en una imagen
óptica. Para alcanzar un haz de
electrones ininterrumpido,
la medición se realiza en una alto
vacío.
pág.755 del libro "Física General".
Joaquín