Tema: Vibrio Vulnificus en ambiente

marino (Aire)

Curso: Microbiología

Docente: Biolg. Torres Díaz, César.

Facultad: Ing Agroindustrial e industrias alimentarias

Ciclo: IV

Alumnos:
 Gamarra Santúr Pedro Williams
 Lecarnaque Mendoza Andy Paúl
 Mauricio Estrada Yesby Carolina

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Tabla de Contenidos

Capítulo 1 Introducción e información general .................................................................. 1

Justificación……………………………………………………………………………...8
Hipotesis…………………………………………………………………………………………………………………………………..9
Objetivos……………………………………………………………………………… 10
Capitulo2 Materiales y Procedimiento………………………………………………………..11
Procedimiento…………………………………………………………………………..12
Bibliografía…………………………………………………………………………….16
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Capítulo 1
Introducción e información general
Vibrio vulnificus

Es un bacilo del género Vibrio; al ser tolerante a la sal, prospera en el agua marina,
especialmente en zonas cálidas. Vibrio vulnificus es un bacilo Gram-negativo curvo,
anaerobio facultativo y halófilo causante de dos entidades clínicas bien definidas de
acuerdo a la puerta de entrada del microorganismo. Una es la sepsis primaria debido a la
ingesta de productos marinos (almejas y otros mariscos o pescados) mal cocidos o
crudos, especialmente en pacientes inmunodeprimidos. La otra es la infección de partes
blandas (celulitis, miositis y/o fascitis necrosante) a través del contacto con el agua de
mar de heridas preexistentes o adquiridas en el ambiente marino.

Patógeno oportunista del ser humano, provoca infecciones normalmente a través del
consumo de mariscos o pescado crudo, aunque puede también ingresar al organismo
durante el baño a través de heridas superficiales. Vibrio vulnificus es una bacteria Gram
negativa, oxidasa positiva y anaerobia facultativa. Posee forma de bastoncillo y un
flagelo polar, no forma esporas y soporta alcalinidades relativamente elevadas, hasta el
pH 9. Fue descrito por primera vez en 1976 como un vibrio lactosa positivo sin nombre1
(posteriormente nombrado como Beneckea vulnificus).2 Dentro de la especie se
diferencian tres biotipos basados en sus diferencias morfológicas (fenotipo): el biotipo 1,
de distribución mundial y aislado principalmente en su medio natural y en enfermos, el
biotipo 2, también de distribución mundial y aislado en peces y humanos, y el biotipo 3,
aislado únicamente en enfermos de Israel.

El bacilo llega normalmente al torrente sanguíneo a través del consumos de pescado o

marisco infectado y ocasionalmente desde el agua del mar a través de heridas abiertas. En
casos de deficiencia inmunológica provoca septicemia, infección de heridas y/o
problemas gastrointestinales teniendo los pacientes que mostraban septicemia una
mortalidad superior al 50%.4 Los antibióticos son efectivos en las primeras fases de la
infección, pero en casos avanzados puede ser necesaria la amputación.
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Al igual que otros miembros del género Vibrio, coloniza el tracto intestinal, donde se fija
a las paredes y secreta toxinas que provocan diarrea; la infección es más frecuente en
pacientes con aclorhidria (producción insuficiente de ácido gástrico) o hemocromatosis.
Otros síntomas posibles incluyen la dermatitis.

Esta bacteria se puede encontrar en las aguas marinas costeras y estuarios en zonas de
climas tropicales y subtropicales que poseen grado moderado de salinidad y temperaturas
que usualmente superan 18 °C. En lo que respecta al marisco, los moluscos, que son
filtradores, adquieren Vibrios como parte de su microflora normal durante los meses
estivales.

En definitiva, el consumo de mariscos, la exposición al agua a través de las actividades

deportivas y recreativas, y el aumento de la densidad de vibrios en aguas marinas durante
los meses más cálidos son las causas que explican esta tendencia estacional de las
infecciones.

TCBS Medio

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus

y otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.

También es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar
Selectivo para Vibrios.

Agar T.C.B.S. Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa

2. Uso

Medio selectivo y diferencial para el aislamiento y cultivo de:

Vibrio cholerae

vibrio parahemolyticus

Vibrio vulnificus
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Otras especies de Vibrio

A partir de heces, aguas y alimentos.

También es conocido con el nombre “Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa”, o como
“Agar Selectivo para Vibrios”.

3. Vibrio

Los vibrios son bacterias generalmente halotolerantes y móviles por flagelo polar que son
habitantes naturales del agua salobre y salada en todo el mundo. La enfermedad intestinal
humana se ha asociado con el consumo de agua y mariscos contaminados. Vibrio
cholerae es el agente etiológico de una diarrea secretora (cólera), propagada mediante la
ingestión de agua y alimentos contaminados y por la vía fecal-oral. Otras varias especies
de Vibrio , por ejemplo, V. parahaemolyticus y V. fluvialis, son la causa de la
gastroenteritis aguda. Además, varias especies de Vibrio , por ejemplo, V. alginolyticus,
V. vulnificus y V. damsela se asocian con las infecciones extra intestinales, tales como
infecciones de heridas, septicemia, meningitis y otras. Se ha demostrado que las
infecciones de lesiones con Vibrio ocurren en especial si los pacientes tuvieron contacto
con agua salada y salobre

4. Fundamento

El extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteína aportan los nutrientes para el

desarrollo microbiano. La bilis de buey, el citrato de sodio y el pH alcalino inhiben el
desarrollo de flora acompañante, favoreciendo el crecimiento de Vibrio spp. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmótico y debido a su alta concentración también contribuye
a la selectividad del medio. La sacarosa es el hidrato de carbono fermentable y el azul de
bromotimol y azul de timol son los indicadores de pH que en un ambiente alcalino le
otorgan al medio de cultivo el color verdeazulado y viran al color amarillo en medio
ácido (por utilización de la sacarosa). El tiosulfato de sodio es la fuente de azufre y junto
con el citrato ferrico permiten la detección de la producción de ácido sulfhídrico por
formación de un compuesto color negro. El agar es el agente solidificante.
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5. Características del medio

Color: Verde azulado

pH: 8,6 +- 0,2

Almacenamiento: 2-8°C

Incubación: Aerobia a 35-37°C durante 18-24 horas.

Siembra: Estría, agotando el inoculo

6. Transporte

Este medio se utiliza para el aislamiento de las especies Vibrio a partir de muestras
fecales (en especial si los pacientes han consumido mariscos) o de muestras clínicas
extraintestinales si se sospecha la presencia de alguna especie Vibrio.

También se pueden utilizar muestras tales como torundas rectales, vómito y muestras de
alimentos, en especial mariscos. Las torundas deben transportarse en medio de transporte
Cary y Blair porque las especies de Vibrio son particularmente sensibles a la
deshidratación. Todas las muestras intestinales y muestras de alimentos pueden colocarse
en tubos con agua de peptona alcalina para evitar la deshidratación de los materiales y
deben transportarse al laboratorio sin demora. Los tiempos de transporte de más de 8
horas reducen la viabilidad. No se debe congelar las muestras.

7. Características de las colonias

Vibrio cholerae: Crecen colonias amarillas de 2-3 mm de diámetro, de borde traslúcido.

Vibrio alginolyticus: Crecen como colonias amarillas mucoides.

Vibrio parahaemolyticus: Crecen colonias con centro verde, borde traslúcido

Vibrio hollisae: Vibrio que no crecen en agar T.C.B.S.

Pseudomona aeruginosa: Inhibido, si crece son colonias color verde azulado.

Aeromonas hydrophila: Inhibido

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Enterococcus faecalis: Inhibido, si crece son colonias pequeñas amarillas

Escherichia coli: Inhibido, si crece son colonias pequeñas amarillas

Proteus mirabilis: Crecimiento inhibido, si no es inhibido crecen colonias de centro

verde y bordes traslucidos

8. Vibrio cholerae

Microorganismos fermentadores de sacarosa: colonias amarillas.

9. Vibrio parahaemolyticus

Microorganismos no fermentadores de sacarosa: colonias del color del medio, con centro
verde.

10. Comparación de colonias

11. Limitaciones del medio

Realizar identificación bioquímica a las colonias presuntivas de Vibrio spp.

Se recomienda no realizar la prueba de la oxidasa a las colonias de T.C.B.S. Medio

porque pueden obtenerse resultados falsos negativos.

Es conveniente sembrar la muestra en paralelo con un medio de cultivo nutritivo no

selectivo ya que algunas cepas de Vibrio pueden no desarrollar satisfactoriamente en
T.C.B.S. Medio. Algunas cepas de Vibrio cholerae pueden fermentar lentamente la
sacarosa y observarse de color verdoso a las 24 horas de incubación.

Algunas cepas de Proteus y Enterococos pueden crecer y observarse como colonias

pequeñas.

El cultivo en este medio no es optimo para pruebas de aglutinación con antisuero

Fundamento
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En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteína aportan

nutrientes para el desarrollo bacteriano. Es este, el medio selectivo más adecuado para el
aislamiento de las especies de Vibrio, e inhibidor para la mayoría de las enterobacterias.
Esta inhibición se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de
bilis y un pH fuertemente alcalino. La degradación de la sacarosa es variable entre las
especies de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas
para aquellas que producen ácido a partir de este azúcar. Esto es debido al viraje del color
de los indicadores de pH azul de timol y azul de bromotimol, del color azul al amarillo en
medio ácido. Es importante tener en cuenta, que la proporción de sacarosa en el medio
está equilibrada de forma tal que no inhiba el crecimiento bacteriano por exceso de ácido.

El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de sodio

aporta azufre y junto con el citrato férrico permiten la detección de producción de ácido
sulfhídrico.

Aumentando la concentración de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura de

incubación, pueden aislarse especies marinas sin importancia sanitaria.

Características del medio

Medio preparado: verde azulado.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

La bacteria Vibrio vulnificus se presenta, fundamentalmente, en aguas calientes, se

beneficia del calor y de la salinidad del potencial hidrógeno (pH) y forma parte de la
"fauna marina local" en Uruguay.

"La bacteria penetra a través de la piel (cuando hay una herida abierta) y lo que se
produce es similar a la celulitis con fiebre, a partir de ahí se produce una necrosis local
que luego se disemina a todo el organismo", explicó Raquel Rosa, directora general de
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Salud del ministerio de Salud Pública de Uruguay, aunque advirtió que la forma más
común de contagio es a través del consumo de mariscos poco cocidos o crudos.

Según un artículo de MontevideoPortal, se la conoce como la "bacteria comedora de

carne", por la velocidad con la que actúa sobre el organismo, en muchos casos
provocando que se deban amputar los miembros infectados.

La bacteria tiene dos formas de infección: ya sea por el consumo de productor marinos,
como mariscos, pescados o almejas, mal cocinados, que es como ocurre en el 90% de los
casos; o por la infección a través de heridas adquiridas en el ambiente marino y que
entran en contacto con el agua del mar.

La bateria Vibrio se clasifica dentro de la familia de la Vibrionaceae, cuyas variantes más

conocidas como Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus y Vibrio vulnificus, todas
asociadas a infecciones invasivas y graves,

Esta bacteria es halofílica, lo que quiere decir que necesita sal para sobrevivir y crecer.
Por esta razón se encuentra en aguas marinas costeras, con climas tropicales y
subtropicales con temperaturas que superan lo 18 °C.

En Uruguay el primer caso que se conoció ocurrió en el 2001 y desde entonces aparece
en cada temporada, generalmente durante el verano cuando las aguas del océano
Atlántico suben,

El primer caso registrado en Uruguay se dio en 2001, y desde entonces se producen

varias infecciones por año. La infección puede generar cuadros graves y mortales en
algunos casos, cuando no es detectada a tiempo. Los síntomas son: diarrea, vómitos y
dolor abdominal. En los casos de alto riesgo, el paciente sufre escalofríos repentinos,
fiebre y lesiones cutáneas.
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Justificación:

Como sabemos el Vibrio vulnificus es un bacilo Gram-negativo curvo, anaerobio

facultativo y halófilo causante de dos entidades clínicas bien definidas de acuerdo a la
puerta de entrada del microorganismo. Es un bacilo del género Vibrio; que al ser
tolerante a la sal, prospera en el agua marina, especialmente en zonas cálidas. Este
Vibrio puede generar enfermedades puede ingresar fácilmente cuando la piel sufre
alguna herida o también se da en pescados, mariscos al no ser previamente cocidos.
Esta bacteria puede avanzar muy rápido, hasta el extremo que llegar amputar la zona
que esta perjudicada.
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Hipotesis

 Se sabe que en todo ambiente Marino existe la posibilidad de encontrar bacterias

pero la bacteria Vibrio vulnicus es más propensa a desarrollarse en este medio y
por ende si no tenemos los cuidados puede llevarte a la muerte.

 Existe la posibilidad en un 50% de que en este ambiente se encuentre la bacteria.

 Los índices en cómo ataca esta bacteria mayormente es al no estar debidamente

cocinados los mariscos o el pescado, ya que en menor proporción cuando accedes
por sumergirte en el mar con una herida.
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Objetivos

 Determinar la posibilidad de que en los Manglares de San Pedro en el ambiente

marino (Aire) se encuentre la presencia de vibrio vulnificus.

 Conocer que produce está bacteria.

 El objetivo principal de este estudio en determinar si en el ambiente marino de los

manglares de San Pedro - Vice se encuentra esta bacteria. Y así poder prevenir a
los pobladores de este lugar para que tengan cuidado y que esa bacteria no los
lleve a la muerte.
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Capítulo 2
Materiales y Procedimiento

Materiales:

- Lugol.

- Cristal violeta.

- Porta objetos.

- El medio de cultivo agar (TSBS)

- Alcohol-acetona.

- Tubo de penicilina.

- Mechero.

- Pipeta.

- Tenazas.

- Recipiente de porcelana.

- Safranina.
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Procedimiento:

El presente trabajo se realizó en los manglares de San Pedro (Sechura) en donde salimos

en la madrugada esperando que la marea baje para poder salir siendo las 2:00 am, donde

llevábamos los cultivos de agar (TSBC) para poder encontrar el Vibrio vulnifucus en el

ambiente marino (aire) tomando los cultivos los destapamos y lo tuvimos por 10 minutos

con nuestra mano alzada para poder alcanzar todo el oxígeno ingrese a la muestra de

cultivo pasado el tiempo lo cerramos y lo llevamos a un lugar seguro viendo que no se

dañe el cultivo.

El siguiente paso era llevar los cultivos a laboratorio para ver si salieron positivos o

negativos de Vibrio vulnificus los resultados se muestran en la siguiente imagen:

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El color verde fue cuando recién llevamos los cultivos al medio marino (aire) luego la

descoloración en una de las partes de la placa de cultivo de color amarillo fue el resultado

de que era negativo que contenía Vibrio vulnificus en el aire.

Luego llevamos a cabo la realización de la muestra de Vibrio vulnificus negativa.

El primer paso fue sacar de la placa (Vibrio vulnifucus) una pequeña parte de muestra

con una pinza, como se muestra en la imagen

Después encendemos el mechero para someterlo al calor ese pequeño parte de muestra
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para ser pasado al frasco de TSA medio de cultivo donde lo ingresamos, luego lo

sacamos y lo colocamos a un porta objetos

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Después de poner en el porta objetos la muestra, le agregamos cristal violeta durante 2

minutos pasado el tiempo le agregamos alcohol-acetona para decolorar la muestra.

Luego pasamos a agregar lugol a la muestra por 3 minutos, como vemos en la imagen

pasado ese tiempo hacemos lo mismo que paso anterior le agregamos el alcohol-acetona.
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Después la safranina por 30 segundos, y le agregamos alcohol-acetona, para finalizar

cubrimos los porta objetos para ver vistos desde el microscopio a medida 100 x .

Lista de referencias
 https://www.infobae.com/america/america-latina/2018/02/04/todo-lo-que-hay-
que-saber sobre-la-bacteria-vibrio-vulnificus-que-provoco-tres-muertes-en-las-
costas-de-uruguay/
 https://es.wikipedia.org/wiki/Vibrio_vulnificus
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