Medios de montaje: conservación permanente

Para los análisis microscópicos, los cortes de tejido teñidos, las preparaciones ginecológicas, las muestras
bacteriológicas y las extensiones de sangre se montan normalmente con medios de montaje acuosos o no
acuosos y se cubren con un cubreobjetos si tienen que conservarse durante un periodo prolongado. Esto
permite una conservación estable y un almacenamiento prácticamente permanente de la muestra. También
asegura el cumplimiento de las pautas internacionales, las cuales exigen que las muestras clínicas
preparadas para diagnóstico se conserven durante 10 años. La elección del medio de montaje depende del
protocolo, y debe contener disolvente o agua, que se aplica a la muestra antes del montaje.

La cartera de reactivos de Merck para microscopio incluye una completa selección de medios de montaje
acuosos y no acuosos. Desarrollados y producidos de acuerdo con los mayores niveles de calidad, los medios
ofrecen una extraordinaria estabilidad y solubilidad, así como excelentes propiedades refractivas. Todos
nuestros medios de montaje son productos para DIV con certificación CE; por ende, son perfectamente
adecuados para diagnóstico clínico.

Medios de montaje acuosos

Ciertas aplicaciones en microscopia, como la tinción fluorescente o la citoquímica

enzimática, requieren el uso de medios de montaje acuosos. En este método, los portaobjetos se montan o
bien directamente desde la etapa acuosa o bien después de un breve secado. Los medios de montaje
acuosos deben utilizarse especialmente con muestras preparadas para determinaciones enzimáticas y
lipídicas. Esto evita que las muestras tengan que deshidratarse con series ascedentes de alcohol.

Nuestra gama de Medios de montaje acuosos consiste en:

 Aquatex® (agente de montaje acuoso) para microscopia

 Gelatina para microbiología
 Glicerol para microscopia de fluorescencia
 Gelatina de glicerol según Kaiser para microscopia
 Sorbitol F líquido (jarabe de sorbitol que no cristaliza) E 420

Medios de montaje no acuosos

Las muestras completamente deshidratadas, como los cortes de tejidos para histología,
deben montarse con un medio de montaje anhidro y un cubreobjetos. Estos medios de montaje anhidros
protegen la muestra y aseguran el brillo óptimo del colorante.

Nuestra gama de medios de montaje acuosos consiste en:

 Nuevo medio de montaje anhidro DPX

  Medio de montaje rápido Entellan®
 Nuevo medio de montaje rápido Entellan®
 Entellan® nuevo para cubreobjetos
 M-Glas™ cubreobjeto líquido
 Neo-Mount® medio de montaje anhidro<

TIPOS DE PORTAOBJETOS Y
UNA BUENA SELECCIÓN.
Home » Sin Categoría » Tipos de portaobjetos y una buena selección.
Previ ousN ext

Un portaobjetos de microscopio es una pieza delgada plana de vidrio de diferentes dimensiones

(típicamente 75 por 25 mm y aproximadamente 1 mm de espesor), se utiliza para fijar muestras
que posteriormente serán examinadas con un microscopio. El procedimiento a seguir es colocar la
muestra (tejido, células, microorganismos, etc.) en la diapositiva o portaobjetos, y luego ambos se
insertan juntos en el microscopio para ser observados.

Dimensiones y tipos
Existen una gran variedad de portaobjetos tanto en dimensiones como en aplicaciones tales como
los de medida estándar (75 X 25 mm) y fabricados en vidrio soda, para aplicaciones diagnósticas y
de rutina en laboratorios de histología y patología.
 Los portaobjetos son generalmente hechos de vidrio óptico de alta calidad, como el vidrio
borosilicato, pero también se utilizan algunos plásticos o cuarzos fundidos, los cuales son utilizados
cuando la transparencia ultravioleta es importante, por ejemplo, en microscopía de fluorescencia.

Mientras que los portaobjetos de fricción son los más comunes, hay varios tipos especializados
tales como:

 Portaobjetos estándar con bordes cortados o bordes esmerilados en un ángulo de 90o, estos
últimos recomendados si se trabaja con material infeccioso ya que presentan los bordes mucho
más lisos y libres de rebabas minimizando el riesgo de sufrir accidentes.
 Portaobjetos con banda mate, en uno de los extremos presenta una banda mate de vidrio
esmerilado para la rotulación y la perfecta identificación de las muestras.
 Portaobjetos con cavidades, con 1 ó 2 cavidades para el montaje permanente de especímenes
gruesos (insectos, minerales) o para aplicaciones diagnosticas en las que se requiere visualizar
células o partículas en suspensión.
 Portaobjetos con bandas de rotulación de color, ideales para la identificación de las muestras
mediante código de color, técnica de preparación, departamento del que proceden, etc.
 Portaobjetos diagnostica, especialmente diseñados para llevar a cabo técnicas de
inmunofluorescencia presentan un recubrimiento hidrofóbico y diferentes números de campo de
reacción (1, 2, 3, 6) permitiendo el análisis de un mismo tipo celular con distintos anticuerpos o
distintas diluciones del mismo anticuerpo sin peligro de contaminación cruzada.
 Portaobjetos de tamaño especial, permiten el montaje de muestras de gran tamaño o varios
cortes de tejido en una misma preparación.
La elección de un correcto tipo de portaobjeto va a depender del tipo de técnica de montaje con la
que se esté trabajando, así como la aplicación y el análisis posterior.

A continuación se describe brevemente algunos tipos de montajes:

Montaje
El montaje de las muestras en el microscopio es a menudo crucial para la visión exitosa. El
problema se ha prestado mucha atención en los últimos dos siglos y es una zona muy desarrollada
con muchas técnicas especializadas y, a veces muy sofisticadas.

Montaje en seco
En un montaje en seco, el tipo más sencillo de montaje, el objetivo no es más que colocar en la
diapositiva la muestra a analizar. Un cubreobjetos se puede colocar en la parte superior para
proteger la muestra y el objetivo del microscopio. Este montaje se puede utilizar con éxito para ver
las muestras como el polen, plumas, pelos, etc., también se utiliza para examinar las partículas
atrapadas en los filtros de membrana transparente. Se recomienda el uso de portaobjetos
estándar.

En fresco o montaje temporal

En un montaje húmedo, la muestra se coloca en una gota de agua u otro líquido contenido entre el
portaobjetos y el cubreobjetos por la tensión superficial. Este método se utiliza comúnmente para
ver los organismos microscópicos que crecen en el agua del estanque o de otros medios líquidos,
especialmente cuando el estudio de su movimiento y el comportamiento. Se debe tener cuidado
para eliminar las burbujas de aire que puedan interferir con la visualización y dificultar los
movimientos de los organismos. También se utiliza para investigaciones rápidas que no se requiera
un registro permanente, así como para examinar líquidos fisiológicos como la sangre, la orina, la
saliva, el semen, y la secreción vaginal. En este tipo de montaje se recomienda el portaobjetos con
cavidades.

Montaje preparado o montaje permanente

Para la investigación patológica y biológicas, la muestra por lo general se somete a una
preparación histológica compleja que puede involucrar el corte en secciones muy finas con un
microtomo, que se fijan en la superficie del portaobjetos, la eliminación de cualquier agua
contenida en ella, la tinción partes específicas del mismo, la limpieza para que sea transparente, e
impregnando o infiltrante con alguna sustancia sólida transparente. Como parte de este proceso de
la muestra por lo general termina bien conectado a la diapositiva. Para este tipo de montaje se
requieren portaobjetos tratados, ya sea con poli-lisina o con recubrimiento hidrofóbico.

En Metrix laboratorios contamos con una amplia gama de portaobjetos, cubreobjetos, para más
información mercadotecnia@metrixlab.com.m

Montaje de cubreobjetos
El cubreobjetos es casi lo que más se necesita en una muestra para microscopio
para proteger la delicada sección y suministrar un camino óptico claro. Elegir un
tamaño que solo cubra la sección. Los tamaños estándar son 22x22 mm, 20x30
mm, 20x40 mm, etc. Los cubreobjetos vienen en una serie de grosores
designados como los siguientes:

Designación Grosor
0.13-
#1
0.17 m
0.16-
#1½
0.19 m
 0.17-
#2
0.25 m

La mayoría de los objetivos de los microscopios están corregidos ópticamente

para el cubreobjetos para un grosor único- generalmente 0.17 mm o #1½- de
modo que hay que asegurarse esto. El grosor del cubreobjetos están estampados
sobre los objetivos bien como "17" o "0.17". Cuando se hace en microscopios
extremadamente críticos en tres dimensiones (deconvolucion o microscopio
confocal) el grosor del cubreobjetos debería ser medido con un micrómetro y
estandarizado excatamente a 0.17 mm.

El cubreobjetos está pegado alobjeto con un cemento soluble en agua, alcohol, o

xileno, teniendo un índice de refracción próximo al de este cristal (1.515). Hay
un gran número de adhesivos de montaje comerciales incluyendo Permount,
Bálsamo de Canadá, Merkoglas, y otros. Los cubreobjetos de plástico pueden ser
comprados y usados, sin embargo debido a la refringencia del plástico, la técnica
óptica de DIC no trabajará.

Procedimiento

Mantener los portaobjetos en xileno mientras le toca el turno de ser procesado.

Debes guardar los portaobjetos en contenedores con muecas para un manejo
fácil. No permitir que los discos se sequen antes de añadir el medio de montaje o
los cortes se dañarán inrreversiblemente.

1.-Quitar el portaobjetos y con un Kimwipe limpiar suavemente alrededor de los

bordes para quitar el exceso de xileno.

2.- Añadir 1-3 gotas de medio de montaje. El cemento debe estar bastante líquido
pero no acuoso. si el medio de montaje está demasiado espeso, diluir en el
solvente apropiado (xileno, alcohol, agua).

3.- Cuidadosamente poner el borde del cubreobjetos (margen corto) sobre el

portaobjetos y con un puntero o un forceps bajar lentamente hasta que toque la
parte superior del adhesivo. Parar un momento para permitir que se quiten las
burbujas de aire.

4.- Continuar bajando el cubreobjetos hasta que todas las gotas de adhesivo
toquen el cubreobjetos, entonces detenerse otra vez para permitir que las gotas se
mezclen en una. El objetivo es permitir al adhesivo que fluya sobre los cortes sin
formar burbujas. las burbujas son extremadamente difíciles de eliminar.

5.- Una vez el adhesivo a formado una capa contínua, dejar que el cubreobjetos
se acomode en su lugar en la parte superiror del portaobjetos.

6.- Poner el portaobjetos en una placa calefactora a 42ºC o en un horno y dejar

que se seque como mucho overnight. usar una toalla de papel para quitar el
exceso de pegamento sobre el portaobjetos en la bandeja calefactora.

Medios de montaje para cubreobjetos

La siguiente tabla es una lista corta de medios de montaje habituales, sus

sinónimos, y (si es posible) sus usos apropiados. Tener enecuenta que, hasta
cierto punto, la elección del medio de montaje es una preferencia personal basada
en historia y corte.

Medio de montaje Compañía* Solubilidad** Comentario

Históricamente importante pero
Bálsamo de Fisher, raramente usadodebido a su coste y
X, T
Canadá Sigma mejor reemplazo. Endurece y
amarillea con los años.
Fisher, Buen medio para propósitos generales.
Permout EMS, y X, T Puede volverse amarillo después de
otros décadas de almacenamiento.
Usado para aplicaciones en
fluorescencia. Consiste en
DPX NA X, T
dibutilfeniltalato (10 ml) +
poliestireno (25 g) + xileno (70 ml).
Reemplazo para el Bálsamo de
DEPEX EMS X, T
Canadá.
Buen medio para propósitos generales.
Preferido para portaobjetos teñidos in
Merkoglass (EM Merck,
X, T situ co NBT. Endurece en una hora a
Glass) EMS
temperatura ambiente. Muestra alguna
retracción.
Buen medio de montaje para
Eukitt EMS X, T
propósitos generales.
Bueno para portaobjetos teñidos con
BioMount EMS X, T
inmunogold/silver.
 Buen medio de montaje para
Cytoseal 60
propósitos generales. Se presenta en
VWR, T X, T
dos viscosidades, "60" baja y "280"
Cytoseal 280
alta.
S/P Accu-Mount Buen medio de montaje para
60 propósitos generales. Se presenta en
S/P X, T
dos viscosidades, "60" baja y "280"
Accu-Mount 280 alta. Puede sustituir al cubreobjetos.
Cubreobjetos líquido. Puede
PolyGlass P X, T
reemplazar al cubreobjetos.
Buen medio de montaje para
Poly-Mount P X, T
propósitos generales.
Medio de montaje para propósitos
Pro-Tex S/P X, T
generales.
Medio de montaje para propósitos
generales. Puede ser eliminado
Meltmount mediante calentamiento del
EMS X, T
(Gargille) portaobjetos. disponible en varios
indices de refracción desde 1.593
hasta 1.704.
Medio de montaje para fines
Coverbond generales. "Piccolyte" es el nombre
S/P X, T
(Piccolyte") genérico usado para una variedad de
polímeros de -pinene.
Bueno cuando el tejido, la tinción o la
matriz no toleran el xileno, por
ejemplo material fresco o cortes en
Euparal CBS Agua
plástico. Usado para
inmunolocalización. Es propietaria de
la fórmula original de Gilson.
Bueno cuando el tejido, la tinción o la
matriz no toleran el xileno, por
ejemplo material fresco o cortes en
plástico. Usado para
inmunolocalización. Poner una gota o
Plastic UV Mount P Alcohol, agua
dos de medio sobre los cortes, añadir
el cubreobjetos, y endurecer bajo luz
UV. Una lámpara portátil de UV de
longitud de onda larga (UVL21)
funciona bien.
Bueno cuando el tejido, la tinción o la
Medio de montaje
EMS Agua matriz no toleran el xileno, por
UV
ejemplo material fresco o cortes en
 plástico. Usado para
inmunolocalización. Endurece bajo luz
UV. Tiene el mismo índice de
refracción que el metacrilato JB-4
Usado en inmunolocalización
Fluoromount-G EMS Agua fluorescente o en criosección en
fresco.
Usado en inmunolocalización
fluorescente o en criosección en
fresco. Diseñado para
(Biomeda)
inmunolocalización HRP y AP. No es
Cristal/Mount EMS; Agua
para ser usado con cubreobjetos,
Fisher
aunque se le puede añadir un
cubreobjetos usando Permount espués
de haber solidificado el Cristal/Mount.
Utilizado para inmunolocalización
fluorescente o criosección en fresco,
(Biomeda)
especialmente bueno para detección de
Gel/Mount EMS; Agua
ficobiliproteínas ya que no contiene
Fisher
glicerina. Usar con un cubreobjetos y
rodear con laca de uñas.
Usado para inmunolocalización
Aqua-poly/Mount P Agua
fluorescente o criosección en fresco.
Agua destilada---------100 ml

Glicerina----------------100 g

Gelatina------------------17 g

Fenol----------------------1 g
Gelatina de
NA Agua
glicerina Mantener a 4ºC y ablandar sólo
pequeñas porciones. Calentar a 37ºC,
aplicar a material fresco sobre
portaobjetos. Bueno para hacer
preparaciones semipermanentes de
material fresco. El cubreobjetos puede
ser eliminado sumergiendo el
portaobjetos en agua caliente.
Agua destilada----40%
Medio de Goma
NA Agua
Arábiga Glicerol-----------20%
 Goma Arábiga----40%

Azida-----------0.02%

Mantener a 4ºC. Usado para montar

secciones acuosas. Los tejidos deben
ser transferidos directamente a Goma
Arábiga.

Excepto por la azida, esta es la

fórmula original de Farrants
Glicerol----90%

TBS-------10%

Glicerol/TBS NA Agua Azida----0.02%

Mantener a 4ºC. Usada para montar

cortes tratados para
inmunocitoquímica.
Mezclar 1:1. Usada para sellar bordes
de cubreobjetos para "spodograms" y
Parafina/Permount NA NA
otros especímenes relativamente
secos.
Mezclar vaselina y parafina fundida
1:1. Usada para sellar los bordes de
Vaspar NA NA
cubreobjetos para preparaciones en
fresco.
Usado para sellar los márgenes de
cubreobjetos para preparaciones en
Fingernail polish NA NA
fresco. Usado especialmente para
preparaciones en inmunolocalización.