11 Guía para Validación de Métodos Analíticos-CNQFB 2002

otEGlb'NAGí"tiiAroV
QUIMICOS FARMACEUTICOS DIOLOGOS

MEXlCO, A.C.
Con Registro ante la DGP
F-032
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FE DE ERRATAS
Guía de validación de métodos analíticos
1a. Edición Mayo de 2002
1.- Para informar que en la página 37 después del primer párrafo falto
incluir la siguiente ecuación a la que se hace referencia
Le __ 10xSy/x
bl
2.- El orden de las páginas 98 y 100 están invertidas, la página 98 debe

ser la 100 Y la página 100 debe ser la página 98.
e o L EG ION A e ION A L D E Q UIM Ieo s FA R M A e E u TIC o s B I o L o G o S. A. e.
Métodos Analíticos
G U lA DE V ALIDACION
COMISION DE VALIDACION
DE MElODOS ANALITICOS
Ma. Araceli García
Evelyn Soberón
Myriam Cortés
Ramón Rodríguez
, José Luis Herrera
Alej an dro Alcántara
lAMBIEN COLABORARON:
Amparo Chárvel
Rosalinda Mota
Alfredo Garzón
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GUíA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
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LA VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS es parte fundamental
e. del desarrollo de una nueva formulación y de la técnica de análisis de control de
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•.•.
calidad de una forma farmacéutica, ya que es durante esta secuencia de pruebas y

análisis, en donde el químico se da cuenta si el estudio, el cual esta siendo evaluado
sistemáticamente, cumple con los propósitos para los cuales fue diseñado.
De acuerdo a las Buenas Prácticas tanto de Fabricación como de

Laboratorio, es necesario que todos los métodos analíticos que empleamos estén
validados.
Bajo este marco y considerando a la validación de métodos analíticos

como el proceso por el cual queda establecido, por estudios de laboratorio, que la
capacidad del método satisface los requisitos para las aplicaciones analíticas
deseadas, el Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos México,. A.C.
ve con agrado, como uno de sus primeros frutos editoriales, sigue siendo hoy una
j herramienta útil para el entorno laboral analítico en la industria farmacéutica.
Sin embargo, considerando tanto el avance científico y tecnológico de

los últimos años, como los valores que nos rigen y nuestra búsqueda constante de la
l.·.'•.·•.· excelencia, han hecho posible nuevamente que presentemos ante ustedes esta
I versión actualizada de la Guía de Validación de Métodos Analíticos, de manera

tal, que satisfaga sus necesidades laborales presentes al día de hoy.
El propósito principal es unificar criterios entre los profesionistas y hacer

más fácil y productivo el trabajo de todos los que de alguna manera, estamos
involucrados en este tipo de actividades.
No me resta más que recomendarles ampliamente este trabajo, realizado

por un grupo de expertos en el área, quienes de manera honorífica han decidido
colaborar y retribuir a su gremio a través de esta publicación. Sin duda alguna, nuestra
institución les esta enormemente agradecida por sus valiosas aportaciones.
Al día de hoy y ante las perspectivas mundiales, las exigencias de

competitividad son muchas, debemos estar preparados para ello, las cuestiones
regulatorias y de armonización nos obligan a empatar nuestros conocimientos, en
este caso, analíticos en pro de un resultado de calidad.
Sirva pues, esta guía para tal objetivo.
Atentamente,
"Por la Unidad y la Excelencia"
Q.:J'B. José 9vfanuef Cárdenas

Presidente
Colegio Nacional de Ouimicos Farmacéuticos Biólogos México. A.C.
PRÓLOGO
GUiA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
PRESEN-.:nCIDN
Colegas:
En el IX Congreso Nacionalde Educación Farmacéutica del año 2000

organizado por el Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos AC
en la Universidad de Colima, asistí a la ponencia de la colega Amparo Chárvel
Gaos que verso sobre Validación de Métodos Analíticos; donde se planteó la
necesidad de revisar la Guía, debido entre otras, a la inquietud de muchos de
nuestros colegas en su actualización y a las publicaciones de otros lineamientos
y guías en años recientes. Debido a esta propuesta, José Manuel Cárdenas
presidente del colegio me invito a participar en la actualización de la guía y
para ello, se formo una comisión especial de Validación de Métodos Analíticos.
Gracias al trabajo de varios colegas y a los comentarios vertidos en diversos
foros organizados por el colegio; se dio lugar a esta publicación, la cual presen-
tamos a nuestro gremio para facilitar esta actividad.
Es importante resaltar el trabajo de los colegas que participaron en

la elaboración de la guía anterior, ya que no habría sido posible este hecho; así
como agradecer a los colegas que colaboraron en la actualización de la guía, por
su tiempo, conocimientos, experiencia, esfuerzo y trabajo orientado al beneficio
de nuestra comunidad gremial.
Presidente de la Comisión Especial de Validación de .Métodos Analiticos
PRESENTACION
pág.
1. Prólogo (Introducción). 2
2. Objetivo y campo de aplicación. 4
3. Justificación. 4
4. Definiciones. 8
5. Símbolos y Abreviaturas. 5
-;..
r
6. Clasificación de Métodos Analíticos 17
7. Parámetros de Desempeño. 19
8. Determinaciones, metodología y criterios de aceptación 20
9. Sustancias de referencia. 40
10. Revalidación 44
11. Comparación de 2 Métodos Analíticos 44
12. Documentación 51
13. Concordancia con Guías Internacionales. 52
14. Bibliografía 53
15. Anexos 55
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¡! GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
1. PRDLDl:iD
I
1
L
1,
EN MUCHAS SITUACIONES, cuando se tiene interés en medir un

componente en una muestra, es necesario contar con una
metodología de medición (método analítico). Por ello, las empresas
de transformación (principalmente farmacéuticas) requieren de este
tipo de metodologías, pudiendo utilizar metodologías farmacopeicas
o bien, dedicar tiempo para su desarrollo, partiendo del hecho de que deben cumplir
el atributo de confiabilidad. Como en muchas de las actividades de la industria
farmacéutica se hace uso del método científico para alcanzar este atributo, es
necesario llevar a cabo en la mayoría de las ocasiones estudios experimentales
que permitan demostrar la confiabilidad de lo que se está midiendo. Un proceso
que permite cumplir este fin, es la validación.
Como es bien sabido, todo producto farmacéutico debe reunir atributos

de identidad, pureza, concentración, potencia, inocuidad y disponibilidad para
cumplir con los aspectos normativos oficiales e internos y no menos importantes,
los éticos, por lo que si un método analítico, que finalmente es el medidor de las
características críticas de calidad del producto, no es confiable, se corre el grave
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1,;
riesgo de afectar al usuario final que es un paciente.
Desde este enfoque, la validación de métodos analíticos es un sistema

involucrado en los procesos de fabricación en el área de calidad de la empresa y
bajo la filosofía de la Validación, las Autoridades Regulatorias verifican que las
empresas sustenten estos sistemas con actividades documentadas, como se in-
dica en la NOM-059 SSA1 numerales 5.6.3, 5.7.4, 9.11.3, 9.11.5 Y 9.12.3 Y en
otros Iill~amientos regulatorios internacionales.
El objetivo final de un dictamen de calidad, es la liberación o no

liberación de un producto sobre la base de las especificaciones previamente
establecidas. Esta decisión es tomada generalmente por el profesional
farmacéutico, en gran medida está dada por los resultados obtenidos al aplicar
uno o diversos métodos analíticos; si estos no son farmacopeicos y no están
I!
I
validados, su decisión corre el riesgo de ser errónea y afectar al usuario del
1;
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~
INTRODUCCiÓN 2
li
I
,1
GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
producto y por ende, a la misma empresa. La validación le proporciona, a quien

aplica la metodología, una seguridad de la confiabilidad de dichos métodos y
puede tomar la decisión final con certeza. La validación de métodos analíticos
también impacta en otras áreas relacionadas a la' calidad de un producto
(estabilidad, limpieza de equipos, entre otras).
Hasta este momento, las empresas que han implantado esta actividad
inicialmente se orientaron con la Guía de Validación de Métodos Analíticos
publicada por el Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos - México,
A.C. y avalada por la Secretaría de Salud hace más de una década. En su
momento, esta Guía cubrió las necesidades que por la corriente de Validación
habían empezado a surgir en la mayoría de las empresas; con el tiempo, por
necesidades propias de la validación de procesos, la validación de métodos se
especializó al grado de convertirse en una actividad independientemente regulada.
Con los avances tecnológicos, aplicaciones de nuevas técnicas,

tratamiento diferente de las muestras, etc., el Colegio Nacional de Químicos
Farmacéuticos Biólogos - México, A.C., ha visualizado la necesidad de publicar
una nueva edición de esta guía.
No se puede pasar por alto el hecho de que el factor más importante

durante la validación de todo método analítico es siempre el criterio del profesional,
responsable de esta decisión, criterio que es necesario aplicar después de tomar
en cuenta todos los factores relacionados con el, o los principios activos,
concentraciones, forma farmacéutica, tipo de muestra, método,1e análisis, propósito
de la técnica analítica, instrumentación, sustancias retaclonadas, etc., estos
requisitos constituyen únicamente una guía para dar al químico un soporte técnico
adecuado para resolver cada caso particular.
Así mismo, no hay que perder de vista que ésta es únicamente una Guía
donde se establecen los requisitos mínimos, que es necesario satisfacer con la
Validación y que no limita de ninguna manera el interés que pudiera tener el
profesionista para profundizar, de manera particular, en alguno o algunos de los
temas involucrados.
El C.N.Q.F.B. agradece de manera muy especial a todas las personas

que colaboraron en la preparación, modificación y actualización de esta Guía y a
la Secretaría de Salud por su apoyo y aceptación de estos Requisitos Mínimos
para la Validación de Métodos Analíticos, ya que estamos seguros de que será en
beneficio de la comunidad científica del país.
INTRODUCCiÓN 3
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¡¡ GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
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2. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACiÓN
Establecer lineamientos generales mínimos necesarios para llevar a cabo el

proceso de validación de métodos analíticos en aquellos establecimientos
dedicados a:
a) Fábrica o laboratorio de materias primas para la elaboración de

medicamentos o productos biológicos para uso humano, incluyendo
fármacos;
b) Fábrica o laboratorio de medicamentos o productos biológicos para

uso humano;
e) Laboratorio de control químico biológico, farmacéutico o de

toxicología, para el estudio y experimentación de medicamentos y
materias primas, con el objeto de establecer la validez de los métodos
analíticos utilizados para el control analítico del producto.
d) Laboratorio de control auxiliar de la regulación,
Un método analítico se define como la descripción de la secuencia de actividades,

recursos materiales y parámetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el
análisis de un componente específico de la muestra. Un analito se define como un
componente específico en una muestra a medir en un análisis; por lo que un
método analítico mide un componente específico (analito) en una muestra y como
todo proceso de medición, éste debe ser confiable para ser utilizado con un
propósito definido. La validación de métodos analíticos es el proceso por el cual
se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad det método satisface
los requisitos para la aplicacion analítica deseada; es decir cumple con su'propósito.
Esta actividad puede ser justificada por los siguientes aspectos:
OBJETIVO y CAMPO DE APLICACiÓN 4

3.1. Moral y ética.
El profesional farmacéutico es el responsable de los procesos farmacéuticos y por

lo tanto de la calidad de estos. Todo producto farmacéutico (materias primas,
producto intermedio, producto a granel y producto terminado) debe satisfacer
requisitos y para ello se utilizan métodos para medir componentes específicos en
el producto; lo cual es llevado a cabo con métodos analíticos.
3.2. Aseguramiento de Calidad.
Los métodos analíticos están definidos como un sistema crítico en el Aseguramiento

de Calidad en una empresa farmacéutica, ya que impactan de manera directa en
la calidad de un producto.
3.3. Económica.
La carrera de muchas empresas por alcanzar una productividad elevada a costos

menores, está determinada, entre otros factores, al dictamen del producto en menor
tiempo, utilizando métodos de prueba de menor costo, mantenimiento o tiempo de
análisis entre otros.
3.4. Regulatoria.
La presente guía está justificada con base en las siguientes referencias:
Reglamento de Insumos para la Salud. Publicado en el Diario Oficial el4 de Febrero

de 1998 referente a los establecimientos que se destinen a la fabricación de insumos
(medicamentos, fármacos, materias primas y aditivos), establece lo siguiente.
ART í e u L o e o N T E N IDO
15 Los establecimientos que se destinen a la fabricación

de insumas, llevarán el control analítico de estos. Dicho
control deberá incluir:
111. La validación de las técnicas empleadas.
Norma Oficial Mexicana NOM-OS.9-SSA1-1993. Buenas prácticas de fabricación

para establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a la
fabricación de medicamentos, establece los siguientes puntos referentes a la
Validación de Métodos Analíticos.
JUSTIFICACiÓN 5
lJi
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1••.[

1:1
L
1:
11
11
¡I, NUMERAL
CONTENIDO
i1:l .! DE LA NORMA
l!'
¡"
El encargado del área de producción se encargará de realizar las
S.6 siguientes funciones, sin perjuicio de las obligaciones y
responsabilidades que correspondan al responsable sanitario,
conforme a la Ley General de Salud y al Reglamento de lnsumos
para la Salud:
S.6.3 Que se lleven a cabo estudios de validación de los procesos de

fabricación y de los sistemas involucrados.
S.7 El encargado del área de calidad se encargará de realizar las

siguientes funciones, sin perjuicio de las obligaciones y
responsabilidades que correspondan al responsable sanitario,
conforme a la Ley General de Salud y al Reglamento de Insumos
para la Salud:
S.7.4 Que se lleven a cabo estudios de validación de los procesos de

fabricación y de los sistemas involucrados.
9.11.3 Los métodos analíticos deben ser validados, de acuerdo con lo

establecido en el apartado 9.12 "control del laboratorio analítico".
9.12.3 Se debe contar con métodos de análisis validados para producto a

granel, producto terminado y materia prima en caso de no aparecer
en cualquier farmacopea internacional ni en la FEUM.
NORMA Oficial Mexicana NOM-164-SSA1-1998, Buenas prácticas de fabricación para fármacos.
NUMERAL DE LA C O N T E N I D O
NORMA
16.1 Los controles de laboratorio e inspecciones deben apoyarse en

normas, PNO's o manuales que contengan las especificaciones para
garantizar la confiabilidad de sus resultados. Tales controles deben
incluir: ,
16.1.S Validación de métodos analíticos utilizados por la empr~~a, no

farmacopeicos.o farmacopeicos que tengan desviaciones;~~~tEta
la farmacopea de referencia. .; o:: ~~;~~~H.",
,
'-'·'';~fr-~·'; ',; vv-
JUSTIFICACiÓN 6
NORMA Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de medicamentos.
NUMERAL DE LA e O N T E N IDO
NORMA
5.5 Cuando se cambie el método analítico durante el estudio de

estabilidad, se debe demostrar que los dos métodos son equivalentes
mediante el proceso de validación.
5.10.2 Información general, especificaciones y métodos analíticos:
5.10.2.3 Información de la linealidad, precisión, exactitud, reproducibilidad,

repetibilidad y especificidad del método analítico indicativo de
estabilidad.
6. Fármacos
Para fines de registro de un medicamento con fármacos nuevos en

México, el fabricante del medicamento debe presentar ante la
Secretaría de Salud estudios de estabilidad acelerada y/o a largo
plazo de tres lotes del (los) fármaco(s) efectuados por el fabricante
de los mismos, utilizando métodos analíticos validados.
Las regulaciones anteriores, determinan la obligación de validar métodos analíticos.

Estas regulaciones podrían ser modificadas, por lo que es importante estar
actualizados.
JUSTIFICACiÓN 7
4. D E F IN I e 1'0 N E S
4.1. Adecuabilidad del sistema.- Verificación de que el sistema (instrumento,

¡¡ analista, equipo, sustancia de referencia, entre otros) opera con base a criterios
,: preestablecidos, que permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un
¡¡ método analítico.
¡¡'1
¡-l",
4.2. Analito.- Componente específico de una muestra, a medir en un análisis.
4.3. Calibración.- Conjunto de operaciones que determinan, bajo condiciones

especificadas, la relación entre los valores indicados por un instrumento o sistema
de medición, o los valores representados por una medición material y los valores
conocidos correspondientes a un patrón de referencia.
4.4. Documentación.- Conjunto de información que sustenta una actividad

realizada.
4.5. Especificaciones.- Descripción del material, sustancia o producto, que incluye

la definición de sus propiedades y características, con las tolerancias de variación
de los parámetros de calidad.
4.6. Especificidad.- Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta

debida únicamente al analito de interés y no a otros componentes de la muestra.
4.7. Estudio colaborativo.- Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios,

por diferentes químicos.
4.8. Exactitud.- Concordancia entre un valor obtenido empleando el método y el

valor de referencia.
4.9. Estabilidad analítica de la muestre» Propiedad de una muestra, preparada

para su cuantificación, de conservar su integridad fisicoquímica y la concentración
del analito, después de almacenarse durante un tiempo determinado bajo
condiciones específicas.
4.10.lntervalo.- Concentraciones incluidas entre la concentración superior einf~:;?,;'~fJ'S

rior delanalito (incluyendo éstas), para las cuales se ha demostrado que el mét9ct~~~f~1~b~\{
analítico es preciso, exacto y lineal. . .
DEFINICIONES 8
4.11. Límite de cuantificación.- Concentración mínima del analito, que puede

ser determinada con precisión y exactitud aceptables, bajo las condiciones de
operación establecidas.
4.12. Límite de detección.- Concentración mínima del analito en una muestra,

que puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones
de operación establecidas.
4.13. Línealidad.- Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos

directamente o por medio de una transformación matemática definida. son
proporcionales a la concentración del analito, dentro de un intervalo determinado.
4.14. Metodología de prueba.- Procedimiento o grupo de procedimientos, para

determinar si un producto Ó materia prima cumple con las especificaciones
establecidas.
4.15. Método analítico.- Descripción de la secuencia de actividades, recursos

materiales y parámetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el análisis de un
componente específico de la muestra.
4.16. Método analítico desarrollado internamente.- Método desarrollado por el

propio laboratorio.
4.17. Método analítico indicativo de estabilidad.- Método cuantitativo capaz de

detectar variaciones en las propiedades del material evaluado, debidas a las
condiciones de almacenaje.
4.18. Método analítico oficial.- Método que aparece en la literatura oficial

reconocida.
4.19. Método analítico no oficial.- Método que no aparece en la literatura oficial

reconocida.
4.20. Muestra.- Porción del material a evaluar.
4.21. Muestra analítica.- Porción del material a evaluar de acuerdo al método

analítico.
4.22. Muestra adicionada.- Porción representativa del material a evaluar, a la

que se le adicionan cantidades conocidas del analito.
4.23. Parámetros de desempeño.- Parámetro específico a estudiar en un protocolo

de validación.
DEFINICIONES 9
~~~":r.~~"",-';Q J
4.24. Placebo analítico.- Muestra que contiene todos los componentes de un

producto a excepción del analito.
4.25. Placebo adicionadQ.- Muestra de un placebo analítico al cual se le adiciona

una cantidad conocida del analito.
4.26. Precísión.-Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales,

cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una
muestra homogénea del producto o de una referencia.
4.27. Precisión intermedia.- Precisión de un método analítico, expresada como

la concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas
en un mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días.
4.28. Proporcionalidad.- Relación establecida por una ecuación matemática en-

tre los resultados obtenidos por dos métodos analíticos.
4.29. Protocolo de validación.- Descripción de pruebas específicas para

demostrar que un proceso da resultados que cumplen con los criterios
preestablecidos de manera consistente.
4.30. Recobro.- Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado o

muestra adicionada, empleando el método analítico.
4.31. Repetibilidad.- Precisión de un método analítico, expresada como la

concordancia obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un
solo analista, usando los mismos instrumentos y método.
4.32. Reproducibilidad.- Precisión de un método analítico, expresada como la

concordancia entre determinaciones independientes realizadas por diferentes
laboratorios.
4.33. Revalidación.- Comprobación de que el método analítico mantiene su

desempeño cuando existen cambios en la composición del producto, en el método
analítico, o cambios críticos en los procesos de fabricación.
4.34. Robustez.- Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al

presentarse variaciones pequeñas pero deliberadas, en los parámetros normales
de operación del método.
4.35. Sustancia de referencia.- Sustancia de uniformidad reconocida destinada

a utilizarse en comprobaciones analíticas físicas, químicas o microbiológicas eR~1
D E F, I N I e ION E S 10
transcurso de las cuales sus propiedades se comparan con la sustancia en

evaluación.
4.36. Sustancia de referencia primaria.- Sustancia quees designada o reconocida

por tener la más alta calidad metrológica, cuyas propiedades se aceptan sin
referencia a otras sustancias.
4.37. Sustancia de referencia secundaria.- Sustancia cuyas propiedades se

asignan por comparación con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando
es certificada mediante un procedimiento científicamente reconocido.
4.38. To/erancia.- Reproducibilidad de los resultados analíticos obtenidos, por el

análisis de la misma muestra bajo diferentes condiciones normales de operación
como pueden ser: equipos, columnas. La robustez y la tolerancia son conceptos
diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia de factores internos del
método, mientras que la tolerancia, se refiere a factores externos al método.
4.39. Validación del método analítico.- Proceso por el cual se demuestra, por
estudios de laboratorio, que la capacidad del método satisface los requisitos para
las aplicacion analítica deseada ..
o E FIN I e ION E S 11
i
'Ii' .,!.'. '
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· .,11.•.·
) ," GUíA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
5. S íM Ba Las y A BREVI RTU R A S
I
I¡¡
I1
Ij Cuando en esta guía se haga referencia a los siguientes símbolos o abreviaturas.

se entenderá:
'1'
',:
AS Authentic Substance
Pendiente.
Pendiente del método 1.
Pendiente del método 2.
Ordenada al origen.
Ordenada al origen del método 1.
Ordenada al origen del método 2.
BP British Pharmacopoeia
BPF Buenas prácticas de fabricación.
CLAR Cromatografía de líquidos

de alta resolución.
COSUFAR Comité de Sustancias

Farmacéuticas de Referencia.
CV Coeficiente de variación o
desviación estándar relativa.
Coeficiente de variación
de regresión.
S 1MB o L o S y A B R E V I A T U R A S 12
Diferencia absoluta de la media

aritmética de cada condición de
almacenaje respecto de la me
dia aritmética del análisis inicial.
F0.975,91 Valor de la distribución F de

Fisher asociado a una confianza
del 97.5% ya grados de libertad
(gl) establecidos.
F0.05,g/ Valorde la distribución F de Fisher

asociado a una confianza del 5%
y a grados de libertad (gl)
establecidos.
F0.025,91 Valor de la distribución F de Fisher

asociado a una confianza del
2.5% y agrados de libertad (gl)
establecidos.
FCC Food Chemical Codex
FDA Food and Drug Administration
FEUM Farmacopea de los Estados

Unidos Mexicanos.
g Gramos.
gl Grados de libertad.
Intervalo de confianza para la

pendiente poblacional.

diferencia de 2 pendientes
poblacionales.
IC(fJ¡} Intervalo de confianza para la

ordenada al origen poblacional

diferencia de 2 ordenadas al
origen poblacionales.
S 1MB o L o S y A B R E V I A T U R A s 13
IC(~) Intervalo de confianza para la

media poblacional.

diferencia de 2 medias poblacionales.
K' Factor capacidad.
Le Límite de cuantificación.
LD Límite de detección.
LGS Ley General de Salud.
LNSP Laboratorio Nacional

de Salud Pública.
mg miligramos.
n Número de mediciones o recobros o

blancos o muestras o
determinaciones.
Número de muestras del análisis

inicial
n, Número de mediciones del método 1.
Número de mediciones del método 2.
N Número de platos teóricos.
NF National Formulary
NIST National Institute of Standard and

Technology
NOM Norma Oficial Mexicana.
OMS Organización Mundial de la Salud
PNO Procedimiento Normalizado

de Operación.
S 1MB o L o S y A B R E V I A T U R A s 14
ppm Partes por millón.
R Resolución.
Coeficiente de determinación.
Rr Retención relativa.
s Desviación estándar.
Desviación estándar de los blancos.
Desviación estándar de la ordenada

al origen.
Desviación estándar para la

diferencia de 2 ordenadas al origen.
Desviación estándar de la pendiente.
Desviación estándar para la

diferencia de 2 pendientes.
Varianza.
Varianza del método 1
Varianza del método 2
Varianza poblacional.
Razón de 2 varianzas poblacionales.
Sref Sustancia de Referencia
SSA Secretaría de Salud.
Desviación estándar de regresión.
T Factor coleo.
t0.975,91 Valor de la distribución t de Student

asociado a una confianza del 95% y
SíMBOLOS y ABREVIATURAS 15
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l'
)i
/!
I! GUíA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALfTICOS
a grados de libertad (gl) establecidos.
USP United States Pharmacopeia
USPC United States Pharmacopoeia

Committe
VMA Validación de métodos analíticos.
x Media aritmética de x.
y Media aritmética de y.
Media aritmética del método 1
Media aritmética del método 2
Media aritmética del análisis inicial.
y¡ Media aritmética de cada condición

de almacenaje.
% Porcentaje o por ciento.
S 1 M B Ol o S y A B R E V I A T U R A s 16
& • eL R S I F I e R e I ti N D E M É T D D D S R N R L íT I e D s
Para fines de esta guía los métodos se clasifican bajo los siguientes criterios:
1). En función de su estado regulatorio en:
a) Métodos farmacopeicos. Todos aquellos métodos que

aparecen en cualquier farmacopea (FEUM, USP, SP,
Europea, etc.).
b) Métodos no farmacopeicos. Aquellos métodos

no compendiados en una farmacopea.
2). En función de su apllcaclén (NOM 059 SSA1 y NOM-073-SSA1) en:
a) Métodos para producto a granel.
b) Métodos para producto terminado.
e) Métodos para materia prima.
d) Métodos indicadores de estabilidad.
3). En función de la naturaleza de la respuesta analítica en:
a) Métodos físico-químicos. Cuando la respuesta es de carácter

físico (absorción de luz, emisión de luz, voltaje, etc.) o químico
(consumo de iones -OH, consumo de un acomplejante, etc.).
b) Métodos biológicos. Cuando la respuesta es de carácter

biológico (crecimiento de un microorganismo, protección,
muerte, etc.).
4). En función de su propósito analítico en:
a) Métodos para cuantificar el analito(contenido o potencia).
b) Métodos para establecer la presencia del analito a un límite.
e) Métodos para identificar el analito.
C L A S I F I C A CiÓ N D E M É T o D o s A N A L í TIC o s 17
GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALiTICOS
Esta última clasificación es la que se utiliza para establecer los parámetros de

desempeño a estudiar en la validación del método analítico. En el Anexo 1 se
presenta una matriz de equivalencia entre esta clasificación y otros métodos con
aplicaciones analíticas definidas de otra manera.
Cualquier método analítico puede estar constituido por técnicas de separación,

extracción, etc., y por técnicas de medición (espectrofotometría, volumetría,
colorimetría, potenciometría, etc.) que permiten medir la respuesta del analito en
la muestra. A esta última técnica dentro de la guía, se le denomina Sistema de
Medición.
5). En funpión de la naturaleza del sistema de medición se clasifican en:
a) Métodos en los cuales el instrumento de medición de la

respuesta analítica, permite medir una señal de ruido
(cromatógrafo de líquidos, cromatógrafo de gases,
espectrofotómetros, etc.).
b) Métodos en los cuales el instrumento de medición no permite

medir una señal de ruido (buretas, medidor de halos,
potenciómetros. etc.).
C L A S I F I e A CiÓ N o E M É To D o s A N A LIT I e O s 18
GUíA DE VALIDACiÓN DE"'MÉTODOS ANALíTICOS
7.PRRÁMETROS DE DESEMPEÑO
En función de la aplicación analítica de un método, la siguiente tabla indica los

parámetros de desempeño a estudiar.
CONTENIDO I PRUEBAS DE IMPUREZAS

PARAMETRO DE DESEMPEÑO
POTENCIAl
VALORACION CONTENIDO I IDENTIFICACION
LIMITE
VALORACION
.~
PRECISiÓN / ADECUABILlDAD SI SI SI' *

DEL SISTEMA
\
LINEALIDAD DEL SISTEMA SI SI NO NO
ESPECIFICIDAD' SP SI SI SI
EXACTITUD Y REPETIBILlDAD SI SI NO NO
LINEALIDAD DEL MÉTODO SI SI NO NO
PRECISiÓN DEL MÉTODO O

SI SI NO NO
PRECISiÓN INTERMEDIN
--
ESTABILIDAD ANALlTICN
* * NO NO
DE LA MUESTRA
-
LíMITE DE DETECCiÓN NO NO SI NO
LíMITE DE CUANTIFICACiÓN NO SI NO NO
ROBUSTEZ * * * NO
TOLERANCIA * * * NO
* PUEDE SER REQUERIDO DEPENDIENDO DE LA NATURALEZA DEL MÉTODO

1. La falta de especificidad de un método analítico, puede ser compensada por
otra alternativa analítica de soporte, como por ejemplo cromatografía de capa
fina.
2. También es definido como un estudio de tolerancia.
3. Un método que es exacto y lineal, por definición es específico al placebo

analítico o a los otros componentes de la muestra.
PAR A M E T R o S D E D E S E M P E Ñ o 19
B.DETERMINRCIONES, METODOLOEiíR y
CRITERIOS DE RCEPTRCIÓN
8.1. Precisión del Sistema.
8.1.1. Metodología.- Un analista debe preparar por lo menos un

sextuplicado de soluciones a la concentración del analito que
represente la concentración de la solución de referencia utilizada, o
en ciertos casos, la concentración que represente el 100% de la
muestra procesada para su medición; preparadas por dilución o por
pesadas independientes. Medir la respuesta analítica bajo las mismas
condiciones.
Calcular, S Y CV de la respuesta analítica.
Para los sistemas biológicos, se deben cumplir los criterios de validez

inherentes al diseño del bioensayo.
8.1.2. Criterio de Aceptación:
CV~ 1.5% para métodos físico - químicos.
CV ~ 3% para métodos biológicos.
Valores superiores deben ser justificados.
Cualquier otro criterio de aceptación, debe ser justificado.
Las fórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo, Se

describen en el Anexo 2.
8.2. Adecuabilidad del Sistema (Métodos Cromatográficos)
8.2.1. Metodología.- Inyectar por quintuplicado la solución de

adecuabilidad. Reportar la respuesta del analito, calcular el CV y para
cada inyección informar cuando proceda:
DETERMINACIONES, METODOLOGIA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 20

GUíA [)E VALI[)ACIÓN [)E MÉTO[)OS ANALíTICOS
factor capacidad (K').
resolución (si procede, R).
retención relativa (si procede, Rr).
factor de coleo (T).
número de platos teóricos (N).
8.2.2. Criterios de Aceptación.-
CV ~ 2% para la respuesta analítica.
Para cada inyección se recomienda:
K' >2.~
R> 2.
T<2.
Las fórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo, se describen en

el Anexo 3.
La evaluación de la adecuabilidad del sistema se recomienda para todos

los métodos analíticos, ya que permite verificar que el sistema de
medición funciona apropiadamente, independientemente de las
condiciones ambientales. Es conveniente que antes de llevar a cabo la
validación del método analítico, se establezcan los criterios apropiados
para la operación del sistema de medición, para ser evaluados en la
validación y verificados de manera rutinaria al emplear el método
analítico. Por ejemplo. en el caso de métodos volumétricos, el volumen
.de la titulación de blancos y/o de un volumen específico de la solución
de referencia; en el caso de métodos fotométricos la lectura de
soluciones blanco; entre otros.
8.3. Linealidad del Sistema.
8.3.1. Metodología.- Un analista debe preparar por lo menos por

triplicado 5 niveles de concentración (intervalo) de la solución de

referencia ya sea por dilución (a partir de una misma solución

concentrada) o por pesadas independientes (cuando no sea posible
prepararlas por dilución). La concentración central debe ser igual a la
que se prepara la solución de referencia en el método o en ciertos
casos, la concentración que represente el 100% en la muestra
procesada para su medición. El intervalo debe incluir la especificación
para el caso de aquellos métodos utilizados para contenido I potencia
I valoración. Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones
de medición, reportarla relación concentración vs respuesta analítica.
Calcular el valor de la pendiente (b.), la ordenada en el origen (bo) ' el
coeficiente de determinación (r2 ) y el intervalo de confianza para la
pendiente (1c(J31 ».
El intervalo está en función del propósito del método, y por lo general
se expresa como % de la concentración de la solución de referencia o
en función del contenido de! analito en la muestra procesada para su
medición.
Para contenido I potencia I valoración se sugiere un mínimo de±20%.
Para contenido I valoración de impurezas desde un nivel apropiado

hasta un 20% por arriba de la especificación.
Para métodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado

hasta un 120%
Es crítico que el intervalo no excluya valores de concentración que

potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra.
8.3.2. Criterios de Aceptación:
IC(J31 ) , no debe incluir el cero.
Cualquier otro criterio de aceptación debe ser justificado.
Las fórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo, se describen

en el Anexo 4:
Es conveniente trazarla gráfica la concentración (x) vs la respuesta

analítica (y), e incluir en ella la ecuación, la línea de ajuste y el
coeficiente de determinación.
n<=T<=I:HAfNArlnNI=~ MI=TODOLOGIA y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN 22

8.4. Especificidad.
8.4.1. Metodología: Partiendo de la experiencia en el análisis de la

muestra, se deben establecer las posibles sustancias interferentes, y
adicionar cantidades conocidas de éstas, solas o combinadas a la
muestra y evaluar su respuesta al método, bajo las mismas condiciones
de análisis.
Para métodos de identificación: Se deben seleccionar sustancias que

potencialmente interfieran en la determinación con base en la estructura
molecular del analito, precursores, sustancias relacionadas, vías
degradativas, entre otros.
Para métodos de contenido / potencia / valoración: Se deben analizar

placebos del producto, como lo indica el método, muestras de producto,
y cuando proceda:
-sustancias relacionadas;
-precursores;.
-homólogos;
y una mezcla del producto con ellos o cualquiera de ellos.
Para métodos de contenido / valoración de impurezas: Si se dispone

de las impurezas se deben adicionar éstas al analito y/o a la muestra
analítica en niveles que incluya la especificación. Analizar como lo In-
dica el método. Cuando no se dispone de éstas, la muestra que contiene
el analito debe someterse a condiciones que generen su inestabilidad
química (luz, calor, humedad, hidrólisis ácido-básica y oxidación) y
aplicar el método a la muestra resultante.
Para métodos de limite de impurezas: Proceder a analizar muestras

individuales de la impureza (orgánicas, inorgánicas o solventes
residuales), el producto (de pureza aceptable) y la mezcla de estos,
como lo indica el método.
Para métodos indicadores de estabilidad: En caso de contar con los

productos de degradación, preparar muestras con placebo adicionado
de éstos, el placebo adicionado de analito, el placebo adicionado de
analito y de productos de degradación y analizar con el método.
DETERMINACIONES, METODOLO~IA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 23

GUíA DE VALIDACiÓN DE MéTODOS ANALíTICOS
Si no se cuenta con los posibles productos de degradación se pueden

emplear, dependiendo de la naturaleza química del analito y si es
posible, las siguientes condiciones para favorecer la inestabilidad del
analito en la muestra:
1. Someter el analito, el placebo y la muestra en un horno a 70° - 120°

C o a 20° C por debajo del punto de fusión del analito de 2 a 4 semanas.
2. Exponer el analito, placebo y muestra a luz UV, fluorescente y/o

humedad relativa, por un tiempo apropiado.
3. Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12

y someterlas a 60° C - 80° C por un tiempo apropiado.
4: Para formas farmacéuticas líquidas o semisólidas, adicionar peróxido

de hidrógeno para favorecer oxidación del analito.
Estos estudios no se deben de llevar a cabo para analitos que según la

bibliografía, tengan propiedades reactivas que puedan dar lugar a
condiciones inseguras al someter las muestras a las condiciones antes
mencionadas.
El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de degradar al

analito a niveles de un 15 a 30%.
En el caso de métodos no selectivos, como por ejemplo los métodos

que utilizan sistemas de medición volumétricos, la especificidad para
los componentes de una muestra, es sustentada con los resultados de
exactitud y linealidad del método, si el método cumple con los criterios
de aceptación.
Cuando haya duda en la demostración de la especificidad de un método

analítico, se sugiere que sea investigada por otra metodología de
soporte.
La respuesta del método únicamente debe ser debida al analito.
DETERMINACIONES, METODOLOGíA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 24

GUíA DE VALIDACiÓN DE MéTODOS ANAL[TICOS
8.5. Exactitud y Repetibilidad del Método.
8.5.1. Metodología.
A) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar

un placebo analítico.
Un analista debe preparar el placebo analítico con el tipo de

componentes que generalmente están presentes en la muestra. A la
cantidad de placebo analítico equivalente a una muestra analítica por
sextuplicado,adicionarle la cantidad de analito (puede ser una sustancia
de referencia secundaria) correspondiente al 100% de éste en la
muestra. Los placebos adicionados deben ser analizados por un mismo
analista bajo las mismas condiciones, utilizando como referencia, la
sustancia empleada en la adición al placebo analítico. Determinar la
cantidad recuperada del analito.
~.'
B) No se conocen los componentes de la muestra.
Un analista debe analizar la muestra con el método, para determinar el

contenido del analito. El mismo analista debe preparar por lo menos 6
muestras adicionadas del analito, por ejemplo utilizando la mitad de la
muestra analítica que originalmente requiere el método y adicionar el
analito (puede. ser una sustancia de referencia secundaria) hasta
completar lo que represente el 100% de éste en la muestra. Las
muestras adicionadas deben ser analizadas por un mismo analista bajo
las mismas condiciones utilizando como referencia la sustancia
empleada en la adición de la muestra. Determinar la cantidad
recuperada del analito.
Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito a la

muestra, la adición puede ser llevada a cabo en alguna etapa del
método.Be recomienda que la adición se lleve a cabo en las primeras
etapas, para poder asegurar que las etapas posteriores no den lugar a
resultados incorrectos. Por ejemplo, si una muestra se debe extraer,
filtrar y diluir, es conveniente que la adición se lleve a cabo antes de
extraer, ya que si existiera algún problema con la extracción o con la
filtración, y el analito se adiciona al placebo analítico o la muestra hasta
antes de diluir, puede dar lugar a resultados incorrectos.
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analítico o muestra
DETERMINACIONES, METODOLOG[A y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 25

adicionada, al obtener el cociente de la 'cantidad recuperada respecto

de la cantidad adicionada expresada en porcentaje.
Calcular el promedio aritmético (y), la desviación estándar {S), el

coeficiente de variación (CV) y el intervalo de confianza para la media
poblacional 1C(1l) del porcentaje de recobro.
El 1C(1l ) debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del % de

recobro se incluya en el intervalo:
98 - 102% si el método es cromatográfico,
98 - 102% si el método es volumétrico.
97 - 103% si el método es químico o espectrofotométrico,
95 - 105% si el método es microbiológico,
El CV del porcentaje de recobro:
no debe ser mayor de 2% si el método es cromatográfico.
no mayor de 2% si el método es volumétrico,
no mayor de 3% si es químico o espectrofotométrico,
no mayor del 5% si es microbiológico,
no mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la

especificación del analito en la muestra.

en el Anexo 5.
8.6. Linealidad del Método:
8.6.1. Metodolopía.
A) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar

un placebo analítico.

G uí A O E V A L lOA CiÓ N o E M É T o 0,0 s A N A L ¡ TIC o s
Un analista debe preparar el placebo analítico con el tipo de componentes que

generalmente están presentes en la muestra. A la cantidad de placebo analítico
equivalente a una muestra analítica por triplicado, adicionarle la cantidad de analito
(puede ser una sustancia de referencia secundaria) correspondiente al 100% de
éste en la muestra. Seleccionar al menos dos niveles, superior e inferior de la
cantidad del analito (intervalo) y preparar el placebo adicionado al menos por
triplicado a cada nivel, manteniendo constante la cantidad de placebo analitico en
los tres niveles. Los placebos adicionados deben ser analizados por un mismo
analista bajo las mismas condiciones, utilizando como referencia, la sustancia
empleada en la adición al placebo analítico. Determinar la cantidad recuperada
del analito.
B) No se conocen los componentes de la muestra.
Un analista debe analizar la muestra con el método, para determinar el contenido

del analito. El mismo analista debe preparar por lo menos 3 muestras adicionadas,
por ejemplo utilizando la mitad de la muestra analítica que originalmente requiere
el método y adicionar el analito (puede ser una sustancia de referencia secundaria)
hasta completar lo que represente el 100% de éste en la muestra. Seleccionar al
menos dos niveles, superior e inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar
la muestra adicionada al menos por triplicado a cada nivel, manteniendo constante
la cantidad de muestra en los tres niveles. Las muestras adicionadas deben ser
analizadas por un mismo analista bajo las mismas condiciones utilizando como
referencia la sustancia empleada en la adición de la muestra. Determinar la cantidad
recuperada del analito.
Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito a la muestra, la

adición puede ser llevada a cabo en alguna etapa del método. Se recomienda que
la adición se lleve a cabo en las primeras etapas del método, para poder asegurar
que las etapas posteriores, no den lugar a resultados incorrectos. Por ejemplo, si
una muestra se debe extraer, filtrar y diluir, es conveniente que la adición se lleve a
cabo antes de extraer; ya que si existiera algún problema con la extracción o con la
filtración, y el analito se adiciona a la muestra o placebo analítico hasta antes de
diluir, puede dar lugar a resultados incorrectos.
El intervalo de la concentración del analito adicionado, depende del propósito del

método y debe incluir la especificación. La siguiente tabla supiere intervalos para
el estudio de linealidad, en la cual la especificación se maneja como porcentaje;
como por ejemplo el 100% puede representar 100 mgl g de muestra, 10 ppm, 5
mg/mL, etc.

PROPOSITO ESPECIFICACION INTERVALO MINIMO
CONTENIDO I POTENCIA I LíMITE INFERIOR (L¡),

L-10% a Ls +10%
VALORACiÓN LíMITE SUPERIOR (L s ) I
EJEMPLO
VALORACiÓN 90% - 110% 80% a 120%
Por lo tanto los niveles

podrían ser 80%, 100%
Y 120%
UNIFORMIDAD DE DOSIS 75% -125% 60% a 140%

podrían ser 60%,
100% Y 140%
DISOLUCiÓN Q'= 75% 40% a 130%
En el caso conservador, de Por lo tanto los niveles

llegar a tercera etapa, ninguna podrían ser 40%, 100% Y
unidad es menor a Q - 25% 130%
CONTENIDO I VALORACiÓN
PARA PRUEBAS DE . LíMITE SUPERIOR (Ls) Ls -20% a Ls +20%
IMPUREZAS
EJEMPLO
80% a 120%
Sustancias relacionadas. No debe contener más de 100%.
podrían ser 80%, 100% Y
120%
Reportar la relación cantidad adicionada vs cantidad recuperada. Utilizando el método

de estimación por mínimos cuadrados, calcular el valor de la pendiente (b.), la ordenada
en el origen (b.), el coeficiente de determinación (r2),el intervalo de confianza para la
pendiente (1c(f31», el intervalo de confianza para la ordenda al origen (1C(f3o» y el
coeficiente de variación de regresión (CVyIJ
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo adicionado o muestra adicionada,

al obtener el cociente de la 'cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada
expresada en porcentaje. Calcular el promedio aritmético (Y'), la desviación estándar
(S), el coeficiente de variación (CV) y el intervalo de confianza para la media poblacional
IC(Il) del porcentaje de recobro.

8.6.2.1. Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:
EIIC( (31 ) debe incluir la unidad.
El 1C(f3) debe incluir el cero.
El CV yxI del porcentaje de recobro,
no debe ser mayor de 2% si el método es cromatográfico,
no mayor de 3% si es químico o espectrofotométrico,
no mayor del 5% si es microbiológico
no mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificación

del analito en la muestra.
8.6.2.2. Porcentaje de recobro:
El IC(/-!) debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del % de

recobro se incluya en el intervalo:
98 - 102% si el método es cromatográfico,
98 - 102% si el método es volumétrico,
97 - 103% si el método es químico o espectrofotométrico,
95 - 105% si el método es microbiológico.
El CV del porcentaje de recobro:
no debe ser mayor de 2% si el método es cromafográfico,
no mayor de 3% si es químico o espectrofotométrico
no mayor del 5% si es microbiológico

GUíA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS


en el Anexo.6.
Es conveniente trazar la gráfica de la cantidad adicionada (x) vs la

cantidad recuperada (y), e incluir la ecuación, su línea y el coeficiente
de determinación.
8.7. Precisión del Método (Precisión Intermedia o Tolerancia

interdía / analista).
8.7.1. Metodología:
Analizar por triplicado una muestra homogénea del producto que tenga
un nivel cercano o igual al 100 % (en el caso de contenidol potencial
valoración) o una muestra homogénea cuyo contenido esté incluido
en el intervalo lineal de concentración de linealidad de método (para
el caso de impurezas), en dos días diferentes y por dos analistas
diferentes. Utilizar de preferencia la misma sustancia de referencia y
los mismos instrumentos y/o equipos. Reportar el contenido I potencia
/ valoración del analito de todas las muestras.
Calcular la media aritmética (y), desviación estándar (8) y coeficiente

de variación (CV) del contenido I potencia I valoración, empleando
todos los resultados obtenidos.
CV-< 2% para métodos cromatográficos y volumétricos.
CV-< 3% para métodos químicos o espectrofotométricos.
CV -< 5% para métodos biológicos.

DETERMINACIONES, METODOLOGíA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN. 30


en el Anexo 7.
Los resultados pueden ser analizados, utilizando otros métodos

estadísticos apropiados, que permitan sustentar que la precisión del
método es aceptable. Puede ser utilizado un modelo estadístico lineal
de diseño experimental considerando como factores al analista y al día
anidado en el analista o considerando al analista como un factor jerárquico
respecto al día. Este modelo permite investigar el efecto del analista y
del día, así como estimar la variabilidad entre analistas (reproducibilidad
interanalistas), la variabilidad entre días (reproducibilidad interdías) y la
variabilidad del método analítico (repetibilidad). Este análisis es de utilidad
cuando se tiene interés en determinar el grado de tolerancia del método
a estas fuentes de variación.
8.8. Estabilidad Analítica de la Muestra.
8.8.1. Metodología:
El analista debe establecer la etapa de análisis en la cual se desea

evaluar la estabilidad, además de determinar si en dicha etapa es posible
fraccionar (muestras dependientes) o no (muestras independientes) y.
las condiciones de almacenaje.
Para determinar la estabilidad analítica para muestras dependientes, el

analista debe procesar hasta la etapa preestablecida por lo menos por
t1iplicado una muestra homogénea. Fraccionar cada una de las preparaciones
de acuerdo a las condiciones de almacenaje de interés. Terminar el análisis
de una de las fracciones de cada preparación (contenido I potencia I
valoración inicial). Proseguir el análisis de cada una de las fracciones al
término de cada condición de almacenaje, utilizando una solución de
referencia recientemente preparada, si el método contempla el uso de una
solución de referencia. Reportar el contenido I potencia I valoración de cada
fracción.
Para determinar la estabilidad analítica para muestras independientes, a

partir de una muestra homogénea, el analista debe analizar por t1iplicado
(contenido I potencia I valoración inicial). Simultáneamente y de la misma
muestra, procesar el número de muestras necesarias para cada condición
de almacenaje hasta la etapa preestablecida (preparaciones) al menos por
triplicado. Proseguir el análisis de cada una de las preparaciones al término
de cada condición de almacenaje, utilizando una solución de referencia
recientemente preparada; si el método contempla el úso de una solución de
referencia. Reportar el contenido I potencia I valoración de cada preparación.

.
Calcular la media aritmética del análisis inicial (Yo) y de cada condición
-
de almacenaje (y¡). Calcular la diferencia absoluta de la media aritmética
de cada condición de almacenaje respecto del análisis inicial ( diI 1).
Idi I~ 2% para métodos cromatográficos y volumétricos.

Idi I~ 3% para métodos químicos o espectrofotométricos.
Idi I~ 5% para métodos biológicos.

en el Anexo 8.
Los resultados pueden ser analizados utilizando otros métodos

estadísticos apropiados. Uno de ellos es la obtención de intervalos de
confianza que describen la diferencia de los resultados de una condición
específica respecto de los resultados iniciales, basados en la distribución
t de Dunnett.
8.9. Límite de Detección.
Para la estimación del límite de detección se sugieren los siguientes

procedimientos:
8.9.1. LD con base en señal de Ruido.
8.9.1.1. Metodología:
Este procedimiento aplica a métodos que utilizan instrumentos para

medir la respuesta analítica y que presentan una señal de ruido basal.
Un analista debe determinar la respuesta de muestras blanco (reactivos,
placebos analíticos, etc., según proceda) y la respuesta de muestras
analíticas (anal]to, placebos adicionados, según proceda) en un
intervalo de concentraciones del ana lito que incluya la especificación
de la prueba de impurezas límite. Determinar aquella cantidad del analito
que genere una respuesta con respecto a la muestra blanco en una
proporción de por lo menos de 3 a 1, lo que corresponde a la

concentración asociada al límite de detección. Este procedimiento se

utiliza para verificar el límite de detección estimado por otros
procedimientos.
8.9.1.2. Criterio de Aceptación:
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de

impurezas límite.
8.9.2. LD con base en curva de calibración y desviación estándar

de los blancos.
Este procedimiento aplica tanto a métodos instrumentales como a no

instrumentales. Un. analista debe preparar por lo menos 3
concentraciones de la sustancia de interés (anal ita, placebos
adicionados, etc.; según proceda) a valores menores o que incluya la
especificación de la prueba de impurezas límite; ya sea' por dilución o
por pesada independiente del analito. Simultáneamente, preparar por
lo menos 5 blancos (reactivos, placebos analíticos, etc.; según proceda).
Medir las respuestas analíticas. Para la curva de calibración, sin incluir
los blancos, calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente de
determinación (r2 ) y el intervalo de confianza para la pendiente (IC({31»'
Para los blancos, calcular la desviación estándar (Sb)de los blancos.
Calcular el límite de detección con la siguiente ecuación:
3.3 X Sb
LO=
b1
El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la
señal de ruido.
1C({31)' no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas límite.
DETERMINACIONES, METODOLOGiA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 33

8.9.3. LD con base en la curva de calibración y la desviación

estándar de regresión.

instrumentales. Un analista debe preparar por lo menos 3
concentraciones de la sustancia de interés (anal ita, placebos
especificación de la prueba de impurezas límite; ya sea por dilución o
por pesada independiente del analito. Medir las respuestas analíticas.
Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente de determinación
(r 2 ) , la desviación estándar de regresión (SY/X> y el intervalo de confianza
para la pendiente (1C(¡3). Calcular el límite dedetección con la siguiente
ecuación.
LD = 3.3 X Sy/x
b1
El valor estimado LO debe ser verificado utilizando el procedimiento de
la señal de ruido.
r2 ~ 0.98
1C(¡31)' no debe incluir el cero.
El LO debe ser menor a la especificación de la prueba de

impurezas límite.
Cualquier otro criterio ·de aceptación, debe ser justificado.

¡
8.9.4. LD con base en la curva de calibración y la desviación
estándar de la ordenada al origen.

concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos
especificación de la prueba de impurezas límite; ya sea por dilución o
por pesada independiente del analito. Medir las respuestas analíticas.
Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente de determinación
(r'). la desviación estándar ele la ordenada al origen (Sb. ) y el intervalo
de confianza para la pendiente (IC(¡31». Calcular el límite de detección
con la siguiente ecuación:
DETERMINACIONES. METODOLOGIA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 34

El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de

la señal de ruido.
r2 ~ 0.98
1C({31)' no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de

impurezas límite.
Las fórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo, considerando

los distintos procedimientos, se describen en el Anexo 9.
8.10. Límite de Cuantificación.
Para la estimación del límite de cuantificación se sugieren los siguientes

procedimientos:
8.10.1. Señal de Ruido.
Este procedimiento aplica a métodos que utilizan un instrumento para

medir la respuesta analítica y que presentan una señal de ruido basal.
Un analista debe determinar la señal de muestras blanco (reactivos,
placebos, etc., según proceda) y la señal analítica de muestras (analito,
placebos adicionados, según proceda) a concentraciones conocidas del
analito, inferiores o que incluya la especiñcación del contenido I valoración
de la prueba de impurezas. Determinar aquella cantidad del analito cuya
señal sea similar o mayor a la de la muestra blanco en una proporción
de 10 a 1, lo que corresponde a la cantidad asociada al límite de
cuantificación. Es necesario verificar que dicha cantidad corresponda al
límite de cuantificación, evaluando la exactitud y repetibilidad del valor
estimado.
.~
DETERMINACIONES, ~ODOLOGIA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 35

GUíA DE VALIDACiÓN DE METODOS ANALíTICOS
El LC debe ser menor a la especificación del contenido / valoración de

la prueba de impurezas
8.10.2. LC con base en la curva de calibración y la desviación

estándar de los blancos.
8.10.2.1. Metodología: Este procedimiento aplica tanto a métodos

instrumentales como a no instrumentales. Un analista debe preparar
por lo menos 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito,
placebos adicionados, etc., según proceda) a valores menores o que
incluya la especificación de contenido / valoración de la prueba de
impurezas, ya sea por dilución o por pesada independiente del analito.
Simultáneamente, preparar por lo menos 5 blancos (reactivos, place-
bos, etc., según proceda). Medir las respuestas analíticas. Calcular el
valor de la pendiente (b.), el coeficiente de determinación (r2) y el
intervalo de confianza para la pendiente 1c(f31) . Para los blancos,
calcular la desviación estándar de los blancos. Calcular el límite de
cuantificación con la siguiente ecuación:
1Dx Sb
LC=
b1
Evaluar la exactitud y repetibilidad del valor estimado del límite de
cuantificación.
IC(f31), no debe incluir el cero.'
El LC debe ser menor a la especificación del contenido I

valoración de la prueba de impurezas
8.10.3. LC con base en la curva de calibración basado en la

desviación estándar dereqreslón,

DETERMINACIONES, METODOLOGiA y CRITERIOS DE ACEPTACiÓN 36

adicionados. etc.• según proceda) a valores menores o que incluya la

especificación de contenido I valoración de la prueba de impurezas, ya
sea por dilución o por pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analíticas. Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente
de determinación (r2) , la desviación estándar de regresión (Sy,) y el
intervalo de confianza para la pendiente (1C«(31))' Calcular el límite de
cuantificación con la siguiente ecuación:

cuantificación.
8.10.3;2. Criterio de Aceptación:
r2 ;:::" O.98
1C«(31)' no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido I

valoración de la prueba de impurezas.
8.10.4. Le con base en la curva de calibración y la desviación

estándar de la ordenada al origen.

instrumentales. Un analísta debe preparar por lo menos 3
adicionados, etc., según proceda) a valores menores o que incluya la
especificación de contenido I valoración de la prueba de impurezas, ya
sea por dilución o por pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analíticas. Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente
de determinación (r2 ) , la desviación estándar de la ordenada al origen
(Sbo ) y el intervalo de confianza para la pendiente (IC«(31))' Calcular el
límite de cuantificación con la siguiente ecuación:
Le = 3.3 x Sbo
b1
cuantificación.

r2 ~ 0.98
IC(,81)' no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido /

valoración de la prueba de impurezas.
Las fórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo, considerando

los distintos procedimientos, se describen en el Anexo 10.
8.11. Robustez.
Metodología:
Se deben establecer aquellos factores instrumentales (temperatura de

la columna, presión en la columna, velocidad de flujo, etc.) y/o factores
no instrumentales (pH de fases, volúmenes de solventes orgánicos para
una extracción, etc.), relacionados al propio método, que se considere
críticos. En cada condición de operación distinta; asi como a la condición
normal, analizar la misma muestra por lo menos por triplicado. Reportar
el contenido / potencia / valoración del analito para las muestras de
condición normal de operación y para la(s) muestra(s) de las otra(s)
condicion(es) de operación, expresada(s) como %.
Calcular la media aritmética de la condición normal de operación (Yo) y

de cada condición de operación diferente a la condición normal ( Yi ).
Calcular la diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición
respecto a la condición normal (\ di [).
\di I ~ 2% para métodos cromatográficos y volumétricos.
I di 1 ~ 3% para métodos químicos yespectrofotométricos.
Idi I ~ 5% para métodos biológicos.

no mayor a una magnitud preestablecida. acorde a la especificación del
analito en la muestra.


el Anexo 11.

estadísticos apropiados. Uno de ellos es la obtención de intervalos de
confianza que describen la diferencia de los resultados de una condición
específica respecto a la condición normal de operación, basados en la
distribución t de Student (para 2 condiciones) o t de Dunnett (para 3 o
más condiciones), incluyendo la condición normal.
8.12. Tolerancia
Metodología:
Se deben establecer aquellos factores ajenos al método como diferentes

equipos, lotes de reactivos, columnas, etc., que se puedan presentar al
reproducir el método en otras condiciones de uso. Fijar por lo menos 2
condiciones de uso y analizar una misma muestra por lo menos por
triplicado a cada condición. Reportar el contenido I potencia I valoración
del analito de todas las muestras.
Calcular la media aritmética ( ~ ). desviación estándar (S) y coeficiente

de variación (CV) del contenido I potencia I valoración.
8.12.1. Criterio de Aceptación:
CV ~ 2% para métodos cromatográficos y volumétricos.
CV ~ 3% para métodos químicos yespectrofotométricos.
CV ~ 5% para métodos biológicos.
no mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificación del

analito en la muestra.

el Anexo 12.

estadísticos apropiados. Uno de ellos es aplicar un análisis de la varianza

con un criterio de clasificación para determinar si al menos una de las

condiciones de uso es diferente. En caso de concluir que al menos una
de las condiciones de uso es diferente: puede emplearse una prueba
estadística de comparaciones múltiples para identificar aquellas
condiciones que dan lugar a resultados diferentes.
S.SUSTANCIAS DE REFERENCIA
Las sustancias de referencia son importantes en la validación de métodos

analíticos, ya que constituyen un componente propio del método y una
herramienta en la evaluación de los parámetros de desempeño, lo que
permite establecer la confiabilidad de la metodología.
c.'i i Para la selección y adquisición de las sustancias de referencia se debe

contar con procedimientos acordes para su manejo y aplicación correctos
dentro del laboratorio que va a llevar a cabo las actividades de validación
de métodos. Así mismo, se debe contar con registros del uso y con la
documentación que avale una buena práctica en el manejo de dichas
sustancias.
9.1. Manejo.
Para cumplir su propósito, cada sustancia de referencia debe

almacenarse, manejarse y utilizarse de acuerdo con las especificaciones
correspondientes. Generalmente deben almacenarse en su contenedor
original, alejadas del calor y protegidas dela luz. Deben evitarse lugares
húmedos. Cualquier indicación sobre condiciones especiales de
almacenamiento deben incluirse en el marbete y (o) certificado analítico.
Toda sustancia de referencia debe contar con su identificación y registro.

La información mínima para identificar las sustancias de referencia es:
Para sustancias de referencia primarias:
a) Nombre de la sustancia de referencia
b) Cantidad
s u S T A N C I A S D E R E F E R E N e I A 40
I
i
1
I
t c) Lote del producto
d) Clave (para uso interno en el laboratorio)
e) Fecha de adquisición
f) Pureza (potencia)
g) Fecha de caducidad
h) Riesgo potencial de manejo
i) Indicaciones especiales.
Para sustancias de referencia secundarias:
. ~
a) Nombre de la sustancia de referencia
b) Cantidad certificada
c) Lote interno
d) Clave
e) Fecha de certificación
f) Potencia en relación con la sustancia de referencia
La información mínima de un registro de las sustancias de referencia es:
a) Nombre
b) Lote
e) Clave de identificación interna
d) Procedencia (USP, BP, COSUFAR, etc.)
e) Fecha de adquisición
f) Fecha de empleo
g) Para que se emplea (uso)
s U S T A N C I A S o E R E F E R E N C I A 41
GUíA DE VALIDACiÓN DE METODOS ANALíTICOS
h) Cantidad empleada
i) Cantidad remanente
j) Analista que la utiliza
k) Caducidad
Para las sustancias de referencia secundaria, es conveniente contar

además con registros adicionales como:
a) Nombre
b) Lote
e) Cálculos para obtener la potencia de la sustancia analizada (por

ejemplo si se emplea para obtener una sustancia de referencia
secundaria)
d) Gráficas (espectros, cromatogramas, etc.)
e) Certificado de análisis del material.
En la validación de los métodos analíticos, estos registros son criticas.
Se debe contar con lineamientos que aseguren la no utilización de

sustancias de referencia caducas.
9.2. Tratamiento.
Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de

referencia lo debe contemplar la propia metodología, o en su caso, debe
especificarse en su marbete.
Si la sustancia de referencia debe secarse antes de ser utilizada, es

necesario seguir las instrucciones que aparecen en su etiqueta o
certificado de análisis. La operación de secado no se debe llevar a cabo
en el envase original; es conveniente transferir una cantidad suficiente
a otro envase, para llevar a cabo dicha operación. Si queda un excedente,
se debe desechar.
S u S T A N C I AS D"E R E F E RE N C lA 42
9.3. Procedencia.
A continuación se mencionan algunos centros especializados que

proveen sustancias de referencia:
• Btitish Pharmacopoeia (BP) (Farmacopea Británica). European Phar-

macopoeia (EP) (Farmacopea Europea). La SP ofrece sustancias de
referencia, las cuales están disponibles en la Agencia de Laboratorios
de Control de Medicamentos (Inglaterra).
• European Pharmacopoeia Chemical Reference Substances, EPCRS

(sustancias químicas de referencia de la Farmacopea Europea). Estos
materiales se obtienen por medio de la Comisión Secretarial de la
Farmacopea Europea, Consejo de Europa .
• Comité de Sustancias Farmacéuticas de Referencia (COSUFAR).
• Organización Mundial de la Salud (OMS).
La OMS clasifica las sustancias de referencia en:
Sustancias químicas internacionales de referencia, que son las

establecidas por la OMS.
Sustancias nacionales de referencia o sustancias regionales de

referencia, las cuales se producen en cada país y se certifican mediante
las sustancias químicas internacionales de referencia.
La Organización Mundial de la Salud, agencia de las Naciones Unidas,

mantiene un programa para proveer los estándares biológicos
internacionales y las sustancias químicas de referencia. El programa
tiene relación con las sustancias de referencia para antibióticos, productos
biológicos y agentes quimioterapéuticos. Como regla general, un estándar
internacional para un material de origen vegetal se discontinúa una vez
que la sustancia responsable de la actividad se ha aislado, identificado y
preparado, de tal forma que pueda ser completamente caracterizada
por medios físicos y químicos.
• Secretaría de Salud (SSA).
• United States Pharmacopeia (USP) (Farmacopea de Estados Unidos).
S U S T A N· C A S o E R E F E R· E N C I A 43
• O. REVRLIDRCIÓN
Se deben establecer y justificar criterios apropiados para la revalidación de métodos

analíticos, así como mantener un control de cambios. Cualquier cambio crítico a
un método analítico, da lugar a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validación
como tal.
Como un ejemplo, en la siguiente tabla se establecen cambios en el método, su

impacto y el parámetro de desempeño a revalidar.
1 PARAMETROA
CAMBIO IMPACTA REVALIDAR
DISPOSITIVO DE MEDICION VARIACION EN SISTEMA PRECISION DEL SISTEMA

DEL INSTRUMENTO DE DE MEDICION
MEDICION
ADECUABILlDAD DEL
SISTEMA
CONCENTRACION DE LA EXACTITUD DEL METODO LINEALIDAD DEL SISTEMA

SOLUCION DE y EXACTITUD DEL
REFERENCIA METODO
FORMULACION DEL EXACTITUD DEL METODO EXACTITUD Y

PRODUCTO REPETIBILlDAD DEL
METODO
LINEALIDAD DEL METODO
ESPECIFICIDAD
EQUIPOS VARIACION DEL METODO TOLERANCIA
PROVEEDOR DE COLUMNAS VARIACION DEL METODO TOLERANCIA
r r, COMPRRRCION DE 2 METODOS RNRLITICOS
Cuando se tiene interés en comparar 2 métodos analíticos para aplicaciones de

contenido I potencia I valoración, se pueden emplear los siguientes procedimientos:
REVALIDACiÓN 44
t GUíA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
I
I
• Estudio de Comparación de Parámetros de Desempeño. Este procedimiento se
utiliza cuando los 2 métodos analíticos han sido validados y se tiene interés en
comparar sus parámetros de desempeño, como puede ser el comparar un método
volumétrico contra un método por cromatografía de líquidos de alta resolución .
• Estudio de correlación. Este procedimiento se utiliza cuando se comparan dos

métodos cuyos resultados se expresan en unidades diferentes, tal como, actividad
biológica vs concentración.
11.1. Estudio de Comparación de Parámetros de Desempeño:
En función de la aplicación analítica de los métodos analíticos, la siguiente

tabla indica cuales son los parámetros de desempeño a estudiar.
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO A COMPARAR DE

2 MÉTODOS ANALiTICOS
CAMBIO CONTENIDO I POTENCIA I PARAMETRO

A REVALIDAR
VALORACION
ESPECIFICIDAD
PARAMETROS DE
EXACTITUD Y REPETIBILlDAD
DESEMPEÑO
LINEALIDAD DEL METODO
PRECISION DEL METODO O PRECISiÓN INTERMEDIA
A continuación se listan los parámetros analíticos mínimos a comparar,

así como los criterios para establecer la igualdad de dichos parámetros.
11.1.1. Especificidad.
Este parámetro debe cumplir para cada método analítico; ya sea

demostrando su especificidad o exactitud.
C o M PAR A e ; Ó N O E 2 M É T 00 o S A N A LIT I e o s 45
GUiA DE VALIDACiÓN DE METODOS ANALíTICOS
11.1.2. Repetibilidad en Exactitud.
De los datos de exactitud y repetibilidad utilizar la información del porcentaje de

recobro. Calcular la varianza (8 2 ) del porcentaje de recobro de cada método.
11.1.2.2. Criterios de Aceptación:
El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.

Lasfórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo, se describenen elAnexo 13.
11.1.3. Repetibilidad en Linealidad del Método.
De los datos de linealidad del método, utilizar la información del porcentaje de

recobro. Calcular la varianza (8 2) del porcentaje de recobro de cada método.
11.1.3.2. Criterios de Aceptación:
El intervalo de confianza para la razón de varianzas debe incluir el valor de 1.

Las fórmulas y el procedimiento de cálculo con un ejemplo, se describen en el
Anexo 14.
11.1.4. Exactitud.
11.1.4.1. Metodología: De los datos de exactitud y repetibilidad, utilizar la

información del porcentaje de recobro. Calcular la media aritmética (y) y varianza
(8 2) del porcentaje de recobro de cada método.
11.1.4.2. Criterios de aceptación:
El intervalo de confianza para la diferencia de las 2 medias poblacionales del

porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.
El análisis estadístico de los resultados, presenta 2 situaciones:
a) Los métodos tienen la misma repetibilidad (varianzas iguales)
.C o M PAR A e ió N DE 2 MÉTODOS A N A LIT I e o s 46

b) Los métodos tienen diferente repetibilidad (varianzas diferentes)
por lo tanto para llevar a cabo el análisis es necesario realizar el estudio de

comparación de repetibilidad de ambos métodos. (11.1 .2 )
Las fórmulas y el procedimiento de cálculos con un ejemplo para ambas

situaciones, se describen en el Anexo 15.
11~ 1.5. Linealidad del Método.
De los datos de linealidad del método, utilizar la información de la cantidad

adicionada y cantidad recuperada de cada método, así como el porcentaje de
recobro de cada método. Para cada método, calcular la pendiente (b, y b,.> y
ordenada al origen (b o1 y b o, ) de Ia relación cantidad adicionada -cantidad
recuperada, así como la media aritmética (Y1 Y Y2) Y varianza (S21 y S22) del
porcentaje de recobro.
El intervalo de confianza para la diferencia de las pendiente de cantidad adicionada-

cantidad recuperada debe incluir el valor de cero.
El intervalo de confianza para la diferencia de las ordenadas al origen de cantidad

adicionada-cantidad recuperada debe incluir el valor de cero.
El intervalo de confianza para la diferencia de las medias poblacionales del

porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.
El análisis estadístico de los resultados del porcentaje de recobro, presenta 2

situaciones:
a) Los métodos tienen la misma repetibilidad (varianzas iguales)
b) Los métodos tienen diferente repetibilidad (varianzas diferentes)
por lo tanto para llevar a cabo el análisis es necesario realizar el estudio de

comparación de repetibilidad de ambos métodos. (11.1.3)
Las fórmulas y el procedimiento de cálculos con un ejemplo para la situación de
C o M PAR A CiÓ N· D E 2 M É T o D o s A N A LIT I C o s 47

igual repetibilidad, se describen en el Anexo 16. Para el caso de diferente

repetibilidad, con base en el porcentaje de recobro se describe en el anexo 15.
11.1.6. Precisión del Método.
De los datos de precisión del método, utilizar la información del contenido / potencia
/ valoración del analito de cada método. Calcular las varianzas. (S21 y S22).
El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.
Las fórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo,se describen en el Anexo 17.
11.2. Estudio de Correlación.
Estos estudios se aplican a métodos de contenido / valoración / potencia y los

parámetros a evaluar en este tipo de estudio son:
* ProPorcionalidad. Es importante establecer que estos estudios no necesariamente

establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad; ya que en muchas
ocasiones la respuesta analítica es diferente.
* Precisión. Es deseable que el método no oficial tenga una precisión igual o

mejor que el método oficial, o que su precisión sea aceptable para la aplicación
analítica deseada.
Inicialmente se debe establecer el método de referencia y el método a comparar
11.2.1. Proporcionalidad:
A. Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placebo

analítico.
Un analista debe preparar una cantidad suficiente de placebo analítico con el tipo
de componentes que comúnmente están presentes en la muestra, de tal manera
que pueda ser analizado por ambos métodos en tres diferentes nivele del analito,
que incluya la especiñcación.
C o M PAR A CiÓ N D E 2 M É T o D o s A N AL' i TIC o s . 48

í
Del placebo analítico preparado tomar una cantidad suficiente para adicionarle
analito al nivel inferior. Fraccionar en tres muestras y analizar cada muestra con
I ambos métodos bajo las mismas condiciones analíticas de cada método, para
l determinar el contenido I valoración I potencia. Es importante que cada muestra
I
este identificada. Repetir este procedimiento con el nivel del 100% Y superior.
¡' Reportar la relación contenido I valoración I potencia de cada método en cada

muestra del método a comparar (y) - método de referencia (x). Calcular el valor de
1 la pendiente (b.), la ordenada en el origen (b.), el coeficiente de determinación
(r2 ) , el intervalo de confianza para la pendiente (1c(f31) ) , y el coeficiente de variación
de regresión (CVy,.).
B. No se conocen los componentes de la muestra.
11.2.1.2. Metodología: El analista debe seleccionar por lo menos 9 muestras del

producto, cuyo nivel de analito cumpla con la especificación. El analista debe fijar
una etapa de los métodos analíticos, en los cuales transfiera una mayor o menor
cantidad de la muestra con el objeto de poder variar el nivel del analito, como
puede ser al pesar la muestra, al transferir un volumen. al efectuar una dilución,
entre otras.
Es conveniente que 3 muestras tengan un nivel bajo. 3 el nivel correspondiente al

100% de la especificación y 3 un nivel alto de analito.
Las 9 muestras deben ser identificadas y analizadas por ambos método. bajo las
mismas condiciones analíticas de cada método. Determinar el contenido I valoración
I potencia de cada muestra.
Reportar la relación contenido I valoración I potencia del método a comparar (y) -

método de referencia (x). Calcular el valor de la pendiente (b.), la ordenada en el
origen (be), el coeficiente de determinación (r2 ) , el intervalo de confianza para la
pendiente (1c(f31)) , y el coeficiente de variación de regresión (CV y,.).
El 1C(f31) no debe incluir el cero.
l
l Cualquier otro criterio de aceptación, debe ser justificado.
r
i
Las fórmulas. el procedimiento de cálculo y un ejemplo, se describen en el Anexo 18.
11.2.2. Precisión.
11.2.2.1. Metodología: Por lo menos 2 analistas. en por lo menos2 días, deben

C o M PAR A CiÓ N D E 2 M É T o D o S A N A LIT I C o s 49
analizar por triplicado muestras independientes (pesadas o alícuotas) de un lote

homogéneo de producto, cuyo nivel de analito esté incluido dentro de la
especificación; tanto con el método de referencia como con el método a comparar.
Reportar el contenido I potencia I valoración del analito de todas las muestras
en %, para ambos métodos.
El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razón de varianzas del método

a comparar respecto del método de referencia, no debe exceder el valor de 1.
Las fórmulas, el procedimiento de cálculo y un ejemplo, se describen en el

Anexo 19.
COMPARACiÓN DE 2 MIOTOÓOS ANALITICOS • 50

.2.DDCUMENTACláN
. Las actividades de la validación de un método analítico, deben ser sustentadas

por los siguientes documentos.
A. Protocolo. El contenido sugerido que debe tener un protocolo es:
1. Título.
2. Propósito u Objetivo.
3. Responsabilidades.
4. Plan de prueba. En éste, se deben describir los parámetros de desempeño

que permitan verificar la aplicación analítica deseada.
5. Criterios de aceptación para cada parámetro.
6. Formatos de registro de resultados.
B. Reporte, cuyo contenido mínimo debe ser:
1. Título.
2. Resultados.
3. Análisis de resultados.
4. Confrontación contra los criterios de aceptación.
5. Conclusión.
Es crítico documentar los registros analíticos.
La documentación debe estar ordenada y disponible, bajo la responsabilidad del

área de calidad.
o o e U M' EN T A C: I Ó N • 51
1 :a.CONCORDANCIA CON GUIAS INTERNACIONALES
Esta guía es equivalente a:
Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures.

ICH-Q2A, March 1995
Guideline on the Validation of Analytical Procedures; Methodology; Availability;

Notice ICHQ2B.
USP24. Validation of Compendial Methods.
Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods. CDER. November

1994, CMC 3
C o N e o R D A N e I A e o N G U I A S I N TER N A e ION A L E s· 52
t 4.BIBLIDORRFiR
14.1. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 7a. Ed. México (2000).
14.2. Métodos Analíticos, Validación. Guías Generales de Validación de la DGCIS,
SSA(1989).
14.3. Ley General de Salud (1997).
14.4. NMX-CC-1-1990 Sistemas de Calidad Vocabulario.
14.5. NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad-Gestión de Calidad. Guía para la
Selección, el Uso de Normas de Aseguramiento de Calidad.
14.6. Reglamento de Insumos para la Salud (1998).
14.7. NORMA Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-1993, Buenas prácticas de
fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados
a la fabricación de medicamentos.
14.8. NOM- 177 SSA1 1998 "Que establece las pruebas y procedimientos para
demostrar que un medicamento es intercambiable"
14.9. Guidance for Industry Bioanalytical methods Validation for Human Studies.
December 1998 FDA.
14.10. Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures.
ICH-Q2A, March 1995
B I B L I o G R A F I A 53.
GUiA DE VALIDACiÓN DE METODOS ANALíTICOS
14.11. Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods. CDER.
November 1994, CMC 3
14.12. Guideline for Industry. Analytical Procedures and Methods Validation.
August 2000. FDA
14.13. Guideline for submiUing Samples and Analytical Data for Methods Valida-
tion. February 1987. FDA
14.14. ICH Harmonised Tripartite Guideline. Validation Analytical Procedures:
Methodology. 6 Nov 1996.
14.15. ICH Guideline on the Validation of Analytical Procedures; Methodology;
ICHQ2B, November 1996.
14.16. USP24. Validation of Compendial Methods.
14.17. NORMA Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de
medicamentos.
14.18. Diseño y Análisis de Experimentos, Montgomery D. C.. Grupo Editorial
Iberoamérica. 38 Ed. México (1991).
BIBLIOGRAFIA 54
~;
~i i:,
GUíA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS 1:
e;'
¡.'.'.·l··.
.
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i
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t
t
15. ANEXOS
NUMERO CONTENIDO
1 MATRIZ DE EQUIVALENCIA DE MÉTODOS ANALíTICOS

2 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiÓN DEL SISTEMA
3 FÓRMULASY PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA ADECUABILlDAD DEL SISTEMA

4 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA
5 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA EXACTITUD Y
REPETIBILlDAD DEL MÉTODO.
6 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD DEL MÉTODO.
7 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE .CÁLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiÓN DEL MÉTODO
(PRECISiÓN INTERMEDIA).
8 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA ESTABILIDAD ANALíTICA
DE LA MUESTRA.
9 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA LIMITE DE DETECCiÓN.
10 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARALíMITE DE CUANTIFICACiÓN.
11 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA ROBUSTEZ.

12 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA TOLERANCIA.
13 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA REPETIBILlDAD
Y EXACTITUD PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.
14 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA REPETIBILlDAD EN
LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.
15 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO EN EXACTITUD PARA.
COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.
16 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO EN LINEALIDAD DEL MÉTODO
PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.
17 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO EN PRECISiÓN DEL MÉTODO
PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTQDOS ANALlTICOS.
18 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA PROPORCIONALIDAD DE
MÉTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACiÓN PARACOMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.

19 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiÓN DEL MÉTODO
EN ESTUDIOS DE CORRELACiÓN PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALlTICOS.

20 TABLA ESTADíSTICA DE LA DISTRIBUCiÓN t DE STUDENT.
21 TABLAS ESTADISTICA DE LA DISTRIBUCiÓN F DE FISHER.
22 COMENTARIOS RESPECTO A LOS CÁLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO.
ANEXOS' 55
ANEXO 1. MATRIZ DE EQUIVALENCIA DE MÉTODOS ANAlÍTICOS.
EQUIVALENTE PROPÓSITO USO

CONTENIDO O CUANTIFICA Métodos para producto a
POTENCIA ALANALlTO granel.
Métodos para producto
terminado.
Métodos para materia prima.
Métodos indicadores de
estabilidad.
Métodos para fármacos.
Métodos para cuantificar el
analito en la prueba de
disolución.
Valoración.
Ensayos de cuantificación.
Determinación del principio
activo liberado. .
Sustancias relacionadas.
Titulación.
Uniformidad de dosis.
LíMITE ESTABLECE LA PRESENCIA Métodos límite de impurezas.

DEL ANALlTO A UN LíMITE Métodos límite de residuos.
Métodos para determinar el
nivel de limpieza.
Prueba límite.
Sustancias relacionadas.
IDENTIFICACiÓN IDENTIFICA AL ANALlTO Ensayo de identidad.

- GUiA DE VALIDACiÓN DE METODOS ANALITICOS
.di'
ANEXO 2. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA

PRECISiÓN DEL SISTEMA
A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA:
_ LY
y=-
n
DESVIACiÓN ESTÁNDAR:
n(L l)-(L y)2

s=
n(n-l)
COEFICIENTE DE VARIACiÓN:
cv = y~*lOO
n = número de mediciones.
B) PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO.
1) Tabular los resultados:

PROPIEDAD MEDIDA (ABSORBANCIA)
.DE LA SOLUCiÓN DE REFERENCIA
(y)
1.0520
1.0462
1.0566
1.0568
1.0554
1.0498
2) Calcular ~y, ~y2 Y determinar n.

~y,= 1.0520 + 1.0462 +...+ 1.0498 = 6.3168
~y2 = 1.05202 + 1.0462 2 +...+ 1.04982 = 6.650417
n=6
3) Calcular y y S:
y = 6.3168 = 1.0528
6
2
s == 6 x 6.650417 - 6.3168 == 0.004252
6x(6-1)
4) Calcular el CV:
cv == 0.004252 x lOO == 0.4039%

1.0528 .
El CV no excede el 1.5%.
ANEXOS' 57

ADECUABILlDAD DEL SISTEMA.
A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA:
- ¿y
y=-
n
n(L/)-(2:y)2
\
\
s=
n(n-l)
CV = ~*lOO
y
n = número de mediciones.
Para la fórmulas de factor capacidad (K'), resolución (R), retención' relativa (Rr), factor de
coleo (T) y número de platos teóricos (N), referirse a la FEUM 7a Edición. Páginas 229 a
231.
RESPUESTAANALlTICA (ÁREA DE PICO)

DE LAS INYECCIONES DE LA SOLUCiÓN DE REFERENCIA.
Inyección Área (mAu*s)

1 1131.6
2 1134.1
3 1162.8
4 1132.9
5 1136.2
2) Calcular ~y, ~y2 Y determinar n.
~y =1131.6 + 1134.1+...+ 1136.2 =5697.6
~y2 = 1131.62 + 1134.1 2 +...+ 1136.22 = 6493218.06
n=5
3) Calcular y y S.
y= 5697.6 = 1139.52
5
s= 5x6493218.06-5697.6 =
5x(5-1)
2
13.124 .'''., .. .~ ..... - ..
4) Calcular el CV.
cv = 13.124 x100= 1.15%

1139.52
El CV no excede el 1.5%.
ANEXOS' 58
ANEXO 4. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA.
A) FÓRMULAS
PENDIENTE
n =número de mediciones (concentración - respuesta analítica).
ORDENADA AL ORIGEN
COEFicIENTE DE DETERMINACiÓN
2 (n(Ixy)-(¿x)(Iy))2
'0
r = (n(Ix 2)-(Ix)2)(n(Ii)-(Iy)2)
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA PENDIENTE
/C(PI) = b¡± (O.975,n-2 Sbl
~'2>2 -b¡¿",-b,¿y
Sylx-- n-2
t o.975,n-2 =Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
8) PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO.
Estos datos se utilizan únicamente para ejemplificar los cálculos.
CONCENTRACiÓN - PROPIEDAD MEDlpA
SOLUCiÓN x (ppm) y (absorbancia)
1 80 0.5194
2 80 0.5172
3 80 0.5147
4 100 0.7800
5 100 0.7846
6 100 0.8063
7 120 1.5917
8 120 1.5844
9 120 1.5837
2) Calcular LX, LY, LX2 , L y2 , Lxy Y determinar n:

LX = 80 + 80 + ... + 120 = 900
LY = 0.5194 + 0.5172 + + 1.5837 = 8.682
oo.
L x2 = 802 + 80 2 + + 1202 = 92400.00

oo.
'L y2 = 0.51942 + 0.51722 + ... + 1.5837 2 = 10.228243

=
LXY 80*0.5194 + 80·0.5172 + ... + 120*1.5837 932.37 =
n=9
3) Calcular b., bo y r2.
b ::: 9 x 932.37 - 900 x 8.682 = 0.026738

I 9 x 92400- 9002
b = 8.682-0.026738x900 = -1.709083
o 9
r2 = (9 x 932.37 -900x8.682)2 =0.925925

2)
(9 x 92400 - 900 2) x (9 x 10.228243 - 8.682
El valor es menor de 0.98
4) Calcular Sytx y Sbl
10.228243-0.026738x932.37 -(-1.709083)x8.682 = 0.140031

9.,...2
S bl = 0.140031 1
2
= 0.002858
92400- 900
9
5) Determinar en el Anexo 20 to.975,n-2 y calcular 1C({3,),

/0.975,7 = 2.365
JCCPl) = 0.026738 ± 2.365 x 0.002858 = 0.019979,0.033496
El intervalo no incluye el cero.
GRÁFICA X vs Y
2.0000 , - - - - ---,
1.5000 y = 0.0267x - 1.7091 o

2
r =0.9259
~ 1.0000
0.5000
0.0000 +--~--.,.---~--..,__-_..,..--..,__-----l
60 70 80- 90 100 110 120 130
x
ANEXOS' 60
ANEXOS. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA EXACTITUD Y

REPETIBILlDAD DEL MÉTODO
, A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA:
y=-
_ LY
1 n
DESVIACION ESTÁNDAR:
n(Ly 2)-(Ly)2
s=
n(n-l)
S
CV = _*100
Y
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA MEDIA POBLACIONAL:
- S
Je(p) = y± [0.975,1l-1 .¡;;
tO.975.n-1 Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
n =número de recobros.
CANTIDAD ADICIONADA- CANTIDAD RECUPERADA - % DE RECOBRO

PARA UN MÉTODO CROMATOGRÁFICO.
PLACEBO CANTIDAD CANTIDAD %DE

ANALlTICO ADICIONADA RECUPERADA RECOBRO
ADICIONADO (mg) (mg) (y)
1 50.00 50.04 100.08
2 50.10 50.39 100.58
3 50.00 50.11 100.22
4 49.90 49.89 99.98
5 50.00 50.23 100.46
6 50~OO-- ...... ---
- --49~93-- - ----------------
-- 99.86--
y = Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada respecto de la cantidad

adicionada.
ANEXOS' 61
2) Calcular ¿Y. ¿y2 Y determinar n.
¿y = 100.08 + 100.58 + o •• + 99.86 = 601.1788

¿y2 =100.082 + 100.58 2 +...+ 99.86 2 = 60236.3819
n=6
3) Calcular y Y S:
y= 601.1788 =100.1965
6
2
6 x 60236.3 819 - 60 I.l788 = 0.2792
s= 6x(6-1)
4) Calcular el CV:
cv = 0.2792 x l 00 =0.28 %
100.1965
El CV no es mayor de 2%.
5) Determinar en el Anexo 20 to.975.n-1 y calcular IC(Il).
..
(o 9755 = 2.571
0.2792
/C(.u) = IOO.1965±2.57Ix ¡¿ ==99.90,100.49
El intervalo incluye el valor de 100%.
ANEXOS' 62
G u i A O E V A LID A CiÓ N D E' M É T o Do s A N A LiT I e o s
ANEXOG. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD

DEL MÉTODO.
6.1 CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA
A) FÓRMULAS
PENDIENTE
n¿xy-¿X¿y
l
"2" 2
b = nLJx -(LJ X )
n = número de mediciones (cantidad adicionada - cantidad recuperada).

ORDENADA AL ORIGEN
¿y-bl¿x
b¿ = ='-----=-
n
COEFICIENTE DE DETERMINACiÓN
(n(L xy )-(¿ X )(2: y))2
lC(PI)=b l ±IO.975,n-2 Sbl
t O.975,n-2 Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA ORDENADAAL ORIGEN

lC(Po) = bo ±IO.975,n-2 SbO
_LX
x=--
n
COEFICIENTE DE VARIACiÓN DE REGRESiÓN.
S
CVy/x =~xl00
y
ANEXOS' 63
CANTIDAD ADICIONADA (x) - CANTIDAD RECUPERADA (y) DE UN MÉTODO
CROMATOGRÁFICO
PLACEBO
ANALíTICO
ADICIONADO x (mg/mL) y(mg I mL)
1 1.860 1.857
2 1.860 1.885
3 1.860 1.861
4 2.479 2.482
5 2.479 2.485
6 2.479 2.491
7 3.099 3.126 j'
8 3.099 3.115
9 3.099 3.122
2) Calcular ~x, ~y, ~X2, ~y2. ~xy y determinar n:

~x =1.860 + 1.860 + oo. + 3.099 =22.314
~Y =1.857 + 1.885 + ... + 3.122 =22.424
~X2 = 1.860 2 + 1.860 2 + oo. + 3.099 2 =57.62653
~ y2 =1.857 + 1.885 2 + oo. + 3.122 2 =58.22761

2
~xy =1.860*1.857 + 1.860*1.885 + ... + 3.099*3.122 =57.9259

n=9
3) Calcular b., be y r2.
b = 9x57.9259-22.314x22.424 = 1.01157
I 9x57.62653-22.3142
b = 22.424-1.01157x22.314 =-0.01647
o 9
2. (9x 57.9259-22.314 x 22.424)2 =0.99971

r = 2
(9x57.62653- 22.314 2)x(9x 58.22761-22.424 ) .~ ,
El valor excede a 0.98
ANEXOS' 64
4) Calcular Sy/x y s;
s = 58.22761-1.01157x57.9259-(-0.01647)x22.424 =0.00989
yl x 9-2
1
Sbl = 0.00989 2 = 0.00652
57.62653- 22.314
9
5) Determinar en el Anexo 20 tO.975.n-2 y calcular 1C(/3,).
(0.975.7 = 2.365
[CC.8I) = 1.01157 ±2.365 xO.00652 = 0.99615, 1.02699

El intervalo incluye la unidad.
6) Calcular x y ss,
x= 22.314 = 2.47933
9
1 2.47933 2
= 0.0165
SbO = 0.00989 "9 + 223142
5762653
. - - ' 9- -
7) Calcular lC(b o)'

[CCPo) = -0.01647 ± 2.365 xO.0165 = -0.05548,0.02254
El intervalo incluye el cero.
8) Calcular el CVy/ x :
y = 22.424 = 2.49156
9
CV = 0.00989 x 100= 0.397%

y/x 2.49156
El valor no excede el 2%.
YvsX
4.00
3.00
>- 2.00
y= 1.0116x - 0.0165
1.00 (2 = 0.9997
0.00
1.50 2.00 2.50 3.00 3.50
X
ANEXOS' 65
6.2 PORCENTAJE DE RECOBRO.
A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA:
- ¿y
y=-
n
n(¿/)-(¿y)2
s=
n(n -1)
CV = ~*lOO
y
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA MEDIA POBLACIONAL.
_ S
/C(¡.L) = y± t O.975,n- 1 f;¡
tO.975,n-1 Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

n = número de recobros.
CANTIDAD ADICIONADA - CANTIDAD RECUPERADA - % DE RECOBRO

DE UN MÉTODO CROMATOGRÁFICO
PLACEBO CANTIDAD %DE

ANALiTICO RECUPERADA
ADICIONADA RECOBRO
ADICIONADO (mg I mL) /
(mg I mL) (y)
1 1.860 1.857 99.84

2 1.860 1.885 101.34
3 1.860 1.861 100.05
4 2.479 2.482 100.12
5 2.479 2.485 100.24
6 2.479 2.491 100.48
7 3.099 3.126 100.87
8 3.099 3.115 100.52
9 3.099 3.122 100.74
y =Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada respecto de la cantidad

adicionada.
2) Calcular 1:y, 1:y2 y determinar n.
1:y =99.84 + 101.34 + + 100.74 =904.21339
1:y2 =99.84 2 + 101.34 2 + + 100.742 =90846.39831
n=9
ANEXOS' 66
GuiA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
3) Calcular y y S:
y = 904.21339 = 100.46815
9
2
s= 9x90846.39831-904.21339 = 0.4673
9x(9-1)
4) Calcular el CV:
_ 0.4673 x100 =0.465%

CV - 100.46815
I 5) Determinar en el Anexo 20 t o.975 ,n- 1 y calcular 1C(J..l).

lo 975 8 = 2.306
0.4673
IC(Jl) = 100.46815 ±2.306x J9 = 100.11,100.83
El intervalo no incluye el valor de 100 .
.\NE<OS ::¡7
ANEXO 7. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiÓN DEL

MÉTODO (PRECISiÓN INTERMEDIA).
A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA:
_ LY
y=-
n
n(L/)-(Ly)2
s=
n(n-l)
CV = ~*100
y
n =número de muestras de contenido I potencia I valoración.
CONTENIDO DE ANALlTO EN mg I 9 PARA UN MÉTODO BIOLÓGICO
ANALISTA
1 2
49.85 52.53
1 48.70 51.78
« 50.04 51.80
o 53.43 51.86
2 53.12 52.44
54.12 52.30
2) Calcular Ly.., Ly2 Y determinar n.
LY =49.85 + 48.70 + ... + 52.30 =621.97

Ly2 =49.85 2 + 48.70 2 +...+ 52.30 2 =32264.7003
n =12
3) Calcular y y S:
y = 621.97 =51.83
12
2
s= 12x 32264.7003 - 621.97 = 1.5805
12x(l2-1)
4) Calcular el CV:
CV = 1.5805 x l 00 = 3.05
51.83
El CV no excede el 5%.
ANEXOS' 68
ANEXOS. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON

EJEMPLO PARA ESTABILIDAD ANALíTICA DE LA MUESTRA.
A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA DEL ANÁLISIS INICIAL
- :2>0
.Yo=--
170
no =número de muestras del análisis inicial.
MEDIA ARITMÉTICA DEL ANÁLISIS DE CADA CONDICiÓN DE ALMACENAJE
- :2>¡
y I. = - -
n¡
ni = número de muestras del análisis de la i-ésima condición de almacenaje.
DIFERENCIA ABSOLUTA DE LA MEDIA ARITMÉTICA DE CADA CONDICiÓN DE

ALMACENAJE RESPECTO DE LA MEDIA ARITMÉTICA DEL ANÁLISIS INICIAL
CONTENIDO DE ANALlTO EN % PARA UN MÉTODO CROMATOGRÁFICO
TIEMPO DE ALMACENAMIENTO EN EL INYECTOR

INICIAL
MUESTRA
(Yo) 6 horas 24 horas 36 horas
(Y,) (Y2 ) (Y3)
1 100.05 99.50 100.26 98.31
2 99.98 99.31 99.50 98.50
3 100.10 99.50 99.31 98.31
2) Calcular ¿Yo' ¿Y 1 , ¿Y2 , ¿Y3 Y determinar no' n1 , n2 Y n3 •

¿Yo = 100.05 + 99.98 + 100.10 = 300.13
¿Y, = 99.50 + 99.31+ 99.50 =298.31
¿Y2 = 100.26 + 99.50+ 99.31 = 299.07
¿Y 3 = 98.31 + 98.50+ 98.31 = 295.12
no =3
n, =3
n2 =3
n3 =3
ANEXOS' 69
Yo = 300.13 = 100.0433
3
- 298.31
YI = ------ =99.4367
3
- - 299.07 _ 99 69
Y2 - --3-- .
Y3 = 295.1~ = 98.3733
3
Id,; = IY1- ~o¡ =199.4367 -100. 04331=0.61

I !
Id2: = IY2- ~o\ =19 9.69 -100.0433\ = 0.35

ANEXO 9. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA lÍMITE DE DETECCiÓN
9.1 SEÑAL RUIDO
SEÑAL
MUESTRA ANALíTICA
pA*seg
BLANCO O RUIDO 3525

3 * RUIDO 10575
ANALlTO ppm
0.5 4215
1 . 6954
1.5 9267
2 11045
2.5 13578
El LD se estima en 2 ppm, que es la cantidad de analito inmediatamente posterior a 3

veces el ruido.
9.2 CURVA DE CALIBRACiÓN BASADO EN LA DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LOS

BLANCOS.
A) FÓRMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACiÓN
PENDIENTE
n =número de mediciones (concentración - respuesta analítica ).
r2 = __ (n(¿xy)-(¿x)(¿y»2
-'-::-O-.-~'-:-''--~-:-~ _
(n(¿x 2)-(¿x)2)(n(¿l)-(¿y)2)
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LAPENDIENTE
t O.975,n-2 =Referirse al Anexo 20 para determinar el valor de la t de Student.
B) FÓRMULA PARA LOS BLANCOS
DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS:
n(¿>2)_(¿y)2
n(n -1)
n =número de blancos
C) FÓRMULA PARA EL líMITE DE DETECCIÓN.
3.3 x s,
LD=-b¡--"-
D) PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACiÓN.
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANAlíTICA (y)
MUESTRA x (ppm) y (absorbancia)
1 0,963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
2) Calcular ~x, ~y, LX2, Ly2, LXY y determinar n:

~x = 0.963 + 0.963 +.. oo + 1.926 = 11.556
~Y =0.315 + 0.314 + oo. + 0.629'= 3,765
L x2 = 0.963 2 + 0.9632 + ... + 1.926 2 = 17.72305
~ y2 = 0.3152 + 0.314 2 + oo' + 0.629 2 = 1.88164
~xy = 0.963*0.315 + 0.963*0.314 +oo. + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
ANEXOS' 72
3) Calcular b, y r2.
q = 8x5.77479-11.556x3.765 =0.32632
8 x 17.72305 -11.556 2
r2 = (8x5.77479-11.556x3.765)2 2 =0.99989
(8x 17.72305 -11.5562)x (8 x 1.88164 -3.765 )
El valor es mayor de 0.98
4) Calcular bo' Sy/x y Sbl:
b = 3.765 - 0.32632 x 11.556 =-0.00075

o 8
_1.88164 - 0.32632x 5.77479 - (-Q.00075)x 3.765 =0.00143

Sylx = 8-2
Sbl = 0.00143 1 = 0.00141

11.5562
17.72305 - 8
5) Determinar en el Anexo 20 tO.975.n'2 y calcular IC(f31)'
tO.975,6 = 2.447
IC(PI) = 0.32632 ± 2.447 x 0.00141 = 0.32288,0.32977
E) PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LOS BLANCOS.
BLANCOS Y (Absorbancia)
1 0.003
2 0.004
3 0.006
4 0.002
5 0.004
2) Calcular 1:y, 1:y2y determinar n:

1: y =0.003 + 0.004 + .,. + 0.004 =0.019
1: y2 =0.003 2 + 0.004 2 + + 0.004 2 = 0.00008
oo.
n=5
ANEXOS' 73
3) Calcular s;
2
5 x 0.00008 - 0.019 =0.00148
Sb = 5(5 -1)
F) CÁLCULO DEL LIMITE DE DETECCiÓN.
= 3.3xO.00148 =0.015ppm
LD 0.32632
9.3 CURVA DE CALIBRACiÓN BASADA EN LA DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE REGRESiÓN.
A) FÓRMULAS
PENDIENTE
n¿xy-¿X¿'y
b¡ = nL,¿x
"'" 2 -(L,¿X)
"'" 2
2 (n(LXY)-(LX)(LY)/
r = (n(Lx 2)-(Lx)2)(n(Li)-(Ly)2)
tO.975 ,n.2 =Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
LíMITE DE DETECCiÓN.
3.3 xS y 1x
LD=--b¡~-
ANEXOS' 74
I,
t
¡¡
. GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
i B) PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO.
I 1) Tabular los resultados:
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTAANALiTICA (y)
f
1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
2) Calcular Lx, Ly, Lx2 , Ly2 , LXY y determinar n:
Lx = 0.963 + 0.963 + + 1.926 = 11.556

L Y =0.315 + 0.314 + + 0.629 =3.765
Lx = 2 2
0.963 + 0.963 + 2
+ 1.9262 = 17.72305
L y2 =0.315 2 + 0.314 2 + + 0.629 2 = 1.88164
LXY = 0.963*0.315 + 0.963*0.314 + ... + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
3) Calcular b, y r2 •
b¡ = ~~_5:~~~22..=-_!J~~56x2·??~'i_ = 0.32632
8x 17.72305-11.556"2
2
r2 = (8x 5.:.?2.~79-11.556x 3.765) _= 0.99989
(8x 17.72305-11.556 2)x (8x 1.88164- 3.7652)
4) Calcular bo' Sy/x y Sbl:
b = 3.765-0.32632xI1.556 =-0.00075
a
8
I.88164-0.32632x5.77479 -(-0.00075)x3.765 = 0.00143

8-2
Sbl = 0.00143 2 =0.00141

17.72305 _ L1.556
8
ANEXOS· 75_
5) Determinar en el Anexo 20 tO.975,n-2 y calcular 1C(f3,).

(0.975,6 =2.447
IC(P.) = 0.32632± 2.447 x 0.00141 = 0.32288,0.32977
6) Calcular el límite de detección.
LD = 3.3xO.00143 = 0.014 m
0.32632 PP
9.4 CURVA DE CALIBRACiÓN BASADO EN LA DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LA

ORDENADA AL ORIGEN.
A) FÓRMULAS
PENDIENTE
nLxy- LxLy
b¡ = nI>2 -CLX)2
I 1
S" =S,¡, ~LX2 _ (L
nX)2
_ I L y -b¡LXy-boLY
2
SYIX-~ n-2
b
L>-b¡Lx
==--~-
o n
tO.975,n-2 = Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN.
ANEXOS' 76
- ¿>
X=--
n
LíMITE DE DETECCiÓN.
3.3xSb
LD= o
b,
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANALíTICA (y)
1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
2) Calcular L.X, L.y, L.X2, L.y2, L.xy y determinar n:

L.X =0.963 + 0.963 + + 1.926 =11.556
L. y = 0.315 + 0.314 + + 0.629 = 3.765
L. x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + + 1.9262 =17.72305
L. y2 = 0.315 2 + 0.314 2 + + 0.629 2 = 1.88164
L.xy = 0.963*0.315 + 0.963*0.314 + ... + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
3) Calcular b, y r 2•
b = 8x5.77479-11.556x3.765 =0.32632
1 8 x 17.72305-11.556 2
r2 = (8x5.77479-11.556 x 3.765)2 =0.99989

(8 x 17.72305-11.556 2) x (8 x 1.88164 -3.765 2)
4) Calcular bo' Sy/x y Sb1

b¿ = 3.765-0.32632x11.556 =-0.00075
8
ANEXOS· 77
1.88164-0.32632 x 5.77479 - (-0.00075) x 3.765 =: 0.00143

S Y/ J: =:
8-2
S61 =: 0.00143 1 2
=0.00141
17.72305 _ 11.556
8
5) Determinar en el Anexo 20 tO.97S.n-2 =y calcular IC({3J

(0975,6 = 2.447
IC(j3I) =: 0.32632± 2.447xO.00141 =: 0.32288,0.32977
6) Calcular x y s, o
x =: 11.556 =1.4445
8
2
1. 1.4445
5 60 =0.00143 8'+------ 2
=0.00210
17.72305- 11.556
8
7) Calcular el límite de detección.
LD = 3.3xO.0021O =0.021 m
0.32632 PP
ANEXOS' 78
ANEXO 10. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO

PARA liMITE DE CUANTIFICACiÓN
10.1 SEÑAL RUIDO
SEÑAL
MUESTRA ANALlT/CA
pA*seg
PLACEBOANALITICO (BLANCO O RUIDO) 3525

10" RUIDO 35250
ANALlTO ppm
5 15228
10 26250
15 37145
20 42180
25 59624
El LC se estima en 15 ppm, que es la cantidad del analito, inmediatamente posterior a 10
veces el ruido.
10.2 CURVA DE CALIBRACiÓN BASADO EN LA DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LOS

BLANCOS.
A) FÓRMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACiÓN

PENDIENTE
n = número de mediciones (concentración - respuesta analítica ).
2 (n(¿xy)-(¿x)(¿y»2
r = (n(¿x 2)_(¿x)2)(n(¿y2)-(¿y)2)
leefi¡)=b 1 ±IO.975,n-2 S b¡
~.
ANEXOS' 79
tO.975.n-2 = Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
B) FÓRMULA PARA LOS BLANCOS
DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS:
n(¿y2)_(¿»2
Sb = .I--=~----"'=--
n(n-l)
n = número de blancos
C) FÓRMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACiÓN.
Le = IOxSb
b)
D) PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACiÓN.
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTAANALlTICA (y)
PLACEBO
ANAL\nco x (ppm) y (absorbancia)
ADICIONADO
1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
2) Calcular LX, LY, LX2 , Ly2 ,LXY determinar n:

LX = 0.963 + 0.963 +.oo + 1.926 =11.556
L y = 0.315 + 0.314 + oo. + 0.629 = 3.765
L x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + oo. + 1.926 2 =17.72305
L y 2 =0.315 2 + 0.314 2 + oo. + 0.629 2 =1.88164
LXY =0.963*0.315 + 0.963*0.314 + oo. + 1.926*0.629 =5.77479
n=8
b = 8x5.77479-11.556x3.765 = 0.32632
) 8x 17.72305-11.556 2
2
r2 = (8x5.77479-11.556 x3.765) 2 =0.99989
(8 x 17.72305-11.556 2 ) x (8 x 1.88164 -3.765 )
ANEXOS' 80
GUíA DE VALIDACiÓN DE M.ÉTODOS ANALíTICOS
El valor excede 0.98
4) Calcular ba, Sytx y Sb'
ha = 3.765-0.32632xl1.556 = -0.00075
8
1.88164- 0.32632x 5.77479 - (-0.00075) X 3.765 = 0.00143

8-2
1
Sbl = 0.00143 2
=0.00141
17.72305_ 11.556
8
5) Determinar en el Anexo 20 tO.975.n-2 y calcular 1C({3,).
10.975,6 = 2.447
IC(Pl)= 0.32632±2.447xO.00141 = 0.32288,0.32977
E) PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS.
PLACEBO ANALíTICO (BLANCOS) Y (Absorbancia)
PLACEBO
ANALiTICO y (Absorbancia)
(BLANCOS)
1 0.003
2 0.004
3 0.006
4 0.002
5 0.004
2) Calcular "iy, "iy2 y determinar n:

"i y =0.003 + 0.004 + ... + 0.004 =0.019
"i y2 = 0.003 2 + 0.004 2 + ... + 0.004 2 =0.00008
n=5
3) Calcular s;
2
5xO.00008-0.019 =0.00148
Sb = 5(5-1)
F) CÁLCULO DEL LíMITE DE CUANTIFICACiÓN.
Le = 10xO.00148 = 0.045 m
0.32632 PP
ANEXOS' 81
10.3 CURVA DE CALIBRACiÓN BASADA EN LA DESVIACfóN ESTÁNDAR DE

REGRESiÓN.
A) FÓRMULAS
PENDIENTE
n = número de mediciones (concentración - respuesta analítica ).
2 (n(¿xy)-(¿x)(¿y))2
r -
- (n(¿x 2)_(¿x)2)(n(¿y2)-(¿y)2)
tO.975.n-2 =Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

LíMITE DE CUANTIFICACiÓN.
lOxS y t x
LC=---
bl
ANEXOS' 82
8) PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO.
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANAlíTICA (y)
PLACEBO
ANAlÍTICO x (ppm) y (absorbancia)
ADICIONADO
1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
2) Calcular LX, LY, LX2 , Ly 2 , LXY y determinar n:

LX = 0.963 + 0.963 + + 1.926 = 11.556
L Y =0.315 + 0.314 + + 0.629 =3.765
L x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + + 1.926 2 =17.72305
L y2 = 0.315 2 + 0.314 2 + + 0.629 2 = 1.88164
LXY =0.963*0.315 + 0.963*0.314 + ... + 1.926*0.629 =5.77479
n=8
b - 8x5.77479-11.556x3.765 =0.32632
1- 8xI7.72305-11.5562
2
2 (8x5.77479-11.556 x3.765) =0.99989
r - 2
- (8 xI7.72305-11.556 2)x(8 x1.88164-3.765 )
El valor excede 0.98
4) Calcular b a, Sy/x y Sbl

b = 3.765 - 0.32632 x 11.556 = -0.00075
o 8
1.88164-0.32632x5.77479-(-0.00075) x3.765 = 0.00143

8-2
Sbl = 0.00143 2 =0.00141

11.5;6
17.72305_
5) Determinar en el Anexo 20, tO.975,n-2 y calcular 1C(f31) .
t 0.975,6 = 2.441
JCCPI) = 0.32632 ± 2.447 x 0.00141 = 0.32288 , 0.32977
ANEXOS' 83
6) Calcular el límite de cuantificación.
LC = 10xO.00143 = 0.044 ppm

0.32632
10.4 CURVA DE CALIBRACiÓN BASADO EN LA DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LA

ORDENADA AL ORIGEN.
A) FÓRMULAS
PENDIENTE
n = número de mediciones ,..:oncentracíón - respuesta analítica ).
s = f¿y2 -b¡¿xy-bo¿y
yIx ~ n-2
bo ==¿=-y_-_b---,¡¿=--X
n
t O.975,n-2= Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN.
- LX
X=--
n
LIMITE DE CUANTIFICACiÓN.
10xSb
LC= o
b¡
ANEXOS' 84
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANALíTICA (y)
PLACEBO
ANALíTICO x (ppm) y (absorbancia)
ADICIONADO
1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
.»
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
2) Calcular L.X, L.y, L.X2 , L.y2, L.xy y determinar n:

L.X =0.963 + 0.963 + + 1.926 =11.556
L. Y = 0.315 + 0.314 + + 0.629 = 3.765
L. x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + oo. + 1.9262 = 17.72305
L.y2 = 0.315 2 + 0.314 2 + oo. + 0.629 2 = 1.88164
L.xy = 0.963*0.315 + 0.963*0.314 + .oo + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
3) Calcular b, y r2 .
_ 8x5.77479-11.556 x3.765 =0.32632

b - l
8 x 17.72305 -11.556 2
2
2 (8x5.77479-11.556x3.765) =0.99989
2
2
r = (8x 17.72305-11.556 ) x (8 x 1.88164- 3.765 )
4) Calcular b o' Sy/x y Sbl:
b = 3.765 - 0.32632 x 11.556 =-0.00075

o 8
1.88164 0.32632x 5.77479 -(-0.00075)x3.765 = 0.00143

Sylx = 8-2
Sbl = 0.00143 1 - - - - - - - - ; ;2- =0.00141

11.556
17.72305 - 8
ANEXOS' 85
· GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTO(')OS ANALíTICOS
5) Determinar en el Anexo 20, to.975,n-2 y calcular 1C(f3J
(0975,6 = 2.447
JC(P.) = 0.32632± 2.447 x 0.00141 = 0.32288,0.32977
6) Calcular xy Sbo
X = 11.556 = 1.4445
8
1 1.4445 2
SbO = 0.00143 - + =0.00210
2
8 17.72305 _ 11.556
8
7) Calcular el límite de cuantificación.
Le =.10xO.00210 =.
0064 ppm
0.32632
ANEXOS' 86
ANEXO 11. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA ROBUSTEZ.
A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA DE LA CONDICiÓN NORMAL DE OPERACiÓN
- ¿Yo
Yo=--
no
no =número de muestras de la condición normal de operación.
MEDIA ARITMÉTICA DEL ANÁLISIS DE CADA CONDICiÓN DE OPERACiÓN.
DIFERENTE A LA CONDICiÓN NORMAL
ni = número demuestras de la i-ésima condición de operación.
DIFERENCIAABSOLurA DE LA MEDIAARITMÉTICA DE CADA CONDICiÓN

RESPECTO DE LA MEDIA ARITMÉTICA DE LA CONDICiÓN NORMAL
. VALORACiÓN (%) DELANALlTO

ROBUSTEZ AL % DE UN COMPONENTE DE LA FASE MÓVIL DE UN MÉTODO
CROMATOGRÁFICO
CONDICION
0.31% 0.34% 0.37%
BAJA NORMAL ALTA

MUESTRA
(Y,) (Yo) (Y2)
1 101.88 100.55 B9.QO

2 101.88 100.22 98.74
3 101.37 103.63 99.33
2) Calcular LYo' LY" LY2 Y determinar. no' n, Y n2 •

LYo = 100.55 + 100.22 + 103.63 = 304.40
LY, =101.88 + 101.88+ 101.37 =305.13
LY2 = 99.00 + 98.74+ 99.33 = 297.07
no =3
n, =3
n2 =3
ANEXOS' 87
3) Calcular Yo, y32 :

Yo = 304.4 = 101.4667
3
YI = 305.13 = 101.71
3
Y2 = 297.07 = 99.0233
3
4) Calcular 1dil:
¡dll = /YI-., =1101.71-101.46671 = 0.2433

El valor excede el 2%.
ANEXOS' 88
ANEXO 12. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA TOLERANCIA.
A) FÓRMULAS
MEDIA ARITMÉTICA:
- ¿y
y=-
n
n(¿/)-(¿y)2
s=
n(n-l)
CV = :'*100
y
n =número de muestras de contenido I potencia I valoración.
VALORACiÓN DEL ANALlTO

TOLERANCIA DE UN MÉTODO CROMATOGRÁFICO A EQUIPOS
MUESTRA CLAR 1 CLAR2

1 98.69 97.9
2 98.51 97.5
3 98.35 98.11
2) Calcular LY, Li y determinar n.

Ly =98.69 + 98.51 + oo. + 98.11 =589.06
L y2 = 98.69 + 98.51 +oo.+ 98.112 = 57832.8908
2 2
n=6
3) Calcular y y S :
y= 589.06 =98.1767
6
I 2
S = /6 x 57832.8908 - 589.06 = 0.4344
~ 6x(6-1)
4) Calcular el CV:
CV = 0.4344 X 100-044°/
-. /0
98.1767
El valor no es mayor de 2%.
EXOS . 89
GUíA DE VALIDACiÓN DE MéTODOS ANALíTICOS

REPETIBILlDAD EN EXACTITUD PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.
A) FÓRMULAS
VARIANZA
Nota: Calcular la varianza de cada método y para fines de cálculo del intervalo de
confianza para la razón de varianzas, se debe establecer:
S,2 =varianza menor.
S/ =varianza mayor.
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA RAZÓN DE VARIANZAS
2 2 S2
S2 r:" < a 2 . < ...-LxF,
2 x rO.025,n 2 -l,n,-l - 2 - S2 O.975,n2- 1,nl-1
~ al 1
FO.025,llrl,Il,-1 y FO.975,1l2_1,1l,.1=Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de

Fisher. nz-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n 1-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
corresponden a los grados de libertad del denominador.
n, =número de recobros del método de varianza menor.

nz =número de recobros del método de varianza mayor.
% DE RECOBRO
PLACEBO
ANALÍTICO METODOA METODO B
ADICIONADO
1 101.22 100.08
2 99.56 100.59
3 100.39 100.22
4 99.11 99.97
5 100.19 100.47
6 100.95 99.85
ANEXOS' 90
2) Calcular ~y, ~y2 Y determinar n, para cada método analítico:
% DE RECOBRO
MÉTODO A MÉTODO B
~y 101.22 + 99.56 + ... + 100.95 =601.42 100.08 + 100.59 + ... + 99.85 =601.18
~y2 101.22 + 99.56 + ... + 100.95 =60287.5648 100.082 + 100.59 2 + ... + 99.852 =60236.6472
2 2 2
n 6 6
3) Calcular la varianza de cada método:
Método A:
2
s2 == 6 x 60287.5648 - 60 1.42 == 0.6457
6x(6-1)
Método B:
2
S2 === 6x60236.6472-601.18 ==0.0830
6x(6-1)
4) Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S,2)
s? == 0.0830
si == 0.B457
5) Determinar en el Anexo 21 F0.025.0 YF0.975.02,1.0,,1'.
2,1.0,,1
FO.025.S.S = 0.14
F097SSS=7.15
6) Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas:
2
0.6457 xO.14S~S 0.6457 x7.15
0.0830 0'¡2 0.0830
El intervalo de confianza no incluye el valor de 1.
ANEXOS' 91
:0 14. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA REPETIBILlDAD

EN LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.
A) FÓRMULAS
VARIANZA
:¿y2 _(¿_~_)_~
., (n -1)
S/ varianza menor.
S/ varianza mayor.
y Fo.975.n2-I.n,-¡= Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de

Fo.025.n2.1.n,-1
Fisher. n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
eje libertad del numerador; y n,-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
n¡ =número de recobros del método de varianza menor.

n2 =número de recobros del método de varianza mayor.
MÉTODO A MÉTODO B
CANTIDAD CANTIDAD CANTIDAD CANTIDAD
ADICIONADA RECUPERADA ADICIONADA RECUPERADA
(mg/g) (mg/g) (mg/g) (mg/g)
400.00 392.88 400.00 407.72

400.00 389.88 400.00 409.24
400.00 397.72 400.00 398.36
400.00 393.76 400.00 405.60
500.00 513.65 400.00 398.36
500.00 497.20 500.00 493.95
500.00 494.00 500.00 511.90
500.00 489.00 500.00 493.85
550.00 543.02 '500.00 393.80
550.00 535.15 500.00 497.20
550.00 545.82 550.00 534.49
550.00 534.38 550.00 545.10
550.00 550.17
550.00 551.93
550.00 535.21
ANEXOS' 92
2) Calcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada método (y), al obtener el

cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada en
porcentaje.
% DE RECOBRO
MÉTODO A MÉTODO B
(392.88/400.00)*100 =98.22 {407.72/400.00)*100 =101.93
97.47 102.31
99.43 99.56
98.44 101.40
102.73 99.59
99.44 98.79
98.80 102.38
97.80 98.77
98.73 98.76
97.30 99.44
99.24 97.18
97.16 99.11
100.03
100.35
97.31
3) Calcular Sy, Sy2 y determinar n, para cada método analítico:
MÉTODO A MÉTODO B
"Ly 98.22 + 97.47 + oo' + 97.16 = 1184.7609 101.93 + 102.31 + + 97.31 = 1496.9118
oo.
"Ly2 98.22 2 + 97.47 2 + oo. + 97.16 2 = 116996.0999 101.932 + 102.31 2 + + 97.31 2 = 149420.3404
oo.
n 12 15
Método A:
2
S2 = 12x116996.0999-1184.7609 =2.2332
12x(l2-1)
Método B:
2
S2 == 15x149420.3404-1496.9118 =2.6672
15x(l5-1)
5) Determinar la varianza mayor (S/) y la varianza menor ( S/)
s; =2.2332
si = 2.6672
ANEXOS' 93
6) Determinar en el Anexo 21 ~
F0.0_5.n,-1.n ,-1
YF0.975.n ,-I.n ,-1\
F0025.14,11 = 0.32
F0975.14,11 = 3.36
2.6673
- - - x0.32 ~
0-;
2 ~
2.6673
------x3.36
2.2332 0-, 2.2332
0.39 ~ o-~ ~ 4.01

0-,
El intervalo de confianza incluye el valor de 1.
ANEXOS' 94
ANEXO 15. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO EN EXACTITUD

PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANAlÍTICOS.
1.0 COMPARACiÓN DE REPETIBILlDAD DE AMBOS MÉTODOS
A) FÓRMULAS
VARIANZA
2 n 2:>2
S = ~=----'=---
-el> )2
n (n -1)
S/ varianza menor.
S/ varianza mayor.

2 2 2
~1.2 x F,O.025,n, -l,n¡-l :;;(J'2
2
s S2 x F,
S2 O.975,n, -I,n,-l
S1 (J'I I
=
FO.o:!5.n, . (,n ' . 1 y Fo.975,n2. l. n , . 1 Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F
de Fisher. nz-1 sangrados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los
grados de libertad del numerador; y n 1-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
n 1 = número de recobros del método de varianza menor.

n 2 =número de recobros del método de varianza mayor.
Las varianzas son iguales si en el intervalo de confianza incluye la unidad.
2.0 IGUAL REPETIBILlDAD (VARIANZAS EQUIVALENTES).
A) FÓRMULAS.
MEDIA ARITMÉTICA DEL MÉTODO 1:
¿Y2
Y2 = - - -
n2
VARIANZA DEL MÉTODO 1
2 ni 'L>l -(¿YI)2
SI = ---'=---==--
ni (ni -1)
2 n2 ¿Y~ _(¿Y2)2
S2 =.. n2(n2 - l)
ANEXOS' 95
GUíA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALITICOS
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS POBLACIONALES.
to.975.n, +n,-2 = Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
n, = número de rec-obros del método 1.

n2 = número de recobros del método 2.
% DE RECOBRO
PLACEBO
ANALíTICO MÉTODO A MÉTODO B
ADICIONADO
1 98.22 101.93
2 101.58 99.56
3 98.44 101.40
4 99.44 98.79
5 100.25 102.38
6 97.16 99.11
2) Calcular "i.y, "i.y2 y determinar n, para cada método analítico:
MÉTODO A MÉTODO B
"i.y 98.22 + 101.58 +oo. + 97.16 595.09 = 101.93 + 99.56 +oo. + 99.11 =603.17
"i.y2 =
98.22 2 + 101.58 2 + .oo + 97.16 2 59034.5401 101.93 2 + 99.56 2 + oo. + 99.112 =60647.7991
n 6 6
Método A:
2
52 = 6~~?O~,!:5401- 59?09 = 2.5044
, 6x(6-1)
Método B:
52 = .6:<~~~42:?_~?! -=_~?3.172 = 2.4249

2 6x(6-1)
4) Determinar la varianza mayor (S/) y la varianza menor (S,2):
S,2 = 2.5044
si = 2.4249
5) Determinar en el Anexo 21 F-0.025.n, -\.n 1-\ Y Fo. 975.n, -Ln, -1 :
F002555 = 0.14
F O.975,5,5 = 7.15
ANEXOS' 96
6) Calcular el intervalo de confianza para la razón de varíanzas:
2.S044 2.S044
--xO.14:$-- < - - x 7 IS
ai
2.4249 a,2 - 2.4249 .
El intervalo de confianza incluye el valor de 1.
7) Tabular otra vez los resultados:
% DE RECOBRO
MÉTODO 1 MÉTODO 2
98.22 101.93
101.58 99.56
98.44 101.40
99.44 98.79
100.25 102.38
97.16 99.11
8) Calcular Ly,. Ly/. LY2 , LY/ y determinar n, y n2 :

LY,= 98.22 + 101.58 + + 97.16 =595.09
"0
LY/ = 98.22 2 + 101.58 2 + ... + 97.16 2 = 59034.5401

LY2 = 101.93 + 99.56 + + 99.11 = 603,17
oo'
LY/= 101.93 2 + 99.56 2 + + 99.112 = 60647.7991

oo.
n1 = 6
n2 = 6
- 603.17 = 100.5283
Y2 -
6
10) Calcular S/. st
S2 = ~.~ S9034oS4~~-=-~~:..~~2 = 2.5044
1 6x(6-1)
s: = 6 x 606~7.7??.1..:-_?~~~.!]_ =2.4249 2
2 6x(6-1)
11) Determinar en el Anexo 20 tO.975.n\ +n,-2 y calcular 1C(lld.l2)O
(0.975,10 = 2.228
ISX2.S044+SX2.4249.[1 1]
ICCf-l1 - f-l2) = (99.1817 - 100oS283)±2.228, 1--'------ - + .. = -3.37,0.67
V ID 6 6
El intervalo de confianza incluye el cero.
ANEXOS' 97
8) Calcular ¿Yl' ¿Y/o ¿y2• ¿Y/ y determinar n, y n2:

¿y,= 102.15 + 98.26 + ... + 99.15 = 602.38
¿Y/= 102.152 + 98.26 2 + ... + 99.15 2 = 60500.4108
¿Y2= 100.93 + 99.56 + ... + 99.11 = 600.16
¿Y/= 100.932 + 99.56 2 + ... + 99.112 =60034.1916
n1=6
n2= 6
9) Calcular Y" Y1 2:
YI = 602.38 = 100.3967
6
Y2 = 600.16 = 100.0267
6
10) Calcular S/. S/=
S~ = 6x60500AI08-602.38 2 =4.6933
I 6x(6-1)
2
6 x 60034.1916 - 600.16
S2 = -----.-- = 0.4375
2 6 x (6 -1)
11) Calcular gl.
12) Determinar en el Anexo 20 tO.975.gl y calcular IC(Jld12)'
t 0.975.6 =2.447
. [4.6933 0.4375
JCCPI - P2) = (100.3967 -100.0267) ± 2.447,1-- + - - = -1.89,2.63
'1 6 6
ANEXOS' 98
GUiA DE VALIDACiÓN DE MéTODOS ANALiTICOS
2) Calcular ¿y, ¿y2 y determinar n, para cada método analítico:
MÉTODO A MÉTODO B
¿y 102.15 + 98.26 + ... + 99.15 = 602.38 100.93 + 99.56 + ... + 99.11 = 600.16
¿y2 102.152 + 98.26 2 + ... + 99.15 2 = 60500.4108 100.93 2 + 99.56 2 + .z, + 99.11 2 = 60034.1916
n 6 6
Método A:
2
S2 = 6 x 60500.4108 -602.38 =4.6933
A 6x(6-1)
Método 8:
2
6 x 60034.1916 - 600.16 = 0.4375
2 _
SB - 6x(6-1)
4) Determinar la varianza mayor (8 22) y la varianza menor (8/)

S¡2 = 0.4375
si = 4.6933
5) Determinar en el Anexo 21 Fo.o25.nz.l.n,.1 y Fo.975.nz.l.n,.1 :
FO.025.5,5 = 0.14
F097555=7.15
2
4.6933 xO.14:o:::; u2 s 4.6933 x7.15
0.4375 u¡2 0.4375
u2
1.50:0:::; _2 :o: :; 76.67
u 12
MÉTODO 1 MÉTODO 2
102.15 100.93
t
./
98.26 99.56 lt
100.65 100.40 :1
J¡
98.51 99.79 ¡i
103.66 100.37
99.15 99.11 ¡l'1
1
j¡I
1I
11
99 I
ANEXOS'
¡
3.0 DIFERENTE REPETIBILlDAO (VARIANZAS DIFERENTES).
FÓRMULAS.
- :¿>\
y\=--
nI
- ¿Y2
)') =---
- n2
2 /1¡:¿>? _(¿YI)2
SI = ---------.-
ni (/11 -1)
2 /12¿Y2
" " 2 -(¿Y2)
"" 2
S1 =. ----------. -- -.
- /12 (n2 -1)
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS POBLACIONALES_
t 0 975 . gl =Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

nl = número de recobros del método 1.
m = número derecobros del método 2.
gl =.
[ ~12 +~i]2
/11
2
n2
2 - 2
fS{Jl
: 111
rI ~l.l
/12
'e.. _ . ,__.. + h..__~_
111 + 1 /1 2 + 1
El valor de gl, debe ser redondeado al entero inmediato anterior.
n, = número de recobros del método 1.

n 2 = número de recobros del método 2.

% DE RECOBRO
PLACEBO ANAlÍTICO ADICIONADO MÉTODO 1 MÉTOOO2
1 102.15 100.93
2 98.26 99.56
3 100.65 100.40
-
4 98.51 99.79
5 103.66 100.37
6 99.15 99.11
ANEXOS' 100
ANEXO 16. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO EN LINEALIDAD

DEL MÉTODO PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTICOS.
16.1 CANTIDAD ADICIONADA (x) VS CANTIDAD RECUPERADA (y)
A) FÓRMULAS.
SUMATORIAS.
MÉTODO 1 MÉTODO 2
Lx, Lx,
LX,2 LX22
LY, LY2
Ly,2 Ly/
LXYl LXY2
El subíndice, indica la sumatoria del método respectivo.
PENDIENTE DEL MÉTODO 1.
n, = número de mediciones (cantidad adicionada - cantidad recuperada) del método 1.
PENDIENTE DEL MÉTODO 2.
n2 = número de mediciones (cantidad adicionada - cantidad recuperada) del método 2.
ORDENADA AL ORIGEN DEL MÉTODO 1.
ORDEtIADAAL ORIGEN DEL MÉTODO 2.
DESVIACiÓN ESTÁNDAR DE REGRESiÓN.
¿yl-b¡¡¿xy¡ -bo¡¿y¡ + ¿y~ -b¡2¿XY2 -b02¿Y2

SVlx =
n¡ +n2-4
ANEXOS· 101
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA 8E LAS 2 PENDIENTES
Donde:
t 0.975.n 1 + n,·-I = Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE LAS ORDENADAS AL

ORIGEN
¡C(Po I - P02 ) = (b oI - b02) ± t 0.975'//1 +//2 -4 SbOl -b"2
Donde:
B) PROCEDIMIENTO DE CALCULO.
MÉTODO A MÉTODO B
CANTIDAD CANTIDAD CANTIDAD CANTIDAD
ADICIONADA RECUPERADA ADICIONADA RECUPERADA
400.00 392.88 400.00 407.72
400.00 389.88 400.00 409.24
400.00 397.72 400.00 398.36
400.00 393.76 400.00 405.60
500.00 513.65 400.00 398.36
500.00 497.20 500.00 493.95
500.00 494.00 500.00 511.90
500.00 489.00 500.00 493.85
550.00 543.02 500.00 393.80
550.00 535.15 500.00 497.20
550.00 545.82 550.00 534.49
550.00 534.38 550.00 545.10
550.00 550.17
550.00 551.93
550.00 535.21
ANEXOS' 102
2
2) Calcular ¿XI' ¿X,2 , ¿X1 , ¿YI ' ¿y¡2 , ¿xy¡ , ¿X2 ' ¿>~ '¿Y2' ¿y~, ¿xy
determinar n, y n2 .
METODO 1
¿ x, = 400.00 + 400.00 + + 550.00 = 5800.0000 oo.
¿ x; = 400.002+ 400.002+ + 550.002= 2850000.0000 oO.
¿YI = 392.88 + 389.88 + ... + 534.38 = 5726.4600
¿y¡2 = 392.882 + 389.882 + Oo. + 534.382 = 2778528.1070
I xy¡ = 400.00*392.88 + 400.00*389.88 + oo. + 550.00*534.38 = 28137245000
n,=12
METODO 2
¿ x = 400.00 + 400.00 + ... + 550.00 = 7250.0000

2
I x ~ = 400.002+ 400.002+ + 550.00 = 3562500.0000 'Oo

2
I Y2 = 407.72 + 409.24 + '" + 535.21 = 7226.7600

I y~ = 40772 + 409.24 + ... + 535.212 = 3533049.5062
2 2
") Xl',
J-J • .
=: 400.00*407.72 + 40000*409.24 +. + 55000*535.21 = 354730900C;'~'
n 2= 15
3) Calcular b ll , b,2' bOl Y b o2 :
12x 2813724.5000 - 5800.0000x 5726.4600

hl l '= .•.- - =09843
12x 2850000.0000 - (5800.0000) 2
b¡2 '= 15x3547309.0000-=-J??Q:OOOOx7~26:7600 =0.9321

15 x 3562500.0000 - (7250.0000)2
bOl '= 57?6:460~ -~-?~~~~.~8.9Q.~000 = 1 4445

12 .
b02 = 72~6:7~?g~.~·.2~~J~2?50.:~0~0 = 31.2483

15
4) Calcular SlÚY y Sb ll " b'2:
i 2 778528.-107()::'O~8¡3~ 28-1372'4.5'000'- 1'.4445'~ 5726.4600 +'3533049.5062 - Ó. 93 2 I x 3S473OY GOnO - :;1.24X.'

Sylx '= .,J.------..--..---.. - -.. - --..-.----.. . -- . -·-···.. -··.. ----2-3---··.. . ..-....- ...
SxIy = 7.3540
S
bll-bl2
-7 3540
-.
r=_·.====.-_~__._=~_=~-=-_==··.~:·~:~~=~T=·~-.··-_~ ~.· ==0.0457
l' (5800.0000)2 (7250.0000)2
_.
'\ 2850000.0000 - .' 3562500.0000 - ----- .. -----
~ 12 15
ANEXOS' 103
I GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALITICOS
5) Determinar en el Anexo 20 (0975.23 Y calcular IC( f3, 1-(3 12 ) :

(0.975,23 = 2.069
IC(PII - P12 ) = (0.9843 - 0.9321) ± 2.069 x 0.0457 = -0.0423 , 0.1467
6) Calcular x" x" y S bo,-b o2

.. 5800.0000
x = -----.-. = 483.3333
1 12
x~ = 7~~~.:~00~ = 483.3333
- 15
: l' "1'- -.---. (4li"J.3333)2 (483.3333)2
+ ._' _.... -_._.--._..-- ---_ ..- ._- _.
Sb o l-b02 = 7.354 ¡12 +"i"s +-·-·-·----·--(5-800.0000)2 (7250.0000)2
-1; 2850000.0000 -- --" .. ------ 3562500.0000 - --.-.------
o 12 15
SbOl -b o, = 22.2581
7) Calcular IC(f301-f30 ) .·
[CCPOI - P02) = (1.4445 - 31.2483) ± 2.069 x 22.2581 = ·75.8482 , 16.2406
16.2 PORCENTAJE DE RECOBRO.
1.0 COMPARACiÓN DE REPETIBILlDAD DE AMBOS MÉTODOS
A) FÓRMULAS
VARIANZA
S
2
=
n ¿y2 -(L> )2 ._-
n (n -1)
Nota: Calcular fa varianza de cada método y para fines de calculo del intervalo de
S,2 varianza menor.

S22 varianza mayor.
si
- 2 x F0.025,/12 -1,/1,-1 <
0"; si
-=-2 --< S2 x Fo.975 ,/1, --¡,11 1
o
- 1-
SI 0"1 I
Fo.025.n,.I,n .1 Y F O.975.n,.I,nl.¡=Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de

-1
Fisher. n2 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n,-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
n, = número de recobros del método de varianza menor.

n2 =número de recobros del método de varianza mayor.
Las varianzas son iguales si en el intervalo de confianza incluye la unidad. Si las

varianzas son iguales desarrolle el punto 2. Si las varianzas no son equivalentes
desarrolle el punto 3.
ANEXOS' 104
, GUíA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
2.0 IGUAL REPETIBILlDAD (VARIANZAS EQUIVALENTES).

A) FÓRMULAS. _
MEDIAARITMÉTICA DEL MÉTODO 1:
- LY2
Y2=--
n2
2 n2¿>ª _(LY2)2
SJ = -..--_ .... -. .----- ----
- n2(n 2 -1)
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS POBLACIONALES.
tÓ:975.n¡+ n,.~= Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

n, = número de recobros del método 1.
n2 = número de recobros del método 2.
3.0 DIFERENTE REPETIBILlDAD (VARIANZAS DIFERENTES).

"-
FÓRMULAS,
- LYI
YI = - - -
n¡
2 _ nlL>l-(LY¡~~
S) -
n¡ (ni -1)
2 n2Lyi -(LY2)2
82 = -=---==---
n2(n2 -1)
ANEXOS' 105
· GUiA DE VALIDACiÓN DE MÉTODOS ANALíTICOS
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS

POBLACIONALES.
I- ' ,C'~
- - ¡ S2I .),
/C(J.Ll - J.L2) = (YI - Y2) ± t o975,gl \: " +-
Y nI /12
(:>9',,,, = Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
.d ··
(Y ce qt. debe ser redondeado al entero inmediato anterior.
.le recobros del método 1.

" '''·cONOS del método 2.
CANTIDAD ADICIONADA - CANTIDAD RECUPERADA - % DE RECOBRO EN

AMBOS MÉTODOS
- ----
MÉTODOA MÉTODO B
CANTIDAD CANTIDAD CANTIDAD
ADICIONADA
%DE CANTIDAD %DE I
RECUPERADA RECOBRO (y) ADICIONADA RECUPERADA RECOBRO (y)
400.00 392.88 98.22 400.00 407.72 101.93

! 400.00 389.88 97.47 400.00 409.24 102.31
I 400.00 397.72 99.43 400.00 398.36 99.56
400.00 393.76 98.44 400.00' 405.60 101.40
,I 500.00 513.65 102.73 400.00 398.36 99.59
500.00 497.20 99.44 500.00 493.95 98.79
500.00 494.00 98.80 500.00 511.90 102.38
500.00 489.00 97.80 500.00 493.85 98.77
550.00 543.02 98.73 500.00 393.80 98.76
550.00 535.15 97.30 500.00 497.20 99.44
550.00 545.82 99.24 550.00 534.49 97.18
550.00 534.38 97.16 550.00 545.10 99.11
550.00 550.17 100.03
550.00 551.93 100.35
550.00 535.21 97.31
y = Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada respecto de la cantidad

adicionada.
2) Calcular LY, Ly2 y determinar n, para cada método analítico:
ANEXOS' 106
MÉTODO A MÉTODO B
"Ly 98.22 + 97.47 + ... + 97.16 =1184.7609 101.93 + 102.31+ ... + 97.31 =1496.9118
"Ly2 98.22 +2
97.47 2 + ... + 97.16 2
= 116996.0999 101.93 2 + 102.312 + ... + 97.31 2 = 149420.3404
n 12 15
Método A:
S ~ = 12 x 116996.0999 -1 184.7609
2
= 2.2332
12x(l2-1)
Método B:
2
2 15x149420.3404-1496.9118 =26672
SR = 15x(l5-1)
4) Determinar la varianza mayor ( S/ ) y la varianza menor ( S/)
S? = 2.2332
si = 2.6672
5) Determinar en el Anexo 21 Fo.025.n,ol.n,ol y Fo.<J75.n , ol.n , ol :
F0 025.14,11 = 0.32
FO 975,14,11 = 3.36
El intervalo de confianza incluye el valor de 1, lo que indica que las varianzas sor.
iguales, por lo que es necesario desarrollar el ejemplo con base al punto 2.
ANEXOS' 107
% DE RECOBRO EN AMBOS MÉTODOS
MÉTODO A MÉTODO B
ANALíTICO %DE
(BLANCOS) RECOBRO (y)
98.22 101.93
97.47 102.31
99.43 99.56
98.44 101.40
102.73 99.59
99.44 98.79
98.80 102.38
97.80 98.77
98.73 98.76
99.24 99.44
97.16 99.44
99.11
100.03
100.35
97.31
8) Calcular :¿y" :¿y/ :¿Y2 ,:¿y/ y determinar n,y n 2:

:¿y,= 98.22 + 97.47 + ... + 97.16 = 1184.7609
:¿y/= 98.22 2 + 97.47 2 + ... + 97.16 2 =116996.0999
:¿Y2= 101.93 + 102.31+ '" + 97.31 = 1496.91118
:¿y/= 101.932 + 102.31 2 + .., + 97.312 = 149420.3404
n,= 12
n2 15=
9) Calcular Y, y Y2:
}o1 = 1184.7609 =98.7301

12
Y2 = 1496.9118 = 99.7941
15
ANEXOS' 108
10) Calcular S/ y S/ :
82 = 12x1l6996.0999-1184.7609 2 =2.2332
1 12x(12-l)
82 = 15x 149420.3404-1496.9118 2 = 2.6672

2 15x(l5-1)
11) Determinar en el Anexo 20 t0975.n,+n2.2 y calcular 1C(J..ldIJ
(0.975,25 = 2.06
IC(fll-fl2)=(98.7301_99.7941)±2.06}I
X2.2332+14 X2.6672[
J
1 :-1 =-2.32 0.19
V 25 12 15 '
ANEXOS' 109
GUiA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALITICOS
ANEXO 17. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO EN PRECISiÓN DEL MÉTODO PARA
COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANALíTIcos.
A) FÓRMULAS
VARIANZA
,"'C '" 17 ¿:>.2 -(L)' )2

17 (17 - 1)
Nota: Calcular la varianza de cada método y para fines de calculo del intervalo de
Si varianza menor.
Si varianza mayor.
s~· O"i si
•....' »: ¡-r")?5.11.,··1,11
1
1 $ 2 :S; Sl2
.. xFü 9 ". 5 n ~ . "
-r •' ,
-1
. I 0"1
"
FO ' I? 5.,,," l.n
.1 y F097S.n,.l.n,.¡ = Referirse al Anexo 21, para det:rminar el valor de la F de
Fisher. 'n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n,-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
n, = número de muestras analizadas del método de varianza menor.

n2 = número de muestras analizadas del método de varianza mayor.
MÉTODO 1 MÉTODO 2
ANALISTA ANALISTA
1 2 1 2
49.85 50.23 49.25 51.15
1 50.85 50.85 1 46.22 53.50

« 50.04 51.80 -c 48.25 52.92
O 50.26 51.86
o 47.11 54.11
2 50.95 49.95 2 48.22 52.25
51.15 45.12 53.40
50.30
ANEXOS' 110·
2) Calcular LY, Ly 2 y determinar n, para cada método analítico:
MÉTODO A MÉTODOS
LY 49.85 + 50.85 + ... + 50.30 = 608.09 49.25 + 46.22 + ... + 53.40 = 601.50
Ly2 49.85 2 + 50.85 2 + ... + 50.30 2 = 30819.6067 49.25 2 + 46.22 2 + ... + 53.40 2 = 30258.8618
n 12 12

Método A:
2
s~ = 12 x 30~?6067 - 608.09 = 0.4684
12x(l2-1)
Método S:
4) Determinar la varianza mayor ( S/ ) y la varianza menor ( S/):
S l2 = 0.4684
si =9.8795
5) Determinar en el Anexo 21 FO.O~5.n ,-I.n ,_1 y FO.975.n ,-I.n ,-1 :
F0 025,11,11 = 0.29
F0 975,11,11 = 3.47
9.8795 xO.29 $ O"? $ ?8795 x3.47

0.4684 O"f 0.4684
2
O"J
6.07 S; -'2 S; 73.26
0"1
ANEXOS' 111

PROPORCIONALIDAD DE MÉTODOS EN 'ESTUDIOS DE CORRELACiÓN PARA
COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANAlÍTICOS.
A) FÓRMULAS
PENDIENTE
n = número de muestras analizadas con el método no oficial y el método oficial.
ORDENADA AL ORIGEN
b
()
= =¿=--)_)-_b-----'I¿=---X
n
lc(fJ, ) = bl ± t o 975.n-2 S bl
t0975n-2 =Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
COEFICIENTE DE VARIACiÓN DE REGRESiÓN.
S
CVy/x =~xlOO
y
Donde:
- ¿y
y=--
n
ANEXOS· 112
1) Tabular los resultados (datos primarios):
POTENCIA CONTENIDO
MUESTRA RELATIVA MÉTODO
MÉTODO NO OFICIAL
OFICIAL (x) (%) (y) (rng I rnL)
1 83.16 16.63
2 78.25 16.12
3 82.11 16.41
4 94.87 18.97
5 I 95.47 19.09
6 101.67 20.33
\
7 ! 118.56 25.33
!
i
8 : 122.15 25.89
9 125.33 26.08
2) Calcular ¿ x, ¿ y. ¿ x2 • ¿ y2 , ¿xy y determinar n:
¿x=83.16+ 78.25+ + 125.33=901.57

¿y = 16.63 + 16.12 + + 26.08 = 184.85
¿x2 = 83.16 2 + 78.25 2 + + 125.33 2 = 92917.0319
2
¿ y2 = 16.63 + 16.12 2 + + 25.08 2 = 3935.3467
¿xy = 83.16*16.63 + 78.25*16.12 + ... + 125.33*26.08 = 19115.1179

n=9
3) Calcular b., bo y r2 .
9 x 19115.1179- 90 1.57 x 184.85
b = -- - - ----------------------- = 0_2297
I 9x92917.0319-901.57 2
b = _1~~~_-=-Q.2~97x901.57 =-2.4719
o 9
2
r2 = (9x19115.1179-901.57xI84.85) ? = 0_9898
(9x92917.0319-901.572)x(9x3935.3647 -184.85-)
4) Calcular Sytx y s;
3935.3647 -0.2279x 19115.1179 - (-2.4719)x 184.85 =0.4497

9-2
r----l--------
S = 0.4497 ,- ---= 0.0088
61 901 57 2
~ 92917.0319--~---
ANEXOS' 113
5) Determinar en el Anexo t0975.n.2 y calcular 1C({3,).
t 0975,7 = 2.365
¡C({JI) = 0.2297 ± 2.365 x 0.0088 =0.2089 ,0.2506
6) Calcular el CV y/ x :
\' = 184.85 = 20.5389

. 9
,. ..
(1 0.4497
= ..._- 000 x 100 --219
. 0//0
.l •. r 20.5389
ANEXOS' 114
ANEXO 19. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiÓN DEL MÉTODO EN
ESTUDIOS DE CORRELACiÓN PARA COMPARACiÓN DE 2 MÉTODOS ANAlÍTICOS.
A) FÓRMULAS
VARIANZA DEL MÉTODO OFICIAL
2 nl¿>~ _(¿::»)2
SI = - - -
n)(nl -1)
n, = número de muestras analizadas utilizando el método oficial.
n2 = número de muestras analizadas utilizando el método no oficial.
LíMITE UNILATERAL INFFRIOR DE CONFIANZA PARA LA RAZÓN DE VARIANZAS

2 2
0"2 S2
--~-xF.
2 S2 0.05,/1, -1,11,-1
0"1 1
FO.05.n , - l. n, . 1 = Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de Fisher. n2-1

son
grados de libertad de la varianza del método no oficial, que corresponden a los grados
de libertad del numerador y n 1-1 son los grados de libertad del método oficial, que
1) Tabular los resultados (datos primarios):

PORCENTAJE
MÉTODO OFICIAL MÉTODO NO OFICIAL
ANALISTA ANALISTA
1 2 1 2
103.95 98.25 101.44 97.80
1 98.91 99.21 1 99.06 100.65

-c 102.64 101.26 102.56 103.15
~
O 97.92 98.54
o 102.75 98.27
2 98.41 99.72 2 104.40 103.56
101.67 100.26 99.13 104.32
2) Calcular ¿Y" ¿Y/' ¿Y2' ¿y} Y determinar n, Y n2·
¿Yl = 103.95 + 98.91 + ... + 100.26 =-1200.74

¿Y/ = 103.952 + 98.91 2 + ... + 100.26 2 = 120188.9554
¿Y 2 = 101.44 + 99.06 + ... + 104.32 = 1217.09
¿y} = 101.442 + 99.06 2 + ... + 104.32 2 = 123504.7041
ANEXOS' 115
3) Calcular la varianza del método oficial y del método no oficial.
2
S2 _ ~.~~_!2ü188.9554-12üü.7~_ = 3.7191
1 - 12x(l2-1)
2
2 12x1235ü4.7ü41-1217.ü9
5.6696
S2 = 12x(l2-1) o
4) Determinar en el Anexo 21 Fo.05.n, . l. n, . 1 :
FO.05;11.11 = 0.35
5) Calcular el limite unilateral inferior de confianza para la razón de varianzas:
(Ji2 >- 5.6696 x 035

.
(JI 3.7191
El límite unilateral inferior de confianza no excede el valor de 1.
ANEXO 20. TABLA ESTADISTICA DE LA DISTRIBUCiÓN t DESTUDENT.
GRADOS DE GRADOS DE GRADOS DE

LIBERTAD
t 0975
LIBERTAD
t 0975
LIBERTAD
t 0975
1 12.706 26 2.056 51 2.008

2 4.303 27 2.052 52 2.007
3 3.182 28 2.048 53 2.006
4 2.n6 29 2.045 54 2.005
5 2.571 30 2.042 55 2.004
6 2.447 31 2.040 56 2.003
7 2.365 ~Lo_._ .__o~'ºªL..
------ 57 2.002
8 2.306 33 2.035 58 2.002
9 2.262 34 2.032 59 2.001
10 2.228 35 2.030 60 2.000
11 2.201 36 2.028 61 2.000
12 .2.179 37 2.026 62 1.999
13 2.160 38 2.024 63 1.998
14 2.145 39 .. o' 2.023 64 1.998
15 2.131 40 2.021 65 1.997
16 2.120 41 2.020 66 1.997
17 2.110 42 2.018 67 1.996
18 2.101 43 2.017 68 1.995
19 2.093 44 2.015 69 1.995
20 2.086 45 2.014 __ _ o. 70 1.994
21 2.080 46 ... 2.013 71 1.994
22 2.074 47 2.012 72 1.993
23 2.069 48 2.011 73 1.993
24 2.064 49 2.010 74 1.993
25 2.060 50 .. __ o~·OOL__o 75 1.992
Losgrados delibertad (gl) sefijan con base ala fórmula indicada enel subíndice del slnt>olo dela1de Student.
ANEXOS' 116
ANEXO 21. TABLAS ESTADíSTICAS DE LA DISTRIBUCiÓN F DEFISHER.
FO.975, gln, gld
91 numerador I 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
I denom inador
3 15.44 15.10 14.88 14.73 14.62 14.54 14.47 14.42 14.37 14.34 14.30 14.28 14.25 14.23 14.21 14.20 14.18 14.17
4 9.98 9.60 9.36 9.20 9.07 8.98 8.90 8.84 8.79 8.75 8.72 8.68 8.66 8.63 8.61 8.59 8.58 8.56
5 7.76 7.39 7.15 6.98 6.85 6.76 6.68 6.62 6.57 6.52 6.49 6.46 6.43 6.40 6.38 6.36 6.34 6.33
6 6.60 6.23 5.99 5.82 5.70 5.60 5.52 5.46 5.41 5.37 5.33 5.30 5.27 5.24 5.22 5.20 5.18 5.17
7 5.89 5.52 5.29 5.12 4.99 4.90 4.82 4.76 4.71 4.67 4.63 4.60 4.57 4.54 4.52 4.50 4.48 4.47
8 5.42 5.05 4.82 4.65 4.53 4.43 4.36 4.30 4.24 4.20 4.16 4.13 4.10 4.08 4.05 4.03 4.02 4.00
9 5.08 4.72 4.48 4.32 4.20 4.10 4.03 3.96 3.91 3.87 3.83 3.80 3.77 3.74 3.72 3.70 3.68 3.67
10 4.83 4.47 4.24 4.07 3.95 3.85 3.78 3.72 3.66 3.62 3.58 3.55 3.52 3.50 3.47 3.45 3.44 3.42
11 4.63 4.28 4.04 3.88 3.76 3.66 3.59 3.53 3.47 3.43 3.39 3.36 -3.33 3.30 3.28 3.26 3.24 3.23
12 4.47 4.12 3.89 3.73 3.61 3.51 3.44 3.37 3.32 3.28 3.24 3.21 3.18 3.15 3.13 3.11 3.09 3.07
13 4.35 4.00 3.77 3.60 3.48 3.39 3.31 3.25 3.20 3.15 3.12 3.08 3.05 3.03 3.00 2.98 2.96 2.95
14 .4.24 3.89 3.66 3.50 3.38 3.29 3.21 3.15 3.09 3.05 ,3.01 2.98 2.95 2.92 2.90 2.88 2.86 2.84
15 4.15 3.80 3.58 3.41 3.29 3.20 3.12 3.06 3.01 2.96 2.92 2.89 2.86 2.84 2.81 2.79 2.77 2.76
16 4.08 3.73 3.50 3.34 3.22 3.12 3.05 2.99 2.93 2.89 2.85 2.82 2.79 2.76 2.74 2.72 2.70 2.68
17 4.01 3.66 3.44 3.28 3.16 3.06 2.98 2.92 2.87 2.82 2.79 2.75 2.72 2.70 2.67 2.65 ~.~~ .~:q2
18 3.95 3.61 3.38 3.22 3.10 3.01 2.93 2.87 2.81 2.77 2.73 2.70 2.67 2.64 2.62 2;60.
19 3.90 3.56 3.33 3.17 3.05 2.96 2.88 2.82 2.76 2.72 2.68 2.65 2.62 2.59 -I~
.:.... _..:..
..'."-.2...
20 3.86 3.51 3.29 3.13 3.01 2.91 2.84 2.77 2.72 2.68 2.64 2.60 2,5.7
21 3.82 3.48 3.25 3.Q9 2.97 2.87 2.80 2.73 2.68 2.64 2,60 "'?;~
~E,le'~i~~~~'i~~~f'1F
22 3.78 3.44 3.22 3.05 2.93 2.84 2.76 2.70 2.65
23 3.75 3.41 3.18 3.02 2.90 2.81 2.73 2.67 2.62
24 3.72 3.38 3.15 2.99 2.87 2.18 2.10 2.64 2.59
25 3.69 3.35 3.13 2.97 2.85 2.75 2. • 2.61 156 2.51 '%:e' 2.44 2.. 41 2.38 2.36 2.34 2.32 2.30
26 3.67 333 3.10 294 2.82 2..13 2.65 2.59 2.54 2.'- 2.45 242 239 2.36 2.34 2.31 2.29 2.28
21 3.65 331 3.08 292 280 211 2.63 2.51 251 247 243 239 236 2.34 2.31 2.29 2.27 2.25
28 3.63 329 3..06 2.90 2.18 2.69 2..61 2.55 2.49 2.45 2.41 2.37 2.34 2.32 2.29 2.27 2.25 2.23
. ;':2;7& a,61 . 2~59 2.53 2.48 2.43 2.39 2.36 2.32 2.30 2.27 2.25 2.23 2.21
.•,;';~¿~i75 2:65 2.57 2.51 246 2.41 2.37 2.34 2.31 2.28 2.26 2.23 2.21 2.20
5 2.73 2.64 2.56 2.50 2.44 2.40 2.36 2.32 2.29 2.26 2.24 2.22 2.20 2.18
'a:5t! á.22 3.002.84 2.71 2.62 2.54 2.48 2.43 2.38 2.34 2.31 2.28 2.25 2.22 2.20 2.18 2.16
33 3.54 3'-20 2.98 2.82 2.70 - 2.61 2.53 2.47 2.41 2.37 2.33 2.29 2.26 2.23 2.21 2.19 2.17 2.15
34 3.53 3.19 . 2.97 2.81 2.69 2.59 2.52 2.45 2.40 2.35 2.31 2.28 2.25 2.22 2.20 2.17 2.15 2.13
35 3.52 3.18 2.96 2.80 2.68 2.58 2.50 2.44 2.39 2.34 2.30 2.27 2.23 2.21 2.18 2.16 2.14 2.12
36 3.50 3.17 2.94 2.78 2.66 2.57 2.49 2.43 2.37 2.33 2.29 2.25 2.22 2.20 2.17 2.15 2.13 2.11
37 3.49 3.16 2.93 2.77 2.65 2.56 2.48 2.42 2.36 2.32 2.28 2.24 2.21 2.18 2.16 2.14 2.12 2.10
38 3.48 3.15 2.92 2.76 2.64 2.55 2.47 2.41 2.35 2.31 2.27 2.23 2.20 2.17 2.15 2.13 2.11 2.09
39 3.47 3.14 2.91 2.75 2.63 2.54 2.46 2.40 2.34 2.30 2.26 2.22 2.19 2.16 2.14 2.12 2.10 ..2.08
40 3.46 3.13 2.90 2.74 262 253 2.45 2.39 2.33 2.29 2.25 2.21 2.18 2.15 2.13 2.11 2.09 2.07
................. .._~.~_"-_ _. _ . _
----..-.;_~ ~ _ _• o." _ .•."... ,... ~u_"" '"' ,~."",a... "'" ,,_v, F'""""'!Mi_~ "'S Obl P,", ",_ ,", "",C>",,, ,,' , "n" .-,,-'~-:=~~. ~'-"""""""""'~~"""""""'''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''~'''':''',-'-'-''''''O- .•,=~,C"'";,.,="-,,,_'7'''''''''_~
F O. 97 5 , gln, gld (Continuación)
91 numerador 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
gl denominador
3 14.16 14.14 14.13 14.12 14.12 14.11 14.10 14.09 14.09 14.08 14.07 14.07 14.06 14.06 14.06 14.05 14.05'.14.04 '14.04 14.04
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10 3.40 3.39 3.38 3.37 3.35 3.34 3.34 3.33 3.32 :>:31 3.30 3.30 3.29 3.29 3.28 3.27 3.27 3.26 3.26 3.26
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13 2.93 2.92 2.91 2.89 2.88 2.87 2.86 2.85 2.85 2.84 2.83 2.82 2.82 2.81 2.80 2.80 2.79 2.79 2.78 2.78
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16 2.67 2.65 2.64 2.63 2.61 2.60 2.59 2.58 2.58 2.57 2.56 2.55 2..55 2.54 2.53 2.53 2.52 2.52 2.51 2.51
17 2.60 2.59 2.57 2.56 2.55 2.54 2.53 2.52 2.51 2.50 2.49 2.49 Z.48 2.47 2.47 2.46 2.46 2.45 2.45 2.44
18 2.54 2.53 2.52 2.50 2.49 2.48 2.47 2.46 2.45 2.44 2.44 2.43 2.42 2.42 2.41 2.40 2.40 2.39 2.39 2.38
19 2.49 2.48 2.46 2.45 2.44 2.43 2.42 2.41 2.40 239 2.39 2.38 2.37 2.37 2.36 2.35 2.35 2.34 2.34 2.33
20 2.45 2.43 2.42 2.41 2.40 2.39 2.38 2.37 2.36 2.35 2.34 2.33 2.33 2.32 2.31 2.31 2.30 2.30 2.29 2.29
21 2.41 2.39 2.38 2.37 2.36 2.34 2.33 2.33 2.32 2.31 2.30 2.29 2.29 2.28 2.27 2.27 2.26 2.26 2.25 2.25
22 2.37 2.36 2.34 2.33 2.¡32 2.31 2.30 2.29 2.28 2.27 2.26 2.26 2.25 2.24 2.24 2.23 2.23 2.22 2.21 2.21
23 2.34 2.33 2.31 2.30 2.29 2.28 2.27 2.26 2.25 2.24 2.23 2.22 2.22 2.21 2.20 2.20 2.19 2.19 2.18 2.18
24 2.31 2.30 2.28 2.27 2.26 2.25 2.24 2.23 2.22 2.21 2.20 2.19 2.19 2.18 2.17 2.17 2.16 2.16 2.15 2.15
25 2.28 2.27 2.26 2.24 2.23 2.22 2.21 2.20 2.19 2.18 2.17 2.17 2.16 2.15 2.15 2.14 2.13 2.13 2.12 2.12
26 2.26 2.24 2.23 2.22 2.21 2.19 2.18 2.17 2.17 2.16 2.15 2.14 2.13 2.13 2.12 2.11 2.11 2.10 2.10 2.09
27 2.24 2.22 2.21 2.19 2.18 2.17 2.16 2.15 2.14 2.13 2.13 2.12 2.11 2.10 2.10 2.09 2.09 2.08 2.07 2.07
28 2.22 2.20 2.19 2.17 2.16 2.15 2.14 2.13 2.12 2.11 2.10 2.10 2.09 2.08 2.08 2.07 2.06 2.06 2.05 2.05
29 2.20 2.18 2.17 2.15 2.14 2.13 2.12 2':11 2.10 2.09 2.08 2.08 2.07 2.06 2.06 2.05 2.04 2.04 2.03 2.03
30 2.18 2.16 2.15 2.14 2.12 2.11 2.10 2.09 2.08 2.07 2.07 2.06 2.05 2.04 2.04 2.03 2.03 2.02 2.01 2.01
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40 2.05 2.03 2.02 2.01 1.99 1.98 1.97 1.96 1.95 1.94 1.93 1.93 1.92 1.91 1.90 1.90 1.89 1.89 1.88 1.88
FO.025, gln, gld
gl numerador 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
aldenom inador
3
4
0.06
0.07
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0.10
0.13
0.14
0.15
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0.20
0.21
0.21
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0.23
0.22
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0.23
0.25
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0.25
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0.25
0.27
0.25
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0.26.
0.28
0.26
0.28
.
5 0.07 0.11 0.14 0.17 0.19 0.21 0.22 0.24 0.25 0.26 0.27 0.27 0.28· 0.29 0.29 0.30 0.30 0.30
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19 .0.07 0.12 0.16 0.19 0.22 0.25 0.27 0.29 0.31 0.32 0.34 0.35 0.36 0.37 0.38 0.39 0.40 0.40
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22 0.07 0.12 0.16 0.19 . 0)3 0.25 0.27 0.30 0.31 0.33 0.34 0.36 0.37 0.38 0.39 0.40 0.40 0.41
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0.44
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\.I
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35 0.12 0.17 0.22 0.26 0.30 0.33 0.35 0.37 0.39 0.41 0.42 0.44 0.45 0.46 0.47 0.48 0.49 0.50
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37 0.12 0.17 0.22 0.26 0.30 0.33 0.35 0.37 0.39 0.41 0.43 0.44 0.45 0.46 0.47 0.48 0.49 0.50
38 0.12 0.17 0.22 0.26 0.30 0.33 0.35 0.37 0.39 0.41 0.43 0.44 0.45 0.46 0.47 0.48 0.49 0.50
39 0.12 0.17 0.22 0.26 0.30 0.33 0.35 0.38 0.39 0.41 0.43 0.44 0.45 0.46 0.47 0.48 0.49 0.50
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- - ""'-
Fo.os. gln. gld (Continuación)
91 numerador 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
gl denominador
3 0.33 0.33 0.33 0.33 0.33 0.34 0.34 0.34 0.34 0.34 0.34 0.34 0.35 0.35 0.35 0.35 0.35 0.35 0.35 0.35
4 0.35 0.36 0.36 0.36 0.36 0.36 0.37 0.37 0.37 0.37 0.37 0.37 0.38 0.38 0.38 038 0.38 0.38 0.38 038
5 0.37 0.38 0.38 0.38 0.38 0.39 0.39 0.39 0.39 0.39 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.~1 0.41 0.41
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7 0.40 0.41 0.41 0.41 0.42 0.42 0.42 0.42 0.43 0.43 0.43 0.43 0.43 0.44 0.44 0.44 0.44 0.44 0.44 0.44
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10 0.43 0.44 0.44 0.44 0.45 0.45 0.45 0.46 0.46 0.46 0.46 0.47 0.47 0.47 0.47 0.47 0.48 0.48 -0.48 0.48
11 0.44 0.44 0.45 0.45 0.45 0.46 0.46 0.46 0.47 0.47 0.47 0.48 0.48 0.48 0.48 0.48 0.49 0.49 0.49 0.49
12 0.44 0.45 0.45 0.46 0.46 0.47 0.47 0.47 0.48 0.48 0.48 0.48 0.49 0.49 0.49 0.49 0.49 0.50 0.50 0.50
13 0.45 0.46 0.46 0.46 0.47 0.47 0.48 0.48 0.48 0.48 0.49 0.49 0.49 0.49 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.51
'14 0.46 0.46 0.47 0.47 0.47 0.48 0.48 0.48 0.49 0.49 0.49 0.50 0.50 0:50 0.50 0.51 0.51 0.51 0.51 0.51
15 0.46 0.46 0.47 0.47 0.48 0.48 0.49 0.49 0.49 0.50 0.50 0.50 0.50 0.51 0.51 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52
16 0.46 0.47 0.47 0.48 0.48 0.49 0.49 0.49 0.50 0.50 0.50 051 0.51 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52 0.52 0.53
17 0.47 0.47 0.48 0.48 0.49 0.49 0.50 0.50 0.50 0.51 0.51 051 0.51 0.52 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53
18 0.47 0.48 0.48 0.49 0.49 0.50 050 0.50 0.51 0.51 0.51 0.52 0.52, 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.53 0.54
19 0.47 0.48 0.49 0.49 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54
20 0.48 0.48 0.49 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.54
21 0.48 0.49 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55
22 0.48 0.49 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55
23 0.48 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.55" 0.55
24 0.49 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.55 0.56 0.56
25 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56
26 0.49 0.50 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 056 0.56 0.56 0.56
27 0.49 0.50 0.50 0.51 0.52 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 055 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.56 0.57
28 0.49 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57
29 0.50 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57
I 30 0.50 0.50 0.51 0.52 0.52 0.53 053 0.54 0.54 054 0.55 055 0.55 056 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.57
31 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 054 0.55 0.55 0.55 056 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.58
32 0.50 0.51 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.57 0.58
33 0.50 0.51 0.51 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 054 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.57 0.58 0.58
34 0.50 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.58 0.58 0.58
35 0.50 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.58 0.58 0.58 0.58
36 0.51 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.55 0.55 0.56 0,56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.58 0.58 0.58 0.58
37 0.51 0.51 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.55 0.55 0.55 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.58 0.58 0.58 0.58 0.59
38 0.51 0.51 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 055 0.55 056 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.58 0.58 0.58 0.59 0.59
39 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0,54 054 0.55 0.55 0.56 0.56 0.56 0.57 0.57 0.58 0.58 0.58 0.58 0.59 0.59
40 0.51 0.52 0.52 0.53 0.53 0.54 0.54 0.55 055 0.56 0.56 0.57 0.57 0.57 0.58 0.58 0.58 0.59 0.59 0.59
COMENTARIOS RESPECTO A LOS CALCULOS y REGLAS DE REDONDEO.
Todos los cálculos llevados a cabo parten delos resultados demanera tabular, los cuales sedenominan datos primarios.
En el caso del % de recobro, por omisión los cálculos se redondearon a 2 decimales. Los cálculos según las fórmulas,
fueron llevados a cabo con una hoja de cálculo; y sereportan hasta 2 decimales más de los datos primarios. Puede ser
que al verificar los cálculos con ayuda de una calculadora de bolsillo, estos puedan diferir de los aquí reportados, ya que
la hoja decálculo efectúa las operaciones hasta con una precisión de 15decimales.
Se sugiere que en los cálculos que usted lleve a cabo al analizar los datos primarios y llegue a utilizar calculadora de
bolsillo, como minimo maneje 4 decimales más que el de los datos primarios y que el resultado final, lo redondee como
mínimo alnúmero dedecimales asociados al delos datos crudos.
Para redondear observe las siguiente reglas:
1) Determinar al decimal a redondear, al cual vamos a definir como X
Por ejemplo, si sevaa redondear a 3 decimales, X vale 3.
2) Determinar en el valor, el decimal X+1.
En nuestro ejemplo corresponde al decimal 4.
3) Determinar el valor del decimal X+1 del número.
Por ejemplo el número 3.23456
El valor del decimal 4 deeste número es5.
4) Siel valor del decimal X+1 es 5 o más, el decimal X seredondea al siguiente entero osi el valor del decimal X+1 es
4 o menos, el valor del decimal X semantiene.
En nuestro ejemplo ya que el cuarto decimal es5, el valor del decimal 3,que en este
entero, por lo que elnúmero 3.23456, seredondea a 3.235, considerando redondearl
._4,
....
se redondea al siguiente
ales.
Ejemplos:
102.6731 redondeando a 2 decimales es 102.67.
102.6761 redondeando a 2 decimales es 102.68.
0.0050 redondeando a 2 decimales es0.01
0.0041 redondeando a 2 decimales esO
El Colegio Nacional de
Químicos Farmacéuticos
Biólogos México, A.C.
AGRADECE EL APOYO DE .
Boehringer - Ingelhelm Pro
Laboratorios de Contro .
Lambda Cien
(Q\ Boehringer 1
~IIIIIII PromeCO¡
L\
~~2
i.aboratorio de

11 Guía para Validación de Métodos Analíticos-CNQFB 2002

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