Crecimiento Microbiano

En microbiología se define como Incremento en el número de células.

En el proceso biosintético, una vez fabricados los monómeros, tienen lugar en el microorganismo
reacciones de polimerización, que dan origen a las macromoléculas. Esas macromoléculas son las que
luego se ensamblan para formar las estructuras celulares.

Fisión Binaria

El crecimiento de una célula procariota continua hasta que se divide en dos células nuevas, mediante un
proceso denominado 'fisión binaria'. El tabique del cual la célula madre se divide en dos, se denomina
'septo' y se origina por crecimiento hacia adentro de la
membrana citoplasmática y la pared celular hacia direcciones
opuestas hasta que la célula se divide.
El tiempo necesario para completar un ciclo de crecimiento
depende de cada organismo y, a la vez, de diversos factores
tales como la nutrición y la genética. El control de la división
celular es un proceso complejo que parece estar ligado con
sucesos que ocurren durante la replica del cromosoma.

Proteínas importantes en el proceso de división celular:

Proteínas Fts. En particular FtsZ, muestra una peculiar similitud
estructural con la tubulina, proteína importante en la división
estructural en eucariotas.
Las Fts forman en la célula un aparato de división que se llama
'divisoma' (Un anillo de FtsZ 'estrangula' la célula). La
replicación de DNA ocurre antes de que se forme ese anillo de FtsZ; de hecho, el cese de la replicación
parece ser la señal para la formación del anillo.
La FtsZ tiene actividad enzimática, siendo capaz de hidrolizar guanosina trifosfato (GTT) liberando
energía; que es usada para polimerizar y despolimerizar la FtsZ y formar y desarmar el anillo.

Forma celular y actina en procariotas

Una proteína clave que determina la forma en procariotas se denomina MreB. Esta proteína forma una
especie de citoesqueleto similar al de la actina en Bacteria y en Archaea. Las bacterias 'cocos' carecen
de MreB y de los genes que las codifican, lo cual sugiere que la forma bacteriana es, por 'default' ,
esférica.

Síntesis del péptidoglicano y división celular

Antes de la división celular, cuando una celula se alarga, se sintetiza una nueva pared celular, que debe
añadirse a la preexistente. En la zona del anillo de FtsZ, se abren pequeños huecos en la pared que son
creados por enzimas llamadas 'autolisinas', similares en función a la lisozima y están presentes en el
divisoma . El nuevo material se añade a través de estas aberturas. En la superficie de las Gram +, la
unión entre el antiguo péptidoglicano y el nuevo, forma un reborde.
Por ello, es crucial que el nuevo péptidoglicano se incorpore dentro
del preexistente ANTES de que se corten los enlacs de este último,
a fin de aasegurar que la presión de turgencia no haga estallar la
celula en un proceso de 'autolisis'.
Biosíntesis del Péptido glicano

Durante el crecimiento celular, la síntesis del nuevo péptidoglicano (PG) supone el corte controlado del
PG preexistente por las autolisinas y la inserción simultánea de precursores.
En este proceso, interviene una molécula transportadora de naturaleza lipídica, el bactoprenol. Éste, es
un alcohol muy hidrofóbico que se une a la unidad precursora del PG haciendo que sean lo
suficientemente hidrofóbicos como para atravesar la membrana. Una vez en el periplasma, el
bactoprenol conecta con enzimas que mete los precursores en el punto de crecimiento de la pared
celular y catalizan la formación de los enlaces glicosídicos.

Bactoprenol (undecaprenol fosfato) unido a unidad precursora de PG, ácido n-acetil murámico.

Transpeptidación

Es el paso final de la síntesis de péptidoglicano y

consiste en la formación de los puentes
interpeptídicos entre unidades de ácido murámico
de cadenas adyacentes del glicano.

La transpeptidación es inhibida por Penicilina.

Crecimiento exponencial

En cada periodo fijo de tiempo , el número de células se duplica. Eso se denomina crecimiento
exponencial. Una característica del crecimiento exponencial, es que la velocidad de aumento de número
de células se incrementa con el tiempo. Es una progresión geométrica en base 2:

Parametros de crecimiento:

Tiempo de generación g = t/n (n se puede calcular, por ejemplo, midiendo el nº de celulas iniciales
y finales)

Constante de velocidad de crecimiento: k = (ln 2)/g

Mientras que g es una medida del tiempo que tarda una población en duplicar su número de células, k es
una medida del número de generaciones que ocurren en un cultivo, por unidad de tiempo.
Curva de crecimiento

-Fase de latencia: Es el periodo entre que se inocula un cultivo en un medio fresco, hasta que comienza a
reproducirse. Es el tiempo que le toma a los bichitos sintetizar los componentes que les falta para la
división celular.
-Fase exponencial: Cada célula se divide para formar dos. La velocidad de crecimiento esta influenciada
por condiciones tanto ambientales como genéticas propias del bichito.
-Fase estacionaria: Los cultivos se reproducen indefinidamente? NO! En general, todo se termina cuando
o bien se acaba algun nutriente esencial, o bien se acumula un producto de desecho inhibitorio.
Frecuentemente, pasan ambas cosas. No hay aumento ni disminución en el número de células. Es un
equilibrio dinámico.
-Fase de muerte: Luego de la fase estacionaria, si la incubación continua, las células empiezan a morir.

Medidas directas del crecimiento microbiano

Recuento de células totales: Se puede determinar contando una muestra con el microscopio mediante el
método de recuento directo. Éste se puede hacer de dos formas, en muestras secas sobre porta o en
muestras líquidas, donde se emplean cámaras de recuento especiales (portas escavados modificados,
con cuadrados marcados de area conocida). Éste método, si bien directo y rápido, presenta ciertas
limitaciones: 1) no distingue células vivas de muertas , 2) las células pequeñas son difíciles de ver con el
microscopio y se pierden en el recuento, 3) la precision es difícil, 4) Se requiere de un microscopio de
contraste de fases cuando las muestras no se tiñen, 5) El método no es adecuado para baja densidad
celular, 6) las células móviles se deben inmovilizar antes del recuento.

Recuento de células viables: Una célula viable es aquella capaz de dividirse y dar lugar a descendencia.
Entonces, contar células viables implica culivar y contar colonias. Hay dos métodos: el de extensión en
placa (Lo que hicimos en el labo) y el de vertido en placa.
Fuentes de error: tamaño del inóculo, cuan adecuado es el medio y las condiciones de incubación y
duracion de la misma. Colonias muy pequeñas pueden pasar desapercibidas en el recuento. Además,
gupos de dos o tres células tambien dan origen a una colonia, por lo que se comete un error por
defecto. Lo que se expresa es 'unidades formadoras de colonias' en vez de 'células viables'.
Medidas indirectas del crecimiento microbiano

Turbidez: A mayor número de células, mayor turbidez. Se puede medir con un fotómetro o un
espectrofotómetro. Se debe realizar una curva de calibración.

Crecimiento microbiano en cultivo continuo: El quimiostato

Un cultivo continuo es un sistema abierto, con volumen constante, al que se añade continuamente
medio fresco y del que se retira continuamente medio usado con células a una velocidad constante
(cultivo en medio renovado). Una vez que se alcanza el equilibrio en el sistema, el número de células
permanece constante y se dice, entonces, que el sistema está en estado de equilibrio. Se realiza cuando
es deseable tener un cultivo estable en esas condiciones.

El quimiostato: Es el aparato conmunmente utilizado

para obtener un cultivo continuo. Controla la densidad
de población celular como la velocidad de crecimiento
del cultivo. Para lograr ese control, son claves dos
factores: 1) la velocidad de dilución y 2) la
concentración de un nutriente limitante. En un
quimiostato pueden controlarse, de manera
independiente, la velocidad de crecimiento y la
producción de células, variando respectivamente los
factores mencionados.

En un quimiostato, la densidad celular se controla por el

nivel de un nutriente limitante, del mismo modo que en
un cultivo cerrado se controla la biomasa. Si se eleva la
concentracion de ese nutriente, manteniendo constante
la dilucion, la densidad celular aumentará.
EFECTOS AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO

Son cuatro los factores ambientales a considerar, por su efecto sobre el crecimiento de los
microorganismos: temperatura, pH, disponibilidad de agua y oxígeno.

Efecto de la temperatura sobre el crecimiento

Temperaturas altas incrementan la actividad enzimática y la velocidad de reacciones intraclulares; pero

exceso de temperatura implica daños irreversibles en ciertas proteinas. Por lo tanto, aumento de
temperatura equivale a aumento de actividad metabólica, hasta que se lega al punto de inactivacion.
Para cada microorganismo existe una tp mínima, una óptima y una máxima para el crecimiento. La
optima siempre está más cerca de la máxima que de la minima. Estas tres temperaturas se llaman
'cardinales' o 'fundamentales' y son características de cada microorganismo pero no son fijas, sino que
pueden ser modificadas por las condiciones ambientales.

Clases de microorganismos según la temperatura: Psicrófilos, Mesófilos, Termófilos e Hipertermófilos.

PH : Crecimiento microbiano a pH alto y a pH bajo

Al igual que con la temperatura, cada microorganismo crece en un rango de pH (en general, de entre 2 y
tres unidades) y normalmente posee un pH optimo bien definido. Se distinguen acidófilos y alcalófilos.

En acidófilos, el factor más importante para dicha caracterización, es la estabilidad de la membrana

citoplasmática. A pH neutro o alcalino, la membrana se disuelve (requiere alta concentracion de H+). En
cuanto a los alcalófilos, como pueden mantener una fuerza protón motriz cuando el pH externo es tan
alcalino? Bueno, se cree que no es una fuerza de H+ sino de Na+ que suministra la energía para el
transporte y movilidad, aunque si existe fuerza de H+ para la producción de ATP.
Todo esto, hablando de pH extracelular; el pH intracelular siempre es cercano o (en neutrofilos) igual a la
neutralidad.
Los cultivo frecuentemente están buffereados, para amortiguar cualquier cambio de pH que tenga lugar a
causa de la actividad metabólica de los microorganismos.

Efectos osmóticos sobe el crecimiento microbiano

La disponibilidad de agua es un factor importante que determina el crecimiento de microorganismos. Su

disponibilidad no es sólo función del contenido de agua en el medio, sino que también depende de la
concentración de solutos como sales y azúcares y otras sustancias que puedan estar presentes en el
agua.

La disponibilidad del agua se expresa en términos físicos como la 'actividad de agua' a w , y es el cociente
entre la presión de vapor de una solución y la presión de vapor del agua pura a la misma temperatura.
En la mayoría de los casos, el citoplasma tiene una concentración de solutos mayor que el medio, por lo
que el agua tiene a entrar por ósmosis. Sin embargo, cuando una celula se encuentra en un medio con
concentracion salina alta (o, lo que es igual, baja actividad de agua) , hay una tendencia a que salga el
agua del citoplasma.

Los organismos que crecen bien en esas condiciones e incluso hasta dependen de concentraciones
salinas altas, se denominan 'halófilos'. (Les gusta) También están los que sólo se la bancan
('halotolerantes').
También existen organismos 'osmófilos' (afinidad por medios con alta concentración de azúcar) y
'xerófilos' (afinidad por medios muy secos)

Cómo hace una célula para crecer en medios con baja aw? Necesita incorporar más agua,
incrementando la concentración salina intracelular. Para ello, incorpora los llamados 'solutos
compatibles' , que son denominados asi porque no alteran el metabolismo celular. En algunos casos, el
rganismo los sintetiza.
Se distinguen 4 tipos de solutos compatibles:
-Tipo carbohidratos. (ej Sacarosa)
-Tipo aminoácidos (ej prolina)
-Tipo Alcohol (Tipo manitol)
-Otros (Propionato de DMSonio)

Ejemplos: sacarosa, prolina, Manitol, KCl, Glicerol, etc.

Oxígeno y crecimiento microbiano

Clases de organismos según el oxígeno:

El oxígeno es un poderoso oxidante y un excelente aceptor de electrones en la respiración. Formas
tóxicas de oxígeno son:

-Oxígeno singulete 1O2

-Superoxido O2-
-Peróxido de hidrógeno H2O2
-Radical OH·

Todos se producen de manera lateral en la reducción de oxígeno a agua durante la respiración. Incluso
las flavoproteinas, quinonas, tioles y ferrosulfoproteinas tambien pueden generarlas.

Enzimas que destruyen estas formas tóxicas:

• La catalasa y la peroxidasa destruyen el agua

oxigenada, pero difieren en que la 2da necesita un
reductor.

• Del superoxido, se encarga la 'superóxido dismutasa',

que logra reducir a agua, actuando en combinación
con la catalasa.

• La superoxido dismutasa parece ser inmprescindible en

aerobios, y su ausencia en organismos anaerobios
estrictos da cuenta de la toxicidad del oxígeno para
éstos.