Inmunología (Ciclo Farmacia) Guía de Trabajos Prácticos 2018

INTRODUCCIÓN A LA RESPUESTA INMUNE (RI)

CUESTIONARIO (para responder después del seminario)

1) ¿Qué entiende por inmunidad?

2) ¿Cuán efectiva considera a la RI innata?
3) ¿Considera que RI innata y adaptativa son dos hechos no relacionados? Fundamente.
4) ¿Dónde se generan los componentes humorales y celulares de la RI?
5) ¿Dónde se monta la RI de reconocimiento antigénico?
6) ¿Por qué es importante que la RI sea policlonal?
7) Mencionamos la existencia de diferentes isotipos de Acs. Enumérelos y discuta si es importante o no su existencia.
8) ¿Qué sucedería si el único isotipo producido fuese IgM?
9) Una mujer embarazada padece rubéola en su infancia. ¿Cómo lo confirma el obstetra? ¿Por qué no corre riesgo de contraerla nuevamente durante el
embarazo?
10) Mediante un esquema, indique como es la RI ante una primo infección y una reinfección con el mismo patógeno.
11) De ejemplos de inmunidad activa y pasiva.

TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS
CUESTIONARIO DE ORIENTACIÓN
1) ¿Qué tipo de uniones participan en la interacción entre Ags y Acs?
2) Defina y ejemplifique los conceptos de especificidad, afinidad y avidez.
3) Un Ac monoclonal, ¿es siempre monoespecífico? Concepto de monoespecificidad. ¿Cómo se obtienen los sueros monoespecíficos?
4) ¿Qué es el fenómeno de prozona y cuáles pueden ser las causas que lo expliquen?
5) ¿Qué es la hemoaglutinación pasiva o indirecta?
6) ¿Qué es la isosensibilización por Rh? ¿Cómo puede producirse? Fundamento de la reacción de Coombs o anti-gammaglobulina directa e indirecta. Describa
los distintos tipos de reacciones de Coombs que pueden realizarse y cómo se obtienen experimentalmente los antisueros utilizados en cada una de ellas.
7) ¿Cuáles son las diferencias y semejanzas entre aglutinación y precipitación? ¿Tienen igual sensibilidad?
8) ¿Cuáles son las leyes físicas que rigen la difusión de las macromoléculas? ¿Cuáles son los factores que influyen en la aparición de las bandas de
precipitación?
9) Compare reacciones de interacción secundaria y primaria analizando: sensibilidad, visualización de la reacción y equipos necesarios. ¿En qué casos utilizaría
una técnica de interacción primaria?
10) Detalle la metodología general para un ELISA puntualizando las etapas de la reacción y todos los reactivos necesarios.
11) Detalle las diferentes estrategias que pueden aplicarse a la técnica de ELISA. ¿En qué casos se utilizan cada una de ellas? ¿Qué características debe tener el
Ac marcado a usar en cada caso? (monoclonales, policlonales y/o monoespecíficos).
12) Desarrollo de cada uno de los pasos del WB. ¿Cómo se verifica la correcta transferencia de las macromoléculas? Ventajas y desventajas de usar un Ac
primario monoclonal y otro policlonal en un WB.
13) Enumere los componentes de cada buffer a emplear y discuta el porqué de su inclusión.
14) Cómo se determinan los pesos moleculares de las proteínas por SDS-PAGE?
15) Cuál de estas técnicas se realiza a voltaje constante y cuál a amperaje constante?
16) ¿Considera Ud. que la ubicación de la membrana respecto de los polos de la cuba es importante? Justifique.
17) ¿Qué se debe tener en cuenta para determinar el tiempo de transferencia?
18) ¿Qué conclusiones puede sacar frente a un resultado negativo para una proteína cuando revela un WB con 4 Cl Naftol, y la visualización de esta misma
proteína con quimioluminiscencia?

PROBLEMAS

1)En un diagrama de teoría de conjuntos y utilizando su conocimiento de la estructura de una IgG de origen humano de cadena liviana Kappa, se podría ubicar
a la misma y sus sub unidades disociadas de la siguiente manera. v Cadena L ƙ IgG (ƙ) Cadena H Ǵ 3

1 a- Para cada una de estas situaciones, responder y justificar:

Situación 1: Si realiza un plan de inmunización en condiciones ideales con la cadena HǴ, el suero obtenido de dicha inmunización,¿reconocería a los siguientes
antígenos:fracciónHǴ, cadena liviana Kappa, cadena liviana lambda, IgG con cadena liviana lambda e IgM con cadena liviana Kappa?.

Situación 2: Si realiza un plan de inmunización en condiciones ideales con la cadena liviana Kappa, el suero obtenido de dicha inmunización,¿reconocería a los
siguientes antígenos: fracción HǴ, cadena liviana Kappa, cadena liviana lambda, IgG con cadena liviana kappa, IgA de cadena liviana Kappa y otra IgAcon
cadena liviana Lambda?.

Situación 3: Si realiza un plan de inmunización en condiciones ideales con la IgG Kappa, el suero obtenido,¿reconocería a los antígenos: fracción HǴ, cadena
liviana Kappa, cadena liviana lambda, IgG con cadena liviana kappa, IgA de cadena liviana Kappa y otra IgA con cadena liviana Lambda?.
b- Según las tres situacionesplanteadas, ¿cuál de los sueros obtenidos podría considerarse como suero monoespecífico para IgG.Justifique.

2)De los fragmentosque se obtienen luego de una digestión papaínica de una IgG humana, ¿cuálde las fracciones podría utilizar para generar un suero
monoespecífico para dicha inmunoglobulina (sistema: suero humano)? Una vez obtenido este suero monoespecífico, ¿considera que este reacciona contra todos
los determinantes antigénicos presentes en la molécula de la IgG humana o solo contra algunas regiones? Justifique.

3)Luego de realizar un tratamiento con beta mercapto etanol de una IgG, explique cómo se podría llegar a obtener un suero monoespecífico utilizando las
moléculas obtenidas.

4)Se inmuniza una cabra con IgG humana con el fin de obtener un reactivo para su comercialización. Este reactivo:
a- ¿Reconoce la porción Fc de IgG humana? ¿Por qué?
b- ¿Reconoce la porción Fab de IgG humana? ¿Por qué?
c- ¿Reconoce la porción Fc de IgA humana? ¿Por qué?
d- ¿Reconoce la porción Fab de IgA humana? ¿Por qué?
e- ¿Podría comercializar este producto como suero monoespecífico? 5)Siguiendo el plan adecuado se inmunizó una cabra con Brucellaabortuscon el fin de
obtener un suero que sea empleado como cont 33 a- ¿Por qué cree que se inmunizaron varios animales para obtener este reactivo? b- Indique las instrucciones
paso a paso que incluiría en el inserto sobre el procedimiento para la prueba indirecta de la reactividad del suero provisto por interacción secundaria. 8) En un
laboratorio que se dedica a la producción de vacunas se está cultivando Clostridiumtetanicon el fin de obtener la toxina tetánica que posee un PM: 150 kDa.
¿Cómo demuestra la pureza de dicho Ag? Indique los reactivos necesarios para efectuar su estudio y el esquema del resultado esperado. 9)El empleo de
inmunoterápicos puede ocasionar, como efecto adverso, la producción de Acs específicos que limitan su eficacia. Considerando que se administra un
inmunoterápico proteico X ¿Por cuál de los métodos que Ud. conoce determinaría si un individuo tratado con X generó Acs específicos? ¿Podría determinar el
isotipo de estos Acs? 10)En su laboratorioUd. ha obtenido un Ac monoclonal contra la lumazina sintetasa de Brucellaspp. Se sospecha que pertenece a la
subclase IgG2a ¿Cómo comprobaría dicha sospecha? 11)Se desea investigar si existió activación linfocitaria en ratones inmunizados con el antígeno CSP de
Plasmodiumfalciparum(agente etiológico de la malaria). Para ello se decidió investigar el nivel de IL-2 en el suero de los animales. Diseñe un EIA para tal fin.
12) Ud. trabaja en un laboratorio donde se produce el AcMo anti CD25 (cadena α del Rc de IL-2). Luego de la obtención y purificación, dicho Ac se somete al
control de calidad donde se busca evidenciar si mantiene su capacidad de Ac. Sabiendo que la técnica inmunológica empleada para esto es el ELISA, explique
cómo cree Ud. que se lleva a cabo mencionando los reactivos y controles necesarios. 34 13)Se ha purificado una proteína y al analizar dicho producto por
electroforesis en geles de poliacrilamida al 10% en condiciones desnaturalizantes y sin reductor se obtuvieron los siguientes resultados: Si usted dispone de un
antisuero específico para la proteína, cómo identificaría a partir de la separación por SDS-PAGE cuál es el componente de su interés. 14)Se ha desarrollado un
Ac monoclonal murino anti dicha proteína. El Ac monoclonal obtenido presenta buena afinidad y buen título por ELISA. Cuando se lleva a cabo el WB con el
mismo, para detectar la presencia de la proteína, la reacción no se verifica, ¿a qué puede deberse? 15)Los parásitos A y B presentan una alta homología
estructural. Sin embargo, la glicoproteína de 75 kD de la superficie de un parásito A genera, en el suero de los pacientes infectados, altos títulos de Acs que son
específicos de la infección con A. Para su empresa es de interés obtener esos Acs para transformarlos en reactivo comercial, por lo tanto: a-¿Cómo investigaría
la presencia de Acs contra esa glicoproteína en el suero de pacientes infectados? Indique la preparación de la muestra y el diagrama de la reacción. b-¿Podría
discriminar si los Acs presentes corresponden al isotipo IgG o IgM? 16) La detección de anticuerpos anti-Transglutaminasa, isotipo IgA, (ATGLU-A) es de
mucha utilidad para el diagnóstico y seguimiento de la Enfermedad celíaca. Usted 35 dispone de la proteína Tranglutaminasa humana recombinante y decide
implementar un ELISA. a- Proponga un esquema de ELISA para la detección de ATGLU-A. Indique controles y expresión de resultados. b-Mencione como
establecería el valor umbral de positividad (cutoff) para detectar positivos de negativos. c-Defina los términos especificidad y sensibilidad d-¿Cómo influye el
valor de cutoff en la sensibilidad y especificidad del método?.