PROTOCOLO CONTROL DE AMBIENTES
MICROBIOLÓGICO DE AMBIENTES, SUPERFICIES, OPERARIOS Y EQUIPOS
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1. PREPRARACION DE LA PRACTICA
Para la preparación de esta práctica previamente
la técnica del laboratorio deberá asignar a los
monitorios la preparación de los medios a
realizar, enfatizando en los reactivos y las
cantidades de medios a preparar.
Los medios y materiales a preparar incluyen:
 Agar Casoy® para control de ambientes
 Agar Sabouraud® para control de
ambientes.
 Agar McConkey para frotis de manos
 Agar Sangre para frotis de gargarganta
 Agua peptonada 0.1% para
enriquecimiento de frotis de equipos y
superficies.
 Hisopos estériles en 2 mL de agua
peptonada 0,1% o caldo Casoy® para
toma de muestra de equipos,
superficies, garganta y manos.
 Bajalenguas estériles para ayuda en la
toma de muestra de garganta.
2. EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
2.1. CONTROL DE AMBIENTE
2.1.1 RECUENTO DE BACTERIAS DEL AMBIENTE
Abrir una caja de petri que contenga agar Casoy
en el lugar indicado del laboratorio, dejar abierto
por 20 minutos, llevar a incubación a 35 y 37 ºC
por 24 a 48 horas; luego de las cuales observar e
informar el número de colonias bacterianas
presentes.
2.1.2 RECUENTO DE HONGOS DEL AMBIENTE
Abrir una caja de petri que contenga agar
Sabouraud en el lugar indicado del laboratorio,
dejar abierto por 20 minutos, llevar a incubación
a temperatura ambiente por 3-5 días; luego de
las cuales observar y se informa el número de
mohos y levaduras presentes.
3. FROTIS DE MANOS
Con la ayuda de un hisopo estéril humedecido en
agua peptonada 0.1% se realiza un frotis en las
Código: PrCI-CM-DF-008
manos del estudiante, primero en las palmas,
luego en los bordes de los dedos y sus comisuras,
finalmente en el borde de la uñas y por debajo de
las mismas. Posteriormente se siembra en agar
MacConkey, se lleva a incubación a 35 ºC por 24
horas. Se realiza lectura de coliformes y se
reporta como coliforme en manos.
4. FROTIS DE GARGANTA
Con un baja lengua y un hisopo estéril
humedecido en agua peptonada 0.1% tomar la
muestra de la parte posterior de la faringe,
sembrar en agar sangre, incubar a 37 ºC por 24 a
48 horas. Realizar lectura de colonias de
Streptococcus β-hemolíticos. Si se da crecimiento
de colonia realizar coloración de Gram y prueba
de catalasa.
COLORACION DE GRAM:
En un portaobjeto, con la ayuda de un asa se
realiza el extendido con una porción de la colonia
seleccionada, se adiciona una pequeña gota de
agua estéril o caldo si es necesario y después se
hace la fijación al mechero.
Se cubre la película con la solución de cristal
violeta y se deja actuar por un minuto. Luego se
lava el exceso de colorante con agua.
Se cubre la película con solución de yodo (lugol) y
se deja por un minuto. Luego se lava el exceso de
colorante con agua.
Se decolora con una mezcla alcohol-acetona por
10 o 15 segundos y se enjuaga con agua por unos
segundos para detener la acción del colorante.
Se cubre con safranina y se deja actuar por un
minuto. Finalmente se lava con agua y se deja
secar.
Se realiza la lectura en microscopio a 40X y 100X
usando aceite de inmersión.
PRUEBA DE CATALASA: Se realiza trasladando
una porción de la colonia a un portaobjeto y
sobre ella se adicionan unas gotas de solución de
H2O2 al 3%.
Lectura: La aparición de burbujas confirma la
presencia de catalasa.
Fecha de Emisión: 28-03-2011
Versión: 01
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5. CONTROL EQUIPOS esterilizar en autoclave a 121°C y 20
libras de presión por 15 minutos.
En un equipo previamente determinado realizar Dispensar cajas de petri alrededor de
un frotis dentro del equipo con un hispo
15ml de agar.
humedecido en agua peptonada, llevar al tubo de
ensayo que contiene 9mL agua peptonada,  Agar sangre: Disolver 40 gr en 1 litro de
esperar 15 minutos. Tomar una alícuota de 1ml y agua destilada, (realizar cálculos en caso
disponer en una caja de petri, adicionar 15 ml de de requerir menor cantidad de Agar) y
agar Casoy a 43 ºC (siembra en profundidad – caliente hasta ebullición. Luego
requiera agar caliente-), incubar de 35 y 37 ºC por esterilizar en autoclave a 121°C y 20
48 a 72 horas. Contar las colonias y reportar.
libras de presión por 15 minutos. Dejar
enfriar a 45-50 °C, incorporar 5 a 8% de
4. CONTROL DE SUPERFICIES
Delimitar un cuadrado de 10 cm en la superficie sangre desfibrinada. Dispensar en cajas
de un equipo realizar un frotis con un hispo de petri alrededor de 15ml de agar.
humedecido en agua peptonada, llevar a un tubo  Agua peptonada 0.1%: Suspender 25 gr
de ensayo con 9mL de agua peptonada, esperar en 1 litro de agua destilada (realizar
15 minutos tomar una alícuota de 1ml y disponer cálculos en caso de requerir menor
en una caja de petri, adicionar 15 ml de agar
cantidad) distribuir en tubos y esterilizar
Casoy a 43 ºC (siembra en profundidad –requiere
agar caliente-), incubar de 35 y 37 ºC por 48 a 72 en autoclave.
horas. Contar las colonias y reportar.

PREPARACIÓN DE LA PRÁCTICA POR LOS

MONITORES

 Agar Casoy®: Disolver 40g de Agar Casoy

en un litro de agua desmineralizada
(realizar cálculos en caso de requerir
menor cantidad de agar) y caliente hasta
ebullición. Luego esterilizar en autoclave
a 121°C y 20 libras de presión por 15
minutos. Dispensar cajas de petri
alrededor de 15ml de agar.
 Agar Sabouraud®: Disolver 65g de Agar
Sabouraud en un litro de agua
desmineralizada (realizar cálculos en
caso de requerir menor cantidad de
agar) y caliente hasta ebullición. Luego
esterilizar en autoclave a 121°C y 20
libras de presión por 15 minutos.
Dispensar cajas de petri alrededor de
15ml de agar.
 Agar MacCONKEY®: Disolver 50g de Agar
MacCONKEY en un litro de agua
desmineralizada (realizar cálculos en
caso de requerir menor cantidad de
Agar) y caliente hasta ebullición. Luego

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RESUMEN DE MATERIALES Y CANTIDADES NECESARIAS PARA LA PRÁCTICA

CANTIDAD CANTIDAD POR MATERIAL ADICIONAL

CANTIDAD POR
MATERIAL POR EQUIPO GRUPOS TOTALES QUE DEBE SER
GRUPO
(2 personas) (9 equipos de trabajo) LABORATORIO ENTREGADO Y UBICACION
(5 grupos de laboratorio) (no está en puestos de trabajo)
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
MATERIALES
Tubos de vidrio 16 x 160 mm En los cajones de vidriería del
2 18 90 material microbiológico
con tapa
Cajas de Petri En los cajones de vidriería del
6 60 300 material microbiológico
Hisopos estériles En los cajones de vidriería del
2 18 90 material microbiológico
Erlenmeyer de 1000 ml 2 2 2 Almacén de vidriería
Erlenmeyer de 250 ml 1 11 11 Puestos de trabajo estudiantes
Erlenmeyer de 100ml 1 5 5 Almacén de vidriería
Agitadores 1 9 9 Puestos de trabajo estudiantes
Guantes de carnaza 1 2 2 Puesto de monitores
Pipetas volumétricas de 1 ml Estufa de esterilización (Área de
1 9 45 microbiología)
Espátula 1 9 9 Puestos de trabajo estudiantes
Frasco lavador 1 9 9 Puestos de trabajo estudiantes
REACTIVOS
Agar Casoy 1.92 g 19.2 g 96 g Nevera de medios de cultivo
Agar Sabouraud 1.04 g 10.4 g 52 g Nevera de medios de cultivo
Agar MacConkey 0.8 g 8g 40 g Nevera de medios de cultivo
Agar sangre 0.72 6.4 32 Cajón de medios de cultivo
Agua peptonada. 0.25 2.25 11.25 Nevera de medios de cultivo
Sangre desfibrinada 1.6ml 14ml 70 ml Nevera de medios de cultivo
EQUIPOS
Balanza analítica 1 2 2 Esta en área de balanzas
Planchas de calentamiento 1 2 2 Mesa 1 del laboratorio
Balanza electrónica 1 2 2 Área microbiológica
Autoclave 1 2 2 Zona de equipos
Incubadora 1 1 1 Área microbiológica
Estufa de esterilización 1 1 1 Área microbiológica
Nevera 1 1 1 Área de equipos

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