Universidad Autónoma del Estado de México

Facultad de Química
Licenciatura en Ingeniería Química

Practica #4:
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATECOLASA
Laboratorio de Biología
2do Semestre 2017A
Grupo: 25

Nombre de los integrantes del equipo: Fecha de Elaboración del

Reporte: 13/04/17
1. Cárdenas Rojas Uriel
2. Gonzales Eduardo
3. Mota Pantaleón Omar Ulises
4. Velázquez Velazco Luis Ángel
 Practica 4:
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATECOLASA

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

1. Analizar algunos factores que inciden sobre la actividad enzimática de la

catalasa.
2. Comprender los principios básicos de la actividad enzimática y poner en
manifiesto la presencia de enzimas en tejidos animales y/o vegetales.

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son proteínas con capacidad de catalizar reacciones biológicas. Igual que
los catalizadores inorgánicos, aumentan la velocidad para alcanzar el equilibrio de la
reacción. El mecanismo por el cual las enzimas incrementan la velocidad de la reacción
es reduciendo la energía libre de activación requerida para la transformar un sustrato al
producto correspondiente, sin afectar la constante de equilibrio.
Como catalizadores las enzimas son específicas, cada enzima solo afecta a sus
sustratos específicos, y esto se debe a su estructura general.

Componentes de una enzima

Algunas poseen en su totalidad proteínas

Otras están formadas por una parte proteica y un componente no proteico (Apoenzima
y cofactor), que juntan conforman la holoenzima.

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Actividad enzimática

La actividad de una enzima se evalúa en función de la velocidad de la reacción. La

cinética enzimática estudia la velocidad de la reacción, los factores que la modifican y el
mecanismo de la misma. Los factores fisicoquímicos que modifican la actividad de la
enzima son: concentración del sustrato, concentración de la enzima, pH, temperatura,
fuerza iónica, inhibidores.

Mecanismos de acción enzimática

1. El sustrato hace contacto con el centro o sitio activo

2. Se forma un complejo intermedio llamado enzima-sustrato
3. La molécula de sustrato se transforma por reorganización de los átomos, por
rotura, o por combinación de varias moléculas de sustrato.
4. El sustrato transformado y los productos de reacción se liberan de la molécula de
enzima.
5. La enzima libre puede reaccionar con otras moléculas de sustrato.

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Factores que afectan la actividad enzimática

Temperatura: la actividad enzimática se incrementa al incrementar la temperatura,

hasta que la enzima se desnaturaliza.

pH: en este caso la enzima es más activa con un pH de 6.

Concentración de sustrato: al aumentar la concentración de sustrato, la velocidad de

la reacción se incrementa, hasta que se ocupan todos los centros activos.

Inhibidores: competidos y no competitivos

MATERIALES Y REACTIVOS

Equipo y material Material por el alumno

1. Tubos de ensayo 1 papa

2. Solución de catecol al 0.1% y/o al
1%
3. Baño maria

PROCEDIMIENTO

Una papa limpia se ralla y se muele en un mortero. El mortero debe mantenerse en

hielo, así como 100 ml agua destilada. La molienda se deja reposar por 10 min. Se filtra
a un vaso de precipitados que también debe estar sumergido en el hielo, la pulpa que
queda en la gasa y se desecha. Se deja reposar el filtrado por 5 minutos para que el

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almidón se asiente en el fondo del vaso, después se vuelve a decantar y el nuevo
filtrado se coloca en hielo. Este líquido filtrado es el “extracto de papa”.

DESARROLLO DE LA PRACTICA

1. Rotule tres tubos de ensayo de la siguiente forma: 1A, 1B, 1C; anote en la etiqueta
de los tubos sus iniciales

2. Marque el tubo a un centímetro y dos centímetros desde la base del tubo

3. Llene cada tubo de la siguiente forma:

Tubo Catecol oxidasa Sol. de Catecol al Agua Destilada

1%

1A Llenar hasta la Llenar hasta la Sin añadir

marca de un marca de dos
centímetro centímetros

1B Llenar hasta la Sin solución de Llenar hasta la

marca de un Catecol marca de dos
centímetro centímetros

1C Sin Catecol Llenar hasta la Llenar hasta la

oxidasa marca de dos marca de un
centímetros centímetro

4. Mezcle el contenido de los tubos y anote el color de la solución de cada tubo en el

tiempo “Cero” en la tabla de resultados

5. Coloque los tubos en Baño María a 30°C

6. Examine el color de los tubos a los “Cinco”, “Diez” y “Quince” minutos, anotando en la
tabla de resultados.

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7. A los quince minutos el Catecol debe estar totalmente oxidado. Por lo tanto, el color
del tubo 1A será considerado con el número “5” para intensidad de color en una escala
de “0 a 5”. Los tubos 1B y 1C serán considerados “0”.

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1. ¿Qué función cumplen las enzimas en los sistemas biológicos?

Son indispensables en la transducción de señales y en procesos de regulación,

normalmente por medio de quinasas y fosfatasas. También son capaces de producir
movimiento, como es el caso de la miosina al hidrolizar ATP para generar la contracción
muscular o el movimiento de vesículas por medio del citoesqueleto. Otro tipo de
ATPasas en la membrana celular son las bombas de iones implicadas en procesos de
transporte activo. Además, las enzimas también están implicadas en funciones mucho
más exóticas, como la producción de luz por la luciferasa en las luciérnagas. Los virus
también pueden contener enzimas implicadas en la infección celular, como es el caso
de la integrasa del virus HIV y de la transcriptasa inversa, o en la liberación viral, como
la neuraminidasa del virus de la gripe.

2. ¿Con base en la clasificación de las enzimas, a qué tipo corresponde la reacción

catalizada por la Catecol Oxidasa?
3. En la reacción que se lleva a cabo en la práctica, identifica las soluciones que
representan al sustrato, a la enzima y al producto.

Tiempo Tubo 1A Tubo 1B Tubo 1C

0 min
5 min
10 min
15 min

BIBLIOGRAFÍA

Aebi, H., “Catalase in vitro”, Methods in Enzymology, 105, 121-126, 1984.

6
Garzón de la Mora, P., “Manual de prácticas de bioquímica” Proyecto VI, Condiciones
óptimas para medir una actividad enzimática, 111-125, 2002.

Maehly, A. C., Chance, B., “The Assay of Catalases and Peroxidases”, Methods of
Bioquimical Analysis, 1, 357-424, 1956.

Rivas, G., López, L. A., Velasco, A., “Regresión no lineal”, Revista Colombiana de
Estadística, 14, 89-102, 1993.