Virus del mosaico del nabo.

Movimiento sistemático a través tanto de floema y xilema

como complejos asociados a la membrana (2015).

Los virus de plantas se mueven sistémicamente a través del floema. Y lo hacen como viriones o complejos
ribononucleoproteicos, aunque no está claro de que están constituidos estos complejos. Las
aproximadamente 10 kb de RNA genómico del virus del mosaico del nabo (TuMV) codifica una proteína de
membrana, conocida como 6K2, que induce la reorganización de la endomembrana para la formación de la
maquinaria de replicación viral. Esta maquinaria toma la forma de vesículas que contienen proteínas de
replicación viral y RNA viral (vRNA). En este estudio, divulgamos la presencia de vesículas 6K 2-tagged, que
contienen el vRNA y la polimerasa de RNA dependiente de vRNA en los elementos cribosos del floema y en
los vasos del xilema. Observaciones con microscopía electrónica de transmisión, demuestran la presencia
en los vasos del xilema de las vesículas que contienen el vRNA asociadas con partículas virales.
Experimentos con tallos anillados, que dejan los vasos de xilema intacto pero destruyen los tejidos
circundantes, confirman que TuMV podría establecer una infección sistémica de la planta a través de los
vasos del xilema. Elementos cribosos del floema y vasos de xilema de plantas infectadas por el Potato virus
X, también contenian lípidos asociados a vRNA no encapsidados, indicando que la presencia de complejos
ribonucleoproteicos asociados a la membrana en el floema y el xilema no está limitado a TuMV. En
conjunto, estos estudios indican que la maquinaria de replicación viral podría acabar en el floema y el
xilema.

Los virus de plantas utilizan las rutas de transporte preexistente en el huesped para propagar la infección a
toda la planta. Después de la replicación en las células infectadas inicialmente, los virus se mueven célula a
célula a través de los plasmodesmos (PD) y comienzan una nueva ronda de replicación en las células recién
infectadas. Este ciclo se repite hasta que el virus llega a los tejidos vasculares, donde entran en los tubos
conductores por movimiento sistémico. Varios estudios han indicado que los virus de plantas son
transportadas pasivamente desde las fuentes a los sumideros con el flujo de fotoasimilados y así se cree
que se mueve sistémicamente a través del floema (Hipper et al., 2013).

El tubo de conducción del floema es el elemento criboso. El elemento criboso maduro es anucleado y
depende de la asociación de células de células acompañantes para el mantenimiento de su función
fisiológica (Fisher et al., 1992). El PD especializado en conectar un elemento de criba con una célula
acompañante se denomina unidad poro - plasmodesmo (PPU). A diferencia de los otros PDs, PPUs siempre
se ramifican en la parte de la célula acompañante pero tienen sólo un canal en el lado del elemento
criboso (Oparka y Turgeon, 1999). Por esto se cree que la carga y descarga de material viral durante el
transporte del floema es a través de los PPUs. A pesar de que el límite de exclusión por tamaño de PPUs
(Kempers y Bel, 1997) es menor que la de los otros PDs (Lobo et al., 1989; Derrick et al., 1990), los PPUs no
deben permitir, en su estado nativo, el paso de los viriones o complejos de ribonucleoproteína viral
(vRNP). Se creé que esto es así, porque factores en la interacción específica entre virus y huésped son
requeridos para que la entidad viral pueda pasar. Por ejemplo, la proteína de movimiento del virus del
mosaico del pepino (CMV) es reconocida por PPUs (Blackman et al., 1998), lo que sugiere que esta proteína
viral modifica el límite de exclusión por tamaño de PPUs y ayuda a la entrada viral en los elementos
cribosos.

La mayoría de los virus vegetales, se asume que se mueven sistémicamente a través del floema como
viriones. Esta hipótesis se basa en la observación de que delecciones en la proteína de la cápsida (CP)
debilitando el ensamblaje del virus, prevé la infección sistémica (Brault et al., 2003; Zhang et al., 2013;
Hipper et al., 2014). Algunas investigaciones demostraron la actual presencia de viriones en los elementos
cribosos. Este es el caso del icosaédrico virus del ringspot (manchas anilladas) del tabaco (Halk y McGuire,
1973), virus de la hoja roja de la zanahoria (Murant y Roberts, 1979), virus del enrollamiento de la hoja en
la patata (Shepardson et al., 1980), y virus del amarilleo de la remolacha occidental (Hoefert, 1984).
Además, los viriones también se observan en savia del floema, como el icosaédrico CMV (Requena et al.,
2006) y con forma de varilla rígida, el virus del mosaico verde jaspeado del pepino (Simón Buela y García
Arenal, 1999). Algunos virus también se cree que se mueven como complejos ribonucleoproteicos (RNP),
puesto que el movimiento sistémico fue observado en proteinas de la cápsida (CP) mutantes, donde el
ensamblaje del virion fue obstaculizado.

Por ejemplo, el virus del cascabeleo del tabaco (TRV), virus mod-top de la patata (PMTV), virus del mosaico
del bromo y el virus del enanismo ramificado del tomate, todavía son capaces de moverse sistémicamente
cuando el gen CP ha sido eliminado del genoma viral (Swanson et al., 2002; Savenkov et al., 2003;
Gopinath, Kao, 2007; Manabayeva et al., 2013). Para potyvirus, todavía no está claro si el transporte a larga
distancia involucra exclusivamente a las partículas virales o si complejos vRNP están también implicados
(Dolja et al., 1994, 1995; Cronin et al., 1995; Schaad et al., 1997; Kasschau y Carrington, 2001; y Rajamaki
Valkonen, 2002). Pero si los viriones o vRNP complejos están involucrados en el movimiento viral, la
naturaleza plena de la entidad viral está implicado no ha sido definido.

También se utiliza para el xilema infección sistémica del virus, pero su importancia en el transporte viral
generalmente ha sido pasado por alto. Los elementos de vaso son los bloques de construcción de buques
de xilema, que constituyen la mayor parte del agua del sistema de transporte hacia arriba en una planta.
Las paredes laterales de elementos de vaso maduros contienen fosas, que son zonas que carecen de una
pared celular secundaria; las paredes del extremo de los elementos de vaso maduros se eliminan y las
aberturas son llamados placas de perforación (Roberts y McCann, 2000). CP o viriones de algunos virus
vegetales de todas formas diferentes han sido detectados en los vasos del xilema y/o líquido guttation,
sugiriendo que estos virus pueden moverse sistémicamente a través de los vasos del xilema. Por ejemplo,
el PP del icosahedral tomato bushy stunt virus (Manabayeva et al., 2013) y el arroz amarillo moteado (virus
Opalka et al., 1998), el PP de la rígida forma de vara soilborne mosaic virus (trigo Verchot et al., 2001) y
moteado verde del pepino mosaic virus (Moreno et al., 2004), y en forma de varilla flexuosas Potato virus X
(PVX; Betti et al., 2012) fueron detectados en vasos de xilema. Colocalization de anti-arroz amarillo
moteado de anticuerpos del virus y un marcador de la pared celular de celulosa b-(1-4)-D-glucanos sobre
buque pit membranas sugiere que el hoyo de las membranas podría ser una vía para la migración del virus
entre los buques (Opalka et al., 1998). Además, flexuosas rodshaped viriones de Zucchini yellow mosaic
virus fueron encontrados en ambos vasos de xilema tejido de raíz y el líquido guttation (francés y Elder,
1999). Por último, icosahedral Brome mosaic virus (Ding et al., 2001) y en forma de varilla rígida el virus del
mosaico del tomate y pimiento dulce virus moteado (French et al., 1993) fueron encontrados en los
viriones guttation líquido. Líquido Guttation procede de xilema exudado, indicando que estos virus
vegetales pueden moverse a través de xilema dentro de la planta infectada. Los estudios anteriormente
mencionados, sin embargo, basado fundamentalmente en la microscopia electrónica y ensayos de
infección y puede haber perdido la presencia de otros componentes virales que pudieran estar
involucrados en el transporte.

Nabos mosaic virus (TuMV) es un virus ARN positivo-strand, perteneciente a la familia Potyviridae, género
Potyvirus, que contiene alrededor de 30% de los actualmente conocidos virus vegetales y causan
enfermedades graves en numerosos cultivos (Shukla et al., 1994). Son nonenveloped Potyviruses, flexuosas
partículas en forma de varilla de 680 a 900 nm de longitud y de 11 a 13 nm de diámetro.

Turnip mosaic virus (TuMV): Virus del mosaico del nabo.

El virus del mosaico del nabo (TuMV) es un virus de ARN de cadena positiva perteneciente a la familia
Potyviridae, género Potyvirus, que constituye aproximadamente el 30% de los virus actualmente conocidos
en las plantas, y causa graves enfermedades en numerosos cultivos (Shukla et al., 1994). Los Potyvirus son
partículas en forma de bastoncillos, sin cubierta, flexuoso (sinuoso), de 680 a 900 nm de longitud y 11 a 13
nm de diámetro. El ARN genómico es de aproximadamente 10 kb, codifica una poliproteína que da lugar al
menos a 11 proteínas maduras. TuMV transforma las membranas celulares en maquinaria viral, que son
compartimientos intracelulares implicados en la replicación viral y el movimiento. Estos compartimientos
toman forma de vesículas de aproximadamente 100 nm de diámetro, y se originan en el retículo
endoplasmático (Grangeon et al., 2012). Estas vesículas contienen RNA viral (vRNA) y proteínas virales y del
huesped, implicadas en la replicación del vRNA (Beauchemin et al., 2007; Beauchemin y Laliberté, 2007;
Dufresne et al., 2008; Huang et al., 2010; Grangeon et al., 2012). La proteína viral de membrana 6K 2 está
implicada en las alteraciones de la membrana y producción de la vesícula (Beauchemin et al., 2007). Los
complejos de replicación asociados a membrana pueden moverse tanto de célula a célula como
intercelularmente (Grangeon et al., 2013) a ritmo de una célula infectada cada 3 h (Agbeci et al., 2013). El
tráfico intercelular del complejo de replicación es probablemente mediada por las proteínas potyviral PD
localizada inclusión citoplásmica (CI) y P3N-PIPO (para N-terminal medio de P3 sobre el muy interesante
Potyviridae ORF; Carrington et al., 1998; Wei et al., 2010; Vijayapalani et al., 2012) y CP (Dolja et al., 1994,
1995), proteína Viral genoma-ligado (VPg; Nicolas et al., 1997; Rajamaki y Valkonen, 1999, 2002) y
ayudante componente-proteinasa (HC-Pro; Cronin et al., 1995; Kasschau et al., 1997; Rojas et al., 1997;
Kasschau y Carrington, 2001), que participan en el movimiento célula a célula y vascular.

Se espera que, en definitiva, TuMV alcanza los tejidos vasculares de la planta, pero cómo y bajo qué forma
se libera en los tubos de conducción no se conocen. Para entender más propagación viral y movimiento
sistémico, se investigó la distribución de 6K 2-tagged TuMV fábricas en todos los tejidos de hoja y tallo que
no sea de las células epidérmicas. Encontramos fábricas de TuMV en todos los tejidos. Curiosamente,
observamos 6K 2 - tagged vesículas, que contienen vRNA y proteínas de la replicación viral, en elementos
de tamiz del floema y los vasos del xilema. Confirmamos que TuMV podía moverse systemically a través del
xilema por un supuesto análisis de vástago anillado, que induce la muerte de las células del floema sin
afectar la integridad del xilema. Por lo tanto, nuestro estudio indica que complejos de replicación TuMV
asociada a la membrana participan en el movimiento sistémico del virus.