Mét.

Espectroscópicos

TEMA 11. MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS APLICADOS AL

ANÁLISIS AGRÍCOLA

 1. Introducción
 2. Propiedades de la radiación electromagnética. Espectro electromagnético
 3. Interacción materia-radiación electromagnética. Espectros de absorción y
emisión.
 4. Clasificación de los métodos espectroscópicos.
 5. Parámetros para la medida de la absorción. Ley de Beer. Desviaciones.
 6. Espectroscopía de absorción molecular. Especies absorbentes.
Transiciones electrónicas
 7. Instrumentación
 8. Aplicaciones de la EAM.
 9. Espectroscopía de absorción atómica.
 10. Espectroscopía de emisión atómica.
 11. Problemas de introducción a los métodos espectroscópicos aplicados al
análisis agrícola.
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Métodos espectroscópicos:

Aquellos que implican la medida de la radiación electromagnética

emitida por la materia o que interacciona con ésta.

Métodos en los que existe un intercambio de energía entre la

radiación electromagnética y la materia.

Espectrofotometría como al conjunto de procedimientos que

utilizan la luz para medir concentraciones químicas.
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Propiedades de la radiación electromagnética

 La radiación electromagnética es una forma de energía que

se transmite a través del espacio a gran velocidad
(concretamente, a la velocidad c, conocida como velocidad
de la luz en el vacío que vale 3·108 m·s-1), con una longitud
de onda λ y una frecuencia ν.

 La radiación electromagnética presenta una doble

naturaleza:

- Ondulatoria

- Corpuscular
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Los parámetros que permiten caracterizar la radiación

electromagnética desde un punto de vista ondulatorio son:

 Longitud de onda (λ). Es la distancia entre dos puntos máximos o

mínimos consecutivos de la onda. Se mide en unidades de
longitud. Las unidades más frecuentes son: Ǻ (10-10 m), nm (10-9
m)
 Frecuencia (ν). Es el número de ciclos por unidad de tiempo, es
decir, es el número de oscilaciones completas de una onda en un
segundo.
 Número de onda. Es el inverso de la longitud de onda. La unidad
de medida más utilizada es el cm-1.
 Periodo (T). Es el tiempo necesario para que dos máximos
sucesivos de una onda pasen por un punto fijo. Se mide en
segundos (s)
c 1 
       
  c
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La radiación electromagnética desde un punto de vista

corpuscular:

 la radiación electromagnética es un flujo de partículas o

corpúsculos, llamados fotones.
 Cuando la radiación electromagnética interacciona con átomos y
moléculas, tiene naturaleza de partículas de energía, fotones.
 Por lo tanto, la frecuencia (ν) de la radiación electromagnética y la
energía del fotón (E) son proporcionales, siendo la constante de
Planck (h = 6,62 · 10-34 J/fotón·s)
 La de proporcionalidad entre ambas es:

c
E h  E  h 

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ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

E = hυ ( h = 6.62·10-34 J·s ) E = hc/λ ( c = 3·108 m/s )

←Energia Longitud de onda→

Microondas: Rotación de enlaces

I f j Vib ió d l
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Colores del espectro visible

λ absorbida (nm) Color absorbido Color observado (complementario)
380-420 violeta amarillo-verdoso
420-440 azul-violeta amarillo
440-470 azul anaranjado
470-500 verde-azulado rojo
500-520 verde púrpura
520-550 amarillo-verdoso violeta
550-580 amarillo azul-violeta
580-620 anaranjado azul
620-680 rojo verde-azulado
680-780 púrpura verde
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 Clasificación de los métodos espectroscópicos:

Espectroscopia en el Infrarrojo
Absorción
Espectroscopia de absorción molecular
Moleculares Ultravioleta-Visible

Fluorescencia
Emisión
Fosforescencia

Espectroscopia absorción atómica (EAA)

Absorción Espectroscopia de absorción electrotérmica
( Horno de grafito)

Atómicos Espectroscopia de emisión atómica (EEA)

Fotometría de llama
Emisión Plasma acoplado por inducción (ICP)
Fluorescencia atómica de Rayos X
Fluorescencia atómica
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MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS

MOLECULARES ATÓMICOS

ABSORCIÓN EMISIÓN ABSORCIÓN EMISIÓN

Espectroscopia de Absorción Molecular Espectroscopia Absorción Espectroscopia de Emisión

Ultravioleta-Visible Atómica (EAA) Atómica (EEA)

Espectro de Bandas Espectros de líneas

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Espectros de absorción

 El espectro de absorción es la representación gráfica de la

radiación electromagnética absorbida por una especie en
función de su λ.
 Si la especie absorbente es:
- Una molécula Espectroscopia de absorción molecular
- Un átomo Espectroscopia de absorción atómica
 Cuando una especie absorbe radiación electromagnética, pasa
de un estado fundamental a otro excitado de mayor contenido
energético.
X ( estado fundamental )  h  X *( estado excitado)
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Transiciones electrónicas-vibracionales-rotacionales

 Son transiciones que se producen desde cada nivel rotacional de cualquier

nivel vibracional del nivel electrónico fundamental hacia diferentes niveles
rotacionales de niveles vibracionales de niveles electrónicos excitados.
Estas transiciones se producen cuando la radiación incidente es del tipo
ultravioleta-visible. El hecho de que las moléculas roten, los enlaces de
éstas vibren y además, se produzcan transiciones electrónicas externas, da
lugar a un mayor número de transiciones y por lo tanto, el espectro
resultante no será de líneas ni de picos sino que será de bandas, más o
menos anchas. Estos espectros son muy útiles para análisis cuantitativo.
Absorción molecular
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Absorción atómica
 Como su propio nombre indica, la especie absorbente es un átomo, con lo
que al no existir enlaces no pueden darse movimientos rotacionales ni
vibracionales. Por lo tanto, si no existen transiciones rotacionales ni
vibracionales, sólo existirán transiciones electrónicas externas. Estas
transiciones se producirán cuando la radiación incidente es del tipo
ultravioleta-visible y el espectro resultante será siempre de líneas. Una
radiación tipo microondas o infrarroja no produce ningún tipo de transición
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Espectros de Emisión

 Es la representación gráfica de la radiación electromagnética

emitida por una especie en función de su longitud de onda
cuando la especie una vez excitada con mayor nivel energético
pasa de un estado excitado menos energético.

X *( estado excitado )  X ( estado fundamental )  h

En función de cual sea la especie que emita radiación podemos realizar la

siguiente clasificación:

Espectoscopía de Emisión Atómica

Espectoscopía de Emisión Molecular

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Ley de Beer

 Relaciona absorbancia y concentración “ley general de absorción”.

 La cantidad de radiación electromagnética absorbida por un analito
(molécula o átomo) se relaciona cuantitativamente con la
concentración de dicho analito en disolución.
 Siempre se cumple que:

A    b C

Siendo:
A, la absorbancia adimensional
ε, la constante de absortividad molar (L · cm-1 · mol-1)
b, el camino óptico (cm), constante para cada aparato.
C, la concentración del analito (mol · L-1)
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Transiciones Electrónicas
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Componentes básicos de un equipo de medida de absorción

molecular en UltraVioleta-Visible

Fuente Selector de λ Muestra Detector Registro

A = Fuente de radiación B = Monocromador

C = Rendija D = Cubeta de muestra
F = Detector G = Medidor
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Espectrofotómetro de haz sencillo

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Espectrofotómetro de doble haz

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Aplicaciones de la EAM

 ¿Qué se puede medir?

 Todas aquellas moléculas que absorban radiación en la zona

del espectro correspondiente al UV-Visible, como son las
moléculas orgánicas con cromóforos, los complejos de metales
de transición y otras disoluciones moleculares con color (por
métodos indirectos se pueden medir otras especies con
electrones en orbitales ).
 ¿Cuál es el procedimiento?
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Aplicaciones de la EAM

¿Cuál es el procedimiento?
 1º- Establecer las condiciones de trabajo
- Elección de la longitud de onda óptima.
- Elección de la fuente de radiación. Dependerá de que midamos
en la zona del Ultravioleta o en el Visible.
- Elección de la cubeta adecuada.
- Preparación de la muestra para el análisis:
- Disolución de la muestra si ésta es sólida.
- Eliminación de las interferencias, si se puede, a la longitud de
onda elegida (frecuentemente por enmascaramiento).
- A veces, la especie absorbente sólo es capaz de absorber en un
determinado estado de oxidación ó en forma de complejo, con
lo que habría que conseguir ese estado.
 2º- Preparar la recta de calibrado.
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Espectroscopía de absorción atómica

 La espectroscopía atómica comprende un conjunto de métodos de

análisis que permiten la determinación de más de 70 elementos. Los
métodos atómicos se caracterizan por ser rápidos, cómodos,
selectivos, sensibles (se determinan ppm y ppb), se requiere muy poca
cantidad de muestra y ésta sufre poca manipulación.

 Estos métodos se basan en la medida de la radiación

electromagnética absorbida (absorción) o emitida (emisión) por los
átomos en estado de vapor, siendo este estado necesario puesto que
es el que permite la mayor separación entre átomos condición
imprescindible para la correcta cuantificación mediante cualquier
método espectroscópico atómico. Por lo tanto, el primer paso de todos
los métodos de espectroscopía atómica es la atomización de la
muestra
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Clasificación de los métodos de espectroscopía atómica más utilizados

Método de Tª típica de
Fundamento Denominación
atomización atomización (ºC)
Espectroscopía de absorción
Absorción
atómica
Llama 1700-3150 Emisión Espectroscopía de emisión atómica
Espectroscopía de fluorescencia
Fluorescencia
atómica
Espectroscopía de absorción
Absorción
electrotérmica
Electrotérmica 1200-3000
Espectroscopía de fluorescencia
Fluorescencia
electrotérmica
Espectroscopía de plasma acoplado
Plasma de argón Emisión
por inducción (ICP)
acoplado por 6000-8000
Espectroscopía de fluorescencia de
inducción Fluorescencia
plasma acoplado por inducción
Plasma de argón de Espectroscopía de plasma de
6000-10000 Emisión
corriente continua corriente continua
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Espectrofotómetro de absorción atómica

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Fuentes de radiación
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Sistema de atomización

Ionización M+ + e- Gas
Excitación M* Gas
Atomización Mo + Ao Gas
Vaporización MA Gas
Fusión MA Líquido
Desolvatación MA Sólido
Nebulización M+ + A- Aerosol
M+ + A- Disolució
n
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Aplicaciones
La espectroscopía de absorción atómica se utiliza para la determinación de elementos metálicos a
nivel de traza, aunque de forma indirecta también se pueden determinar otras especies.
Las medidas en absorción atómica también se basan en la ley de Beer, si bien, hay que comprobar
experimentalmente la linealidad entre absorbancia y concentración, por ello hay que realizar el
calibrado.
¿Cuál es el procedimiento?
1º- Establecer las condiciones particulares de trabajo
a) Colocar la lámpara correspondiente al elemento a medir y ajustar su linealidad.
b) Dentro de las líneas de resonancia del elemento a determinar, hay que elegir una longitud de onda
óptima que permita la máxima absorbancia libre de interferencias.
c) Se regulará la relación de flujos de los gases (oxidante / combustible)
d) Se ajustará la alineación y la altura del mechero.
e) Se fijará el caudal de aspiración de la muestra.
f) Preparación de la muestra para el análisis:
- Disolución de la muestra si ésta es sólida, con o sin la utilización de ácidos minerales, con o sin
calcinación, con o sin digestión ácida, etc.
- Eliminación de las interferencias, si se puede, a la longitud de onda elegida.
A veces, la especie absorbente sólo es capaz de absorber en un determinado estado de oxidación ó en
forma de complejo, con lo que habría que conseguir ese estado.
2º- Calibrado.
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ANÁLISIS CUANTITATIVO MEDIANTE E.A.A

Elección de lámpara
Fijar intensidad
Ajuste de longitud de onda
Ajuste de rendija
Ajuste de flujos de gases
Ajuste de altura de mechero
Ajuste de caudal de aspiración
“Blanco” → Agua desionizada

Medida de concentraciones
Patrones
Calibrado:
- Recta de calibrado
- Adición estándar
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Espectroscopía de Emisión Atómica

X + E (térmica, eléctrica o radiante) → X* X* → X + hυ

FUENTE DE ENERGÍA TÉCNICA

Llama Fotometría de llama

Radiación
Fluorescencia atómica
electromagnética

Eléctrica Espectroscopía de emisión

Plasma I.C.P.

Rayos X Fluorescencia de Rayos X

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Instrumentación EEA

Atomizador - Selector de λ Detector Registro

Llama (Muestra)
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Aplicaciones
La espectroscopía de emisión atómica se utiliza, fundamentalmente, para la
determinación de elementos alcalinos a nivel de traza. En todo caso, se cumple
que la intensidad de radiación emitida es una función de la concentración de
analito.
¿Cuál es el procedimiento?
1º- Establecer las condiciones particulares de trabajo
a) Se ajustará la ganancia de energía, a la vez que es aspirado el patrón más
concentrado de analito.
b) Dentro de las líneas de resonancia del elemento a determinar, hay que elegir
una longitud de onda óptima que permita la máxima absorbancia libre de
interferencias.
c) Se regulará la relación de flujos de los gases (oxidante / combustible)
d) Se ajustará la alineación y la altura del mechero.
e) Se fijará el caudal de aspiración de la muestra.
f) Preparación de la muestra para el análisis:
2º- Calibración.
Se puede realizar una recta de calibrado con disoluciones patrón, o bien si hay
problemas de efecto matriz, se puede utilizar el método de adiciones estándar.
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Espectroscopía de plasma acoplado

La principal característica de este método es el empleo de plasma como

sistema de atomización de la muestra.
¿Que es el plasma?
Gas ionizado, es decir, un gas que contiene una concentración
relativamente alta de cationes y electrones. Si el gas fuese Argón, se
tendría el siguiente equilibrio:

 Ar   1 e 
Ar 

El plasma alcanza temperaturas mucho más altas (6000-8000 ºC) que las
alcanzadas por las llamas habituales de combustión. La elevada
temperatura, estabilidad y entorno químico inerte del Argón elimina gran
parte de las interferencias que se encuentran habitualmente en las llamas
de combustión
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Instrumentación (ICP óptico).

En un espectrómetro óptico de emisión con plasma acoplado por inducción, la muestra

es transportada en forma líquida por medio de una bomba. La muestra líquida será
convertida en aerosol mediante el proceso de nebulización.
Posteriormente, la muestra nebulizada es transportada hacia el plasma, lugar dónde es
desolvatada, vaporizada, atomizada y excitada por el plasma. Los átomos e iones
excitados emiten su radiación característica que es recogida y ordenada por su longitud
de onda. Esta radiación es detectada y convertida en una señal eléctrica que es
convertida en concentración de analito.
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Ventajas e inconvenientes del ICP óptico

Ventajas:

- Elimina muchas interferencias habituales en la atomización mediante llama.

- La temperatura que se alcanza con el plasma es de 2 a 3 veces mayor que en la
llama y el tiempo de residencia de los átomos es unas 2 veces mayor, por lo que
la atomización es más completa y la señal es considerablemente mayor.
- El plasma presenta menor radiación de fondo.
- Tiene una temperatura más uniforme que la llama.
-La autoabsorción es menos importante que en la llama.

Inconvenientes:

- Alto precio del equipo

- Alto coste de mantenimiento y puesta a punto.