USO Y APLICACIÓN DEL MICROSCOPIO ÓPTICO EN BIOLOGÍA CELULAR

Juan J. Bolaño & Luis S. Alvarez

Estudiantes del Programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del

Atlántico Km 7 Antigua vía Puerto Colombia.
Resumen
Palabras claves: Microscopio, célula, Biología celular, objetivos.
Introducción
El microscopio es un instrumento fundamental en la Biología celular ya que ha ayudado a
los científicos a hacer grandes aportes a la biología celular y en general en la biología, (El
descubrimiento de las células, por ejemplo). Las células son el principal constituyente de la
vida y la gran mayoría de estas son imperceptibles ante el ojo humano, Por este motivo es
necesario que el biólogo conozca el correcto uso y aplicación del microscopio en el campo
de la biología celular. Existen varios tipos de microscopios con diversas características.
Pero en este trabajo solo se utilizará el microscopio óptico compuesto, el cual se compone
por dos conjuntos de piezas mecánicas y ópticas, Una de las partes ópticas más
importantes del microscopio son los objetivos los cuales permiten observar la muestra con
un mayor aumento de la imagen e invertida, el microscopio óptico del que se dispone en
este caso posee cuatro objetivos diferentes, tres objetivos secos: 4X, 10X, 40X, y un
objetivo húmedo o de inmersión: 100X. Con este trabajo se pretende lograr Conocer el uso
correcto del microscopio y sus diferentes aplicaciones en el campo de la biología celular,
como la determinación del diámetro del campo visual, área, volumen celular, diámetro del
campo visual, coordenadas de ubicación en la muestra y obtener la mejor nitidez y
resolución de imagen que el microscopio pueda brindar.

Metodología
Equipos Materiales Reactivos
Microscopio Frasco gotero Azul de metileno
Lanceta
Porta y cubreobjetos
Papel milimetrado
Bajalenguas
Cebolla
Muestra de sangre
Alcohol

En esta práctica se tomaron diferentes muestras de células para ser observadas en el

microscopio óptico compuesto con cada uno de los objetivos de este, entre estas muestras
están las células sanguíneas, células de la catafila de cebolla, células de la mucosa bucal
y un trozo de papel milimetrado para usar como referencia en las distintas mediciones que
se llevaran a cabo.
Células de la catafila de cebolla: Para obtener esta muestra se hizo uso de una cuchilla
para cortar un trozo de cebolla y extraer la membrana de la catafila, después esta
membrana se colocó sobre un portaobjetos y se realizó un montaje húmedo agregándole
agua y cubriéndola con el portaobjetos.
Células de la mucosa bucal: Para obtener esta muestra se utilizo un bajalenguas, con el
cual se hizo un frotis bucal, una vez se realizó el frotis, se esparció con cuidado la mucosa
bucal sobre el portaobjetos, luego se cubrió con el cubreobjetos.
Células de la sangre: Para la obtención de esta muestra se utilizó una lanceta luego de
haber desinfectado con alcohol el dedo medio de una mano, esparciendo de manera sutil
una gota de sangre sobre el portaobjetos, para luego dejarla secar y sobre ella agregar una
gota de azul de metileno y teñir las células, para posteriormente ser cubierta con un
portaobjetos.
Papel milimetrado: Se utilizó un trozo de papel milimetrado para obtener una referencia
del diámetro visual de los objetivos del microscopio, este trozo fue cortado observado en
montaje húmedo.

Resultados
Todas las muestras fueron centradas y observadas en un principio con el objetivo de 4X
con el cual se enfocó en el punto central de la muestra y se tomaron las coordenadas de
cada una de ellas, al cambiarse el aumento del objetivo las coordenadas no fueron
alteradas, por lo tanto, son las mismas en los diferentes aumentos. Luego de tomar las
fotos de las distintas muestras en los diferentes objetivos , se hizo uso de la herramienta
informática tpsDig2 para tomar las medidas de las células.
Figura 1. Muestras observadas en el microscopio botico compuesto con el objetivo de 4X

Figura 2. Muestras observadas en el microscopio óptico compuesto con el objetivo de 10X

Figura 3. Muestras observadas en el microscopio óptico compuesto con el objetivo de 40X

Figura 4. Muestras observadas en el microscopio óptico compuesto con el objetivo de 100X

Medidas (µm)
Aumentos Catafila de cebolla Mucosa bucal Sangre

Largo Ancho Largo Ancho Largo Ancho

276,96 64,11 20,46 20,06 10,6 9,39
357,04 69,92 25,19 28,77 9,39 10,6
4X 268,17 65,56 21,61 22,2 8,72 9,86
337,71 78,47 19,82 23,4 7,8 8,89
Promedio: 309,97 69,515 21,77 23,6075 9,1275 9,685
317,48 63,17 24,51 11,64 9,19 8,52
193,27 79,4 33,19 18,46 6,94 7,88
10X 297,08 59,56 20,66 18,53 8,04 6,69
230,12 59,52 24,11 16,94 6,69 8,83
Promedio: 259,4875 65,4125 25,6175 16,3925 7,715 7,98
290,19 55,96 26,88 19,68 9,78 10,67
174,03 61,51 13,88 28,66 7,56 8,66
40X 274,95 60,43 16,55 17,9 9,04 7,9
233,21 66,94 29.68 20,89 8,67 9,55
Promedio: 243,095 61,21 19,10333 21,7825 8,7625 9,195
Figura 6. Tabla de medidas tomadas con la herramienta tpsDig2
 Medidas (µm)
Aumentos Catafila de cebolla Mucosa bucal Sangre

Largo Ancho Largo Ancho Largo Ancho

Promedio 4X 309,97 69,51 21,77 23,6 9,12 9,68
Promedio 10X 259,97 65,41 25,61 16,39 7,71 7,98
Promeio 40X 243,09 61,21 19,1 21,78 8,76 9,195
Promedio general: 271,01 65,37667 22,16 20,59 8,53 8,951667
Desviacion: 34,77995 4,1501 3,272476 3,749413 0,732598 0,875733
Figura 7. Tabla con el promedio general de cada medida tomada con la herramienta
tpsDig2

Medidas
Catafila de cebolla Mucosa bucal Sangre
Largo Ancho Largo Ancho Largo Ancho
(271,01 ± 34,77)µm (65,37 ± 4,15)µm (22,16 ± 3,27)µm (20,59 ± 3,74)µm (8,53 ± 0,73)µm (8,95 ± 0,87)µm

Figura8. Promedio de longitud y ancho de cada uno de los tipos de célula estudiadas

Cálculos:
Catafila de cebolla
Área: (271,01 m)(65,37 m)  17.715,92 m2

 65,37  m 
2

Volumen: (271, 01 m)     909.561, 70 m

3

 2 
Mucosa bucal

 20,59 m 
2

   332,96 m
2
Área: 
 2 

4  20,59 m 
3

  80.194,55 m
3
Volumen: 
3  2 
Células sanguíneas

 8,95 m 
2

   20, 02 m
2
Área: 
 2 

4  8,95 m 
3

  375,37  m
3
Volumen: 
3  2 
Análisis y discusión
El uso del microscopio es fundamental en la biología celular, permite observar estructuras
que el ojo humano no puede distinguir a simple vista, por ejemplo, las células son
estructuras que en su mayoría son imperceptibles ante el ojo humano, para observarlas se
requiere del uso del microscopio, en este caso el microscopio óptico compuesto. Una de
las principales diferencias que se pueden observar cuando se alterna entre los diferentes
objetivos, es el hecho de que las células se vean de mayor o menor tamaño, pero este
aumento en el tamaño de las células es solo aparente, esto se puede evidenciar en la Figura
6. En donde se observa varias medidas tomadas en distintos aumentos del microscopio, en
donde la variación entre las medidas es considerable pero no tan lejanas. Estas medidas
pueden tomarse de una forma más directa pero menos exacta sabiendo el diámetro del
campo visual de cada uno de los objetivos. Estas medidas también pueden ser utilizadas
para determinar de manera indirecta el área y volumen de una célula asociándola a una
figura geométrica similar a su morfología, por ejemplo, se podrían asociar a las células de
la catafila de cebolla con un cilindro o rectángulo, y a las células de la mucosa bucal y
sanguíneas con una esfera o circulo, de esta manera se procedió en los cálculos expuestos
en los resultados. En base a estos cálculos se observa que las células de cebolla son mucho
más grandes que las células del epitelio bucal y las de la sangre respectivamente, siendo
las células de cebolla las más grandes y las células sanguíneas las más pequeñas, esto se
puede deber a la presencia de una vacuola en las células vegetales, que ayuda a mantener
la turgencia entre el citosol y la pared celular

Bibliografía:
 http://www.tiposdemicroscopio.com/

Anexos:
1. ¿Cuál es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?
2. ¿Qué importancia tiene el uso del microscopio en la biología celular?
3. ¿Porque es necesario utilizar aceite de inmersión al utilizar el objetivo del mismo nombre?
4. ¿Qué significa resolución, poder de resolución y amplificación, así mismo de que factores
depende cada uno de ellos?
5. Realiza una tabla comparativa de todos los microscopios incluyendo: fuente de
iluminación, condensador, longitud de onda, tipo de tinción, resolución, amplificación, tipo
de lentes, etc.
Solución:
1. Un microscopio compuesto se denomina compuesto porque compone la luz haciendo
que atraviese dos o más lentes para que aumenten la imagen. Encontramos una lente cerca
del objeto a observar conocida como lente objetivo, que amplía naturalmente la imagen del
objeto haciendo que la luz utilizada para observarlo atraviese un cristal curvo. En otra lente
llamada lente ocular es donde ocurre el verdadero aumento con un microscopio compuesto.
La lente ocular aumentará la imagen ya ampliada por la lente objetivo, haciendo que se vea
aún más grande. En cambio, se describe al microscopio simple como todo objeto que
aumenta el tamaño de una imagen mediante una sola lente. El microscopio más simple que
se haya podido inventar fue la lupa.
2. La importancia del microscopio reside en que nos permite ver a las células y a ciertas
estructuras intracelulares. También podemos hacer cortes histológicos de tejidos animales
o vegetales para ver su disposición en detalle, caracterizar la epidermis de un animal o de
una hoja, y visualizar un sinnúmero de estructuras más. Se podría decir que el microscopio
es uno de los elementos más importantes en los laboratorios dedicados a la investigación
biológica, pues el hecho de haber superado la limitante de la resolución del ojo humano le
ha abierto al hombre de ciencia un mundo hasta entonces ignorado, o cuanto mucho,
apenas imaginado.
3. En microscopía óptica, la inmersión (generalmente en aceite, aunque también se puede
efectuar en agua o con medios sólidos) es una técnica utilizada para aumentar el poder de
resolución de un microscopio. Esto se consigue mediante la inmersión en un aceite
transparente de alto índice refractivo tanto de la lente del objetivo como del espécimen a
observar, aumentando así la apertura numérica de la lente del objetivo. A diferencia del
aire, el aceite de inmersión tiene un índice de refracción similar al del vidrio del cubre
objetos. Al colocar aceite de inmersión entre el lente frontal del objetivo (diseñado para
usarse con aceite de inmersión) y el cubre objetos, el rango angular de los rayos difractados
capturados por los lentes se incrementan y, en efecto, incrementa la A. N. del objetivo.
4.
Resolucion Poder de resolucion Aumento
El poder de resolución es la
capacidad de todo sistema
óptico de percibir detalles. A El grado en el cual el espécimen es
menor límite de resolución, agrandado en el microscopio. Por
Es la capacidad que tiene un
mayor poder de resolución. ejemplo, un objetivo 40X y un ocular
sistema óptico de aislar dos
Por eso, el microscopio al 10x (sin módulos intermedios)
puntos que se encuentran
tener menor límite de brindan un aumento total de 400X. El
muy próximos entre sí, de
resolución tiene mayor poder aumento final del espécimen bajo el
manera que se puedan ver
de resolución que el ojo microscopio está determinado tanto
individualizados uno del otro.
humano, es decir, percibe por el poder de aumento del objetivo
La riqueza de detalles que
más detalles. El poder de como el aumento del ocular (y
5.
microscopio optico compuesto
Fuente de iluminación. lámpara incandescente de tungsteno sobrevoltada; en versiones más modernas con leds.

está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano
condensador.
de la preparación, formando un cono de luz con el mismo ángulo que el del campo del objetivo.
longitud de onda. es aproximadamente la mitad de la longitud de onda de la luz azul.
tipo de tinción.

resolucion. 0,2 micrometros

amplificación. 4x, 10x, 40x, 100x
tipo de lentes lentes convergentes

microscopio de luz ultra violeta

La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la absorción de esa luz por las moléculas
Fuente de iluminación.
de la muestra.
los elementos ópticos de estos microscopios están hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos
condensador.
iluminados.
longitud de onda. La fuente de luz ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm
tipo de tinción.

resolucion. 100nm
amplificación.
tipo de lentes

microscopio de luz polarizada

lampara incandescente de tungsteno sobrevoltada; en versiones
fuente de iluminacion
mas modernas con leds.
esta formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concretar
condensador los rayos luminosos sobre el plano de la preparacion, formando un
cono de luz con el mismo angulo que el del campo del objetivo.
longitud de onda la mitad de la longitud de onda de la luz
tipo de tincion
resolucion 0,2 micrometros
amplificacion
tipo de lentes
 microscopio de campo oscuro
Fuente de iluminación. utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre la muestra.

Los condensadores que se emplean en microscopía de campo oscuro son de dos tipos: del tipo
condensador.
paraboloide (tiene una superficie espejada), y los del tipo cardioide, con dos superficies espejadas.
longitud de onda. la mitad de la longitud de onda de la luz azul
tipo de tinción.

resolucion. 0,2 micrometros

amplificación.
tipo de lentes

microscopio de contraste de fases

La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión y queda fuera
Fuente de iluminación.
de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra.
condensador. El condensador presenta un disco que proyecta un haz de luz con forma anular.

longitud de onda. 1/4 de la longitud de onda de la luz con la que se observa.

tipo de tinción.

resolucion. 0,2 micrometros

amplificación.
tipo de lentes

microscopio confocal
utiliza iluminacion puntuaal y un pinhole en un plano optico
conjugado en frente del detector para eliminar la informacion que
fuente de iluminacion
esta fuera del plano focal. Solo la luz que esta dentro de este plano
puede ser detectada.
esta fprmado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concretar
condensador los rayos luminosos sobre el plano de la preparacion, formando un
cono de luz con el mismo angulo que el del campo del objetivo.
longitud de onda
tipo de tincion
resolucion es posible alcanzar resoluciones de 0,14um en horizontal y 0,23um en vertical
amplificacion
tipo de lentes
microscopio confocal laser de barrido
la iluminación se produce por lámparas de mercurio. No usa filtros y se observa en placas fotográficas. La
Fuente de iluminación.
variedad de fluorescencia, si usa filtros, y la observación es directa.
está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la
condensador.
preparación, formando un cono de luz con el mismo ángulo que el del campo del objetivo.
longitud de onda. utilza un laser y no posee una longitud de onda determinado.
tipo de tinción.

resolucion. es posible alcanzar resoluciones de 0.14 µm en horizontal y 0.23 µm en vertical

amplificación.
tipo de lentes
 microscopio electronico de transmision
Fuente de
utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto.
iluminación.
Los dos condensadores son capaces de dar una amplia gama de intensidad
ajustando el cañón electrónico. Esto reduce el área iluminada en la muestra.
condensador. Sin embargo, otras partes de la muestra también sufren los efectos del haz
electrónico. El primer condensador reduce la imagen de la fuente mientras
que el segundo codensador obtiene la adecuada intensidad de iluminación.

longitud de un microscopio electrónico de transmisión operando a 200 keV la longitud

onda. de onda es de 2.5 pm.
tipo de tinción.

resolucion. 0,2 nanometros

amplificación. pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.
tipo de lentes lentes electromagnéticas.

microscopio electronico
Fuente de usa electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos
iluminación. diminutos.
condensador.
longitud de
utiliza la longitud de onda de los electrones
onda.
tipo de tinción.

resolucion. 0,2 nanometros

amplificación.
tipo de lentes lentes electromagnéticas.

Microscopio electrónico de barrido

Fuente de
Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen.
iluminación.
Los dos condensadores son capaces de dar una amplia gama de intensidad ajustando el
cañón electrónico. Esto reduce el área iluminada en la muestra. Sin embargo, otras
condensador. partes de la muestra también sufren los efectos del haz electrónico. El primer
condensador reduce la imagen de la fuente mientras que el segundo coudensador
obtiene la adecuada intensidad de iluminación.
longitud de La longitud de onda de los electrones en un microscopio electrónico de barrido a 10 kV
onda. es entonces de 12.3 x 10-12 m (12.3 pm)
tipo de tinción.

resolucion. entre 3 y 20 nm
amplificación. pueden ampliar los objetos 200.000 veces o más.
tipo de lentes lentes electromagnéticas.
 Microscopio de sonda de barrido
Fuente de
utiliza una sonda que recorre la superficie del objeto a estudiar.
iluminación.

condensador.

longitud de
utiliza la longitud de onda de los electrones.
onda.
tipo de tinción.

resolucion. 0,2 nanometros

amplificación.
tipo de lentes

Microscopio de efecto túnel

Fuente de
utiliza una sonda que recorre la superficie del objeto a estudiar.
iluminación.

condensador.

longitud de
utiliza la longitud de onda de los electrones.
onda.
tipo de tinción.

resolucion. por debajo de los 2 angstrom

amplificación.
tipo de lentes

Microscopio de fuerza atómica

Fuente de Al rastrear una muestra, es capaz de registrar continuamente su topografía mediante
iluminación. una sonda o punta afilada de forma piramidal o cónica.
condensador.
longitud de
onda. el laser es infrarojo tiene una longitud de onda de 630 nm
tipo de tinción.

resolucion. Algunos de los mejores valores para AFM son de 3 nm

amplificación.
tipo de lentes