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CURSO: Laboratorio Clínico Clase 9: Urocultivo.
CURSO: Laboratorio Clínico
Clase 9: Urocultivo.

Introducción

Introducción La meta del Laboratorio de Microbiología en el manejo de la Infección Tracto Urinario (ITU)

La meta del Laboratorio de Microbiología en el manejo de la Infección Tracto Urinario (ITU) es reducir la morbilidad y la mortalidad a través del diagnostico exacto y a tiempo con la apropiada prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos.

¿Que es una Infección Urinaria (IU)?

¿Que es una Infección Urinaria (IU)?  Infección Urinaria : es la invasión microbiana de cualquiera
  • Infección Urinaria : es la invasión microbiana de cualquiera de los tejidos que se extienden desde el orificio uretral hasta la corteza renal

¿Que es una Infección Urinaria (IU)?  Infección Urinaria : es la invasión microbiana de cualquiera

El laboratorio de Microbiología en las Infecciones Urinarias (IU)

Infecciones del Tracto urinario

El laboratorio de Microbiología en las Infecciones Urinarias (IU) Infecciones del Tracto urinario Cultivo de Orina

Cultivo de Orina

El laboratorio de Microbiología en las Infecciones Urinarias (IU) Infecciones del Tracto urinario Cultivo de Orina

BACTERIURIA SIGNIFICATIVA

Bacteriuria Significativa

Bacteriuria Significativa  Bacteriuria: La presencia de bacterias en la orina, independientemente de su origen. 
  • Bacteriuria: La presencia de bacterias en la orina, independientemente de su origen.

  • Bacteriuria Significativa (BS): concepto de laboratorio que se refiere al hallazgo (por técnicas microbiológicas), en una orina correctamente obtenida y conservada, de un numero de bacterias que indique que existe una infección del tracto urinario y que no es solo contaminación.

BACTERIURIA SIGNIFICATIVA

Infección

BACTERIURIA SIGNIFICATIVA Infección Contaminación ADULTOS ≥ 100,000 ufc/ml Chorro medio NIÑOS ≥ 10,000 ufc/ml Excluir contaminación

Contaminación

ADULTOS

≥ 100,000 ufc/ml

Chorro medio

NIÑOS

≥ 10,000 ufc/ml

Excluir contaminación vaginal

Bacteriuria Significativa

Bacteriuria Significativa Stam y col . N Engl J Med. 307:463-468, 1982  Orina de mujeres

Stam y col.

N Engl J Med. 307:463-468, 1982

  • Orina de mujeres con signos de disuria y bacteriuria, con 10 2 a 10 5 UFC/ml. estaban asociados a clínica de ITU

  • Microorganismos: Escherichia coli y Staphylococcus saprophyticus

Bacteriuria Significativa Stam y col . N Engl J Med. 307:463-468, 1982  Orina de mujeres

Contaminación

Contaminación  Bajo recuento o varias especies bacterianas crecen en los cultivos de orina.  Microorganismos
  • Bajo recuento o varias especies bacterianas crecen

en los cultivos de orina.

  • Microorganismos contaminantes:

    • Lactobacillus

    • Especies de Corynebacterium

    • Gardnerella

    • Estreptococs α-hemoliticos

  • Confirmar ITU por cateterizacion o punción suprapúbica.

  • Bacteriuria: recuentos bajos

    Bacteriuria: recuentos bajos  50% de mujeres con ITU sintomático tienen ≥ 10 ufc/ml.  Fase
    • 50% de mujeres con ITU sintomático tienen ≥ 10 5 ufc/ml.

    • Fase temprana de ITU

    • Recuentos entre 10 2 y 10 4 ufc/ml tienen bacterias típicas de ITU (E. coli, S. saprophyticus).

    • La bacteria entra transitoriamente a la vejiga.

    • Incremento de flujo urinario.

    • Recuento significativo ≥ 10 2 ufc/ml en pacientes sintomático.

    Bacteriuria Asintomática

    Bacteriuria Asintom á tica  Dos cultivos de orina (chorro medio) con más de 100,000 UFC/ml
    • Dos cultivos de orina (chorro medio) con más de 100,000 UFC/ml con el mismo microorganismo.

      • Con o sin piuria

      • Ausencia de síntomas de infección.

  • Importantes en embarazadas, ancianos y pacientes intervenidos urologicamente

  • Bacteriuria Asintom á tica  Dos cultivos de orina (chorro medio) con más de 100,000 UFC/ml

    Clasificación de IU

    Clasificación de IU  Por su localización  Por su evolución • Por su origen •
    • Por su localización

    • Por su evolución

    Por su origen Por su características clínicas

    Clasificación de IU  Por su localización  Por su evolución • Por su origen •

    Por su gravedad

    Clasificación de IU  Por su localización  Por su evolución • Por su origen •

    Por su gravedad

    Por su gravedad  ITU no complicado: infección bacteriano o por levadura en un tracto urinario
    • ITU no complicado: infección bacteriano o por levadura en un tracto urinario normal estructuralmente y neurológicamente.

    • ITU complicada: infección bacteriano o por levadura en un tracto urinario con anormalidades

    funcionales o estructurales.

    • sonda urinaria

    • Calculo urinario

    • Transplante renal

    • Diabetes mellitus

    Sintomatología

    Sintomatología  Del Tracto Bajo (Cistitis) – Disuria (ardor al orinar) – Poliaquiuria (frecuencia y urgencia)
    • Del Tracto Bajo (Cistitis)

    Disuria (ardor al orinar) Poliaquiuria (frecuencia y urgencia) Tenesmo vesical (poco volumen de orina) Incontinencia

    • Del Tracto Alto (Píelonefritis)

    Fiebre Dolor lumbar Malestar general, dolor de cabeza, nausea.

    Epidemiología

    Epidemiología Grupo de Edad % V/M Factor de Riesgo Anormalidad anatómica Neonatal 1.0 1.5:1 o funcional
           

    Grupo de Edad

    %

    V/M

    Factor de Riesgo

         

    Anormalidad anatómica

    Neonatal

    • 1.0 1.5:1

    o funcional

         

    Anormalidades

    Preescolar

    1.5 3.0

    1:10

    congénitas

    Escolar

     
    • 1.2 1:30

    Reflujo vesicoureteral

    Reproductiva

     
    • 2.5 1:50

    Actividad sexual

    Geriátrica

    10 - 30

    1:1

    Incontenecia, hipertrofia prostática, cirugía.

           

    Etiología de las IU

    Etiología de las IU  Infecciones por Gram-negativos – Escherichia coli – Klebsiella spp. – Proteus
    • Infecciones por Gram-negativos Escherichia coli Klebsiella spp. Proteus spp. Enterobacter spp. Serratia spp. Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumannii

    Etiología de las IU  Infecciones por Gram-negativos – Escherichia coli – Klebsiella spp. – Proteus

    Etiología de las IU

    Etiología de las IU  Infecciones por Gram-positivos – Staphylococcus saprophyticus – Enterococcus faecalis – Corynebacterium
    • Infecciones por Gram-positivos Staphylococcus saprophyticus Enterococcus faecalis Corynebacterium urealyticum Aerococcus urinae Streptococcus agalactiae Staphylococcus aureus Candida spp.

    Etiología de las IU  Infecciones por Gram-positivos – Staphylococcus saprophyticus – Enterococcus faecalis – Corynebacterium
    Bacterias inusuales en los urocultivos
    Bacterias inusuales en los
    urocultivos
    • Ureaplasma urealyticum

    • Mycoplasma hominis

    • Gardnerella vaginalis

    • Bacteroides fragilis

    • Haemophilus influenzae

    • Corynebacterium urealyticum

    Fairley K F, and Birch D F. Detection of Bladder Bacteriuria in Patients with

    Acute urinary Symptoms. J. Infect Dis, 159 (2).: 226-231, 1989.

    METODOS DIAGNOSTICO DE

    LABORATORIO

    METODOS DIAGNOSTICO DE LABORATORIO CULTIVO DE ORINA

    CULTIVO DE ORINA

    METODOS DIAGNOSTICO DE LABORATORIO CULTIVO DE ORINA

    Cultivos de Orina: Indicaciones

    Cultivos de Orina: Indicaciones  Cultivo no siempre es necesario en mujeres con disuria y piuria
    • Cultivo no siempre es necesario en mujeres con disuria y piuria (ITU no complicada).

    • Cultivos son indicadas en las siguientes situaciones:

      • ITU complicada o características clínicas inciertas.

      • ITU en pasadas 3 semanas indicando posible recaída

      • Síntomas por mas de 7 días

      • Reciente hospitalización, indicando posible IIH

      • Embarazo

      • Diabetes

    Obtención de Muestras

    Obtención de Muestras Tipo de Muestras Métodos invasivos Métodos no invasivos Punción Cateterización Chorro Bolsa Sonda
    Tipo de Muestras Métodos invasivos Métodos no invasivos Punción Cateterización Chorro Bolsa Sonda suprapúbica vesical medio
    Tipo de
    Muestras
    Métodos
    invasivos
    Métodos no
    invasivos
    Punción
    Cateterización
    Chorro
    Bolsa
    Sonda
    suprapúbica
    vesical
    medio
    colectora
    urinaria

    Rev Chil Infect (2001); 18 (1): 57 - 63

    Uso de bolsa colectoras (adhesivas)

    Uso de bolsa colectoras (adhesivas)  Sensibilidad del 100%  Especificidad 14 -84% Si cultivo de
    • Sensibilidad del 100%

    • Especificidad 14 -84%

    Si cultivo de orina es

    negativo descarta ITU

    Si cultivo es positivo

    requiere descartar con

    cateterización o punción suprapúbica

    Uso de bolsa colectoras (adhesivas)  Sensibilidad del 100%  Especificidad 14 -84% Si cultivo de

    A method comparison study to assess the reliability of urine collection pads as a means of obtaining urine specimens from non-toilet-trained children for microbiological examination. Farrell M. y col. J Adv Nurs 2002 Feb;37(4):387-393.

    Métodos Invasivos

    Métodos Invasivos Cateterización Punción suprapúbica
    Métodos Invasivos Cateterización Punción suprapúbica

    Cateterización

    Métodos Invasivos Cateterización Punción suprapúbica

    Punción suprapúbica

    Conservación de la muestra

    Conservación de la muestra  Hasta 2 horas a temperatura ambiente.  Mantener la muestra en
    • Hasta 2 horas a temperatura ambiente.

    • Mantener la muestra en refrigeración a 4 o C (hasta por 24 horas).

    • NO CONGELAR

    • En caso de tener que transportarla por espacios de tiempo mayores de 1 hora se recomienda el uso de recipientes térmicos con hielo para mantener la muestra fría.

    • Conservadores no recomendable (ac. borico).

    Recolección de la muestra

    Recolección de la muestra  Condiciones:  NO ESTAR RECIBIENDO ANTIBIOTICO  Suspender de 3 a
    • Condiciones:

      • NO ESTAR RECIBIENDO ANTIBIOTICO

      • Suspender de 3 a 5 días antes del cultivo.

    Recolección de la muestra  Condiciones:  NO ESTAR RECIBIENDO ANTIBIOTICO  Suspender de 3 a

    Detección del Poder

    Residual Antimicrobiano

    (PAR test)

    Cultivo de orina (Urocultivo)

    Cultivo de orina (Urocultivo)  Cuantificar el numero de bacterias por ml (UFC/ml)  Un UFC
    • Cuantificar el numero de bacterias por ml (UFC/ml)

    • Un UFC representa una bacteria viable en la orina.

    Cultivo de orina (Urocultivo)  Cuantificar el numero de bacterias por ml (UFC/ml)  Un UFC

    Staphylococcus

    Cultivo de orina (Urocultivo)  Cuantificar el numero de bacterias por ml (UFC/ml)  Un UFC

    El numero de UFC es inferior al numero real de bacterias en al muestra

    Técnica de cultivo: asa calibrada

    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar
    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar
    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar

    Muestra de orina

    Volumen del

    asa 0.001 ml.

    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar
    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar

    Placa de agar CLED

    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar
    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar
    Técnica de cultivo: asa calibrada Muestra de orina Volumen del asa 0.001 ml. Placa de agar

    Técnica de cultivo: asa calibrada

    Técnica de cultivo: asa calibrada  El volumen de orina en el asa calibrada depende: •
    • El volumen de orina en

    el asa calibrada depende:

    El ángulo con el

    cual el asa es introducido en la

    orina.

    El diámetro del recipiente de la

    muestra.

    Técnica de cultivo: asa calibrada  El volumen de orina en el asa calibrada depende: •

    Recuento de Colonias (UFC/ml)

    Recuento de Colonias (UFC/ml)  El asa calibrada carga 0.001 ml de orina (factor 1000) 
    Recuento de Colonias (UFC/ml)  El asa calibrada carga 0.001 ml de orina (factor 1000) 
    • El asa calibrada carga 0.001 ml de orina (factor 1000)

    • El numero de colonias es 100.

    CALCULOS:

    RC: 100 x 1000 RC: 100,000 UFC/ml.

    ¿Que medios de cultivo utilizar?

    ¿Que medios de cultivo utilizar? Agar Sangre y Agar MacConkey

    Agar Sangre y Agar MacConkey

    ¿Que medios de cultivo utilizar? Agar Sangre y Agar MacConkey
    ¿Que medios de cultivo utilizar? Agar Sangre y Agar MacConkey
    ¿Que medios de cultivo utilizar? Agar Sangre y Agar MacConkey

    Agar CLED

    Agar CLED Usado para el aislamiento, recuento y identificación presuntiva de uropatógenos • C isteina: para

    Usado para el aislamiento, recuento y identificación presuntiva de uropatógenos

    Cisteina: para engrandecer el crecimiento de coliformes

    dependientes de cisteina

    (“dwarf colony”)

    Lactosa: fermentación de lactosa

    Deficiente en Electrólitos:

    previene el swarming del

    Proteus

    Agar CLED Usado para el aislamiento, recuento y identificación presuntiva de uropatógenos • C isteina: para

    Colonia lactosa positiva

    Medios cromogénicos

    Medios cromogénicos Chromogenic UTI Medium CPS ID2 CHROMagar Orientation
    Medios cromogénicos Chromogenic UTI Medium CPS ID2 CHROMagar Orientation

    Chromogenic UTI Medium

    CPS ID2

    CHROMagar Orientation

    Medios comerciales

    Medios comerciales
    Medios comerciales

    ¿Cuándo utilizar agar chocolate?

    ¿Cuándo utilizar agar chocolate? • Utilizar para el aislamiento de microorganismos exigentes. • Especies de Haemophilu

    Utilizar para el aislamiento de microorganismos exigentes.

    Especies de Haemophilus.

    Utilidad en el diagnostico de ITU en niños con anormalidades del tracto urinario.

    ¿Cuándo utilizar agar chocolate? • Utilizar para el aislamiento de microorganismos exigentes. • Especies de Haemophilu

    Agar Chocolate

    Tiempo de incubación del cultivo de orina: 1 dia vs 2 dias

    RESULTADOS:

    Un día de incubación es confiable si:

    (1) las muestras se incuban por un total de 24 horas

    (2) las muestras con < de 10 4 ufc/ml se incuban por un nnndia mas para mejorar el recuento

    (3) Pacientes con sospecha de funguria, incubar por un nnnminimo de 2 días

    Diagnostico de Laboratorio de las

    Infecciones del Tracto Urinario

    Diagnostico de Laboratorio de las Infecciones del Tracto Urinario Pruebas de Tamizaje Métodos rápidos para predecir

    Pruebas de Tamizaje

    Métodos rápidos para

    predecir resultados

    Métodos para predecir resultados

    Métodos para predecir resultados  Microscopia de la orina – Leucocitos – Bacterias  Pruebas bioquímicas
    • Microscopia de la orina

    Leucocitos Bacterias

    • Pruebas bioquímicas

    Leucocito esterasa Nitrito urinario

    Orina centrifugada: Sedimento

    Urinario

    Orina centrifugada: Sedimento Urinario  Porcentaje de sedimento recobrado:  Hematies – 60% son recobrados en
    • Porcentaje de sedimento recobrado:

      • Hematies 60% son recobrados en el sedimento

      • Leucocitos 73% son recobrados en el sedimento

      • Células Epiteliales 84% son recobrados en el sedimento

      • Cilindros 88% son recobrados en el sedimento

      • Bacterias 40% son recobradas en el sedimento

    ¿Porque tiene el mayor error analítico?

    Volumen no constante de la Muestra

    Tiempo y Velocidad No siempre ideal

    Subjetividad y cansancio

    Hannemann-Pohlin. Chem Lab Medicine, 1999

    Bacteriuria: evaluación microscópica

    Bacteriuria: evaluación microscópica  ¿En que tipo de muestra? – Sedimento de orina centrifugada – Orina
    • ¿En que tipo de muestra?

    Sedimento de orina centrifugada Orina no centrifugada

    • ¿Coloreado Gram o no coloreado?

    • ¿Cuantas bacterias son muchas?

    Bacteriuria: evaluación microscópica  ¿En que tipo de muestra? – Sedimento de orina centrifugada – Orina
    Bacteriuria: evaluación microscópica  ¿En que tipo de muestra? – Sedimento de orina centrifugada – Orina

    Coloración de Gram

    Coloración de Gram  Preclasificar del microorganismo a aislar :  El tipo ,  La
    • Preclasificar del microorganismo a aislar :

      • El tipo,

      • La agrupación y

      • La reacción al Gram

  • Permite determinar la cantidad

  • Coloración de Gram  Preclasificar del microorganismo a aislar :  El tipo ,  La

    Una 1 bacteria/campo de inmersión en el Gram de una

    gota de orina sin centrifugar, correlaciona con un cultivo de mas de 10 5 UFC/ml. de orina.

    • Presencia de reacción inflamatoria y contaminación con secreción vaginal.

    Sensibilidad: 96.0% Especificidad: 99.2% VPN: 98.7% VPP: 97.67% Recuento de colonias de 10 a 10 UFC/ml

    Sensibilidad:

    96.0%

    Especificidad: 99.2%

    VPN: 98.7% VPP: 97.67%

    Recuento de colonias de 10 4 a 10 5 UFC/ml Observación de > 1 bacteria/campo de inmersión

    HOSPITAL SAN BARTOLOME
    HOSPITAL SAN BARTOLOME
    HOSPITAL SAN BARTOLOME
    HOSPITAL SAN BARTOLOME
    HOSPITAL SAN BARTOLOME
    HOSPITAL SAN BARTOLOME
    HOSPITAL SAN BARTOLOME
    HOSPITAL SAN BARTOLOME

    Valor predictivo de las pruebas de

    laboratorio en el diagnostico de UTI

    en niños

    Prueba

    Sensibilidad ( %)

    Especificidad (%)

    Tiras de orina:

     

    Nitrito

    50

    98

    Leucocito esterasa

    83

    84

    Leucocito esterasa o nitrito

    88

    93

    Sedimento (leucocitos > 5 / campo 40x)

    67

    79

    Contaje hemocitometro ( > 10 / mm 3 )

    77

    89

    Coloración de Gram

    93

    95

    INTERPRETACION DEL UROCULTIVO

    INTERPRETACION DEL UROCULTIVO Agar McConkey Agar Sangre Relevancia microbiológica del crecimiento BACTERIURIA SIGNIFICATIVA IDENTIFICACION ANTIBIOGRAMA

    Agar McConkey

    INTERPRETACION DEL UROCULTIVO Agar McConkey Agar Sangre Relevancia microbiológica del crecimiento BACTERIURIA SIGNIFICATIVA IDENTIFICACION ANTIBIOGRAMA

    Agar Sangre

    Relevancia microbiológica del crecimiento

    INTERPRETACION DEL UROCULTIVO Agar McConkey Agar Sangre Relevancia microbiológica del crecimiento BACTERIURIA SIGNIFICATIVA IDENTIFICACION ANTIBIOGRAMA

    BACTERIURIA SIGNIFICATIVA

    INTERPRETACION DEL UROCULTIVO Agar McConkey Agar Sangre Relevancia microbiológica del crecimiento BACTERIURIA SIGNIFICATIVA IDENTIFICACION ANTIBIOGRAMA

    IDENTIFICACION

    ANTIBIOGRAMA

    INTERPRETACION DEL UROCULTIVO Agar McConkey Agar Sangre Relevancia microbiológica del crecimiento BACTERIURIA SIGNIFICATIVA IDENTIFICACION ANTIBIOGRAMA
    INTERPRETACION DEL UROCULTIVO Agar McConkey Agar Sangre Relevancia microbiológica del crecimiento BACTERIURIA SIGNIFICATIVA IDENTIFICACION ANTIBIOGRAMA

    ¿Que datos mínimos son importantes

    para la interpretación ?

    ¿Que datos mínimos son importantes para la interpretación ?  Método de recolección de la muestra.
    • Método de recolección de la muestra.

      • Chorro medio

      • Punción suprapúbica

      • Cateterización

  • Paciente presenta síntomas.

  • Volumen sembrado.

  • Si el aislamiento es un probable patógeno o contaminante.

  • ¿Como debemos interpretar un

    cultivo de orina ?

    ¿Como debemos interpretar un cultivo de orina ?  La mayoría de los cultivos de orina
    • La mayoría de los cultivos de orina son fáciles de interpretar.

      • Ningún crecimiento

      • Contaminación grosera (mas de 3 tipos de bacterias).

      • Cultivos puros de uropatógenos (> 10 5 ufc/ml).

      • Cultivos puro con bajos recuentos (< 10 5 ufc/ml) de muestra obtenidas por punción suprapúbica o por cateterización transitoria.

  • Cultivos de orina con flora mixta y recuentos variables puede ser difícil interpretar.

  • Guía General en la Interpretación de los cultivos de orina

    Guía General en la Interpretación de los cultivos de orina  Una sola especie de Enterobacteria
    • Una sola especie de Enterobacteria recuperada a > de 10 5 ufc/ml de orina: con pacientes sintomático para ITU, 95% de probabilidad de bacteriuria

    verdadera.

    • Una sola especie de Enterobacteria recuperada entre 10 4 10 5 ufc/ml de orina: con pacientes sintomático para ITU, 33% de probabilidad de bacteriuria verdadera.

    Guía General en la Interpretación de los cultivos de orina

    Guía General en la Interpretación de los cultivos de orina  Uropatogenos Gram positivos , hongos,
    • Uropatogenos Gram positivos , hongos, bacterias exigentes, se recuperan frecuentemente en recuentos bajos 10 4 10 5 ufc/ml de orina.

    • Comensales de la uretra recuperados a < 10 4 ufc/ml

      • Estafilococos coagulasa negativo (excepto S. saprophyticus)

      • Estreptococo viridans y estreptococos no hemoliticos

      • Difteroides (Corynebacterium, excepto C. urealyticum)

      • Lactobacillus

    Criterios Practicas de Bacteriuria Significativa

    10 2 UFC/mL de E. coli

    o 10 5 UFC/mL de

    Enterobacterias en mujeres sintomáticas

    10 3 UFC/mL en varones sintomáticos

    10 5 UFC/mL en pacientes asintomáticos en dos muestras sucesivas

    10 3 UFC/mL en pacientes portadores de catéter sintomático

    Cualquier recuento obtenido por punción

    suprapúbica

    ¿Como debemos informar un resultado de cultivo de orina ?

    ¿Como debemos informar un resultado de cultivo de orina ?  Si el cultivo es POSITIVO
    • Si el cultivo es POSITIVO, reportar el recuento de colonias de cada uropatogeno separadamente seguido por la identificación con la susceptibilidad.

    • Si el cultivo es NEGATIVO, ha de completarse señalando el limite de detección,

      • CULTIVO NEGATIVO (< 1000 UFC/ml)

    si se utilizo una asa de 0.001 ml

    • CULTIVO NEGATIVO (< 100 UFC/ml)

    si se utilizo una asa de 0.01 ml