INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO
REACCIONES DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

INTRODUCCIÓN coloración producida por la ninhidrina es independiente

de la coloración original del aminoácido
Las reacciones de identificación y cuantificación para
aminoácidos y proteínas tienen como fundamento las Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para
características químicas que les confieren sus grupos R, aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la
reaccionaran o no con determinados reactivos prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que
dependiendo de la naturaleza de sus grupos R contienen no hay proteinas, pero si hay aminoacidos libres.
grupos arilo, grupos indol, presencia de grupos
sulfhídrico, etc. Reaccion de Hopkins-Cole. Es específica del grupo
indol característico del Triptófano. El anillo del indol se
OBJETIVOS hace reaccionar con ácido Glioxálico en presencia de
ácido Sulfúrico concentrado para formar un compuesto
 Identificación de aminoácidos por medio de violeta que se forma en la interfase entre la solución de
reacciones coloridas. proteína y el ácido sulfúrico. La estructura exacta del
 Identificar algunos grupos R presentes en compuesto violeta no se conoce, pero parece estar
aminoácidos. relacionado con el producto de condensación del
aldehído del ácido Glioxálico con los nitrógenos de dos
RESULTADOS anillos indólicos, como se muestra en la reacción, ya que
también se pueden formar complejos con otros
aldehídos.
Grupos - Ninhidrina Hopkins-
SH Cole
La reacción de Hopkins Cole es positiva sólo para las
proteínas que contienen Triptófano. Se supone que el
Gelatina    ácido concentrado hidroliza las proteínas en la interfase
Peptona    liberando el Triptófano para dar el producto violeta. Sin
Albumina    embargo, el Triptófano puro en solución no da positiva la
Tirosina    reacción, a menos que se agreguen agentes oxidantes,
Triptófano    por lo que es de suponer que el Triptófano de las
Fenilalanina    proteínas no se libera como tal, por lo cual la reacción
Cisteína    presentada es sólo parcialmente correcta.
Agua   
Reaacion de Millon. Es específica para el grupo
Reacción Reacción Reacción fenólico por lo tanto, la dan positiva todas las sustancias
Millon Xantoproteica de Biuret que poseen esta función, como la Tirosina y todas las
proteínas que contengan Tirosina. El primer paso de la
Gelatina    reacción de Millon consiste en la nitración del anillo
Peptona    fenólico de la Tirosina, por el ácido Nítrico del reactivo.
La Tirosina nitrada forma complejos con los iones
Albúmina   
Mercurioso Hg (I) y Mercúrico Hg (II) del reactivo
Aspartame    produciendo un precipitado rojo o una solución roja,
Tirosina    ambos resultados positivos.
Triptófano   
Fenilalanina    Algunas proteínas pueden formar el precipitado rojo
Agua    desde el inicio, mientras que otras primero forman un
precipitado blanco, que se debe calentar para dar el
color rojo indicativo de la presencia de Tirosina.
FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES Cualquier sustancia con un grupo fenólico dará positiva
la reacción de Millon y puede interferir con la detección
Reacción del plomo para la cisteína. Cuando los de Tirosina.
aminoácidos y las proteínas que contienen grupos
tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el Reaccion Xantoprotéica. Algunos aminoácidos como
azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este Fenilalanina, Tirosina y Triptófano, tienen anillo
sulfuro puede detectarse por la formación de un aromáticos derivados de benceno y por ello tiene las
precipitado negro de sulfuro de plomo por adición de propiedades químicas del benceno y sus derivados. Una
acetato de plomo. Los grupos tioles también reaccionan de estas propiedades es la reacción de nitración del
con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso anillo bencénico con ácido Nítrico concentrado. Los
de amoníaco para dar un complejo de color rojo. anillos Benceno de Tirosina y Triptófano están activados
y reaccionan fácilmente, mientras que el benceno de la
Reacción de la ninhidrina. La ninhidrina es un Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y
poderoso agente y reactivo común para visualizar las reacciona con más dificultad.
bandas de separación de aminoácidos por cromatografía
o electroforesis, también es utilizada con fines Reaccion de Biuret. La reacción debe su nombre al
cuantitativos para la determinación de aminoácidos. Biuret, una molécula formada a partir de dos de
Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que
encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía da positiva esta reacción la presencia de proteínas en
de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado una mezcla se puede determinar mediante la reacción
púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en

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solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La

reacción se basa en la formación de un compuesto de
color violeta, debido a la formación de un complejo de
coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte
de los enlaces peptídicos presentando un máximo de
absorción a 540 nm.
La producen los péptidos y las proteínas, pero no los
aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace
peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los
aminoácidos.
Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali
concentrado, se forma una sustancia compleja
denominada Biuret. Debido a dicha reacción fue que
observamos que al agregar el reactivo de sulfato de
cobre más solución de proteína precipitó una coloración
violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad
azul cielo reacción positiva. Precipitando a una
coloración amarilla la reacción nos torna negativa al no
haber presencia de proteínas.
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
 Reacción del plomo para la cisteína: Es una
prueba para identificación de aminoácidos con
grupos sulfhídrico, específica para cisteína, al dar
positivo tanto en peptona como en albumina, nos
indicó la presencia de este aminoácido en dichas
proteínas. En el caso de la cisteína, los grupos tiol
de dos moléculas de cisteína se han oxidado para
formar un grupo disulfuro de modo que se
establece un enlace covalente transversal entre
ellas. (Rivera et al, 2001) La reacción se lleva a
cabo en un medio alcalino, es decir en presencia de
NaOH, el cual permite la separación del azufre de
la estructura del aminoácido. Al añadir una sal
soluble en agua, como lo fue el acetato de plomo, el
azufre se combina con el plomo para producir un
precipitado de color negro que corresponde a
sulfuro de plomo.
 Reacción ninhidrina: al ser una prueba que
identifica grupos amino libres en un compuesto, dio
positivo para todos los aminoácidos y proteínas,
pero no para el agua, debido a que estas presentan
un grupo amino libre, el cual reacciona con la
ninhidrina, el cual es un agente oxidante fuerte que
efectúa la descarboxilación oxidativa de los
aminoácidos, y forman dióxido de carbono,
amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de
carbono menos que el compuesto original. El
amoníaco y la hidrindantina así formadas
reaccionan con una segunda molécula de ninhidrina
que da lugar a la formación de un pigmento color
azul o violeta, del que solamente el átomo de
nitrógeno pertenece al aminoácido (Lehninger,
1979). Se debe tener en cuenta que la coloración
azulada o violeta de las reacciones es proporcional
a la concentración del aminoácido.
 Reacción de Millón: Es específica para la
detección de grupos fenólicos en un compuesto,
debido a que la tirosina tiene este grupo dio positiva
a esta reacción en la cual reacciona frente a las
sales de Mercurio a pH ácido, formando en un
principio nitrotirosina y más adelante una sal
mercúrica de color rojo. La gelatina, albumina y
peptona, al dar positivo a la prueba nos indicaron la
presencia de grupos fenólicos en dichas proteínas.
 Reacción Xantoproteica: reacción para la
identificación de grupos arilo en los aminoácidos,
dio positivo para tirosina, triptófano y nos indicó la
presencia de estos aminoácidos en peptona,
albumina y gelatina, este comportamiento se debe
a la presencia de anillos bencénicos en la
estructura de las anteriores proteínas y
aminoácidos. Los anillos aromáticos presentes
reaccionaron con ácido nítrico concentrado
formando nitroderivados de color amarillo.
 Reacción de Biuret: para identificación de
tripeptidos en adelante, solo dio positivo para
gelatina, peptona y albumina. El NaOH se
constituye en el medio que permite la formación de
complejos de coordinación Cu2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno que forma
parte de los enlaces peptídicos. Por tanto, el
reactivo de Biuret cambió a color violeta en
presencia delas anteriores proteínas.
CONCLUSIONES
Estas pruebas nos ayudan a la detección de forma
específica de determinados aminoácidos dentro de una
proteína, y así conocer de forma empírica su estructura.
BIBLIOGRAFÍA
 Fundamentos de bioquímica estructural; José María
Teijón; Editorial Tebar pag (65-68).
 Fundamentos De Bioquimica, Donald Voet, Judith
G. Voet, Charlotte W. Pratt; Ed. Médica
Panamericana, pag 216.
 http://biokimik2011.blogspot.mx/2011/09/objetivos-
aplicar-pruebas-cualitativas.html

 Reacción Hopkins-Cole: Es específica para

identificar grupos indol, al ser el triptófano el único
aminoácido con este grupo, se trata una prueba
específica para este, y nos indicó la presencia de
este en peptona y albumina.