TÉCNICAS DE ADN

RECOMBINANTE.
 Técnicas de ADN recombinante
• Son herramientas de la biología molecular o
ingeniería genética.
• Se basa en la posibilidad de manipular los genes,
es decir:
A) tenerlos aislados
B) amplificarlos, en el sentido de tener muchas
copias de la misma secuencia
C) conocer la secuencia exacta
D) una vez aislado poderlo expresar fuera de su
localización natural
 Enzimas de restricción
• Familia de
enzimas aisladas
de bacterias, que
cortan las
moléculas de ADN
exógenos en
secuencias
específicas de
reconocimiento
Figure 8-31 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
 Genoteca o biblioteca genómica
• El genoma cortado en pedazos por enzimas de
restricción puede ser clonado (cada pedazo inserto en
un vector) para posteriormente estudiarlo.
 Plasmidios recombinantes

Figure 8-39 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

Clonación de ADN

Estas bacterias
producirán la
proteína de
interés a partir
del gen clonado?
BIBLIOTECA DE ADN genómico

Conjunto de clones recombinantes en el que está representado

todo el ADN de un organismo

BIBLIOTECA DE cDNA

Conjunto de clones recombinantes obtenidos a partir de los ARNs

mensajeros de un organismo o tejido determinado

Facilita la expresión de genes de organismos superiores en

procariotas porque elimina los intrones
 Genoteca o biblioteca genómica
El genoma cortado en fragmentos por enzimas de restricción puede
ser clonado (cada fragmento inserto en un vector) para
posteriormente estudiarlo.
 Biblioteca genómica Biblioteca de cDNA
Genoma clonado como cDNA en un conjunto de vectores, sólo se han
clonado los genes que se expresan en mRNA, no poseen intrones
La reacción en cadena de la polimerasa
(PCR)
Amplificación mediante PCR
PCR: Reacción en cadena de la polimerasa
Amplificación mediante PCR
PCR: Reacción en cadena de la polimerasa
 Síntesis de ADN complementario (cDNA)

Un DNA complementario (cDNA) es

sintetizado in vitro a partir de mRNA o de
RNA total utilizando la enzima
transcriptasa reversa (RT)

El cDNA clonado no contendrá intrones (a

diferencia del DNA genómico) y por permite
la expresión directa del mRNA transcrito a
proteína in vitro o en bacteria.
 Secuenciación de ADN
• La secuenciación de ADN es el proceso de
determinar la secuencia de nucleótidos (A, T, C
y G) de un fragmento de ADN.
• la secuenciación de Sanger, el ADN blanco es copiado muchas veces y se
hacen fragmentos de diferentes longitudes. Nucleótidos fluorescentes
que actúan como "terminadores de cadena" marcan los extremos de los
fragmentos y permiten la determinación de la secuencia.