Universidad Católica Andrés Bello.

Facultad de ingeniería.
Escuela de ingeniería Civil.
Cátedra: Lab de Sanitarias II

TINCION GRAM EN
LA LAGUNA DEL
CISNE UCAB
GUAYANA
Realizado por:
 Cedeño Esther
 Coraspe Carlos
 Fuentes Juan
 Quiroz Astrid

Abril 2018
 INFORME
TINCION GRAM LAGUNA CISNE UCAB LABORATORIO DE INGENIERÍA
GUAYANA SANITARIA

“Aprender es como remar contra corriente: en cuanto se deja,

se retrocede”
Benjamín Britten
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SUMMARY
Gram stain is a useful and easy to perform test that differentiates the two main
classes of bacteria in order to establish a treatment. Heat-fixed or otherwise dried
bacteria are placed on a slide and stained with crystal violet, then an iodized
solution is added which acts as a mordant and then a wash is carried out with a
decolorizing agent (acetone) and water with the order to eliminate the unfixed dye.
Later it is covered with a contrast dye, safranin, to stain red cells that have not
retained the crystal violet.
Therefore, where the sample was taken for the evaluation of the type of battery
with the staining method was in the lagoon of the swan UCAB GUAYANA. To carry
out the study, samples were taken from a specific point of the lagoon, which He
worked with the materials and equipment suitable for the identification of the
existing bacteria in it. This study practice is of great importance since the lagoon is
a very popular place for students.

RESÚMEN
La tinción de Gram es una prueba útil y de fácil realización que permite
diferenciar las dos principales clases de bacterias con el objeto de instaurar un
tratamiento. Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o
secadas de algún otro modo y se tiñen con cristal violeta a continuación, se añade
una solución yodada que actúa como mordiente y luego se realiza un lavado con
un agente decolorante (acetona) y agua con el fin de eliminar el colorante no
fijado. Posteriormente se cubre con un colorante de contraste, safranina, para teñir
de rojo las células que no hayan retenido el cristal violeta.
Por ello donde se tomó la muestra para la evaluación del tipo de batería con el
método de la tinción fue en la laguna del cisne UCAB GUAYANA., para llevar el
estudio a cabo se tomaron muestras desde un punto específico de la laguna, la
cual se trabajó con los materiales y equipos adecuados para la identificación de
las bacterias existentes en la misma., esta práctica de estudio es de gran
importancia ya que la laguna es un lugar muy popular para los estudiantes.
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INTRODUCCION
Si hay un espacio natural y/o recreativo que se encuentre en la Universidad
Católica Andrés Bello sede Guayana, es la Laguna del Cisne, el cual además de
ser uno de los más llamativos y agradables a la vista de cualquiera, también es de
suma importancia su preservación y mantenimiento para garantizar un hábitat
adecuado tanto para la fauna que allí encontramos (Peces, terecayas, entre otros)
como para cualquier ser vivo que frecuente sus alrededores (estudiantes,
profesores, obreros, visitantes, etc.).

Para lograr dicho objetivo debemos asegurarnos de estudiar los agentes

bacteriológicos presentes en el cuerpo de agua de la Laguna, ya que estos
podrían representar una amenaza y poner en riesgo el ecosistema. Dichos
estudios se realizan en el Laboratorio de Sanitarias II, por lo que está incluido en
el cronograma de la materia, es decir que cada semestre los estudiantes que la
cursen deben realizar la práctica y de esta manera conocer por experiencia propia
la importancia de saber que agentes están presentes en la Laguna.

El método y/o técnica que utilizaremos en el Laboratorio es “Tinción de Gram”,

ésta técnica es utilizada con frecuencia para diferenciar diferentes grupos de
bacterias que se encuentran en una muestra, es nuestro caso tomada de la
Laguna; para estudiarlas y seguidamente identificarlas, de acuerdo a la coloración
final que presenten las paredes bacterianas estas pueden ser color morado, y se
trataría de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color
rosado, y serían Gram negativas.
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Objetivos
 Iniciar en las técnicas del estudio de microorganismos: cultivo, tinción y
morfología.
 Usar el microscopio como herramienta para la diferenciación de bacterias
Gram-positivas de las Gram-negativas.
 Efectuar una adecuada gestión de desechos peligros generados en el
laboratorio: recolección, tratamiento y disposición final.
 Recolectar los desechos generados de las soluciones preparadas durante
la práctica.
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Marco teórico
 Tinción Gram
Es una técnica de laboratorio que permite identificar distintos tipos de bacterias
según se coloree su superficie, la técnica se basa en aplicar una serie de
colorantes a una muestra de cualquier origen (esputo, orina, pus, etcétera) que
supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la pared
de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del
colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y
se trataría de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color
rosado, y serían Gram negativas.
 Gram positivas
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un
gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram,
dando un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +.
 Gram negativas
Se denominan bacterias Gram negativas aquellas que no se tiñen
de azul oscuro o de violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un
color rosado tenue.
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Marco metodológico
1. Materiales y equipos:

 Microscopio
 Portaobjetos
 Asas de cultivo
 Mechero

2. Reactivos y Medios de Cultivo

 Muestras del agua de la Laguna del Cisne.
 Cristal violeta (1 g de cristal violeta en 100 cc de agua destilada).
 Lugol (1 g de iodo en 2 g de ioduro potásico en 100 cc de agua destilada).
 Estanol (decolorante).
 Safranina (1 g de Safranina básica en 100 cc de agua destilada).

Procedimiento

Toma de Muestra:

La muestra que utilizamos para el estudio de esta práctica se tomó directamente del
cuerpo de agua de la Laguna del Cisne, es recomendable remover un poco en el fondo de
la misma, para asegurarnos de que la muestra contenga la mayor parte de partículas que
nos sirven para un mejor estudio; dicha muestra se tomó el 4 de abril de 2018 en horas del
mediodía.
Fijar un Frotis

Se fijó la muestra en un portaobjeto con la ayuda de una pipeta de modo que

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ésta no sea arrastrada durante el proceso de tinción, esperamos que la muestra seque al
aire libre o con la ayuda de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que
dicho calor no deber ser excesivo ya que puede cambiar la morfología celular de las
bacterias contenidas en la muestra.

Tinción con Cristal Violeta

Agregamos un par de gotas violeta con el gotero sobre el portaobjetos, de manera que
cubra toda la muestra. Se dejó actuar por un minuto, esta tinción viene dada para fijarse a
temperatura de 25 °C.

Enjuague

Luego de transcurrido el minuto se procedió a enjuagar la muestra con un chorro de

agua destilada, teniendo en cuenta que el agua no debe caer directamente sobre la
muestra, ésta debe caer desde la parte superior del portaobjetos que debe estar en
posición inclinada hacia abajo.

Mordiente

Una vez enjuagado el portaobjeto con la muestra, se aplicó como mordiente Lugol con
un gotero durante un minuto, el cual ayuda a la fijación del color en las bacterias.

Decoloración
 Pasado el minuto de haber actuado el mordiente se decoloró con Etanol al 95 %,
Acetona o Acetona- Alcohol, y al igual que en el paso anterior se realizó con la lámina

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inclinada, luego se agregó con el decolorante en un gotero en cantidades suficientes hasta

que ya no escurrió más líquido azul y salga transparente

Lavado y Secado

Se lavó con agua para quitar los restos del residuo del decolorante y esperamos a que
secara la lámina al aire libre y posteriormente con la ayuda del mechero.

Tinción de contraste

Una vez se secó la muestra, la teñimos nuevamente, pero esta vez con un colorante de
contraste, en este caso usamos la Safranina o Fucsina y se dejó actuar por un minuto.

Enjuague

Pasado el minuto correspondiente procedimos a enjuagar la lámina con agua

destilada nuevamente, se dejó secar una vez más, para luego ser analizada en él
microscopio
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Análisis de Resultados
Con el método de tinción de Gram se logró estudiar la determinación
microbiológica del agua proveniente de la laguna el Cisne de la universidad, con la
ayuda del microscopio se logró identificar la morfología bacteria al usar un
aumento de 10*1000 el cual se dictamino que la visualización de micrococos, a
pesar de que en dicha morfología no se logró visualizar la división de un diplococo
sino los estreptococos o racimos con una tonalidad azul-violeta con lo cual
hablamos de microrganismos Gram-Positivos de forma esféricas.
Como se puede apreciar en la imágenes tomada en el laboratorio

 Tal como era de esperarse, se encontraron grupos de bacterias

teñidas de color violeta (S. aureus), en mezcla con otras teñidas de
color rosado (E. Coli), evidenciándose aquí un diferencial útil para
distinguir unas bacterias de otras
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Conclusiones
I. En el procedimiento de la tinción con Gram, se mostró que las bacterias
gram positivas y gram negativas se tiñeron en un principio con el cristal
violeta, pero posteriormente el etanol fue el responsable de la
decoloración de éstas últimas, y la safranina hizo su parte como agente
de contraste para teñir las gram negativas que se encontraban
decoloradas.
II. Como resultado de la tinción de Gram, las bacterias grampositivas,
correspondientes al estafilococo aureus quedaron teñidas de violeta,
mientras que las gramnegativas, correspondientes a E. Coli aparecieron
de color rojo. Este comportamiento diferente frente a la tinción de Gram
obedeció a la diferente composición de la pared celular de los dos grupos
bacterianos.

Recomendaciones
1) Usar guantes y bata de laboratorio al momento de extraer y manejar las
muestras.
2) No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el
microscopio.
3) Al secar la muestra, no aplicar la llama directamente en ella para no alterar
la bacteria y no romper el portaobjetos.
4) Al enjuagar el portaobjetos el chorro de agua no debe impactar
directamente la muestra.
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Referencias bibliográficas
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
 https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-
13399
 https://biologia.laguia2000.com/histologia/tincion-gram
 Manual de prácticas de Ingeniería Sanitarias. Asapchi. Universidad
Católica Andrés Bello, Caracas, Venezuela