INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

SISTEMAS DE CONTROL DE CALIDAD

PRACTICA 10: CONTROL DE CALIDAD EN LA COLORACION DE LOS EXTENDIDOS

SANGUINEOS, TINCION DE WRIGHT
INTRODUCCION
En la mayoría de los laboratorios los colorantes más empleados para la tinción hematológica
se basan en el de Romanowsky constituido fundamentalmente con la mezcla de eosina
(ácido) y azul de metileno (básico). Además se han incorporado el empleo de derivados por
oxidación del azul de metileno que se conoce con el nombre de azures (A, B, C). Son los
azures los responsables de la coloración púrpura o roja de ciertas estructuras. Tanto la
eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH de las diferentes
estructuras celulares, de forma que las que tienen carácter básico fijan la eosina mientras
que las que poseen propiedades ácidas fijan principalmente el azul de metileno. Esto explica
que las estructuras basófilas se tiñan de color azul mientras que los competente acidófilas
adquieren un color rosado. La diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmáticas por
dichos colorantes permite clasificar a los leucocitos polimorfonucleares en 3 grupos:
 Granulocitos eosinófilos, en los que la granulación específica contiene sustancias de
carácter básicos que fijan los colorantes ácidos y se tiñen de color rojo-naranja.
 Granulocitos basófilos, en los que la granulación específica posee sustancias de
carácter ácido que fijan los colorantes básicos y se tiñen de color azul oscuro.
 Granulocitos neutrófilos, en los que la granulación específica posee compuestos de
carácter neutro por lo que fijan ambos colorantes simultáneamente, de ahí que se
tiñen de color pardo.
Dentro del grupo de colorante tipo Romanowsky los más utilizados son el de Wright, Giemsa
y May-Grünwald-Giemsa, entre otras.
OBJETIVOS
Conocer la importancia y efecto que tiene sobre las células un reactivo mal empleado (buffer
de fosfatos)
FUNDAMENTOS
Los colorantes ácidos se unen con los componentes básicos de las células (citoplasma),
inversamente, los colorantes básicos son atraídos por los compuestos ácidos de las células y
se combinan con ellos (ácidos nucleicos y nucleoproteínas), por lo que se denomina basófilo;
la eosina es un colorante ácido, por lo tanto se puede usar indistintamente los términos
“eosinófilo" y “acidófilo" para describir las propiedades tintóreas de los componentes
celulares. Algunas estructuras se tiñen por una combinación de ambos y se denomina
neutrófilos. La coloración de los núcleos celulares, esta basada en la interacción molecular
entre eosina y un complejo azur B—DNA.
La tinción de Wright cuyo colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color
azul las partes acidas de las células) y eosina (que tiñe las partes alcalinas) disueltos en
metanol (que permite la fijación de las células), adicionando a la preparación buffer de
fosfatos (que rehidrata a las células después de la exposición con metanol).
METODOS

Control de calidad en la
tinción de Wrigth

Realizar una punción venosa

Preparar extendidos
sanguíneos y marcar con
lápiz

Secar al aire y agregar

alcohol metílico 1 min

Cubrir el extendido con el

colorante de Wright 1 min

A diferentes pH, 6.8 ,

7.5 , 6.4 hasta la
formación de una capa
Agregar buffer de fosfatos 5 metálica y
min homogeneizar soplando

Lavar con agua destilada

Observar al microscopio a
100x
RESULTADOS
Tabla 1: bitacora de resultados
BITACORA DE RESULTADOS FECHA: 15 NOV 2017
Control de calidad en las tinciones celulares
Resultados y observaciones
Metodología utilizada: tinción de Wright
pH de los reguladores utilizados: 6.8, 7.5 y 6.4
Célula de referencia: Monocito
Características que debe tener la célula de referencia:
Observación de las células a diferentes pH con el objetivo de inmersión (100x)

Plaqueta

Eritrocitos

Monocito

Figura 1: extendido sanguíneo pH 6.8

En esta figura se puede observar que el monocito presenta un plasma de color grisáceo y el
núcleo también, no se distinguen bien sus partes, lo eritrocitos presentan una coloración
grisácea.
 Linfocito

Eritrocitos

Monocito

Neutrófilos

Figura 2: extendido sanguíneo a pH 7.4

En esta figura se puede observar que el monocito presenta un plasma de color grisáceo y el
núcleo de color morado así como los leucocitos que se observan alrededor del monocito.
 Monocito

Eritrocitos

Plaqueta

Figura 3: extendido sanguíneo a pH 6.4

En esta figura se puede observar que el monocito presenta un plasma de coloración grisácea así
como su núcleo que es del mismo color, los eritrocitos tienen color rosada.
Características de una buena tinción:
1. Los eritrocitos deben ser de color rosado a salmón.
2. Los núcleos son de color azul oscuro o violeta.
3. Los gránulos citoplasmáticos de los neutrófilos los son de color lavanda a lila.
4. Los gránulos citoplasmáticos de los basófilos los son de color azul oscuro a negro.
5. Los gránulos citoplasmáticos de los eosinófilos los son de color rojo a anaranjados.
6. La zona entre las células debe ser incolora, clara, limpia y sin colorante precipitado.

Figura 4: Linfocito Figura 5: Basófilo Figura 6: Eosinófilo Figura 7: Neutrófilo

Tabla 2. Identificación de puntos críticos durante el proceso.

Identificación de puntos Acciones correctivas Acciones preventivas

críticos del proceso
Usar mucha fuerza al
momento de realizar el
extendido sanguíneo
Portaobjetos sucio o graso
No correr el extendido
sanguíneo derecho
El ángulo del portaobjetos
incorrecto
Al soplar sobre la capa
metálica
Tiempos de los colorantes
No utilizar mucha fuerza
Desengrasarlo o limpiarlo
Hacerlo despacio
Hacerlo a un ángulo de 45
grados
No soplar con mucha fuerza
porque se cae el colorante
además de la saliva que cae
sobre el extendido
Fijarse en los tiempos de
cada colorante
Practicar
Tener el material limpio y
completo antes de utilizarlo
Practicar
Antes de correr el extendido
sanguíneo fijarse en el
ángulo correcto
Soplar suavemente
Traer cronómetro

DISCUSIÓN
De a cuerdo a los resultados de las figuras 1, 2, 3, se puede observar que en la figura 1 a pH
de 6.8 no se observa una buena coloración o la coloración esperada al encontrar la célula de
referencia que es el monocito, ya que su citoplasma como su núcleo son de color grisáceo
ocasionando una difícil identificación por lo tanto a este pH es el incorrecto para la tinción de
Wright, en la figura 3 a pH de 6.4 también se observa que el citoplasma y el núcleo del
monocito tienen coloración grisácea aunque los eritrocitos tienen el color esperado rosado,
pero aun así es una mala tinción ya que no se logra ver bien la célula de referencia y en
cuanto a la figura 2 con pH de 7.4 se observan mejor las células sanguíneas se logra
diferenciar el núcleo del citoplasma con sus característicos colores, en la literatura menciona
que el pH ideal es de 6.4 el cual difiere de nuestros resultados ya que a ese pH no se logra
observar bien a nuestra célula de referencia, el posible error que esté pasando es que el
analista se haya equivocado al momento de utilizar el buffer de fosfatos incorrecto o
simplemente etiqueto mal, se tendría que repetir esa tinción o las 3 para corroborar este
resultado, también se tiene que evaluar la calidad del reactivo, si no está precipitado o esta
caduco. La importancia de realizar una buena tinción es que podemos confundirlas con
patologías de diferente índole y por lo tanto un diagnostico incorrecto con un tratamiento
innecesario para un paciente por eso es muy importante saber realizar estas técnicas así
como sus fundamentos en este caso para la tinción de Wright Los resultados indicados son
orientativos ya que la intensidad y la tonalidad del color varían con el pH usado en la tinción.
En general la coloración con el reactivo de Wright da lugar a coloraciones más rojizas al
disminuir el pH del buffer de fosfatos utilizada.

CONCLUSIÓN
 Se Conoció la importancia y efecto que tiene sobre las células un buffer de fosfatos a
diferentes pH

 El mejor pH al cual se observaron mejor las células fue 7.4. difiriendo de la literatura.

 Se tienen que repetir los extendidos para corroborar el pH ideal

 Las tinciones utilizadas en el laboratorio de microbiología permiten el diagnóstico

oportuno y sugerente de los agentes infecciosos, por lo que juegan un papel
importante en la decisión de una patología.
REFERENCIAS
 Artículo de revisión Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología Luis Esaú
López-Jácome,* Melissa Hernández-Durán,* Claudia Adriana Colín-Castro,* Silvestre
Ortega-Peña,* Guillermo Cerón-González,* Rafael Franco-Cendejas disponible en
línea en [http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf] (fecha de
consulta: 19/nov/2017)

 https://www.thinglink.com/scene/724250009217794050 (fecha de consulta:

19/nov/2017)

 Calvo GA, Esteban RFJ, Montuenga FL. Técnicas en histología y biología celular. 2nd
ed. Madrid Spain: Elsevier; 2009

 Koneman E. Diagnóstico microbiológico. 6a ed. México DF: Editorial Médica

Panamericana S.A.; 2006.

 http://www.cromakit.es/pdfs/inserts/997939.pdf (fecha de consulta: 19/nov/2017)