1.

EXPERIMENTAL

MATERIALES Y MÉTODOS:

Muestra: Cynara scolymus (Alcachofa)

Materiales:

 Embudos de separación
 Matraces Erlenmeyer
 Vasos de precipitación
 Soporte
 Embudo
 Papel Filtro
 Tubos de ensayo
 Pipetas graduadas (5,10 ml)
 Pera de succión

Método:

Obtención de las diferentes fracciones

Se partió de 20 ml un extracto etanolico de alcachofa que inicialmente contenía 12 g de planta, luego

se procedió a realizar los cálculos correspondientes para separar los equivalentes establecidos.

Alcaloides

A la primera fracción correspondiente a 6 ml se le añadió HCl al 5% hasta llegar a un pH ácido (2 a 3)

que se comprobó con papel indicador, luego se adiciono NaOH al 20% y se llevó a pH básico (10 a
12). El extracto alcalinizado se transfirió a un embudo de separación y se extrajo con cloroformo
utilizando un volumen igual al del extracto, se separó el extracto clorofórmico y se procedió a realizar
una segunda extracción utilizando cloroformo-etanol (3:2) y se separó nuevamente el extracto
clorofórmico, después, se unió los dos extractos, se acidifico con HCl 5% y se realizó las pruebas para
identificación de alcaloides Dragendorff, Mayer, Wagner. También se guardó alícuotas tanto del
residuo clorofórmico como de la fase acuosa para realizar cromatografía.

Esteroles, Flavonoides, Antraquinonas, Taninos y Saponinas.

La segunda fracción correspondiente a 3,6 ml, se colocó en un embudo de separación y de adiciono
una cantidad igual de éter de petróleo, se separó el extracto etéreo, luego, se realizó una segunda
extracción con la mitad de la cantidad anteriormente utilizada y finalmente se unieron estos dos
extractos.

Del extracto etéreo se guardó una pequeña alícuota para usarla en cromatografía, y en el sobrante
se realizó pruebas correspondiente de identificación de esteroles Lieberman Buchard y Zak.

La fase acuosa se procedió a extraer en un embudo de separación con una mezcla etanol-agua (1:7),
una pequeña alícuota del extracto obtenido se guardó para cromatografía y en el restante se
realizaron pruebas de identificación para Flavonoides: reacción de Shinoda; Antraquinonas: reacción
de Bromtrager; Taninos: reacción con FeCL3; Saponinas: espuma reacción con agua.

Heterosidos cardiotónicos

La segunda fracción correspondiente a 4 ml, se hizo precipitar con una solución de acetato de plomo
al 5 %, se filtró, se desechó el precipitado y el filtrado se extrajo con cloroformo en un embudo de
separación. El extracto clorofórmico se trató con sulfato de sodio anhidro y se filtró.

Una pequeña alícuota del extracto obtenido se guardó para cromatografía y en el restante se
realizaron pruebas de identificación para Cardiotónicos: reacción de Baldej, Kedde, Raymound y
Lieberman Buchard.

Procedimiento cromatografías

En primer lugar se procedió a preparar las diferentes fases móviles:

Compuesto Fase móvil

Alcaloides y flavonoides Butanol/ácido acético/agua (10:1:3)
Esteroles Éter de petróleo (80:20)
Antraquinonas Naftol Éter de petróleo/acetato de etilo (7:3)
Antrol Benceno/acetato de etilo/ácido acético
(75:24:1)
Saponinas Acetona/hexano (4:1)
Cardiotónicos Cloroformo/acetona (90:10)

Luego se preparó y activo las placas de silica gel para usarla como fase estacionaria, después de ser
activadas se procedió a sembrar las muestras de todos los grupos con la ayuda de un capilar, se
realizó el mismo procedimiento para cada uno de los compuestos en total se sembraron 7 placas,
estas placas se colocaron en las cámaras cromatográficas con las fases móviles respectivas y se dejó
correr. Tras la corrida se retiró y dejo secar las placas, luego de esto se tomó la medida de las
distancias recorridas por las muestras y por el diluyente para el posterior cálculo del Rf, también se
observaron las placas bajo la luz UV a 365 nm y se hizo el respectivo revelado