ESTERILIZACIÓN: MUERTE TÉRMICA

Jairo Antonio Guirales León 1, Carola Quiroga Urrego2

Universidad de Antioquia, Facultad de Ingeniería, Ingeniería Bioquímica, Biotecnología

Industrial y Ambiental, Carepa, Colombia.

RESUMEN

El término de muerte se define microbiológicamente cómo la pérdida irreversible de la

capacidad de reproducción. Por ello para matar los microorganismos se requiere una dosis
letal, la cual dependerá de la duración del tratamiento de esterilización. En el presente
informe se realizaron los tratamientos de esterilización por calor seco y calor húmedo en el
microorganismo saccharomyces cerevisiae ; para obtener las constantes de muerte térmica,
energía de activación y ciclos de esterilizacion. Para una temperatura de 60ºc se obtuvo una
constante de muerte térmica igual a 0.0656/min y para 80ºc fue 0.0986/min; la energía de
activación para 60ºC fue 22.275J/mol y para 80ºC fue 19.285 J/mol; el ciclo de calentamiento
se obtuvo en el rango de 30ºc hasta 105º y el de sostenimiento en 115ºC.

PALABRAS CLAVES: Muerte Térmica, Esterilización, Calor Seco, Calor Húmedo,

Saccharomyces Cerevisiae, Energía de Activación.
INTRODUCCIÓN mayor rapidez cuando se encuentran en
presencia de agua, ya que éste permite que
Saccharomyces Cerevisiae es un hongo
se altere con mayor facilidad la
unicelular, un ejemplar de levadura
configuración de sus proteínas y
manipulado industrialmente en la
proporciona un medio para distribuir el
elaboración de pan, cerveza y vino
calor uniformemente en toda la cámara
(Najafpour, 2007). S. cerevisiae es uno de
interna del equipo de esterilización
los modelos más apropiados para el
(Najafpour, 2007). Por esta razón, para
estudio de problemas biológicos. Además
lograr la esterilización del material
de su rápido crecimiento, la dispersión de
empleando el calor seco, se deben aplicar
las células y la facilidad con que se
temperaturas más altas durante mayor
replican cultivos y aíslan mutantes,
tiempo.
destaca por un sencillo y versátil sistema
de transformación de ADN (Najafpour, Por otra parte, la esterilización por calor
2007). húmedo, es más conveniente, porque el
vapor de agua difunde por ósmosis a través
La esterilización consiste en la
de la membrana de los microorganismos,
eliminación de los microorganismos
produciendo la muerte de los mismos por
existentes en un sistema (Najafpour,
coagulación de su protoplasma y no por
2007). El objetivo es obtener materiales y
deshidratación, como en el caso del calor
medios aptos para la siembra de
seco (Najafpour, 2007).
microorganismos a analizar. Existen
diferentes métodos de acuerdo al objeto a En consecuencia, la cinética de la
esterilizar y el fundamento en el cuál se esterilización de medios de cultivo
basan. describe la tasa de destrucción de
microorganismos mediante vapor
La esterilización por calor seco produce la
utilizando un modelo de velocidad de
destrucción de los microorganismos por
reacción química de primer orden
oxidación de sus componentes celulares
(Najafpour, 2007). A medida que la
(Gupta, Sengupta, Prakash, & Tripathy,
población de microorganismos (N)
2017). Éste es un proceso menos eficiente
disminuye con el tiempo, la tasa se define
que la esterilización por calor húmedo,
mediante la ecuación:
porque los microorganismos mueren con
 𝑑𝑁  1200 mL medio de cultivo para S.
− = 𝑘𝑑 𝑁 (1)
𝑑𝑡 Cerevisiae estéril.
donde N es el número de organismos  500 mL Solución NaCl 0,9 %
viables presentes en los medios de cultivo,  Azul de metileno
t es el tiempo de retención o el tiempo de
Materiales
esterilización, y 𝒌𝒅 es la constante de
 4 Erlenmeyer de 250 mL
velocidad de reacción, ya que es conocida
 60 Tubos de ensayo con tapa rosca
por una tasa de mortalidad específica
 20 tubos de ensayo
(Najafpour, 2007).
 7 Gradillas
El objetivo principal de esta práctica de
 6 - 8 Micropipetas de 1000, 200 y
laboratorio; fue aplicar los conceptos de
100 µL
esterilización empleando vapor saturado y
 4 Beakers de 250 Ml
calor seco, y obtener los parámetros
asociados como la Energía de activación. Equipos

 1 Autoclave
 3 Incubadoras
MATERIALES y METODOS
 8 microscopios
Reactivos  8 cámaras de Neubawer

Modelo de Calculo

Para obtener el número de organismos viables N, mostrados en la tabla 1; se utilizó

la ecuación (2)

10000 1 𝑙𝑒𝑣
𝑁𝑖 = 𝐵 ( )( ) [ ] (2)
16 10 𝑚𝐿

Donde:

 B es el número total de células contadas en la cámara de Neubawer

 i es el índice para cada tiempo.
 Para la obtención de la energía de activación Ea, se utilizó la ecuación (3), que resulta
de obtener una relación entre la ecuación de Arrhenius de cada temperatura tomada

𝐸𝑎 = −𝑚 ∗ 𝑅 [𝐽/𝑚𝑜𝑙] (3)

Donde:

 𝑅 constante de los gases ; 𝑅 = 8.314472 𝐽/𝑚𝑜𝑙

 𝑇 temperatura absoluta (K)
 𝑚 es la pendiente obtenida de la gráfica 1/𝑇 𝑣𝑠 𝑙𝑛(𝑘𝑑)

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Tabla 1. Esterilización por calor seco para temperaturas de 60ºC y 80ºC

T: 60oC T: 80oC

Tubo Tiempo N (cell) Tubo Tiempo N (cell)

N0 0 42365 N0 0 41258

N1 5 41584 N1 5 40245

N2 10 N2 10
27598 14254

N3 15 16425 N3 15 8254

N4 20 13095 N4 20 7958

y 80ºC) es directamente proporcional al

tiempo de permanencia de la levadura
La Tabla 1, muestra los resultados
saccharomyces cerevisiae en el equipo de
obtenidos al utilizar esterilización por
esterilización (horno), obviamente para la
calor seco, realizada en el horno. Es muy
temperatura de 80ºC se obtiene una
visible apreciar de la Tabla 1 que, la
velocidad de muerte mucho más rápida,
muerte de las células manteniendo una
debido a que la naturaleza de este
temperatura constante en cada caso (60ºC
microorganismo (hongo) no tolera
ambientes con temperaturas tan altas, su
temperatura optima de crecimiento está
alrededor de los 35ºC .

Fig. 1 Tiempo de esterilización vs reducción fraccional de saccharomyces cerevisiae para

una temperatura de 60ºC.

A partir de la ecuación de la gráfica lineal mostrada y que indica el cambio o

mostrada en la Fig.1 podemos obtener la transición de vida a muerte celular; para
constante de muerte térmica para este caso tiene el valor de 𝑘𝑑 = 𝟎. 𝟎𝟔𝟓𝟔/
saccharomyces cerevisiae, que es 𝒎𝒊𝒏 .
básicamente la pendiente de la ecuación
Fig. 2 Tiempo de esterilización vs reducción fraccional de saccharomyces cerevisiae para
una temperatura de 60ºC.

A partir de la ecuación de la gráfica muerte para este microorganismo es más

mostrada en la Fig.2 podemos obtener la rápida a medida que se aumenta la
constante de muerte térmica para temperatura del sistema de esterilización.
saccharomyces cerevisiae, que para este
La energía de activación en cada
caso tiene el valor de 𝑘𝑑 = 𝟎. 𝟎𝟗𝟖𝟔/𝒎𝒊𝒏
tratamiento se obtuvo a partir de la
Como se tenía provisto, la constante de ecuación (3) y utilizando los valores de la
muerte térmica para el tratamiento de 80ºC pendiente de las ecuaciones mostradas en
fue mayor, es decir que la velocidad de las figuras 3 y 4.
Fig.3 Gráfica para el sistema de 60ºC equivalente a 333.15 K

A partir de la fig.3 podemos obtener el 𝑚 = −2.7272 entonces el valor de

valor de m y aplicar la ecuación (3) para 𝐸𝑎 = 22.675 𝐽/𝑚𝑜𝑙
conseguir la energía de activación;

Fig.4 Gráfica para el sistema de 80ºC equivalente a 353.15 K

Desde de la fig.4 podemos obtener el valor Para el proceso de esterilización por calor
de m y aplicar la ecuación (3) para húmedo, realizado en el autoclave, se
conseguir la energía de activación; 𝑚 = obtuvo al final del proceso de
−2.3195 entonces el valor de 𝐸𝑎 = esterilización un total de 10125 𝑙𝑒𝑣/𝑚𝐿
19.285 𝐽/𝑚𝑜𝑙

Fig. 5 Gráfica para la esterilización por calor húmedo .

A partir de la gráfica mostrada en la figura durante la realización de la práctica . Se

5, podemos obsevar dos ciclos de puede aprecias de la grafica que el ciclo de
esterilización los cuales son calentamiento calentamiento se obtuvo a partir de 30ºC
y sostenimiento, el enfriamiento no se hasta los 105ºC, el ciclo de sosteniemiento
pudo realizar por cuestiones de tiempo se mantuvo alrededor de los 115ºC.
CONCLUSIONES

El valor de la constante de muerte térmica El ciclo de sostenimiento para el sistema

para saccharomyces cerevisiae, a 60ºC fue de esterilización tratado por vapor humedo
0.0656/𝑚𝑖𝑛 y para 80ºC fue de 0.0986/ se obtuvo en 115ºC.
𝑚𝑖𝑛.
A menor temperatura se obtuvo una
La energía de activación para constante de muerte térmica menor y una
saccharomyces cerevisiae, a 60ºC fue energia de activacion mayor; es decir que
22.275 𝐽/𝑚𝑜𝑙 y para 80ºC fue de para saccharomyces cerevisiae, existe una
19.285𝐽/𝑚𝑜𝑙 relación inversamente proporcional entre
estos dos parámetros.
El ciclo de calentamiento para el sistema
de esterilización tratado por vapor humedo
se obtuvo en el rango de 30ºC a 105ºC.

PREGUNTAS

1. ¿Cuál es el efecto de la energía de activación sobre la destrucción de esporas y

nutrientes? ¿Explique claramente?

Las esporas son consideradas ahora como una de las formas más resistentes en la tierra a la
temperatura y la desecación. Son muchas las especies esporoformadoras y están distribuidas
principalmente dentro del grupo de las bacterias Gram positivas (Prescott et al., 2004).

En su estado de latencia las esporas no muestran metabolismo detectable (fenómeno

conocido como abiosis) y por tanto se pueden considerar inertes mostrando una marcada
resistencia a la inactivación por agentes físicos (desecación extrema, vacío, presión
hidrostática, temperatura, radiaciones ionizantes) o sustancias químicas.

Funcionalmente la formación de la endospora es un claro ejemplo de la adaptación de algunas

especies bacterianas a la falta de nutrientes. Ante el agotamiento de estos, una célula
vegetativa se verá obligada a producir la endospora.
La activación de la espora es un proceso irreversible por el cual la endospora bacteriana
termina con el estado de letargo, sin terminar la criptobiosis (estado fisiológico de
metabolismo detenido)

Se puede apreciar en la gráfica que la energía de activación de las esporas es

significativamente mayor que su destrucción durante la etapa temprana del proceso, por lo
tanto, el número viable parece incrementar antes de observarse el declive exponencial.
2. ¿Qué diferencia existe entre las etapas de calentamiento lineal, exponencial e
hiperbólica?

Grafica Perfiles de temperatura Vs Tiempo para diferentes tipos de calentamiento y

enfriamiento

 Vapor directo (Modelo Hiperbólico) se rige bajo la siguiente ecuación:

𝑇 = 𝑇0 + (𝐻 ∗ 𝑚𝑠 ∗ 𝑡)/(𝑐 ∗ (𝑀 + 𝑚𝑠 ∗ 𝑡))

Donde:

𝑇0 : 𝑇𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 (𝐾)

𝐽
𝑐: 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 ( )
𝐾𝑔𝐾

𝐽
𝐻: 𝐸𝑛𝑡𝑎𝑙𝑝𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑣𝑎𝑝𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑎 𝑎 𝑙𝑎 𝑡𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜. ( )
𝐾𝑔
 𝐾𝑔
𝑚𝑠 : 𝐹𝑙𝑢𝑗𝑜 𝑚𝑎𝑠𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒 𝑣𝑎𝑝𝑜𝑟 ( )
𝑠

𝑀: 𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑟 (𝐾𝑔)

 Con flujo de calor constante, resistencia eléctrica (Modelo lineal) se rige bajo la
siguiente ecuación.

𝑇 = 𝑇0 + (𝑞 ∗ 𝑡)/(𝑐 ∗ 𝑀)

Donde:

𝑇0 : 𝑇𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 (𝐾)

𝑞: 𝑉𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟 (𝐽/𝑠)

𝐽
𝑐: 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 ( )
𝐾𝑔𝐾

𝑀: 𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑟 (𝐾𝑔)

 Camisa de calefacción con fuente isotérmico (Modelo Exponencial) se rige bajo

el siguiente perfil de temperatura.

−𝑢∗𝐴∗𝑡
𝑇 = 𝑇𝐻 + (𝑇0 − 𝑇𝐻 ) ∗ 𝑒 𝑐∗𝑀

𝑇𝐻 : 𝑇𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑓𝑢𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟 (𝐾)

𝑇0 : 𝑇𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 (𝐾)

𝐽
𝑐: 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 ( )
𝐾𝑔𝐾

𝑀: 𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑟 (𝐾𝑔)

 𝑢: 𝐶𝑜𝑒𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑔𝑙𝑜𝑏𝑎𝑙 (𝐽/𝑠𝑚2 )

𝐴: 𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 ( 𝑚2 )

Vapor directo (Modelo Resistencia eléctrica(Lineal) Camisa de

Hiperbólico) calefacción(exponencial)

3. ¿Cómo se logra que una etapa de calentamiento sea exponencial?

Se debe determinar el tiempo que debe durar la etapa de mantención, dado el tiempo de las
etapas de calentamiento y enfriamiento dependen del proceso de transferencia utilizado
una etapa de calentamiento puede pasar a exponencial aumentado el vapor al que se encuentre
el microorganismo objeto de estudio.

4.Cómo se logra una etapa de enfriamiento lineal. ¿Explique claramente?

Camisa con fuente no isotérmica y recirculación (Modelo exponencial).

𝐴
−𝑈∗ ∗𝑚𝑐
(𝑐 𝑡
[(1−𝑒 )(𝑚𝑐∗ )]
𝑀
T = (T0 − Tc0 ) ∗ 𝑒

𝑇𝐶𝑂 : 𝑇𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑓𝑢𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑒𝑛𝑓𝑟𝑖𝑎𝑑𝑜𝑟𝑎 (𝐾)

𝑇0 : 𝑇𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 (𝐾)

𝐾𝑔
𝑚𝑐 : 𝑓𝑙𝑢𝑗𝑜 𝑚𝑎𝑠𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑟𝑒𝑓𝑟𝑖𝑔𝑒𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒 ( )
𝑠

𝐽
𝑐: 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 ( )
𝐾𝑔𝐾

𝑀: 𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑎 𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑟 (𝐾𝑔)

𝑢: 𝐶𝑜𝑒𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑔𝑙𝑜𝑏𝑎𝑙 (𝐽/𝑠𝑚2 )

𝐴: 𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 ( 𝑚2 )
Reporte 5 microorganismos considerados muy resistentes a los procesos de
esterilización. Explique su resistencia con base en sus características (energías de
activación, características morfológicas, cinéticas de muerte

los PRIONES (agentes infecciosos causantes de encefalopatías degenerativas transmisibles,

síndrome de Creutzfeldt- Jacobs, CJD ) parecen ser las formas más resistentes al proceso de
esterilización. Hasta la actualidad no se ha demostrado la composición exacta y propiedades
específicas de los priones.

Las Esporas bacterianas, (sin contar con los priones) son los microorganismos más resistentes
que conocemos y su completa destrucción asegura la muerte del resto de microorganismos
viables. Por esta razón, estas esporas BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS, son
utilizadas como controles biológicos.
los virus con envuelta, son los microorganismos más sensibles a los procesos de
esterilización. Los virus no envueltos presentan una mayor resistencia debido a la ausencia
de cubierta lipídica.

Las mico bacterias poseen una pared bacteriana especial, cuya composición tiene un alto
contenido en lípidos complejos y ceras que impiden la penetrabilidad de ciertos agentes como
la Clorhexidina y glutaraldehido.

REFERENCIAS

Gupta, V., Sengupta, M., Prakash, J., & Tripathy, B. C. (2017). Basic and Applied Aspects
of Biotechnology. https://doi.org/10.1007/978-981-10-0875-7

Najafpour, G. D. (2007). Biochemical Engineering and Biotechnology. Biochemical

Engineering and Biotechnology. https://doi.org/10.1016/B978-0-444-52845-2.X5000-
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