Genetica Molecular

Ingeniería en Biotecnología de los RR.NN

Docente: Germania Karolys

Expresión génica de las proantocianidinas en Vitis vinifera

Nombre del grupo:

Integrantes: Jácome Gabriela, Montaluisa Belén, Paucar Diana, Yuquilema Mónica.

Metabolito a estudiar: Tanino (proantocianidinas)

Organismo: Vitis vinífera (Uva)
Lugar en el que se va a estudiar: en bayas de Vitis vinífera (Uva)

Introducción

En uvas maduras los taninos se presentan primariamente en hollejos y semillas,

influyendo en el sabor de las uvas y del vino, estos corresponden al contenido de
procianidinas, lo cual incluye a los monómeros de flavan-3-oles, oligómeros y
polímeros Duarte (2001).

De acuerdo con Reynier (2002), durante el período de maduración existe un aumento de

taninos en la piel de las bayas que estaría ligado al de antocianos y azúcares. Por lo
tanto, una variedad tinta rica en azúcares estaría bien provista, generalmente, de
antocianos y taninos.

La baya de la uva sigue un proceso de maduración caracterizado por una serie de

cambios que incluyen aumento de tamaño, ablandamiento, metabolización de ácidos
orgánicos, acumulación de azúcares, cambios en el contenido de sustancias aromáticas,
incremento del contenido en polifenoles y en las variedades tintas, adquisición de color,
generalmente en el hollejo. Estos procesos van a su vez acompañados por una serie de
cambios en la expresión génica de la uva, que junto con la interacción con el ambiente
son los que determinan el desarrollo de la maduración y por tanto el aspecto y
composición de la baya. CITA

Uno de los procesos más importantes durante la maduración de los frutos de Vitis
viniferaes el envero, en donde se produce un cambio en el color de las uvas, esto se
produce por la pigmentación de tonalidades rojas y azuladas producto de la acumulación
de antocianinas (Deluc, Bogs, & Wayne, 2008).

Importancia

Los alimentos ricos en proantocianidinas pueden presentar efectos beneficiosos para la

salud al actuar como antioxidantes, anticancerígenos, cardiopreventivos,
antimicrobianos, antivirales y como agentes neuroprotectores (Mateos, 2013).

En los ensayos de actividad antimicorbiana y actividad antiviral el grado de

polimerización, el porcentaje de galoización, el tipo de enlace interflavánico y la
estereoquímica influyen fuertemente en su capacidad inhibidora (Mateos, 2013).

Metabolismo de proantocianidinas en Vitis vinifera

Fig.1.Biosíntesis de las proantocianidinas en la uva.

Fuente (Bogs, Dowey, Harvey, Ashton, Tanner, & Robinson, 2005)

La biosíntesis de los taninos condensados o proantocinidinas es parte de la ruta de los
flavonoides que también producen antocianos y flavonoles.La síntesis de
proantocianidinas ocurre por adición de un intermediario derivado de un flavan-3-4-diol
(leucoantocianidina) a una unidad de flavan-3-ol terminal (tal como la catequina o
epicatequina) con una adición secuencial de extensiones.

La biosíntesis de los flavan-3-oles ha sido tradicionalmente como un producto de la

enzima leucoantocianidinareductasa (LAR), que convierte a la leucoantocianidina en
catequina y su posterior transformación en epicatequina por la acción de epimerasa.La
actividad de la enzima LAR está relacionada a la acumulación de proantocianidinas.

Después se encontró a la enzima ANR,antocianidinareductasa capaz de convertir las

antocianidinas a epicatequina; la alteración en la estéreo química se realiza a través de
un intermediario aquiral (antocianidina)y no por acción de una epimerasa. De esta
forma ANS no solo se relaciona con la síntesis de antocianos sino también con la de los
flavan-3-oles y las proantocianidinas (Busse, 2013).

 Enzimas implicadas en el metabolismo

Proteína Abreviatura
Chalconasintetasa CHS
Chalconaisomerasa CHI
Flavolona-3B-hidroxilasa F3H
Hidroflavonol-4-reductasa DFR
Leucocianidinadioxigenasa LDOX
Flavonolsintetasa FLS
Leucocianidinareductasa LAR
Antocianidinareductasa ANR
UDP glucosil flavonoide3 O-
UFGT
glucosiltransfersa
CumarilCoA CumarilCoA

Productos del metabolismo

Producto Función
Los compuestos fenólicos fenilpropanoides derivan
principalmente de la fenilalanina o de la tirosina. La primera
Fenilpropanoide enzima en el metabolismo fenilpropanoide es la Fenilalanina
Amonio Liasa (PAL), que cataliza la eliminación del grupo
amino de la fenilalanina para dar ácido transcinámico
Las orto-hidroxichalconas 2 son precursores para la síntesis de
flavonas 3, pigmentos naturales ampliamente
Chalconas difundidos.Laschalconas 1 son cetonas aromáticas α,β-
insaturadas de origen natural o sintético (Insuasty, 2015).

Las estructuras de flavonoides, derivadas de la 2— fenilcromona

y del 2—fenilcromano.
Las flavanonas derivan de las flavonas, por desaparición del
Flavononas doble enlace del heterociclo central. Son incoloros o solo
ligeramente amarillos (Catayo & Reynaldo, 2001).
Poseen un grupo carbonilo en posición 4 del anillo C y carecen
del grupo hidroxilo en posición C3.
Es una 3—hidroxiflavanonas, denominadas también
flavanonoles o 2,3—dihidroflavonoles (Conde, 1994)Grupo
Dihidroflavonoles
carbonilo en posición 4 y un grupo –OH en posición 3 del anillo
C
Las leucoantocianidinas como monómeros de las
proantocianidinas y las proantocianidinas condensadas, como los
oligómeros de los flavan—3—oles.
El término leucoantocianidina se utiliza para designar los
Leucoantocianidina
productos naturales que tienen la propiedad de formar
antocianidinas, por calentamiento en medio ácido. Se conocen
también como flavan—3,4—dioles.

Pertenece a los Flavanos, con un grupo -OH en posición 3 del

Catequina
anillo C.
Epicatequina Los flavonoles constituyen el grupo de flavonoides más ubicuo
 en los alimentos de origen vegetal, generalmente, se encuentran
en los alimentos en forma glicosilada, siendo la glucosa o la
ramnosa los principales azúcares a los que se asocian (Granado,
2009).
Epigalocatequina

GENES IMPLICADOS

Genes de Vitis vinifera Proteína que

codifica
VvCHS Gen que codifica para la
CHS
proteína chalconasintetasa
VvCHI Gen que codifica para la proteína
CHI
chalconaisomerasa
VvF3H Gen que codifica para la
F3H
proteína flavolona 3B hidroxilasa
VvDFR: Gen que codifica para la
DFR
proteína Hidroflavonol-4-reductasa
VvLDOX: Gen que codifica para la
LDOX
proteína Leucocianidinadioxigenasa
VvFLS: Gen que codifica para la
FLS
proteína flavonolsintetasa
VvLAR1-1: Gen que contiene un marco
de lectura abierto de 1,038 bp que
codifica para la proteína
leucocianidinareductasa, de 346 LAR
aminoácidos
VvLAR1-2: Presenta 15 nucléotidos
diferentes en la región codificante en
relación al gen VvLAR1-1
VvANR: Gen que contiene un marco de
lectura abierto de 1,017-bp que codifica
para la proteína antocianina reductasa, ANR
de 339 aminoácidos.

VvUFGT: Gen que codifica para la

UFGT
 proteína flavonoide- 3-0
glucosyltransferasa.
CumarilCoA
Fuente: (Bogs, Dowey, Harvey, Ashton, Tanner, & Robinson, 2005)

Expresión génica

La expresión de proantocianinas en Vitis vinífera comienza cuando se encuentra gran

cantidad de azúcares. El incremento de la actividad de las enzimas cinnamato 4
monoxigenasa, p- coumarato:CoA-ligasa (la cual cataliza reacciones antes de la CHS
en la ruta metabólica) y UFGT incrementan la concentración de antocianinas.
Se encontró que todos los genes implicados se expresan incluso después de dos
semanas pasada la floración excepto del gen UFGT, por lo que no existe antocianinas,
es posible que esto se deba a que los genes expresados no llegarán a producir
flavonoides, sino otros compuestos similares como flavones, flavonoles y
proantocianinas (Boss, Davies, & Robinson, 1996).

La expresión del gen que codifica para VvLDOX, monitorea la actividad de la ruta
metabólica. El gen LDOX y el gen VvANR son expresados antes de la floración, sin
embargo su nivel de expresión es mayor después de dos semanas de la floración. La
expresión de VvLAR1-1 muestra un patrón similar al de los genes antes mencionados,
mientras que VvLAR1-2 es baja y muestra una disminución de su expresión después de
la floración (Bogs, Dowey, Harvey, Ashton, Tanner, & Robinson, 2005). (Véase
Anexo)

Durante el envero se expresan todos los genes de la ruta de síntesis de las

proantocianinas, durante el estudio de (Castellarin, Matthews, & Di Gaspero, 2007) se
encontró que durante la deficiencia de agua, se induce a la rápida expresión de los
genes F3H, LDOX, y DFR y a la acumulación de azúcares; sin embargo la
deficiencia de agua no aceleró los procesos asociados a la maduración.
La acumulación de azúcar es necesaria para la biosíntesis de proantocianinas, durante
este proceso, intervienen las fitohormonas ácido absíciso (ABA) y brasinosteroides. El
incremento de ABA durante el envero promueve la maduración de las uvas, a través del
incremento de la expresión de genes relacionados a la síntesis de antocianinas, como el
VvmybA1 o el VvHT1 el cual codifica para una hexosa transportadora
(Yamane, 2006) reporta que altas temperaturas reducen los niveles endógenos de ABA,
lo cual provoca la disminución de la expresión de VvmybA1, que es un factor de
transcripción que regula la expresión de los genes de las enzimas que participan en la
biosíntesis de antocianos. Del mismo modo (Yamane, 2006), (Jeong, S., Yamamoto N.,
Kobashi, S. and Esaka, M., 2004) observaron, que tratamientos de ABA favorecieron la
acumulación de VvmybA1, mientras que el sombreamiento la suprimió.
Es sabido que la luz es un factor preponderante en la biosíntesis de antocianos, ya que
induciría un aumento de la abundancia del transcrito regulador de la expresión de
UFGT, clave en la conversión de antocianidinas en antocianinas, sin embargo, se debe
tener en consideración que la luz está altamente ligada a la temperatura, por lo que
mientras la luz favorece la acumulación de antocianos (Kliewer, 1977), altas
temperaturas causarían un efecto detrimental en la calidad de la fruta (Mori, K.,
Kitayama, M. and Hashizume, K., 2007).
La expresión para los genes PAL, CHS y DFR realizado, en bayas expuestas a la luz,
demostró que, la abundancia de los transcritos de PAL y CHS debido a que
aumentaban la actividad de la enzima, y la disminución en la actividad de PAL en
bayas sometidas a oscuridad, sin embargo, el gen DFR aparece cuando hay alta
intensidad de luz por sobre los 100 µmoles m-2s-1, (Downey, M., Dokoozlian, N. and
Krstic M., 2006).
(Downey, M., Dokoozlian, N. and Krstic M., 2006) reportaron que el sombreamiento
provocó una disminución de los antocianos con tres oxígenos sustituyentes del anillo B
(malvidina, petunidina y delfinidina glucósido) y un aumento en los compuestos con
sólo dos sustituciones de oxígeno (peonina y cianidina glucósido), lo que implicaría
que la sombra estaría reduciendo la actividad de la enzima flavonoide-3´,5´-hidroxilasa
y una sobre regulación de la expresión del gen F3H.
También se observó un aumento de los compuestos cumaril glucosilados en
condiciones más cálidas, se presente una mayor proporción de malvidina, petunidina y
delfinidina cumariladas, mientras que en ambientes más fríos y sombreados exista más
peonina y cianidina glucosiladas y acetilglucosiladas (Peña, 2006).
La regulación de la síntesis de los compuestos flavonoides y su acumulación es
compleja, involucrando varios genes reguladores que median diferentes pasos de la
ruta. Esos genes pertenecen a la familia de los factores de transcripción myc y myb, los
cuales ejercen su control en forma diferencial dependiendo de las especies (Jeong, S.,
Yamamoto N., Kobashi, S. and Esaka, M., 2004)
Estudios previos mostraron un fuerte incremento de los niveles de los transcritos de
PAL, STS y CHS en la piel de uvas almacenadas 3 días a 0ºC, que fue menor en los
frutos tratados con 20% de CO2 durante 3 días a la misma temperatura (Walbot, 2007),
indicaron que distintos genes de la ruta biosintética de los antocianos, tales como la
PAL y CHS, pueden ser considerados genes COR

Factores de transcripción

El gen VvMYB5b codifica para un factor de transcripción perteneciente a la familia

R2R3-MYB; tanto este factor como el VvMYB5a activan los promotores de diferentes
genes estructurales de la ruta de los flavonoides durante los primeros días del desarrollo
de frutos, antes del envero, entre esos al gen UFGT. Mientras que en la piel de los frutos
comienza a existir una mayor expresión de este factor de transcripción cercanas al
envero (Véase Anexo B)

Anexos

Fig 2 Expresión de los genes de Vitisvinifera

Fuente (Bogs, Dowey, Harvey, Ashton, Tanner, & Robinson, 2005)

Anexo B

Fig 3 Expresión del gen VvMYB5b

Fuente: (Deluc, Bogs, & Wayne, 2008)
Bibliografía
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