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PRÁCTICA NÚMERO 4
CROMATOGRAFIA
ESTUDIANTES
PROFESOR
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
MICROBIOLOGIA Y BIOANALISIS
MEDELLÍN
OBJETIVOS
INTRODUCCION
ASPECTOS TEORICOS:
Adsorbente y eluyentes
Son muchos los sólidos que se han utilizado como fase estacionaria en cromatografía de
adsorción. Los más importantes son alúmina, silicato de aluminio, silicagel, óxido, silicato y
carbonato de magnesio, óxido, carbonato y fosfato de calcio, como inorgánicos; y carbón,
almidón y azúcares como orgánicos. Normalmente deben ser sometidos a un proceso térmico de
activación superficial antes de su utilización. Como eluyentes se utilizan, alcoholes, cetonas,
esteres, cloroformo, tetracloruro de carbono, etc. Su capacidad de elución depende de su
polaridad, del absorbente y de las especies a eluir.(2)
Electroforesis
El fundamento de la técnica consiste en depositar sobre un medio poroso una mezcla de especies
cargadas (algunas pueden ser neutras). Por aplicación de un campo eléctrico entre los extremos
del soporte poroso las especies se separan en función de su carga y su movilidad iónica en ese
medio. Para favorecer el paso de la corriente se utilizan disoluciones fondo conductoras
(electrolitos), que son generalmente disoluciones reguladoras en las que se empapa previamente
el soporte poroso, debidamente escogidas para que no formen precipitados con las especies del
problema. Como soportes se han utilizado alúmina, lana de vidrio, almidón, agar- agar, gel de
sílice, etc. tanto en columna como en capa fina, pero quizás el método más utilizado es el que
emplea como soporte papel. Se suelen utilizar tiras de acetato de celulosa, casi transparentes, que
por poseer una estructura más uniforme y un poro menor que el del papel filtro, tienen un mayor
poder de resolución. A estas ventajas del acetato de celulosa se añade su fácil solubilidad en
ácidos, lo que facilita la posterior determinación de las especies separadas.(2)
Concepto de Rf
Rf es el registro, es una relación de distancias, y se define como:
Rf = (a) distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación
(b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.
MATERIALES
SUSTANCIAS
PROCEDIMIENTO
Se tomaron 2 placas cromatográficas y con la ayuda de un capilar sembramos una mezcla que
contenía acido gálico, resorcinol y naftol. Al lado de esta se sembró una muestra problema (#47)
y se introdujo la placa en una cámara que contenía hexano-acetato de etilio en proporción 8:2. Se
repitieron estos pasos, pero se colocó en una cama en proporción 6:4. Después cuando subió el
efluente en cada una de las placas se procedió a colocarlas en una cámara de yodo.
RESULTADOS
Placa 1 Placa 2
8:2
6:4
Placa 1 Placa 2
B-naftol 0.4 cm 0.5 cm
Resorcinol 1.7 cm 2.7 cm
Acido gálico 3.0 cm 4.0 cm
B-naftol
Resorcinol
Acido gálico
DISCUSION DE RESULTADOS
Estas dos placas fueron obtenidas en el laboratorio por medio de cromatografía para determinar la
separación de los componentes en ambas placas a diferentes proporciones de disolventes.
Placa 1: Constituida por una mezcla de patrones de referencia (B-naftol, resorcinol y acido
gálico) y una muestra problemas #47 a uno proporción 8:2 de hexano de etilo.
Placa 2: Constituida por una mezcla de patrones de referencia (B-naftol, resorcinol y acido
gálico) y una muestra problemas #47 a uno proporción 6:4 de hexano de etilo.
El reactivo revelador empleado es Yodo, el cual forma complejos coloreados con los
componentes orgánicos con tono amarillo y marrón. Las manchas que se pueden apreciar en
ambas placas se obtuvieron debido a que después de que la elución ascendiera, fueron llevados a
una cámara de yodo, donde fueron revelados.
En la cromatografía de columna se espera una mezcla por medio de un eluyente o fase móvil que
logra separa la mezcla en sus partes originales, donde el proceso de separación vara por grado de
absorción de cada componente y su resistencia a la fase móvil, lo que nos muestra a simple vista
que una queda arriba y la otra abajo.
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
REFERENCIAS