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Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicos

2.1.- Introducción
Los compuestos polifenólicos son antioxidantes que constituyen una clase de
metabolitos secundarios biosintetizados por el reino vegetal [1].
Debido a que los antioxidantes sintéticos utilizados en la industria tienen la desventaja
de ser muy volátiles y se sospecha que son perjudiciales para la salud, existe en la
actualidad un gran interés por la búsqueda de sustancias o compuestos alternativos,
preferiblemente de origen biológico, que además de ser eficaces como antioxidantes, su
aprovechamiento no impacte negativamente sobre el medio ambiente.
Por otro lado, cada día se conoce más acerca de los beneficios del empleo de
antioxidantes naturales en la salud humana e industria, por lo que es necesario explorar
nuevas fuentes. Los residuos de la poda de olivo podrían resultar una excelente opción,
ya que estudios recientes a nivel internacional evidencian la presencia de compuestos
polifenólicos con propiedades antioxidantes en la hoja de olivo, lo que condujo a la
comercialización de sus extractos debido a la gran utilidad en fitoterapia, cosmética y
las industrias farmacológicas y de la alimentación. En contraste, apenas existen
antecedentes sobre la composición fenólica en la madera de esta especie.
Por lo expuesto y teniendo en cuenta que la provincia de Catamarca presenta una
extensa área de cultivo de olivo, con perspectiva de crecimiento y consecuente
producción de una biomasa de residuos de poda, actualmente sin aprovechamiento,
surge la necesidad de desarrollar un método confiable que implique procedimientos de
extracción y tratamientos de la muestra para extraer la mayor cantidad de fenoles
presentes en las hojas y la madera de olivo, manteniendo algunas de las características
beneficiosas de sus extractos, como ser el poder antioxidante.
[2]
De acuerdo con lo presentado por Waterman y Mole (1994) , con respecto a los
solventes y condiciones de trabajo para la extracción de CF de materiales vegetales y en
función de los mejores resultados registrados en antecedentes que se refieren al poder
[3]
extractivo de diferentes solventes orgánicos sobre la madera y la hoja de olivo , en el
presente ensayo se aplica la extracción por maceración con etanol acuoso y acetato de
etilo sobre residuos de poda de la variedad Arbequina del Valle Central de Catamarca
para evaluar su poder extractivo y la actividad antioxidante de los extractos obtenidos.

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2.2.- Objetivos del presente capítulo


 Seleccionar un solvente de extracción de sustancias fenólicas, presentes en hojas
y madera procedentes de la poda de olivos de la variedad Arbequina cultivados
en el Valle Central de la Provincia de Catamarca, en función de los mayores
rendimientos alcanzados.
 Determinar el rendimiento en sólidos totales, polifenoles totales y ortodifenoles
de los extractos de las hojas y la madera derivados de la poda de olivo de la
variedad Arbequina, según el solvente utilizado en el proceso de extracción.
 Comparar el rendimiento en polifenoles de los residuos derivados de la poda de
olivo de la variedad Arbequina, con antecedentes de antioxidantes provenientes
de otras fuentes.

2.3.- Materiales y métodos


2.3.1.- Preparación de las muestras: Obtención de los extractos
Reactivos:
Solución de etanol acuoso al 50%
Acetato de etilo absoluto
Agua bidestilada

Los extractos en etanol acuoso al 50% y en acetato de etilo se obtienen utilizando una
relación 1:10 p/v. Para ello se pesan, por quintuplicado, 5 g de muestra de hoja y 5 g
de muestra de madera, por separado. Se adicionan 50 ml de etanol acuoso al 50%, se
dejan macerar en vasos de precipitado, recubiertos con film y papel de aluminio, a
temperatura ambiente, durante 24 hs. Posteriormente se filtran al vacío y al residuo
remanente se le adicionan 50 ml de solvente fresco. Se repite el proceso estimando 48
hs de maceración. Los extractos obtenidos de la primera y segunda maceración se
combinan y el volumen final de cada extracto se divide en dos alícuotas de 50 ml,
medidos en matraz aforado. Una de las alícuotas se destina para la cuantificación de
polifenoles, ortodifenoles y para calcular actividad antioxidante, la otra se utiliza para
determinar la cantidad de sólidos totales. Las muestras se almacenan en recipientes
ámbar para mayor protección contra la luz a una temperatura de 5-10 ºC.
El procedimiento se repite para la obtención de los extractos con acetato de etilo
(Anexo 4; Fotos A.4.7 a A.4.28).

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2.3.2.- Determinaciones analíticas


a.- Sólidos totales
Reactivos:
Extractos hoja- etanol 50% (EHE)
Extractos hoja- acetato de etilo (EHAc)
Extractos madera- etanol 50% (EME)
Extracto madera - acetato de etilo (EMAc)

Se colocan 50 ml de cada uno de los extractos en cápsulas de porcelana previamente


secadas y pesadas. Se llevan a baño maría hasta evaporación completa. Posteriormente
se introducen las cápsulas en estufa a 105 ºC hasta sequedad, se enfrían en desecador y
se efectúan pesadas hasta que la masa residual permanezca constante (Anexo 4; Fotos
A.4.31 y A.4.32). Finalmente se realizan los cálculos correspondientes tomando la
última pesada como referencia.
Cálculo: ST = [(M2 – M1)/ M] x 100
Donde: ST: Sólidos totales
M2: Peso de la cápsula más el residuo.
M1: Peso de la cápsula vacía.
M: Peso de la muestra.

b.- Polifenoles totales


Método de Folin Ciocalteu, a λ= 725 nm según Vázquez et al. (1975) [5].
Reactivos:
Ácido cafeico
Agua bidestilada
Extractos hoja- etanol 50% (EHE)
Extractos hoja- acetato de etilo (EHAc)
Extractos madera- etanol 50% (EME)
Extracto madera- acetato de etilo (EMAc)
Folín Ciocalteu
Solución saturada de carbonato de sodio

I. Recta de calibrado
Se prepara una solución de ácido cafeico de 210 ppm. A partir de ésta se calculan los
volúmenes apropiados para preparar 25 ml de soluciones patrones de 0.0; 2.0; 4.0; 8.0;
12.0; 16.0 ppm (Tabla 2.1).
Luego se llevan a matraz aforado de 25 ml en los que previamente se adicionan 10 ml
de agua bidestilada, se someten a reacción con 1,25 ml de Folín Ciocalteu. Se agita

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vigorosamente y se deja reposar 3 minutos. Por último se agregan 2,5 ml de Na2CO3


saturado y se enrasa con agua bidestilada.
Concentración Volumen
(ppm) (ml)
0.0 0
2.0 0,238
4.0 0,476
8.0 0,952
12.0 1,428
16.0 1,905
Tabla 2.1. Volúmenes para preparar 25 ml de soluciones patrones de PFT.

Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante una hora para que se complete la
reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra patrón en espectrofotómetro a
longitud de onda de 725 nm. Una vez obtenidos los datos de absorbancia, se construye
la recta de calibrado.
II. Determinación de la concentración de polifenoles en los extractos de hoja y madera
de olivo
Se miden 10 ml de agua bidestilada, se llevan a matraz aforado de 25 ml y se adiciona
0,1 ml de extracto. Se agrega 1 ml de reactivo Folín Ciocalteu, se agita vigorosamente y
se deja reposar por tres minutos. Por último se agregan 2,5 ml de Na2CO3 saturado y se
enrasan con agua bidestilada. Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante una
hora para que se complete la reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra en
espectrofotómetro a longitud de onda de 725 nm.
Cálculo: ppm PFT = L x VD x VT/(VA x MM)
Donde: L: Lectura de la curva en ppm.
VD: Volumen de dilución.
VT: Volumen total de extracto.
VA: Volumen de la alícuota.
MM: Masa de la muestra.

c. Ortodifenoles
Método de molibdato de sodio.
Reactivos:
Ácido cafeico
Agua bidestilada
Extractos hoja- etanol 50% (EHE)
Extractos hoja- acetato de etilo (EHAc)
Extractos madera- etanol 50% (EME)
Extracto madera- acetato de etilo (EMAc)
Solución de molibdato de sodio al 5 % en etanol al 50%
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I. Recta de calibrado
Se prepara una solución de ácido cafeico de 210 ppm. A partir de ésta se miden los
volúmenes apropiados para preparar 10 ml de soluciones patrones de 0.0; 2.0; 4.0; 8.0;
12.0; 16.0 ppm (Tabla 2.2).
Concentración Volumen
(ppm) (ml)
0.0 0
2.0 0,095
4.0 0,190
8.0 0,380
12.0 0,570
16.0 0,760
Tabla 2.2. Volúmenes para preparar 10 ml de soluciones patrones de ODF.

Luego se llevan a matraz aforado de 10 ml, en los que previamente se adicionan 5 ml de


agua bidestilada, se someten a reacción con 1 ml de solución de molibdato de sodio al 5
% en etanol al 50%. Se agitan vigorosamente y se enrasan con agua bidestilada. Estas
soluciones se mantienen en oscuridad durante 15 minutos para que se complete la
reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra en espectrofotómetro a longitud de
onda de 370 nm. Una vez obtenidos los datos de absorbancia, se construye la recta de
calibrado.
II. Determinación de la concentración de ortodifenoles en los extractos de hoja y
madera de olivo
Se toman 5 ml de agua bidestilada, se llevan a matraz aforado de 10 ml y se adicionan
0,1 ml de extracto. Se agrega 1 ml de solución de molibdato de sodio al 5 % en etanol al
50%, se agita vigorosamente y se enrasa con agua bidestilada. Estas soluciones se
mantienen en oscuridad durante quince minutos para que se complete la reacción. Se
mide la absorbancia de cada muestra en espectrofotómetro a longitud de onda de 370
nm (Anexo 4; Fotos A.4.29 y A.4.30).
Cálculo: ppm ODF = L x VD x VT/ (VA x MM)
Donde: L: Lectura de la curva en ppm.
VD: Volumen de dilución.
VT: Volumen total de extracto.
VA: Volumen de la alícuota.
MM: Masa de la muestra.

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2.4.- Resultados y Discusión


2.4.1.- Comportamiento de los extractos de hojas
Los máximos, mínimos, medianas, medias, desviaciones estándar y coeficientes de
variación de los rendimientos en sólidos totales (ST), expresados como porcentaje de
extracción (%) y los rendimientos en polifenoles totales (PFT) y orto-difenoles (ODF),
-1
expresados como ppm de ácido cafeico (mg ácido cafeico kg hojas), de cinco
repeticiones de extracciones etanólicas y con acetato de etilo de hojas de olivo, se
presentan en la tabla 2.3.
Medidas Extractos
Parámetros
descriptivas HE HAc
Máx 28,31 7,87
Mín 24,39 6,97
Sólidos
Mediana 25,53 7,07
Totales
Media 26,11 7,31
(%)
DE 1,53 0,42
CV % 5,86 5,75
Máx 30020,39 11675,15
Polifenoles Mín 24117,12 9633,96
Totales
Mediana 27467,65 10562,84
(mg de ácido
Media 27540,73 10497,36
cafeico kg - 1
DE 2544,79 848,99
de hojas)
CV % 9,24 8,09
Máx 21002,44 6434,72
O-difenoles Mín 16022,36 4378,16
(mg de ácido Mediana 17401,08 5018,80
cafeico kg - 1 Media 18130,80 5093,28
de hoja) DE 1904,85 810,09
CV % 10,51 15,91
Tabla 2.3. Medidas descriptivas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y
con acetato de etilo de hojas de olivo.

Considerando los elevados valores de las DE obtenidos en la tabla 2.3, se decide


trabajar con los datos de las medianas para realizar el análisis descriptivo y estadístico.
En la tabla 2.4 se exhiben las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF para los
extractos etanólicos y con acetato de etilo con las diferencias estadísticas respectivas,
calculadas mediante el análisis unilateral da varianza por rangos, de Kruskal Wallis
(Anexo 3; Tablas A.3.3.1 a A.3.3.3).
Extractos Medianas*
ST PFT ODF
HE 25,53 A 27467,65 A 17401,08 A
HAc 7,07 B 10562,84 B 5018,80 B
% Diferencia de extracción por solvente 72,30 61,54 71,16
* Letras distintas indican diferencias significativas al 5%
Tabla 2.4. Medianas de rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos etanólicos y con acetato de
etilo de hojas de olivo.
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Los gráficos 2.1 y 2.2 muestran las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de
los extractos etanólicos y con acetato de etilo de las hojas de olivo.

HAc 7,07 HE HAc


Extractos

HE 25,53

ST/ %

Gráfico 2.1. Medianas del rendimiento en ST de extractos de hoja.

La extracción de los principios activos a partir de las hojas de olivo por maceración con
etanol acuoso al 50 %, manifiesta un rendimiento significativamente superior en ST
(p<0,0079) respecto de los macerados con acetato de etilo en un 72,30 % (Tabla 2.4;
Gráfico 2.1).

5018,80
HAc
10562,84
PFT ODF
Extractos

17401,08
HE
27467,65

Concentración/ ppm Ac. Cafeico

Gráfico 2.2. Medianas del rendimiento en PFT y ODF de extractos de hoja.

Igualmente, son los extractos etanólicos los que muestran rendimientos en PFT y ODF
significativamente superiores (p<0,0079) que los macerados en acetato de etilo, tal
como evidencian la tabla 2.4 y gráfico 2.2. La concentración de PFT registrada en los
extractos etanólicos de hojas de olivo, se impone en un 61,54% sobre los fenoles

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cuantificados para los extractos de acetato de etilo, obteniéndose 27467,65 mg y


10562,84 mg de fenoles totales por kilogramo de hoja respectivamente (Tabla 2.3;
Gráfico 2.2). Asimismo, el contenido en ODF de los extractos etanólicos es
estadísticamente superior a la concentración de ODF presentes en los extractos con
acetato de etilo, en una proporción del 71,16 % (Gráfico 2.2; Tabla 2.3).
Resulta importante señalar, que del total de los fenoles cuantificados, una proporción
elevada de estos son ODF. En el extracto etanólico el 63,35% de los PFT son ODF, en
tanto que, en el extracto de acetato de etilo el porcentaje diminuye a 47,51%. Esto
resulta interesante si se tiene en cuenta que son los ODF quienes confieren, en gran
medida, la valiosa bioactividad a las hojas de olivo [6; 7].
En síntesis, los extractos obtenidos a partir de hojas con etanol al 50% presentan un
contenido en PFT, ODF y rendimiento en ST claramente superior al de los extractos de
hojas con acetato de etilo; lo que permite deducir que desde el punto de vista de la
capacidad extractiva del solvente, el etanol acuoso al 50% resulta ser el mejor de los
solventes ensayados para la extracción de PF y ODF en hojas de olivo. Este
comportamiento, además, permite predecir la naturaleza polar de los compuestos
fenólicos presentes en este residuo agrícola. Es decir, que se pone en evidencia que la
composición química de los extraíbles de las hojas de olivo serían en gran medida
compuestos fenólicos hidrosolubles.
Por otra parte, en función de estos resultados se puede considerar a las hojas de olivo de
la variedad Arbequina procedente del Valle Central de la provincia de Catamarca, como
una fuente importante de fitofenoles. Por lo que resulta importante el estudio de las
propiedades antioxidantes de los extractos obtenidos, temática que se aborda en el
capítulo 3 de la presente tesis.

2.4.2.- Comportamiento de los extractos de madera


Los valores máximos, mínimos, medianas, medias, desviaciones estándar y oeficientes
de variación de los rendimientos en sólidos totales (ST), expresados como porcentaje de
extracción (%), y los rendimientos en polifenoles totales (PFT) y o-difenoles (ODF),
expresados como ppm de ácido cafeico (mg ácido cafeico kg-1 de madera), de cinco
repeticiones de extracciones etanólicas y con acetato de etilo sobre madera de olivo, se
presentan en la tabla 2.5.

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Extractos
Medidas
Parámetros
descriptivas ME MAc
Máx 18,07 3,64
Mín 13,88 2,34
Sólidos Mediana 17,54 3,00
Totales
(%) Media 17,21 2,96
DE 1,20 0,47
CV% 6,97 6,30
Máx 21246,00 6087,78
Polifenoles Mín 18520,01 4792,79
Totales Mediana 18938,85 5395,13
(mg de ácido
cafeico kg - 1 Media 19635,51 5412,26
de madera) DE 1293,02 476,42
CV% 6,58 8,80
Máx 7708,75 4512,18
O-difenoles Mín 7202,78 2360,35
(mg de ácido Mediana 7313,85 3463,80
cafeico kg - 1 Media 7422,45 3453,65
de madera) DE 278,76 762,31
CV% 3,76 22,07
Tabla 2.5. Medidas descriptivas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y
con acetato de etilo de madera de olivo.

Analizando la tabla 2.5 se observa que las DE calculadas son elevadas y por ello se
decide trabajar con las medianas para realizar el análisis estadístico.
En la tabla 2.6 se exhiben las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF para los
extractos etanólicos y con acetato de etilo con las diferencias estadísticas respectivas,
calculadas mediante el análisis unilateral da varianza por rangos de Kruskal Wallis.
(Anexo 3, Tablas A.3.3.4 a A.3.3.6).

Extractos Medianas*
ST PFT ODF
ME 17,54 A 18938,85A 7313,85 A
MAc 3,00 B 5395,13 B 3463,80 B
% Diferencia de extracción por solvente 82,90 71,51 52,64
* Letras distintas indican diferencias significativas al 5%

Tabla 2.6. Medianas de rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos etanólicos y con acetato de
etilo de madera de olivo.

Los gráficos 2.3 y 2.4 muestran las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de
los extractos etanólicos y con acetato de etilo de madera de olivo.

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MAc 3,00 ME MAc

Extractos

ME 17,54

ST/ %

Gráfico 2.3. Medianas del rendimiento en ST de extractos de madera.

En los extractos de madera de olivo de la variedad Arbequina, la extracción con acetato


de etilo es un 82,90% menor en ST que la obtenida con etanol acuoso al 50% y de
acuerdo al análisis estadístico, existen diferencias significativas (p<0,0079) en el
rendimiento de ST en relación a los solventes de extracción (Tabla 2.5 y Gráfico 2.3).
A su vez, con acetato de etilo se extrae un 71,51% de PFT menos que con etanol agua
50%, registrándose valores de 5395,13 mg y 18938,85 mg de fenoles por kilogramo de
madera respectivamente (Gráfico 2.4). Las diferencias de las medianas del contenido en
PFT para los extractos tratados con etanol 50% y acetato de etilo resultan
estadísticamente significativas (p<0,0079) (Tabla 2.6).

3463,80 PFT ODF


MAc
5395,13
Extractos

7313,85
ME
18938,85

Concentración/ ppm Ac. Cafeico

Gráfico 2.4. Medianas del rendimiento en PFT y ODF de extractos de madera.

Un comportamiento similar se observa en los valores registrados en los rendimientos en


ODF (Gráfico 2.4). El etanol acuoso extrae un 52,64% más de ODF que el acetato de
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etilo. En este caso, a nivel estadístico, también se encuentran diferencias significativas


(p<0,0079) entre las medianas de los extractos (Tabla 2.6).
Contrariamente a lo manifestado por los extractos de hoja (Tabla 2.4), el acetato de etilo
extrae mayor proporción de ODF en madera que el etanol acuoso. Los valores
registrados en PFT y ODF (Tabla 2.6) señalan que sólo el 38,62% de PFT cuantificados
en el extracto etanólico son ODF, en tanto que, en el extracto con acetato de etilo este
porcentaje asciende al 64,20%. Como se señaló anteriormente, esto resulta interesante si
se tiene en cuenta que el grado de hidroxilación y la posición de los grupos oxhidrilos
en la molécula son factores importantes en la actividad antioxidante de los CF [6; 7].
En síntesis, para ambos extractos de madera se observa que los rendimientos en ST,
PFT y ODF presentan variación con respecto al solvente de extracción, lo que puede
explicarse en función a las diferentes afinidades de los compuestos bioactivos del leño y
los solventes del ensayo. Se evidencia en este estudio, que la composición química de
los extraíbles de la madera son en gran medida compuestos fenólicos hidrosolubles, ya
que es el etanol-agua 50% el que exhibe extracciones superiores, obteniéndose los
valores de las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF significativamente más
elevados. Sin embargo, es preciso resaltar que es el acetato de etilo el que extrae mayor
proporción de ODF sobre los fenoles totales extraídos.
Dado los resultados registrados se puede establecer que, desde la perspectiva de la
capacidad extractiva, el etanol acuoso al 50% se revela como el mejor de los solventes
empleados en la extracción de PFT y ODF originarios de la madera de olivo de la
variedad Arbequina. Además, este residuo de poda se puede considerar como una fuente
potencial de polifenoles naturales, resultando sumamente interesante investigar si estos
biocompuestos, presentes en los extractos, exhiben propiedades antioxidantes, temática
que se analiza en los capítulos 3 y 4 de la presente tesis.

2.4.3.- Análisis comparativo de los residuos de poda de olivo


Las medianas de cinco repeticiones de los rendimientos en sólidos totales (ST),
expresados como porcentaje de extracción (%) y de los contenidos en polifenoles totales
(PFT) y en ortodifenoles (ODF), expresados como ppm de ácido cafeico, de los
extractos de hojas y de madera de olivo extraídos con acetato de etilo y etanol acuoso al
50%, se analizan aplicando la prueba de Kruskal Wallis, que resulta significativa al 5%
(p<0,0079 a p<0,0159 respectivamente). En consecuencia, se utilizan las comparaciones

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múltiples y se obtienen los resultados (Anexo 3, Tablas A.3.7 a A.3.12) que se


presentan en la siguiente tabla:
Sólidos Polifenoles totales O-difenoles
Extractos totales (mg de ácido cafeico kg - 1 (mg de ácido cafeico kg - 1
(%) de residuo) de residuo)
HE 25,53 A 27467,65 A 17401,08 A
ME 17,54 B 18938,85 B 7313,85 B
% Diferencia de extracción por
31,30 31,05 57,97
material vegetal
HAc 7,07 A 10562,84 A 5018,80 A
MAc 3,00 B 5395,13 B 3463,80 B
% Diferencia de extracción por
57,57 48,92 30,98
material vegetal
* Letras distintas indican diferencias significativas al 5%
Tabla 2.7. Medianas de los rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos HE, ME, HAc y MAc.

En etanol la hoja presenta un rendimiento en ST un 31,30 % superior al de la madera, de


igual forma, en acetato de etilo las extracciones en hoja tienen un rendimiento mayor
comparado con los extractos de madera en un 57,57%, estas diferencias resultan
estadísticamente significativas (p<0,0079) (Tabla 2.7).
Asimismo, el extracto etanólico de hoja presenta un 31,05% más de PFT que el de
madera y comparando los extractos con acetato de etilo, el de hoja es un 48,92%
superior.
Los contenidos de ODF en hoja, para el etanol acuoso y acetato de etilo, presentan
incrementos de 57,97% y 30,98% comparados con los de madera respectivamente.
El hecho de que las hojas de olivo exhiben rendimientos mayores con ambos solventes
de extracción en los parámetros analizados, confirma lo publicado en otras
investigaciones acerca de que las hojas presentan naturalmente mayor contenido en PFT
[3] [4]
que la madera . Sin embargo, comparados con otras fuentes alternativas de CF
(Tabla 2.8), tanto las hojas como la madera de olivo de la variedad Arbequina
procedente de la poda, pueden ser consideradas excelentes fuentes de PF naturales con
posibles propiedades antioxidantes [3].
Extractos Polifenoles totales (ppm)
Etanólico de porotos de soja 343
Metanólico de porotos de soja 320,8
Con acetato de etilo de poroto de soja 23,1
Etanólico en salvado de avena 287,5
Metanólico en salvado de avena 278,1
Con acetato de etilo en salvado de avena 44,3
Tabla 2.8. Contenido de compuestos fenólicos en extractos vegetales. Fuente: Revista A&G [4].

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Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicos

De acuerdo con el análisis estadístico el rendimiento en PFT y ODF del etanol acuoso
es significativamente superior al acetato de etilo tanto en hoja como en madera de olivo
(p<0,0079, en ambas variables) (Tablas 2.4 y 2.6). El mayor poder extractivo del etanol
frente al acetato de etilo sobre compuestos fenólicos de diferentes fuentes vegetales fue
registrado recientemente por otros autores para madera y hoja de olivo cultivado bajo
[3] [4]
las condiciones edafoclimáticas del mediterráneo y sobre soja y salvado de avena
(Tabla 2.8), coincidiendo con los resultados obtenidos en la presente tesis para residuos
de poda de Arbequina, cultivadas en zonas cálidas.

MAc 3,00
HE ME

HAc 7,07 HAc MAc


Extractos

ME 17,54

HE 25,53

ST/ %

Gráfico 2.5. Medianas de los rendimientos en ST de los extractos MAc, HAc, ME y HE.

3463,80
MAc
5395,13
ODF

5018,80
PFT
HAc
Extractos

10562,84

7313,85
ME
18938,85

17401,08
HE
27467,65

Concentración/ ppm Ac. Cafeico

Gráfico 2.6. Medianas de los rendimientos en PFT y ODF de los extractos MAc, HAc, ME y HE.

En función de lo expuesto, se puede concluir que existe una mayor afinidad entre las
estructuras fenólicas presentes en los dos residuos vegetales y el etanol acuoso al 50 %,
lo que confirma la naturaleza polar de los fenoles presentes en ambos materiales. Queda

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comprobado además, que los residuos foliares del cultivar Arbequina presentan un
rendimiento significativamente superior en ST (p<0,0079), PFT (p<0,0079) y ODF
(p<0,0079 y p <0,0159), tanto en etanol acuoso al 50% como en acetato de etilo que la
madera de la misma variedad (Tabla 2.7 y Gráficos 2.5 y 2.6).
Un análisis más profundo de los rendimientos fenólicos revela que en los extractos la
mayor proporción de ODF no siempre coincide con la mayor concentración en PFT y en
ODF. Así, en el caso de los extractos MAc, que registra concentraciones en PFT y ODF
inferiores al resto de los extractos ensayados, es el que contiene mayor proporción de
ODF, ya que un 64,20% de los fenoles totales cuantificados resultan ser ODF, por lo
que se esperaría que este extracto manifieste la mejor propiedad antioxidante frente a un
sistema radicalario. El extracto HE, con los contenidos más elevados en PFT y ODF es
el que le sigue en este aspecto al extracto MAc con un 63,35% de ODF sobre el total de
PFT. En el caso del extracto HAc un 47,51% de los PFT son ODF y en ME este
porcentaje baja a un 38,62% (Tabla 2.4 y 2.6).
En síntesis, en base a los resultados registrados en el presente estudio, se puede estimar
que con acetato de etilo se puede llegar a extraer por kilogramo de residuo 18,94 g de
PFT en hoja y 5,40 g de estos compuestos bioactivos en la madera. En tanto, con el
etanol acuoso puede llegar a obtenerse para la hoja y madera respectivamente 27,48 g y
10,56 g de fitofenoles por kilogramo de residuo, lo que incrementa el interés del estudio
de la potencialidad de los extractos para contrarrestar la acción de RL sobre diferentes
sustratos. Por otra parte, cabe señalar que desde el punto de vista de las posibles
aplicaciones de los extractos como conservantes de productos alimenticios o su empleo
en la industria farmacológica y cosmetológica, el mayor poder extractivo de la mezcla
etanólica acuosa resulta positivo debido a la inocuidad del etanol y la toxicidad e
inflamabilidad del acetato de etilo. Resta comprobar la actividad antioxidante de los
extractos sobre distintos sistemas radicalarios.
En los capítulos 3 y 4 se analiza la incidencia de las propiedades antioxidantes de los
extractos frente a dos sistemas radicalarios diferentes, solución metanólica de DPPH y
aceite de oliva virgen sometido a condiciones forzadas de oxidación, respectivamente.

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2.5.- Citas bibliográficas

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containing plant extracts at different pHs”. Food Chemistry. Vol. 77. Pp. 155-161.
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metabolites”. Blackwell Scientific publications. Pp.237.
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<http://www.expoliva.com/expoliva2003/simposium/com.asp?anio=2003&codigo=TE
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función biológica”. Tesis de Doctorado. Universidad de Granada. Cap. I. Sección 2. Pp.
42.

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