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Prácticas de Microbiología General FCCBB-UNPRG

PRÁCTICA N° 01

BIOSEGURIDAD

DEFINICIÓN:
La bioseguridad es el conjunto de medidas de sentido común a ser adoptadas, con el
fin de reducir o eliminar los riesgos para el personal, la comunidad y el medio
ambiente, que pueden ser producidos por agentes infecciosos, físicos, químicos y
mecánicos.

La bioseguridad se realiza en conjunto; el personal que debe cumplir las normas de


bioseguridad, las autoridades que deben hacerlas cumplir y la administración que debe
dar las facilidades para que estas se cumplan.

COMPETENCIAS

 Conoce y aplica correctamente las normas de bioseguridad para el trabajo


experimental.
 Conoce e interpreta la simbología relacionada con la bioseguridad en el laboratorio
de Microbiología.

ACTUACIÓN EN CASO DE UN ACCIDENTE LABORAL.

En caso de que ocurra un accidente en el ámbito de trabajo, lo ideal es contar con una
guía detallada de actuación, un manual de procedimientos.

Librar a la persona que sufrió un accidente de improvisar una actuación resulta de


suma importancia debido a que no todos podemos superar hechos y tomar decisiones
razonables en circunstancias traumáticas.

Pasos a seguir:

1. Reconocer que surgió un accidente.

2. Informar a su supervisor inmediato.

3. El supervisor debe: tomar nota de fecha, hora, lugar, nombre y apellido de


persona/s involucradas, hacer una breve descripción de lo sucedido.

4. Contactarse con la aseguradora de riesgos del trabajo y derivar al hospital para


comenzar tratamiento preventivo y análisis.

5. Con respecto a la herida, dejar sangrar y lavar con abundante agua y jabón.

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

1. Las áreas en las que exista riesgo biológico deben estar perfectamente
señalizadas y con avisos de advertencia para el ingreso exclusivo al personal
autorizado.

2. Es imprescindible el uso de guardapolvo en el laboratorio.

3. Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y
jabón.

4. No ingerir o guardar cualquier tipo de alimento o bebida en el local del


laboratorio, sobre todo en los refrigeradores donde se guardan muestras
infecciosas, cultivos de microorganismos, agentes químicos o soluciones.

5. No fumar ni maquillarse en los ambientes del laboratorio.

6. Manipular las muestras biológicas con guantes. No llevarse las manos a la


cara, los ojos, ni la boca durante el trabajo, para evitar la autoinoculación.

7. No llevarse objetos a la boca.

8. Prohibir el pipeteo bucal. Utilizar pipetas automáticas o emplear peras de goma


u otro dispositivo similar.

9. Cambio de guantes según lo requiera el trabajo y en caso de accidente.

10. Al finalizar cualquier tipo de actividad y durante su estancia en el laboratorio,


lavarse bien las manos de manera frecuente.

11. No extraer el vestuario del laboratorio sin antes descontaminarlo.

12. Usar equipos de protección cuando el trabajo lo requiera (careta, respirador,


gorro, gafas protectoras, etc.).

13. Desinfectar el área de trabajo antes de comenzar su labor.

14. Mantener el laboratorio limpio y retirar de este cualquier material que no tenga
relación con el trabajo.

15. Mantener las puertas cerradas durante el trabajo.

16. En caso de derramamientos accidentales se debe informar inmediatamente al


docente y se procederá a abandonar el área y esperar un lapso de tiempo
antes de limpiar con agua y detergente, y proceder posteriormente a la
desinfección de la superficie sobre la que tuvo lugar.

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


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Niveles de Seguridad Biológica

Existen cuatro niveles establecidos según las técnicas utilizadas, los equipos de
seguridad y la estructura del laboratorio.

Nivel 1. En el nivel de bioseguridad 1 los microorganismos que pueden ser


manipulados están bien definidos y caracterizados por tener una muy baja o ninguna
virulencia para personas adultas saludables. En este nivel se incluyen bacterias como
Bacillus subtilis o ciertas cepas no patógenas de Escherichia coli como E. coli K12.
Sin embargo, estos microorganismos podrían representar algún riesgo para el público
en general, especialmente para niños e individuos con compromiso inmunológico. En
términos generales, el nivel de bioseguridad 1 no es apropiado para el trabajo con
bacterias patógenas e incluye condiciones apropiadas para la enseñanza de la
microbiología a un nivel introductorio.

Nivel 2. En laboratorios del nivel de bioseguridad 2 es donde se efectúa la mayor parte


del trabajo rutinario del laboratorio de microbiología clínica, incluyendo el manejo de
muestras clínicas de diversa índole y la manipulación de cultivos de microorganismos.
Los microorganismos que deben ser trabajados en el nivel de bioseguridad 2 incluyen
la mayor parte de las bacterias aisladas frecuentemente en muestras clínicas, como
Salmonella, Shigella, Vibrio cholerae, Campylobacter, Haemophilus, Neisseria,
Pseudomonas, Staphylococcus aureus y especies de Staphylococcus coagulasa-
negativa, Streptococcus y Enterococcus, entre otras. Bacterias que no deben ser
trabajadas en el nivel de bioseguridad 2, sino en el nivel de bioseguridad 3, incluyen
Mycobacterium tuberculosis, Brucella y Coxiella burnetii, entre otras.

Nivel 3. Este nivel es adecuado para trabajar con microorganismos de alto riesgo. El
uso de animales de laboratorio siempre implica uso de guantes. Los animales se
desinfectarán antes de desecharlos. El laboratorio debe estar aislado de la circulación
general, existiendo doble puerta de entrada, con una habitación para cambiarse y con
ducha. Debe tener, además, un sistema especial de extracción de aire. Los
microorganismos que deben ser trabajados en el nivel de bioseguridad 3 son
altamente infecciosos, pueden causar graves infecciones sistémicas en seres
humanos inmunocompetentes e incluyen a Mycobacterium tuberculosis, Coxiella
burnetii y las especies de Brucella.

Nivel 4. Este nivel solo se establece en laboratorios de experimentación y no en


laboratorios de microbiología clínica. Se suelen manejar microorganismos de altísimo
riesgo o que son exóticos del país, especialmente virus (Ébola, Hanta).

Cuestionario

1. Cuáles son los principios de la bioseguridad. Explique en qué consiste cada


uno de ellos.
2. Cuáles son las barreras de contención. Explique en que consiste cada una de
ellas.
3. Cuantos tipos de lavado de manos existe. Explique cada uno de ellos.

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4. Establezca la diferencia entre: Limpieza, Desinfección, Esterilización y


Eliminación.
5. Esquematice los símbolos de Bioseguridad en el laboratorio, no incluidos en la
presente guía.

SÍMBOLOS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


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LAVADO DE MANOS

 Debe ser ejecutada de inmediato, antes y después de cada procedimiento y del


contacto con el paciente. Se debe usar:

 Jabón neutro de preferencia liquido.

 Jabón con detergente anti- microbiano o con agente ante-sépticos en situación


específica (brote epidémico, procedimiento invasivo, unidades de alto riesgo).

 Secuencia de la Técnica del lavado de manos:

o Subirse las mangas hasta los codos.


o Retirar reloj y alhajas.
o Mojarse las manos con agua.
o Aplicare 3 a 5 ml de jabón.
o Friccionar la superficie de la palma de la mano y puño durante 10-15
segundo.
o Enjuagar con agua de arrastre.
o Secar con toalla de papel.
o Cerrar la llave con la toalla.

EL GUANTE NO REEMPLAZA AL LAVADO DE MANOS

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TÉCNICA DEL LAVADO DE MANOS

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PRÁCTICA N° 2

MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO

INTRODUCCIÓN

En el laboratorio de Microbiología, especialmente en el desarrollo de las prácticas es


esencial la utilización de instrumentos y equipos para el manejo de sustancias
químicas y biológicas para lo cual existe una serie de instrumentos diseñados para
facilitar el trabajo en el laboratorio, así como hacerlo seguro y práctico.

Por tal razón se hace necesario de que antes de la realización de un trabajo


experimental el alumno conozca tanto el material como los equipos a utilizar en el
laboratorio de Microbiología, la función y utilidad de de cada uno de ellos así como su
correcta manipulación para reducir el riesgo de accidentes en el laboratorio.

COMPETENCIAS

 Reconoce el material de uso en el laboratorio de Microbiología y adquiere


habilidad en el manejo del mismo.

 Reconoce equipos de uso en el Laboratorio de Microbiología, aprende su uso,


calibración y cuidado.

 Prepara y/o acondiciona el Material de Laboratorio de Microbiología para su


esterilización.

Material de Vidrio

 Embudo de vidrio
Es un instrumento empleado para canalizar
líquidos y materiales sólidos granulares en
recipientes con bocas estrechas. Es utilizado en
el filtrado de sustancias.

 Vaso de Precipitación
Recipiente cilíndrico de vidrio fino que se utiliza
muy comúnmente en el laboratorio, sobre todo,
para preparar o calentar sustancias y traspasar
líquidos.

 Probetas graduadas
Son recipientes cilíndricos, graduados, de vidrio
grueso, de boca ancha, abierta y con pico, y las
hay de distintos volúmenes. Es un instrumento
volumétrico, que permite medir volúmenes
considerables con un ligero grado de inexactitud.
También sirve para contener líquidos.

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 Matraz de Erlenmeyer
Son recipientes de vidrio de forma cónica, base
ancha y cuello angosto. Tienen muchas
aplicaciones, por ej. En volumetría para hacer
titulaciones, facilitando una mejor agitación del
líquido y evitando pérdidas por salpicaduras.
Para preparar soluciones y medios de cultivo.

 Tubos de ensayo
Son tubos de vidrio de diferentes anchos y
longitudes. Tienen forma cilíndrica y es
utilizado para contener muestras líquidas,
realizar reacciones bioquímicas y calentar
sustancias.

 Láminas Porta objetos


Es una fina placa de cristal sobre el cual se
disponen objetos para su observación en el
microscopio, ya sea en fresco o coloreadas.
 Laminillas cubre objetos
Son finas laminillas de vidrio, de forma
cuadrada, sirven para cubrir muestras frescas
para la observación microscópica.

 Mechero de Alcohol
Los mecheros de alcohol son de uso corriente
en el laboratorio; se emplean para
temperaturas no muy elevadas. Sirve para
calentar sustancias utilizando como
combustible alcohol o ron. Se utiliza para
mantener un ambiente de esterilidad y evitar la
contaminación de los medios de cultivo.

 Placas de Petri
Es un recipiente circular, de cristal, con una
cubierta de la misma forma que pero de
mayor diámetro, para un cierre no hermético.
Son de diversos tamaños y se utilizan para
colocar medios de cultivo sólido.

 Pipetas graduadas
Son tubos cilíndricos, estrechos con un
extremo terminal cónico graduadas en ml. Se
emplean para medir cantidades variables de
líquido. Pueden ser terminales, cuando la
medición se realiza hasta la punta o no

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terminales, la medición se realiza en la última línea de graduación.

 Frascos gotero
Son frascos de vidrio, transparentes o de color
ámbar. Permite contener sustancias que se
necesitan agregar en pequeñas cantidades.

 Matraz aforado
Son recipientes de cuello estrecho y cuerpo
ancho, en el cuello presenta marcada una
señal ó “línea de aforo”, en él se indica el
volumen capaz de contener. Se utiliza para
preparar soluciones y diluir líquidos.

Material de porcelana

 Mortero y pilón
Son utensilios hechos de diferentes materiales
como: porcelana, vidrio o ágata, los morteros de
vidrio y de porcelana se utilizan para triturar
materiales de poca dureza y los de ágata para
materiales que tienen mayor dureza.

 Malla de asbesto

Son mallas de hierro más o menos finas, a


veces con un círculo de asbesto en el centro
(malla de asbesto). Son usadas cuando no se
requiere calentamiento a fuego directo, el
asbesto es buen aislante del calor.

Material de Metal

 Gradillas

Son los elementos que se utilizan para colocar


tubos de ensayo en posición vertical. Las hay
de los más diversos tamaños y construidas con
diferentes materiales (madera, metal, etc.),
aunque las más usadas son de metal.

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 Trípode
Se utiliza cuando no se tiene el soporte universal
para sostener objetos con firmeza. Su principal uso
es como herramienta de sostén a fin de evitar
el movimiento. Sobre la plataforma del trípode se
coloca una malla metálica para que la llama no dé
directamente sobre el vidrio y se difunda mejor
el calor.

 Mechero Bunsen
Utilizado para esterilizar, calentar muestras y
sustancias químicas. Constituido por un tubo
vertical que va enroscado a un pie metálico con
ingreso para el flujo de gas, el cual se regula a
través de una llave. En la parte inferior del tubo
vertical existen orificios y un anillo metálico móvil
o collarín también horadado, los cuales permiten
regular el flujo de aire que aporta el oxígeno
necesario para llevar a cabo la combustión
.
 Espátulas
Es una lámina plana angosta que se encuentra
adherida a un mango de madera o metal. Se utiliza
para tomar pequeñas cantidades de sustancias o
compuestos químicos que van a ser pesados.

 Asas Bacteriológicas
Están constituidas por una base que puede estar hecha de platino,
acero, aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o
platino que termina o en aro o en punta, este instrumento de laboratorio
nos ayuda transportar o trasplantar microorganismos de un medio a
otro, así como para la realización de frotis.

 Asas Micológicas
Está formada de una base que puede estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento más grueso que el asa bacteriológica termina en
un ángulo de 45º o forma de “L”, este instrumento de laboratorio nos
ayuda transportar o trasplantar hongos de un medio a otro medio para
su adecuado desarrollo, así como para la realización de frotis.

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Equipos de Laboratorio

 Microscopio
Es un equipo constituido básicamente por un conjunto de lentes
superpuestos que nos permite visualizar directamente, por el aumento
de la imagen, cuerpos no visibles al ojo humano.

 Balanza analítica
Son instrumentos de precisión, utilizados para pesar los medios de
cultivos y reactivos que se preparan en un laboratorio de Microbiología.
 Baño María
Equipo de laboratorio de Clínico, fabricado en acero inoxidable, utilizado
para conferir temperatura uniforme a una sustancia líquida o sólida o
para calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene
en otro mayor con agua llevar con el fin de mantener una muestra a una
temperatura específica. Por regla general se utilizarán 37°C para
reacciones enzimáticas.
 Incubadoras
Equipos indispensables en la sección de bacteriología, por lo general
son de acero inoxidable. Se utilizan a una temperatura de 37ºC para
realizar cultivos de bacterias, hongos a una temperatura similar a la del
cuerpo humano.
 Horno esterilizador
También llamado “Horno Pasteur” o “estufa Poupinel”; es un equipo
utilizado para esterilización a calor seco (por corrientes de aire caliente).
El vapor saturado es el método de esterilización por excelencia y la
opción de referencia para esterilizar material inerte que tolera las altas
temperaturas.
Tabla de relación Temperatura-Tiempo en el Horno Pasteur

 Autoclave
Equipo fijo de acero inoxidable, que se emplea para la esterilización de
material de laboratorio empleando calor húmedo. Es un medio en el que
se emplea vapor saturado para producir hidratación, coagulación e

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hidrólisis de las proteínas de la célula. Para la esterilización por este


método se requiere 121°C de temperatura con 15 libras de presión en
un tiempo de 20 minutos.
En la autoclave, el vapor generado debe cumplir los siguientes
requisitos:
 Bebe acceder a todos los lugares de la cámara donde se
encuentra el material.
 No debe mezclarse con el aire para poder contactar a todos los
envoltorios y objetos.
 Debe tener una calidad de vapor del 97% o superior (con menos
de un 3% de agua). El vapor que contiene menos del 97% de
vapor es el vapor húmedo o sobresaturado que moja los
envoltorios a esterilizar.
Etapas de un ciclo de esterilización con autoclave:
a) Calentamiento inicial de la cámara: se da la salida del aire del
interior de la cámara, donde se encuentra el material a esterilizar
previamente empaquetado.
b) Calentamiento de la temperatura del interior de la cámara: con
inyecciones de vapor hasta alcanzar las condiciones
(temperatura y presión) de esterilización.
c) Realización del ciclo de esterilización: con el mantenimiento de
los parámetros previamente fijados.
d) Expulsión del vapor o desvaporización: liberación de vapor con
la caída de la presión (descompresión).Secado final: con la
igualación de la presión interior de la cámara a la presión
atmosférica.

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


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 Contador de colonias
Equipo utilizado para el recuento de colonias bacterianas y mohos en
placas de cultivo con agar. Se utilizan para estimar la densidad de
microorganismos en un cultivo líquido. Una dilución adecuada, o varias
diluciones en serie dentro del rango estimado apropiado, los cuales han
sido propagados mediante técnicas de siembra estériles a una placa
con medo de cultivo.

 Conservadoras y congeladoras
Equipos de refrigeración, cuya utilidad es la mantención o conservación
de los medios de cultivos a temperaturas para de entre 4 – 8 °C. La
temperatura ideal de congelación para conservación es a -20°c.

 Cabinas de bioseguridad
Equipo para manipular muestras biológicas bajo una atmósfera
microbiológicamente controlada. Gabinete de seguridad biológica con
ventana frontal deslizable y alarma que indica el nivel de apertura de la
ventana. Flujo de aire vertical y recirculación de aire filtrado. De acero
inoxidable. Con filtros absolutos de eficiencia del 99.99% (HEPA) y
retención de partículas de 0.3 micras. Con llave para toma de oxígeno.
Se utiliza para la manipulación de muestras biológicamente infecciosas,
evitando la contaminación de la misma así como de operador.

 Jarra de anaerobiosis (Jarra de Brewer)


Fabricada en policarbonato de alta transparencia que facilita el control
de las placas con soporte acero inoxidable en su interior. Recipiente
ideal para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte
de acero inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de
atmósfera libre de oxígeno.

 pH metro
Es un sensor utilizado en el método electroquímico para medir el pH de
una disolución. La determinación de pH consiste en medir el potencial
que se desarrolla a través de una fina membrana de vidrio que separa
dos soluciones con diferente concentración de protones.

 Vortex
El agitador vórtex para tubos está diseñado para mezclar de modo
intenso células de bacterias y hongos, permitiendo la homogenización
de suspensiones celulares.

 Centrífugas
Son equipos rotatorios, utilizados en los laboratorios clínicos y otros,
para la separación de los solutos y sus solventes mediante el
aprovechamiento de la fuerza centrífuga.

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


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Balanza analítica Baño María Incubadora

Horno Pasteur Autoclave Conservadora

Contador de colonias Jarra de Brewer pH metro

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Vortex Centrífuga Cabina de Bioseguridad

Microscopio compuesto

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


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Criterios a considerar para el correcto uso, conservación y control de calidad de


los equipos de Laboratorio de Microbiología.

 Los equipos de Laboratorio deberán encontrarse fijos en lugares específicos


dentro del laboratorio, sobre superficies niveladas y resistentes, evitando su
movilización debido a que esto puede causar su descalibración y/o accidentes.

 Deben estar conectadas a fuentes de energía estables, ya que los cambios


bruscos de tensión eléctrica pueden afectar su funcionamiento y/o dañarlos.

 Debe realizarse periódicamente la limpieza de ellos, para lo cual éste no debe


encontrarse en funcionamiento y siguiendo las especificaciones técnicas del
fabricante.

 El personal responsable del Laboratorio deberá realizar la “Programación anual


para mantenimiento preventivo” de los diversos equipos para verificar que se
encuentren en óptimas condiciones de funcionamiento.

 Cada uno de los equipos deberá contener en lugar visible las correctas
instrucciones de encendido y uso del equipo.

 Los equipos de incubación, conservación y congelación deberán contener una


hoja de registro de temperaturas en un lugar visible, el cual deberá ser llenado
diariamente por el personal al momento del ingreso y salida del Laboratorio.

 Los equipos de esterilización: a calor seco (horno Pateur) y Autoclave deberán


tener un registro de control de ciclos de esterilización y autoclavado de
material, el cual deberá ser llenado cada vez que se utilice el equipo. Así
mismo deberán utilizarse indicadores químicos o biológicos que permitan la
verificación de un adecuado proceso de esterilización.

Cuestionario
1. ¿Cuantos tipos de cabinas de Bioseguridad existen y cuál es la aplicación de
cada una de ellas?
2. Defina: Limpieza, Desinfección, Esterilización, Descontaminación, Eliminación y
establezca la importancia de cada una de ellas.
3. Realice un esquema de la adecuada distribución de los ambientes un
laboratorio de Microbiología.
4. Indique qué equipos de microbiología automatizados y semiautomatizados
existen en la actualidad en el laboratorio de microbiología y en qué consiste su
funcionamiento.
5. Mencione otros equipos de uso en el laboratorio de Microbiología,

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PRÁCTICA N° 3

TÉCNICAS MICROSCÓPICAS: MANEJO, USO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO

INTRODUCCIÓN

Los organismos vivos pueden ser unicelulares o multicelulares. La mayoría de las


células no son visibles a simple vista. Para observar y estudiar las células y los tejidos,
se usan diferentes tipos de microscopios. El microscopio de disección, se utiliza para
el estudio de objetos relativamente grandes, de aproximadamente 0.05 a 20
milímetros. Los microscopios electrónicos, son utilizados para el estudio de objetos
muy pequeños, hasta menos de un nanómetro (1 nanómetro = 0,000000001 metros.
Es decir, es la mil millonésima parte de un metro, o millonésima parte de un milímetro.
1 milímetro = 1.000.000 nanómetros). El microscopio compuesto, se utiliza
principalmente para el estudio de objetos de aproximadamente uno a 2000
micrómetros (µm), aunque se pueden ver cosas aún más pequeñas con el empleo de
técnicas especiales. En el microscopio compuesto, la propiedad de hacer que las
imágenes de las cosas se vean más grandes se conoce como ampliación o
magnificación, y la capacidad de distinguir detalles entre dos puntos muy cercanos se
conoce como poder de resolución o poder de separación. El poder de resolución
determina los límites prácticos a los que puede ser llevada la ampliación de la imagen.
La resolución es más importante que la ampliación, debido a que es indispensable
observar con claridad los detalles finos. El poder de resolución máximo de un buen
microscopio óptico de laboratorio, es aproximadamente 0,25 µm. El poder de
resolución del ojo humano es de 0,25 mm. El microscopio compuesto es un
instrumento valioso en el laboratorio de Biología: con el que se obtienen imágenes
dimensionales del objeto observado al ser atravesado por la luz mirando a través de
los oculares: de un lado el microscopio provee aumento y permite ver detalles de
objetos tan pequeños que no son visibles a simple vista (menores de 0.1 mm).

El estudio de células vivas, se realizan en preparaciones frescas de organismos o


células en su estado natural. Se utilizan colorantes vitales que no hacen daño durante
el corto tiempo que se analizan. Las preparaciones frescas son muy fáciles de hacer,
se prepara una disolución acuosa donde se introducen los microorganismos, se pone
una gota en un porta objetos, se tapa con una laminilla cubre objetos y se observa al
microscopio. El estudio de células muertas, pasa por proceso de fijación y coloración.
Las preparaciones fijadas y teñidas son las más utilizadas, la fijación conserva las
células y tejidos en un estado lo más parecido posible en morfología y composición
química al estado vivo, y la tinción facilita la visualización de la morfología y estructura
interna de las células y tejidos. Por otra parte, es necesario conocer el significado de
las unidades de medición para entender la importancia de los resultados de
experimentos y expresarlos correctamente. En este sentido, se utilizan oculares
micrométricos y micrómetros de platina para calibrar los microscopios. La presente
practica pretende que el estudiante se familiarice con el manejo del microscopio
compuesto, a la vez que observa células y microorganismos, y utilice algunos
colorantes para diferenciar estructuras; además, aplicará una técnica sencilla para
medir algunos objetos bajo el microscopio compuesto.

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El microscopio consta de las siguientes partes:

A. Sistema Mecánico
 Pie o base
 Brazo o columna
 Tubo óptico
 Revólver
 Platina
 Tomillos macro y micrométrico

B. Sistema Óptico; formado por un conjunto de lentes convergentes que incluye a


oculares y objetivos.

C. Sistema de Iluminación, comprende:


 Espejo o lámpara de iluminación
 Condensador
 Diafragma
 Porta filtro
 El conocimiento del microscopio es de suma importancia para los estudiantes
de obstetricia si se tiene en cuenta que el desarrollo y evolución en los últimos
años ha permitido dilucidar los aspectos inherentes a la naturaleza de los seres
vivos y la individualización de las estructuras facilitando su estudio y
comprensión.

COMPETENCIAS

 Identifica y Manipula adecuadamente correctamente las partes del microscopio


óptico.
 Explica la formación de imágenes en el microscopio óptico y calcula la
magnificación (aumentos) de la imagen del objeto obtenida.
 Realiza preparaciones en fresco y coloraciones definiendo el uso de los
diferentes objetivos.

MATERIALES Y EQUIPOS

 Material Biológico
 Muestras de orina, leche, fermentos
 Láminas montadas de tejidos animales, Bacterias, Parásitos.

 Material de Laboratorio
 Microscopio compuesto
 Láminas portaobjetos y laminillas cubreojetos.
 Aceite de cedro
 Colorante Azul de metileno.

 Equipos
 Microscopio Compuesto.

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PROCEDIMIENTOS

EXPERIENCIA 1: ESTRUCTURA, MANEJO, USO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO


FOTONICO.

SISTEMA MECÁNICO: Comprende los siguientes dispositivos

• Base: da soporte y estabilidad


• Columna o brazo: Sostiene los oculares y objetivos
• Platina: Superficie para colocar la lámina portaobjeto.
• Ajuste mecánico de la platina: Ajusta y mueve el porta objeto para su exploración.
• Revólver: Anillo que gira sobre su eje, contiene los objetivos de diferentes
aumentos
• Cabezal: Contiene los oculares.
• Anillo de enfoque del ocular izquierdo: Se usa para compensar la diferencia de
visión que existe entre los dos ojos
• Ajuste de distancia interpupilar: Adapta la distancia lateral de los oculares según la
distancia de los ojos del observador
• Tornillo macrométrico: Sirve para hacer ajustes gruesos, para subir y bajar la platina
rápidamente; se usa solamente con los objetivos de 4x y 10x.
• Tornillo micrométrico: Sirve para hacer ajuste fino, para subir y bajar la platina muy
lentamente; se usa con todos los objetivos para perfeccionar el enfoque de la
imagen
• Cordón eléctrico: Conecta el microscopio a la fuente de energía eléctrica
• Interruptor: Enciende y apaga la lámpara de luz

SISTEMA ÓPTICO: Comprende los lentes oculares, los lentes objetivos y los
dispositivos de iluminación.

• Oculares: El microscopio binocular, tiene dos lentes oculares; el aumento puede ser
de 6x, 10x, 15x y 20x; para determinar la magnificación de la imagen que se
observa a través del microscopio, multiplica la magnificación de los oculares por la
del objetivo en uso.
• Objetivos: Lentes principales del microscopio; son parafocales, pues al cambiar de
un objetivo a otro, la imagen queda casi en foco y sólo es necesario un leve ajuste;
en este caso, hay tres objetivos:
- Rastreo: cuatro magnificaciones o 4x
- Baja potencia: 10x
- Alta potencia: 40x
- Objetivo de inmersión: son aquellos que usan aceite de cedro entre la lente frontal y
el objeto a observar. Son los más poderosos y hacen que la imagen de los objetos
se vea 100 veces más grandes

SISTEMA DE ILUMINACIÓN: Comprende dispositivos que regulan la intensidad de


iluminación.

• Condensador: Lente que condensa la luz en el plano de la laminilla

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• Tornillo para ajuste del condensador: Sirve para


subir y bajar el condensador; para nuestro uso el
condensador debe estar un poco por debajo de su
posición más alta
• Diafragma: Sirve para controlar el diámetro del
cono de luz que llega al objetivo, no para controlar
la intensidad de iluminación; al disminuir la
apertura del diafragma se aumenta el contraste y
la profundidad de foco, pero se disminuye la
resolución; para lograr la mejor imagen posible es
necesario cambiar la apertura del diafragma al
cambiar el objetivo
• Lámpara de iluminación: Proporciona la luz que llega al objeto por estudiar y el
sistema óptico del microscopio
• Filtro azul: Absorbe el exceso de luz roja y amarilla del iluminador para que la
iluminación sea más similar a la luz natural

MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina


completamente.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4 aumentos (4x) o colocar el de 10
aumentos (10x), y seguir cambiando a más aumentos, si el análisis de la preparación
lo requiere.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya
que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar
alguno de ellos o ambos.
b. Luego, mirando, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando la imagen de la muestra se observe nítida,
girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Si se quiere observar la muestra a mayores aumentos, pasar al siguiente objetivo,
girando solamente el revólver. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino.
6. Solamente cuando se usa el objetivo de inmersión (100x), debe usar aceite de
inmersión. Este aceite se coloca entre la muestra y la lente frontal del objetivo.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

 El microscopio es un equipo óptico de alta precisión y como tal debe ser tratado con
mucho cuidado tanto en el aspecto mecánico como óptico.

 La inspección del microscopio antes de su uso y la limpieza después de su uso son


hábitos que contribuyen a la buena conservación de este equipo.

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


Prácticas de Microbiología General FCCBB-UNPRG

 Las partes ópticas y las lentes deben limpiarse cuidadosamente con un trapo de
lino fino o piel de gamuza que no desprenda pelusa. Nunca debe friccionarse el
papel o gamuza sobre la lente.

 Se debe preservar el equipo de la humedad y el polvo ambiental para evitar la


formación de hongos y el atascamiento de sus partes por 27 acumulación de polvo
y pelusas. El microscopio debe guardarse en su estuche de protección (con una
bolsa conteniendo no menos de 0,5 kg. de Silicagel seco de color azul) lejos de la
humedad y polvo. En caso que el Silicagel se tome de color rosado cambiar por
otro o calentar hasta que se tome azul para su reutilización.

 El personal de laboratorio nunca debe desarmar el microscopio para realizar


limpieza o reparación. Este trabajo debe ser realizado por personal especializado
con la finalidad de garantizar que el equipo mantenga su eficiencia y precisión.

 La superficie exterior de los oculares debe limpiarse diariamente. Recordar que


tanto los párpados como las pestañas tienen grasa, y al apoyarlos sobre los
oculares, las lentes pueden ensuciarse. Para la limpieza debe emplearse papel
lente o un trozo de gamuza seca.

 El objetivo de inmersión debe limpiarse después de su uso con papel especial para
limpieza de lentes (Lens Cleaning llssue 105,10 x 15 cm) humedecido con tolueno
o bencina para eliminar el aceite de inmersión. Por ningún motivo la lente de
inmersión quedará sin limpiarse, caso contrario el aceite se secaría y ocasionaría
la inutilización del objetivo.

 Utilizar alcohol etílico 95° para la limpieza de lentes de los oculares, filtro y todos los
elementos y lentes de condensador.

 Para la limpieza diaria del microscopio se requiere disponer del siguiente material: -
Trapo de lino fino. - Papel lente o bien papel absorbente tipo pañuelo descartable.
También una piel de gamuza o trapo del tipo que no desprenda pelusa. - Tolueno o
bencina para limpiar los objetivos. - Pequeña pera de goma. - Pincel fino. - Una
bolsa conteniendo no menos de 0,5 kg. de Silicagel.

Cuestionario

1. Describa correctamente las partes de un Microscopio.


2. Describa las características y aplicación del Microscopio de Fluorescencia.
3. Describa las características y aplicación del Microscopio de campo oscuro.
4. Describa las características y aplicación del Microscopio Electrónico.
5. Que otros tipos de microscopios existen, defina su uso y aplicaciones.

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal


Prácticas de Microbiología General FCCBB-UNPRG

Dpto. Académico de Microbiología y Parasitología Blgo. Manuel Farcio Villarreal

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