TECNICAS DE AISLAMIENTO, OBTENCIÓN DE CULTIVOS

PUROS
Introducción
En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados,
sino integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos
microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y
trabaja rcon especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros. Para
obtener cultivos axénicos o puros a partir de una población microbiana mixta,
se utilizan las denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas
durante elsiglo XIX. (Wistreich; 1983)Para efectuar el estudio de los
microorganismos, se han diseñado diversos método sque permiten cultivarlos
bajo condiciones artificiales, en los que es posible cultivarlos bajo condiciones
experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. (Madigan;2004)El
aislamiento de un microorganismo para obtener un cultivo puro se realiza
principalmente en un medio sólido. Se inicia por la separación de una sola
célula a partir de una población y requiere también que la colonia que surja de
esta célula se mantenga separada de otras células o colonias (Vullo; 2000).El
aislamiento de un cultivo puro puede hacerse también en medios líquidos,
siempre que el organismo predomine en el material de partida. (Seeley;
1991)Es la separación de un determinado microorganismo del resto de
microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por
estría sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesta en una placa de
Petri. Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa
de platino y se reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio
quedan separadas e inmovilizadas las células bacterianas. (Banwart; 1982)
Tras la incubación en condiciones adecuadas, cada célula viable origina una
colonia visible resultado de sucesivas divisiones celulares. Cada colonia
bacteriana tiene unas características determinadas en cuanto a su forma,
borde, elevación, tamaño, consistencia, etc.Los tipos de bacterias presentes
en la muestra original son visibles como tipos diferentes de colonias. A partir
de colonias separadas suficientemente es posible obtener un cultivo puro de
cada uno de los tipos de bacterias presentes en la muestra original. (Bourgeois;
1994). Por lo tanto el objetivo de la práctica es reconocer las técnicas de
aislamiento para obtener cultivos puros, ya sea por estría simple o compuesta

Material y métodos
Para realizar esta práctica se utilizaron elementos como agar nutritivo, cajas
Petri, una autoclave, incubadora, cámara de flujo laminar, asa bacteriológica,
mechero, cinta masking, marcador para CD. Se elabora el medio de cultivo, en
este caso es agarnutritivo, que después de prepararlo, se llevan los envases al
autoclave (Model NO.25X-1), en donde serán esterilizados, a una temperatura
de 115°C a 15 minutos.Una vez realizado el proceso de esterilización, se retiran
los frascos de la autoclave, yse los lleva a la cámara de flujo laminar
(Streamline), en donde se realiza el traspaso del medio de cultivo a las
diferentes cajas Petri, lo cual se lo realiza colocándose alcohol en las manos
para eliminar las bacterias de nuestras manos y de esta manera no contaminar
nuestro medio. Realizado este procedimiento, utilizamos el asa bacteriológica,
la cual primero esterilizamos, ya que la colocamos en la llama del mechero
hasta que esta tome un color rojo, y sin soltar el asa la agitamos dentro de la
cámara para enfriarla y para que esta no derrita el agar solidificado. Cogemos
con el asa un microorganismo presente en una muestra y la sembramos en
forma de zigzag en nuestra caja Petri que tiene una división por la mitad,
realizado esto, volvemos a esterilizar el asa, cogemos nuevamente el
microorganismo, y lo sembramos de la misma manera en la otra mitad de
la caja Petri, siendo esta una inoculación por estría simple. Para realizar la
inoculación por estría compuesta, se utiliza el procedimiento anterior, solo
que para esta, no utilizamos una caja Petri con división o bi-Petri sino un mono-
Petri, en el que igualmente, esterilizamos el asa, cogemos el microorganismo
y lo sembramos en un extremo de la caja haciendo estrías rectas, pero el asa
no debe romper el agar; esterilizamos nuevamente, pero esta vez no cogemos
al microorganismo, sino que volvemos a realizar el estriado en el extremo
adyacente dela caja, haciendo que estas formen un ángulo recto.
Este procedimiento lo realizamos tres veces en la misma caja y se termina con
una estríaen zigzag. Terminado el proceso de inoculación en las cajas Petri,
rotulamos y diferenciamos en cuál de ellas se realizó una inoculación
compuesta y una simple, seguido de nuestro nombre y la fecha. Finalizado el
proceso de rotulación llevamos las cajas Petri, en filas con la tapa hacia abajo,
formando paquetes, los cuales serán sujetados con cinta masking, y llevados
hacia la incubadora (BLUE M), para que estos microorganismos sembrados por
estas dos técnicas de aislamiento puedan desarrollarse, ya que pasada una
semana podamos observar si la inoculación que se realizo fue
hecha correctamente