FÓSFORO DISPONIBLE.

Espectrofotometría
Práctica 7

OBJETIVO
Determinar fosforo disponible en el suelo

NOTA: USAR BATA DE LABORATORIO, GAFAS DE SEGURIDAD Y TAPA BOCA

Paso 1. Manejo De La Vidriería

Todo material de vidrio a emplearse para la determinación de fosforo en suelos se debe lavar
primero con agua y jabón; posteriormente al lavado se debe lavar con mezcla sulfocrómica
tratando de que sean impregnadas todas las paredes del material de vidrio con el fin de remover
la materia orgánica que el agua y el jabón no haya limpiado posteriormente se lava con agua
destilada y el residuo se desecha en el frasco de residuos del laboratorio (No en el sifón); el paso a
seguir es sumergir el material previamente lavado por un lapso de 10 minutos.

Paso 2. Preparación De Los Reactivos

1. Mezcla sulfocrómica: a 500 mL de dicromato de potasio 1 N agrego 50 mL de ácido
sulfúrico concentrado (esta adición debe realizarse a chorro de agua).

2. Ácido Clorhídrico al 3%: en una cubeta con capacidad de 4 L agregar 3L de agua y 100 mL
de ácido clorhídrico concentrado.

3. Preparación de la solución patrón de fosfato:

 Patrón de Fosfato 50 ppm (solución madre): En beaker de 50 mL pesar
exactamente 0,1097 g de KH2PO4 (fosfato ácido de potasio) y disolver en 20 mL de
agua destilada y desionizada y 1mL de ácido clorhídrico; posteriormente trasvasar
a balón aforado de 500 mL y llevar a volumen.
 Patrón de Fosfato 20 ppm (solución a emplear): de la solución madre de fosfato
realizada anteriormente medir 100 mL y llevar a volumen en balón aforado de 250
mL

4. Preparación de la solución extractora:

Para preparar 250 mL de la solución extractora, pipetear con cuidado 7,5 mL de la solución
stock de fluoruro de amonio 1N y 12,5 mL de ácido clorhídrico al 0,5 N
 Preparación de la solución stock de fluoruro de amonio 1N (NH4F): En beaker de
50 mL pesar 9, 2500 g de fluoruro de amonio disolver en 20 mL de agua y
trasvasar a balón aforado de 250 mL y llevar a volumen.
 Preparación de la solución de ácido clorhídrico 0,5 N: en balón aforado de 250 mL
agregar 12,5 mL de ácido clorhídrico concentrado a 20 mL de agua y llevar a
volumen.

5. Preparación de la solución de molibdato de amonio:

En Beaker de 50 mL pesar 12,5 g de molibdato de amonio y disolver en 100 mL de agua y
agregar lentamente y a chorro de agua 140 mL de ácido clorhídrico concentrado;
 posteriormente llevar a volumen en balón aforado de 500 mL. (después de preparada la
solución tener en cuenta que esta se descompone por la luz por lo tanto hacer uso de esta
antes de transcurrir los 8 días de la preparación de la solución; de igual forma cubrir con
papel aluminio para evitar que la luz la descomponga durante los siguientes 7 días de uso).

6. Preparación de la solución de cloruro de estaño:

En beaker de 50 mL pesar 0,300 g de cloruro de estaño y disolver en 20 mL de ácido
clorhídrico concentrado, trasvasar en balón aforado de 100 mL y llevar a volumen con
ácido clorhídrico concentrado.

Tratamiento a la muestra de suelo:

En beaker de 50 mL pesar 2,85 g de muestra seca y tamizada a 2mm y registrar el dato en bitácora
ya que este dato es muy importante para el posterior cálculo de las ppm de fosforo cuantificadas
por el método en suelos; agregar 20 mL de solución extractora y homogenizar durante 1 minuto
posteriormente filtrar 2 veces con papel filtro doble con el fin de separar la porción de suelo que
quedo en suspensión luego de la homogenización con la solución extractora; luego de filtrar se
toman 6 mL de la muestra para determinar las ppm de fosforo en la porción de suelo.

Construcción de la curva de calibración

Luego de preparar los materiales y los reactivos que se van a usar para determinación de fosforo
en suelos se debe de construir una curva de calibración con el fin de cuantificar el fosforo en las
muestras de suelo; en la siguiente tabla se muestran 8 tubos de los cuales hace parte de la curva
de calibración el blanco (B) y los tubos del 1 al 7 y el tubo 8 es como se debe de preparar la
muestra; esta se debe leer a 750 nm
TUBO
MUESTRA
B 1 2 3 4 5 6 7 8
AGUA DESTILADA 6,4 5,7 5,2 4,2 3,2 2,2 1,2 0,2 0,4
PATRON DE FOSFATO (20 ppm) 0 0,7 1,2 2,2 3,2 4,2 5,2 6,2 0
SOLUCIÓN EXTRACTORA 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
CLORURO DE ESTAÑO 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
MOLIBDATO DE AMONIO 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6
MUESTRA 0 0 0 0 0 0 0 0 6

RETENCIÓN FOSFÓRICA. Espectrofotometría

OBJETIVO
Determinar el porcentaje de retención fosfórica de un suelo por espectrofotomería – método azul.

METODOLOGÍA
Muestra: seca y pasada por tamiz de 2mm
Reactivos:Patrón de fosfato a 50 ppm, agua destilada y desionizada, solución extractora (Bray II),
molibdato de amonio y cloruro de estaño.
Materiales: balanza analítica, frascos plásticos, bureta, equipo agitación horizontal, tubos de
centrífuga, centrífuga, balones aforados 50mL, tubos de ensayo de 10mL, pipeteador, pipetas de
10mL - 2mL - 1mL, micropipetas, beaker de vidrio 80mL, vortex, espectrofotómetro.

Paso 1. Manejo De La Vidriería

Todo material de vidrio a emplearse se debe lavar primero con agua y jabón neutro; luego se debe
lavar con mezcla sulfocrómica tratando de que sean impregnadas todas las paredes del material
de vidrio con el fin de remover la materia orgánica que el agua y el jabón no haya limpiado.
Posteriormente, se lava con agua destilada y el residuo se desecha en el frasco de residuos del
laboratorio (No en el sifón); el paso a seguir es sumergir el material previamente lavado por un
lapso de 30 minutos en ácido clorhídrico al 3%.

Paso 2. Preparación De Los Reactivos

7. Mezcla sulfocrómica: a 500 mL de dicromato de potasio 1 N agrego 50 mL de ácido
sulfúrico concentrado (esta adición debe realizarse a chorro de agua).

8. Ácido Clorhídrico al 3%: en una cubeta con capacidad de 4 L agregar 3L de agua y 100 mL
de ácido clorhídrico concentrado.

9. Preparación de la solución patrón de fosfato a 50 ppm: En beaker de 50 mL pesar

exactamente 0,1097 g de KH2PO4 (fosfato ácido de potasio) y disolver en 20 mL de agua
destilada y desionizada y 1mL de ácido clorhídrico; posteriormente trasvasar a balón
aforado de 500 mL y llevar a volumen.

10. Preparación de la solución extractora (Bray II):

Para preparar 250 mL de la solución extractora, pipetear con cuidado 7,5 mL de la solución
stock de fluoruro de amonio 1N y 12,5 mL de ácido clorhídrico al 0,5 N
 Preparación de la solución stock de fluoruro de amonio 1N (NH4F): En beaker de
50 mL pesar 9, 2500 g de fluoruro de amonio disolver en 20 mL de agua y
trasvasar a balón aforado de 250 mL y llevar a volumen.
 Preparación de la solución de ácido clorhídrico 0,5 N: en balón aforado de 250 mL
agregar 12,5 mL de ácido clorhídrico concentrado a 20 mL de agua y llevar a
volumen.

11. Preparación de la solución de molibdato de amonio:

En Beaker de 50 mL pesar 12,5 g de molibdato de amonio y disolver en 100 mL de agua y
agregar lentamente y a chorro de agua 140 mL de ácido clorhídrico concentrado;
posteriormente llevar a volumen en balón aforado de 500 mL. (después de preparada la
solución tener en cuenta que esta se descompone por la luz por lo tanto hacer uso de esta
antes de transcurrir los 8 días de la preparación de la solución; de igual forma cubrir con
papel aluminio para evitar que la luz la descomponga durante los siguientes 7 días de uso).

12. Preparación de la solución de cloruro de estaño:

En beaker de 50 mL pesar 0,300 g de cloruro de estaño y disolver en 20 mL de ácido
clorhídrico concentrado, trasvasar en balón aforado de 100 mL y llevar a volumen con
ácido clorhídrico concentrado. Nota: Realizar esta preparación en cabina extractora.

Tratamiento a la muestra de suelo:

En un frasco plástico pesar 5,00gr de muestra seca y tamizada a 2mm, agregar 20mL de solución
patrón de fosfato a 50 ppm y agitar durante 15 minutos en agitador mecánico horizontal a
temperatura ambiente. Posteriormente, pasar la muestra del frasco plástico a tubo de centrífuga y
centrifugar a 4500 rpm durante 5 minutos; luego pasar el sobrenadante a balón aforado de 50mL y
aforar con agua destilada y desionizada. Por último, tomar alícuota de 0,2mL de la muestra y
agregar a tubo de ensayo de 10mL para determinar el porcentaje de retención fosfórica.Nota: El
sobrenadante debe salir incoloro de la centrífuga, en caso de que no sea así, centrifugue una o dos
veces más para aclarar la solución.

Construcción de la curva de calibración:

Primero, se debe tomar 6 balones aforados de 50mL, agregar con la bureta las siguientes
cantidades de patrón de fosfato a 50 ppm y aforar con agua destilada y desionizada (excepto el
balón #6):

Balón Patrón-PO4 a 50ppm %RetP

1 0 mL 100
2 10 mL 80
3 20 mL 60
4 30 mL 40
5 40 mL 20
6 50 mL 0

Luego de preparar los materiales y los reactivos se debe construir una curva de calibración para
determinar la ecuación linealcon la que se calculara el porcentaje de retención fosfórica. En la
siguiente tabla se muestran 7 tubos, de los cuales los tubos 1 al 6 hacen parte de la curva de
calibración, y el tubo 7 es como se debe preparar la muestra; esta se debe leer a 730 nm.*En el
tubo 1 se agrega 0,2mL de la solución del balón 1, en el tubo 2 se agregan 0,2 mL de la solución del
balón 2, y así sucesivamente.

TUBO
1 2 3 4 5 6 7
PATRON DE FOSFATO 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0
AGUA DESTILADA Y
6,2 6,2 6,2 6,2 6,2 6,2 6,2
DESIONIAZADA
SOLUCIÓN EXTRACTORA 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
MOLIBDATO DE AMONIO 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6
CLORURO DE ESTAÑO 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
MUESTRA 0 0 0 0 0 0 0,2

Cálculo del porcentaje de retención fosfórica (%RetP):

Grafique los datos de la curva de calibración, colocando en el eje X el porcentaje de retención

fosfórica respectivo de cada balón, como se muestra en la primera tabla, y en el eje Y los valores
de absorbancia, de la siguiente manera:

Tubo/Balón Patrón-PO4 50ppm %RetP Abs

1 0mL 100 0,054

2 10mL 80 0,128
 3 20mL 60 0,211
4 30mL 40 0,292
5 40mL 20 0,374
6 50mL 0 0,447

Curva de calibración
0.5
y = -0.004x + 0.4499
0.4 R² = 0.9996

0.3
Abs

0.2

0.1

0
0 20 40 60 80 100
%RetP

Ecuación:
𝐴𝑏𝑠 ± 𝑏
%𝑅𝑒𝑡𝑃 =
𝑚
En este ejemplo:
𝐴𝑏𝑠 − 0,4499
%𝑅𝑒𝑡𝑃 =
−0,004