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Pre informe: Bioseguridad y Observación de la célula bacteriana viva y coloreada
con colorantes primarios Universidad del

Valle, Cali.
PREINFORME DE LABORATORIO: Bioseguridad y Observación de la célula

bacteriana viva y coloreada con colorantes primarios (azul de metileno).
Sofía Marmolejo Vargas (1640061)
1.¿De cuáles riesgos, crees que nos protegemos al adherirnos a las normas de
bioseguridad?
Las normas de bioseguridad están destinadas a reducir el riesgo de transmisión de
microorganismos de fuentes reconocidas o no reconocidas de infección en Servicios de
Salud vinculadas a accidentes por exposición a sangre y fluidos corporales.
Desde el lavado de manos en el que desarrollamos una remoción mecánica de
microorganismos, el uso de guantes, de mascarillas que previene la exposición de las
membranas mucosas de la boca, nariz y ojos, a líquidos potencialmente infectados,
(elaborados en un material con alta eficiencia de filtración, para disminuir la
diseminación de gérmenes) hasta el uso de gorro se propone ya que el cabello facilita la
retención y dispersión de microorganismos evitan tanto contagio como transmisión a
otras personas del agente patológico.
2. ¿Menciona y dibuja al menos tres pictogramas de riesgo que deben existir en el
laboratorio de prácticas?
AMBIENTE: Símbolo: N - Peligroso para el medio ambiente: El contacto de esa
sustancia con el medio ambiente puede provocar daños al ecosistema a corto o largo
Valle, Cali.
plazo. Precaución: debido a su riesgo potencial, no debe ser liberado en las cañerías, en el
suelo o el medio ambiente. Ejemplos: benceno, cianuro de potasio, lindano.
INFLAMABLE: Clasificación: Sustancias y preparaciones: • Líquidos con un punto de
inflamación inferior a 21ºC, pero que NO son altamente inflamables. • Sustancias sólidas
y preparaciones que por acción breve de una fuente de inflamación pueden inflamarse
fácilmente y luego pueden continuar quemándose ó permanecer incandescentes, o
gaseosas, inflamables en contacto con el aire a presión normal, o que, en contacto con el
agua o el aire húmedo, desenvuelven gases fácilmente inflamables en cantidades
peligrosas; Precaución: evitar contacto con materiales ignitivos (aire, agua). Ejemplos:
benceno, etanol, acetona
PELIGRO PARA LA SALUD: Estos productos se clasifican en una o más de estas
categorías: cancerígenos, mutágenos y tóxicos para la reproducción. Alteran el
funcionamiento de ciertos órganos como el hígado, sistema nervioso. Estos efectos
tóxicos pueden aparecer con una o varias exposiciones. Causan daños a los pulmones y
pueden ser mortales su entran en el tracto respiratorio. Causan alergias respiratorias
(asma, por ejemplo). Estos productos pueden ejercer su toxicidad por vía oral, cutánea o
por inhalación
3. ¿Cómo se realizará la identificación y separación de la fuente de cultivos líquidos con
bacterias, láminas portaobjetos con cultivos frescos, láminas portaobjetos con bacterias
fijadas y teñidas, pipetas 10 Pasteur dispensadoras de cultivos líquidos inoculados con

Valle, Cali.
bacterias, medios de cultivo sólidos con cultivos bacterianos, palillos de madera
inoculados con bacterias? ¿Restos de alimentos, cajas de Petri que se han quebradas y
tenían crecimientos bacterianos?
Los residuos del laboratorio se pueden clasificar en infecciosos o de riesgo biológico,
químicos, radioactivos, residuos no peligrosos y sustancias peligrosas. Los mecanismos
de manejo de residuos especiales generados en las actividades del área incluyen la
separación de los residuos por separado en bolsas y recipientes y la previa inactivación
por medios físicos o químicos. Los residuos biomédicos e infecciosos como
coprológicos, frascos con esputo, o demás artículos contaminados deberán empacarse en
una bolsa plástica de color rojo identificada con el símbolo internacional de bioseguridad
a fin de que su manejo y disposición final este sujeta a las normas de bioseguridad e
incineración, los residuos cortopunzantes tales como jeringas, laminas, laminillas,
deberán disponerse en recipientes herméticos de boca angosta a prueba de perforaciones,
sellarse e identificarse con rótulos para su posterior recolección e incineración.
El resto de desechos podrá ser almacenado según el código de colores normatizado por la
OMS.
4. ¿Menciona cuál es la razón para que la movilidad observada en las preparaciones sin
azul de metileno sea mayor que la observada en las que no tienen el colorante?
Valle, Cali.
El azul de metileno es un antiséptico débil, no bactericida, al 1% se comporta como
bacteriostático frente a Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Mycobacterium
tuberculosis, por la tanto reduce la viabilidad celular lo que provoca menor movilidad en
las muestras observadas con esta tinción
5. ¿En qué consiste el movimiento browniano?
El movimiento browniano es el movimiento aleatorio que se observa en las partículas que
se hallan en un medio fluido (líquido o gas), como resultado de choques contra las
moléculas de dicho fluido.
En el uso del microscopio es importante saber diferenciar el movimiento browniano de
partículas en suspensión con el movimiento real producido por los microorganismos.
6. ¿Qué otro método se puede emplear para el montaje de la gota pendiente?
1.Con una pipeta Pasteur colocar una gota de la muestra (agua o de pulque) en el centro
del portaobjetos. Cuando se trata de un cultivo sólido, colocar una gota de solución salina
o agua destilada estéril en el centro del cubreobjetos limpio y emulsionar una pequeña
cantidad del material. Se puede hacer una pequeña marca cerca de la gota en
el cubreobjetos para facilitar la observación.
3. Poner un poco de vaselina alrededor de la concavidad del portaobjetos
utilizando para ello un aplicador.

Valle, Cali.
4. Invertir y colocar el portaobjetos sobre el cubreobjetos que contiene la gota de
la suspensión bacteriana cuidando que quede bien centrado para que la
excavación quede directamente encima de la gota. La gota no debe tocar el
portaobjetos.
5. Presionar suavemente cubreobjetos y portaobjetos para que se adhieran
perfectamente.
6. Invertir rápidamente. La gota que contiene el material a examinar pende del
cubreobjetos sobre la excavación del portaobjetos (Figura 6.2).
7. Observar al microscopio con ei objetivo seco débil y enseguida con el seco
fuerte. Al localizar la marca hecha en el cubreobjetos, el borde de la gota se
encontrará fácilmente.
8. Determinar si hay movilidad real - desplazamiento de las células de un lado a
otro dentro del campo microscópico -, o movimiento browniano.
9. Si se desea observar células individuales, colocar una gota de aceite de
inmersión sobre el cubreobjetos y observar con objetivo de inmersión
7. ¿Qué utilidad tiene la observación de las bacterias de esta manera?
La técnica de la gota pendiente consiste en la observación de una pequeña cantidad de
suspensión de microorganismos en medio líquido, pero exenta de las fluctuaciones
provocadas por las corrientes líquidas que se generan entre porta y cubre.
Valle, Cali.
Esta técnica permite observar el desplazamiento rápido y rectilíneo o dando giros y
volteretas en aquellas bacterias que tienen flagelos. Las bacterias inmóviles presentan un
movimiento vibratorio denominado movimiento browniano, debido al choque de estas
con las moléculas de una solución líquida.
8. ¿En qué consiste la microscopia de campo oscuro, haga un esquema? ¿Para qué se
utiliza?
La microscopia de campo oscuro crea contraste en especímenes transparentes sin tinción
como células vivas. Este depende de controlar la iluminación del espécimen para que la
luz central que normalmente pasa a través y alrededor del espécimen se bloquee. En lugar
de iluminar la muestra con un cono de luz completo (como en microscopia de campo
claro) el condensador forma un cono hueco con luz que pasa alrededor del cono en lugar
de pasar a través de este.
Esta forma de iluminación permite que solamente los rayos de luz oblicuos peguen en el
espécimen la platina del microscopio y se forme la imagen con rayos de luz dispersados
por las muestras y capturados por el objetivo. Cuando no hay muestra en la platina del
microscopio la observación es completamente oscura.
9. Averigüe en que consiste los siguientes tipos de microscopia y haga un esquema de
cada una en la que se muestre como se produce la imagen a partir del objeto analizado
a. Microscopia Electrónica de transmisión y de barrido

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El microscopio electrónico de transmisión (TEM) es un instrumento que aprovecha los
fenómenos físico-atómicos que se producen cuando un haz de electrones suficientemente
acelerado colisiona con una muestra delgada convenientemente preparada. Cuando los
electrones colisionan con la muestra, en función de su grosor y del tipo de átomos que la
forman, parte de ellos son dispersados selectivamente, es decir, hay una gradación entre
los electrones que la atraviesan directamente y los que son totalmente desviados. Todos
ellos son conducidos y modulados por unas lentes para formar una imagen final sobre una
CCD que puede tener miles de aumentos con una definición inalcanzable para cualquier
otro instrumento. La información que se obtiene es una imagen con distintas intensidades
de gris que se corresponden al grado de dispersión de los electrones incidentes.
La imagen del TEM tal como se ha descrito ofrece información sobre la estructura de la
muestra, tanto si ésta es amorfa o cristalina.
La microscopía de barrido de electrones (MEB) es una técnica de análisis superficial, que
consiste en enfocar sobre una muestra electrodensa (opaca a los electrones) un fino haz
de electrones acelerado con energías de excitación desde 0.1kV hasta 30kV.
El haz de electrones se desplaza sobre la superficie de la muestra realizando un barrido
que obedece a una trayectoria de líneas paralelas. La interacción del haz de electrones
con la muestra produce diversas señales (electrones secundarios, electrones
retrodispersados, emisión de rayos X, etc.), que son recogidas por distintos detectores; los
cuales permiten la observación, caracterización y microanálisis superficial de materiales
tanto orgánicos como inorgánicos.

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b. Microscopia de contraste de fase
En este caso la suspensión de microorganismos se observa con un microscopio de
contraste de fases o interferencia diferencial (DIC) que permiten el aumento del
contraste. El microscopio de contraste de fases utiliza un condensador con un diafragma
anular opaco con un anillo transparente que provocan variación de la longitud de onda
dependientes de la densidad y el índice de refracción de la muestra, se observan las
células más brillantes sobre un fondo oscuro.
La microscopia de contraste de fases y la de capo oscuro facilitan la observación de
estructuras con bajo índice de refracción que pasarían inadvertidas con el microscopio de
campo claro
10. Investigar y crear una ficha técnica de cada uno de los reactivos que se utilizarán en la
práctica.
La ficha debe contener al menos la siguiente información:
- Composición del reactivo
- Toxicidad
- Acciones en caso de accidente
- Conservación y Almacenamiento
Composición Toxicidad Acciones en Conservación y

Valle, Cali.
caso de almacenamiento
accidente
Azul de Azul de metileno Inhalación: Almacenar en un
metileno (C16H18CIN3S) Puede ser lugar fresco.
1g nocivo si se Conservar el
inhala. envase
Agua destilada Provoca una herméticamente
1000 ml irritación del cerrado en un
tracto lugar seco y bien
respiratorio. ventilado
Piel: Nocivo si
es absorbido
por la piel.
Provoca
irritación de la
piel.
Ojos: provoca
irritación de
ojos.
Ingestión:
Nocivo por
ingestión

accidente
Hipoclorito El Hipoclorito de Fuerte agente Notificar al Mantener en
Sodio se encuentra oxidante. personal de recipientes
en solución acuosa, poder seguridad y cerrados y
conformando el 5% corrosivo, de proveer resistentes a la
de propiedades ventilación corrosión en
la solución como irritantes adecuada. área ventilada y
NaOCl, y el agua derivadas de El personal fresca
constituye el su alcalinidad. afectado a la (temperatura
restante 95% (9) El grado de limpieza del inferior a 29,5ºC),
riesgo está derrame debe alejada de la luz
asociado a la estar protegido solar, del
Valle, Cali.
concentración para evitar la calor, de
de la inhalación de sustancias
solución y a la nieblas y incompatibles,
duración del vaporees y el ácidos y
contacto contacto con sustancias
la piel. orgánicas (como
madera,
papel, aceite).
Evitar el
almacenamiento
por periodos
prolongados, ya
que el producto
se degrada con el
tiempo

accidente
Caldo de Tripteína 17.0 g Nula, para No hay Medio
tripticasa Peptona de soya. 3.0 g una atención deshidratado: a
de soya Cloruro de sodio 5.0 g manipulación médica ni 10-35 ºC.
Fosfato dipotásico 2.5 segura no se tratamientos Medio preparado:
g requieren especiales en a 2-8 ºC.
Glucosa 2.5 g medidas caso de
Agua purificada1000ml especiales contacto con
pH final: 7.3 ± 0.2 piel, en caso
de contacto
con los ojos
Valle, Cali.
limpiar los
ojos abiertos
durante varios
minutos con
agua corriente
Webgrafía:
 https://es.slideshare.net/MarcoGonzlez2/pictograma-de-seguridad-en-el-
laboratorio
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Practica2PreparacionesYtinciones_20
836.pdf
 http://www.upv.es/entidades/SME/info/753329normalc.html
 http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_campo_oscuro.htm
 https://investigaciones.uniandes.edu.co/es/microscopio-electronico-de-barrido-
meb/
 http://dqisa.com/wp-content/uploads/2015/11/HIPOCLORITO-DE-SODIO.pdf
Bibliografía:
 Microbiología Clínica practica P.Garcia Martos 2ª edición

Valle, Cali.
 Manual de Bioseguridad- Fundación universitaria Juan Corpas

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con colorantes primarios Universidad del

PREINFORME DE LABORATORIO: Bioseguridad y Observación de la célula

Las normas de bioseguridad están destinadas a reducir el riesgo de transmisión de

microorganismos de fuentes reconocidas o no reconocidas de infección en Servicios de

Salud vinculadas a accidentes por exposición a sangre y fluidos corporales.

Desde el lavado de manos en el que desarrollamos una remoción mecánica de

microorganismos, el uso de guantes, de mascarillas que previene la exposición de las

membranas mucosas de la boca, nariz y ojos, a líquidos potencialmente infectados,

(elaborados en un material con alta eficiencia de filtración, para disminuir la

diseminación de gérmenes) hasta el uso de gorro se propone ya que el cabello facilita la

retención y dispersión de microorganismos evitan tanto contagio como transmisión a

otras personas del agente patológico.

2. ¿Menciona y dibuja al menos tres pictogramas de riesgo que deben existir en el

AMBIENTE: Símbolo: N - Peligroso para el medio ambiente: El contacto de esa

suelo o el medio ambiente. Ejemplos: benceno, cianuro de potasio, lindano.

INFLAMABLE: Clasificación: Sustancias y preparaciones: • Líquidos con un punto de

fácilmente y luego pueden continuar quemándose ó permanecer incandescentes, o

agua o el aire húmedo, desenvuelven gases fácilmente inflamables en cantidades

benceno, etanol, acetona

PELIGRO PARA LA SALUD: Estos productos se clasifican en una o más de estas

categorías: cancerígenos, mutágenos y tóxicos para la reproducción. Alteran el

funcionamiento de ciertos órganos como el hígado, sistema nervioso. Estos efectos

pueden ser mortales su entran en el tracto respiratorio. Causan alergias respiratorias

3. ¿Cómo se realizará la identificación y separación de la fuente de cultivos líquidos con

fijadas y teñidas, pipetas 10 Pasteur dispensadoras de cultivos líquidos inoculados con

tenían crecimientos bacterianos?

Los residuos del laboratorio se pueden clasificar en infecciosos o de riesgo biológico,

químicos, radioactivos, residuos no peligrosos y sustancias peligrosas. Los mecanismos

de manejo de residuos especiales generados en las actividades del área incluyen la

separación de los residuos por separado en bolsas y recipientes y la previa inactivación

por medios físicos o químicos. Los residuos biomédicos e infecciosos como

coprológicos, frascos con esputo, o demás artículos contaminados deberán empacarse en

incineración, los residuos cortopunzantes tales como jeringas, laminas, laminillas,

deberán disponerse en recipientes herméticos de boca angosta a prueba de perforaciones,

sellarse e identificarse con rótulos para su posterior recolección e incineración.

bacteriostático frente a Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Mycobacterium

las muestras observadas con esta tinción

5. ¿En qué consiste el movimiento browniano?

El movimiento browniano es el movimiento aleatorio que se observa en las partículas que

moléculas de dicho fluido.

En el uso del microscopio es importante saber diferenciar el movimiento browniano de

partículas en suspensión con el movimiento real producido por los microorganismos.

6. ¿Qué otro método se puede emplear para el montaje de la gota pendiente?

el cubreobjetos para facilitar la observación.

3. Poner un poco de vaselina alrededor de la concavidad del portaobjetos

utilizando para ello un aplicador.

la suspensión bacteriana cuidando que quede bien centrado para que la

excavación quede directamente encima de la gota. La gota no debe tocar el

5. Presionar suavemente cubreobjetos y portaobjetos para que se adhieran

6. Invertir rápidamente. La gota que contiene el material a examinar pende del

cubreobjetos sobre la excavación del portaobjetos (Figura 6.2).

7. Observar al microscopio con ei objetivo seco débil y enseguida con el seco

fuerte. Al localizar la marca hecha en el cubreobjetos, el borde de la gota se

8. Determinar si hay movilidad real - desplazamiento de las células de un lado a

otro dentro del campo microscópico -, o movimiento browniano.

9. Si se desea observar células individuales, colocar una gota de aceite de

inmersión sobre el cubreobjetos y observar con objetivo de inmersión

7. ¿Qué utilidad tiene la observación de las bacterias de esta manera?

La técnica de la gota pendiente consiste en la observación de una pequeña cantidad de

suspensión de microorganismos en medio líquido, pero exenta de las fluctuaciones

movimiento vibratorio denominado movimiento browniano, debido al choque de estas