Guia Bioquimica 2018-I

Autores: Juan Salazar Sánchez
Álvaro Marcelo Rodríguez
Lima – Perú
2018
~1~
GUÍA DE PRÁCTICAS DE BIOQUIMICA I
© Derechos Reservados 2012

© Área de Química
Segunda Edición
Primera reimpresión
Diseño, Diagramación e Impresión
Universidad Científica del Sur

Panamericana Sur Km. 19. Lima-Perú 610-6400
Tiraje 1500 ejemplares

IMPRESO EN PERÚ
~2~
Luis Javier Cardó Soria
Presidente Ejecutivo
Dr. Manuel Rosemberg Barrón

Rector
José Agustín Ortiz Elías

Director General Académico
M Sc. Alejandro Fukusaki

Coordinador de Cursos Básicos de Ciencias
Q.F. Juan Salazar Sánchez

Coordinador de Área Química
Autor
Q.F. Juan Salazar Sánchez
Reservados todos los derechos: ningún material de este manual puede ser
reproducido sin autorización expresa por escrita por los autores. La autorización
será en hoja aparte y firmada y adosada a este material. Todo compromiso suscrito
aparte, no se refiere a este manual. Queda exento del compromiso, el fotocopiado
interno en una cantidad no mayor de 100, solo para uso con fines educativos y sin
lucro.
~3~
"Me lo contaron y lo olvidé, lo vi y lo entendí, lo
hice y lo aprendí"
Confucio
INDICE
# PRÁCTICA TEMA PÁGINA

0 Bioseguridad 5
1 Espectrofotometría 9
2 Factores que afectan la velocidad de la reacción enzimática 14
3 Determinación de ácido úrico en suero sanguíneo 20
4 Digestión enzimática del almidón 24
5 Efecto del ayuno sobre el contenido de glucógeno hepático 29
6 Cálculo del balance energético 34
7 Hidrólisis de los lípidos 45
8 Determinación de triglicéridos y colesterol en plasma 50
9 Determinación de HDL y LDL colesterol en plasma 55
10 Determinación de proteínas plasmáticas 59
11 Determinación de vitamina C en alimentos vegetales 63
SISTEMA DE EVALUACION:
Laboratorio 35%
BLOQUE
Rubro (Química y
Física)
Control de Aprendizaje I 10
Control de Aprendizaje II 10
Informes 10
Actitudinal (Asistencia y
puntualidad (1%), Participación
5
permanente (2%) y Respecto a las
normas (2%))
~4~
~5~
INSTRUCCIONES GENERALES y MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
LABORATORIO DE QUÍMICA 1, 2, 3 y 4 UCSUR
El Laboratorio es un ambiente físico estratégico donde se desarrolla diferentes

experimentos, con la finalidad que el alumno complemente conocimientos, genere
habilidades y destrezas en la manipulación de materiales, equipos e instrumental de
laboratorio, incentivando así la adquisición de los hábitos del método científico-
observando los fenómenos que ocurren en los ensayos respectivos y tomando datos
necesarios para obtener resultados confiables.
INSTRUCCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO
 Llegar puntual a las prácticas (tolerancia 5 minutos).

 Leer con anticipación la Práctica a realizar.
 Cada sesión de Laboratorio se generará un Informe; el que será entregado en la
siguiente práctica en su respectivo horario. Es la única fecha y la entrega es de
carácter obligatorio. El Informe se debe desarrollar de acuerdo al formato que se
establecerá en clases.
 La inasistencia injustificada a cualquier práctica impide al alumno la presentación
del informe correspondiente y por lo tanto tendrá la nota mínima de cero.
 El alumno con inasistencia justificadas deberá recuperar la práctica durante la
misma semana para lo que recabará de su profesor de prácticas el formato de
autorización correspondiente.
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
a) DE LA HIGIENE PERSONAL
 Queda prohibido fumar, comer y/o beber durante las prácticas en el laboratorio. Así
mismo el uso de celulares y otros equipos electrónicos.
 Se debe lavar las manos al finalizar el trabajo de laboratorio y cada vez que se
sospecha que ha estado en contacto con algún material contaminado.
 Al entrar en contacto la piel con ácidos o bases fuertes, lavarse inmediatamente
con abundante agua. Para el caso de ácidos aplicarse una solución saturada de
bicarbonato, para las bases utilice una solución al 5 % de ácido acético (vinagre).
 Para quemaduras leves el área afectada se debe aplicar inmediatamente una
crema de picrato de Butesín.
 Mantener limpio el área de trabajo. Al derramar alguna sustancia limpiar
inmediatamente. Al final de la práctica dejar todo el material limpio y ordenado.
~ 6ALUMNOS
b) DEL COMPORTAMIENTO DE LOS ~ DURANTE LAS PRÁCTICAS
 Está terminantemente prohibido ingresar a l Laboratorio mochilas, carteras o
bolsos, teléfono celular, animales domésticos, etc.
 Una vez que el alumno haya ingresado al laboratorio no puede salir por ningún
motivo.
 El trabajo con sustancias volátiles se debe realizar haciendo uso de la campana
extractora.
 Para diluir ácidos, siempre se debe agregar los ácidos al agua, y no en sentido
contrario.
 Cuidar como propio todo bien que encuentre o utilice en el laboratorio. El alumno
es responsable de los materiales asignados para el desarrollo de la práctica, el
deterioro implica su reposición obligatoria.
 El manejo de materiales, reactivos y el desarrollo de los experimentos sólo se
realizan con autorización del profesor. Los experimentos no autorizados están
prohibidos.
 Observar cuidadosamente que los frascos con reactivos estén etiquetados
indicando el contenido y la concentración respectiva, antes de ser usados. Obtener
las sustancias químicas de los frascos de reactivos, en un vaso de precipitados
o e n u n t u b o d e e n s a y o s l i m p i o , c u i d a n d o d e n o u s a r cantidades
mayores que las necesarias, está terminantemente prohibido regresar
sustancia alguna no utilizada al frasco original.
 Al encender el mechero Bunsen, primero encender el fósforo y luego abrir la llave
de gas.
ELIMACIÓN DE RESIDUOS
 Los desechos sólidos, líquidos y sales solubles deben ser depositados en los
recipientes indicados por el profesor para su posterior tratamiento.
 Todo desperdicio de papel o residuo sólido debe dirigirse al recipiente de basura
situados en ambas paredes laterales de cada Laboratorio.
 No se debe arrojar residuos sólidos al lavadero.
ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y DE LOS EQUIPOS
a) MANDIL
Para cada sesión de prácticas el estudiante debe llevar un mandil (guardapolvo), el
cual es de carácter obligatorio. Cuando el experimento lo amerite, los estudiantes
usarán lentes de seguridad industrial tipo MERCK. Los estudiantes vestirán sus
mandiles antes de ingresar al Laboratorio y dejarán de vestirlos a la finalización de
las actividades correspondientes.
b) LENTES DE SEGURIDAD Y RESPIRADORES

Se debe usar lentes de seguridad cuando sea necesario proteger la cara de
salpicaduras y/o sustancias corrosivas. Igualmente se utilizará respiradores cuando
sea necesario. En ambos casos el estudiante tiene a su disposición estos
materiales y los solicitará al responsable del laboratorio.
En la parte lateral central del Laboratorio se encuentra la ducha española, la que
será usada para casos de salpicaduras o derrames en el cuerpo de la víctima con
sustancias ácidas, básicas o corrosivas. Así mismo a la entrada parte izquierda se
encuentra un kit lavador de ojos que se aplicará directamente al ojo de la víctima
en caso de salpicadura de alguna~ 7~
sustancia dañina al ojo.
c) EXTINGUIDORES CONTRA INCENDIOS
El alumno debe conocer el uso y la ubicación de los extintores contra incendios que
en caso de emergencia se descolgará de la pared con cuidado. El extintor, en la
parte superior tiene una palanca circular que se saca (se tira) para activar y se
presiona la manija con la mano derecha y con la mano izquierda se coge la manguera
la cual se orientará hacia la fuente de peligro.
En el caso de incendiarse la ropa de una persona, se deberá pedir ayuda
inmediatamente, se debe estirar en el piso y rodar sobre sí mismo para apagar las
llamas. No se recomienda utilizar el extintor sobre el cuerpo o rostro de una persona.
d) BOTIQUÍN DE PRIMEROS AUXILIOS

Existe un botiquín identificado y de fácil acceso con elementos necesarios para
prestar primeros auxilios en el Laboratorio.
Será responsabilidad de todos los usuarios del Laboratorio conocer la ubicación y el
uso del botiquín y de los elementos de protección personal.
TOMA DE DATOS
 Manipular con habilidad, criterio y en forma adecuada los diferentes materiales de

laboratorio.
 Desarrollar los experimentos en forma ordenada y con
mucha responsabilidad.
 Observar con mucho cuidado los fenómenos que ocurren durante el desarrollo de
los experimentos.
 Realizar las mediciones con precisión y efectuar las anotaciones
pertinentes, para obtener resultados satisfactorios disminuyendo el margen de
error. “un error mínimo al principio puede ser máximo al final” (Aristóteles).
 Todo alumno deberá contar con una calculadora personal que contenga como
mínimo funciones de potencia y logaritmo. No se permitirá usar celulares como
calculadora personal.
~8~
~9~
MATERIALES Y REACTIVOS PARA LA PRACTICA N° 1
ESPECTROFOTOMETRÍA
MATERIALES EN LA MESA DEL ALUMNO
01 Gradilla
05 Tubos de ensayo 13x100 mm
01 Piseta con agua destilada
02 Pipeta de 10mL
02 Propipetas
REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES
12mL Solución de azul de metileno (1mg/dL)
MATERIALES EN LA MESA CENTRAL (DEL PROFESOR)
01 Espectrofotómetro
01 Micro-pipeta 100-1000 µL, 10-100 µL y/o de 5-50µL
12 Puntas descartables respectivas (c/porta puntas ó beacker)
12 Cubetas para espectrofotometría
06 Beacker de 100 ml
06 Fiola de 10 ml
01 Vortex
01 Papel tisue
PROCEDIMIENTOS PARA LA PREPARACIÓN DE REACTIVOS
“Solución azul de metileno” (1mg/dl):

- En la balanza analítica pesar 1mg de azul de metileno.
- Mezclar los 1mg de azul de metileno previamente pesados en 100mL de agua destilada.
Agitar hasta que se disuelva completamente.
~ 10 ~
Entre los diversos métodos de análisis de tipo cuantitativo que se utilizan para la
determinación de moléculas o elementos constitutivos de los organismos se
encuentra la espectrofotometría, que utiliza la medición de la intensidad de la
luz transmitida y/o absorbida, a determinada longitud de onda, por compuestos
químicos en solución.
El paso de un haz de luz de una longitud de onda determinada a través de una

solución es reflejada en parte, mientras que la mayor fracción de esta es
absorbida por la sustancia disuelta. La absorción es proporcional a la
concentración del soluto.
La propiedad de una sustancia para absorber radiación de una determinada

l o ng it u d de onda es dependiente de su estructura química. La ley de Lambert
y Beer expresa las relaciones antes mencionadas mediante la siguiente ecuación:
𝐼𝑜
Long = ε.l.c.
𝐼𝑡
Io Luz incidente
ε Coeficiente de extensión
I Distancia recorrida por la luz a través de la solución
It Luz transmitida
El log Io/It también se conoce como densidad óptica (D.O.) ó absorbancia de la

solución y es directamente proporcional a la concentración del soluto.
Para determinar la concentración de una determinada sustancia puede hacerse
uso del
factor de calibración o de una curva de calibración.
La preparación de una curva de calibración se realiza utilizando concentraciones
conocidas de la sustancia cuya concentración deseamos conocer. Luego se
determina la absorbancia de cada una de dichas concentraciones y se procede a
preparar un gráfico, donde en el eje de abscisas se disponen las concentraciones
de la sustancia y en el eje de ordenadas la absorbancia.
~ 11 ~
FACTOR DE CALIBRACIÓN:
Se d e f i n e c o m o l a r e l a c i ó n que e x i s t e e n t r e l a c o n c e n t r a c i ó n del
e s t á n d a r y s u respectiva absorbancia. Este factor puede obtenerse de la
manera siguiente:
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
Factor de calibración =
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
La concentración del estándar pude expresarse como: mg/dL, ug/dL, mEq/L,

U/L, etc. Para encontrar la concentración de una sustancia problema se
multiplica el factor de calibración por la Absorbancia del problema, operación que
se realiza de acuerdo al siguiente procedimiento.
EXPERIMENTO 1: PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ABSORCIÓN
Para elaborar una curva de absorción se preparará el siguiente sistema:
Solución de azul de metileno (10 mg/dL) 1 mL.

Agua destilada 4 mL
Luego se procederá a realizar lecturas en el espectrofotómetro a las

siguientes longitudes de onda: 560, 580, 600, 620 640, 660, 680 y 700 nm.
Graficar utilizando papel milimetrado las absorbancias en función de las longitudes

de onda y determinar el pico de máxima absorción del azul de metileno,
el cual corresponde al mayor valor de la absorbancia.
~ 12 ~
EXPERIMENTO 2: PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN
Preparar un experimento de la siguiente manera:
TUBO 1 2 3 4 5
mL Azul de metileno (1mg/dL) 0.5 1 2 3 4
mL Agua destilada 4.5 4 3 2 1
Con agua destilada llevar el espectrofotómetro a cero

Luego leer los tubos a una longitud de onda de 660 nm.
Graficar en un papel milimetrado los resultados, disponiendo las concentraciones
en el eje de abscisas y las absorbancias en el eje de las ordenadas, luego trazar
una recta a través de los putos obtenidos experimentalmente.
Utilizando la curva de calibración o el factor de calibración determinara
la concentración de la sustancia problema que recibirán en la presente práctica.
~ 13 ~
~ 14 ~
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
01 Gradilla
17 Tubos de ensayo
01 Hígado de pollo (enzima fosfatasa ácida del hígado)
01 Termómetro
02 Pipeta de 10mL
01 Probeta 25mL
02 Propipetas
01 Beacker 250 ml
12mL Albumina a [1.3] de Absorbancia a 450nm

3mL Pepsina al 2%
6mL Buffer Acetato 0.1 M pH 3.6
01 Baño María con temperatura a 37°C o Cocinilla

01 Beaker de 250 ml
01 Termómetro
“Buffer Acetato” 0.1M pH 3.6

Para obtener soluciones de buffer acetato 0.1M de pH 3.6 se deberá preparar:
Solución A (Acido acético 0.2M) medir 1,15 ml de ácido acético en una pipeta de 2 ml.
Colocar en una fiola de 100mL y aforar con agua destilada.
Solución B (Acetato de sodio 0.2M) pesar 2.72 g de Acetato de sodio en una balanza
analítica. Colocar en una fiola de 100mL y aforar con agua destilada.
Colocar en una fiola de 100 ml 46.3 de la solución A + 3.7 ml de la solución B y aforar con
agua destilada. Ajustar el pH si fuese necesario.
Pepsina al 2%
Pesar 2g de pepsina en la balanza analítica, luego agregar agua destilada hasta
completar un volumen de 100mL.
~ 15 ~
Albúmina [1.3] de Absorbancia a 450 nm
Solución madre: Cocer en un beaker de 1000 ml dos huevos (15 minutos

aproximadamente). Separar la clara y licuar con agua destilada a una capacidad para 250
ml. Luego filtrar 2 veces con papel toalla.
Realizar una dilución de la solución madre de albumina a 3.7x (5.40 ml para cada 20 ml).
Verificar con el espectrofotómetro una absorbancia de 1.3 aproximadamente a una
longitud de onda de 450 nm.
~ 16 ~
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EFECTO DE LA
CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO
1. COMPETENCIAS:
Al finalizar la práctica de laboratorio el alumno será capaz de:
- Explicar la actividad enzimática de la pepsina sobre la actividad de la
pepsina.
- Explicar el efecto de un factor enzimático sobre la actividad de la pepsina.
- Determinar el Km y Vmáx experimental de la pepsina para la albúmina a
partir de la gráfica de Vi contra [S].
- Determinar el Km y Vmáx experimental de la pepsina para la albúmina a
partir de la gráfica de dobles recíprocas 1/Vi contra 1/[S].
2. GENERALIDADES:
Los biocatalizadores específicos sintetizados por el organismo, llamados
enzimas, son proteínas que intervienen en las reacciones biológicas,
acelerando la velocidad de reacción hasta alcanzar su punto de equilibrio. Las
enzimas son sumamente específicas en las reacciones que catalizan y en los
compuestos (llamados substratos) sobre los que actúan.
La cinética enzimática es el estudio del comportamiento de la velocidad en

reacciones catalizadas por enzimas. Las mediciones de la cinética
proporcionan una herramienta bioquímica muy útil para calcular la
concentración de una enzima en una muestra biológica y comparar su
actividad catalítica con la de otras enzimas. Además, las mediciones cinéticas
permiten describir de manera cuantitativa el efecto de un veneno o
medicamento sobre la actividad de una enzima.
La velocidad a la que procede una reacción enzimática está controlada en

parte por las concentraciones de la enzima y el substrato. A medida que
progresa la reacción, aumenta la concentración de los productos a expensas
de la desaparición de los correspondientes substratos, en tanto que la
concentración de la enzima no se altera.
La actividad enzimática puede expresarse:

a) Por la desaparición del Substrato (S)
b) Por la aparición de Productos (P)
c) Por modificación de Cofactores (C)
El mecanismo de reacción enzima-sustrato puede simbolizarse así:

[E] + [S]  [E] + [P]
C C’
~ 17 ~
Diversos factores modifican la actividad enzimática, tales como:
1) Concentración de Substrato [S]
2) Concentración de la Enzima [E]
3) pH del medio
4) Influencia de la temperatura
5) Efecto de inhibidores y activadores
En las siguientes prácticas estudiaremos el efecto de estos factores sobre la

actividad enzimática de la pepsina en presencia de albúmina.
La pepsina es un enzima proteolítico (proteasa ácida) segregada por las

células principales de las glándulas gástricas, tiene un peso molecular de 34
644 Da. Hidroliza los enlaces peptídicos, descomponiendo así las proteínas en
aminoácidos. La pepsina solo realiza la proteólisis en medio ácido, actúa a un
pH bajo, por lo que es precisa la presencia de ácido clorhídrico para la
realización de la digestión gástrica de las proteínas. Las células de las
glándulas gástricas no producen directamente pepsina, sino que su producto
es el pepsinógeno, sustancia precursora sin capacidad digestiva que se
convierte en pepsina en la luz de la glándula, al entrar en contacto con el ácido
clorhídrico y con la pepsina ya producida.
La actividad enzimática se medirá por la desaparición del substrato

(disminución de la turbidez en los tubos que contiene albúmina), la cual se
determinará en el Espectrofotómetro a 450 nm.
TUBOS N° 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Agua Destilada 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 mL
HCl 1N 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 mL
Albúmina 5% 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 mL
Pepsina 2%(P/V) 4 mL
- Leer los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 en el espectrofotómetro. Considerar

las Absorbancias como Lectura Inicial.
- Luego, Incubar los nueve tubos a 37ºC por 5 min. Añadir 0.5 ml de
pepsina a cada tubo (del tubo 9 a los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8).
Incubar a 37ºC por 5 min o hasta que el tubo 1 este claro.
- Detener la reacción colocando los tubos en un baño de hielo.
- Leer los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 en el espectrofotómetro. Considerar
las Absorbancias como Lectura Final.
Hacer la diferencia:
Actividad Enzimática = Lectura Inicial - Lectura Final
El resultado de ésta diferencia se considerará como Actividad Enzimática.
Graficar en papel milimetrado:

Actividad Enzimática en el eje Y versus [S] en el eje X.
1/Actividad Enzimática en el eje Y versus 1/[S] en el eje X.
Calcular el Km y Vmáx de la pepsina en cada una de las gráficas.

~ 18 ~
PRÁCTICA 2
INFORME
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Apellidos Nombre (s) Mesa N° Fecha
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
~ 19 ~
~ 20 ~
DETERMINACIÓN DE ACIDO URICO EN SUERO
01 Gradilla
03 Tubos de ensayo
03 Pipetas de 5mL
03 Propipetas
0.02mL Suero o plasma

0.02mL Estándar de ácido úrico
3mL Reactivo de trabajo de úrea
01 Baño maría a 37°C
01 Micro-pipeta 100-1000 µL y/o de 5-50µL
12 Puntas descartables respectivas
El personal técnico colocará en las mesas TODO el material requerido.
~ 21 ~
El ácido úrico es un compuesto que se forma en el organismo como producto
de excreción de las purinas. Los niveles séricos se encuentran elevados en
diversas enfermedades t a l e s como: insuficiencia cardiaca crónica, leucemia,
gota, síndrome de Lesch-Nyhan, etc.
Determinación enzimática de ácido úrico en suero:
La determinación de ácido úrico en suero se realiza utilizando dos enzimas,

la uricasa que transforma el ácido úrico en alantoína y la enzima peroxidasa,
que en presencia de 4- aminofenazona forma quinonimina de color rojo.
Uricasa
Ácido úrico + 2H2O + O2
Alantoína + H2O2 + CO2
POD
2 H2O2 + 4-AF Quinonimina
roja
Preparar los siguientes medios de ensayo:
B X St
Suero o plasma (uL) - 50 -
Estándar (uL) - - 50
Reactivo de trabajo (mL) 2.0 2.0 2.0
Mezclar suavemente e incubar durante 5 minutos en baño maría a 37° C.

Enfriar y leer la densidad óptica en el espectrofotómetro a 505 nm.
VALORES DE REFERENCIA:
Hombres: 2.5 – 6.0 mg/dL
Mujeres: 2.0 – 5.0 mg/dL
~ 22 ~
PRÁCTICA 3
INFORME
DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SUERO
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 23 ~
~ 24 ~
DIGESTION ENZIMATICA DEL ALMIDON
01 Gradilla
02 03 Tubos de ensayo
01 Beaker de 50mL
01 Pipeta de 10mL
01 Pipeta de 5mL
02 Propipetas
3mL Tampón fosfato 0.1M pH 6.5

6mL Almidón 1%
7.5mL Cloruro de sodio 0.5N (HCl)
01 Gotero de solución de Lugol
01 Baño María con temperatura a 37°C
“Tampón Fosfato” 0.1M pH 6.5
Para obtener las soluciones buffer fosfato 0.1M a pH de 6.5, se mezcla 68.5mL de Solución
1 y 31.5mL de la Solución 2. Luego se completa a un volumen total de 200mL con agua
destilada. (Para otro pH y concentración ver el Anexo 1).
Solución 1: 0.2M de NaH2PO4

Disuelva 24g de NaH2PO4 y lleve a un volumen de 1Litro con agua destilada.
Solución 2: 0.2M de Na2HPO4

Disuelva 53.6g de Na2HPO4*7H2O y lleve a un volumen de 1Litro con agua destilada.
~ 25 ~
“Almidón” 1%
Colocar 1L de agua en una plancha de calentamiento hasta llegar a ebullición. Luego,

añadir 10 gr de almidón hasta su disolución.
Conservación: Con el objetivo de que el almidón dure más tiempo, luego de la ebullición
se puede agregar 3gr de NaCl, disolver y añadir 10gr de almidón.
Verificación: Colocar en un tubo de ensayo 10 mL de la solución de almidón y agregar 2-

3 gotas de Lugol. La reacción positiva dará una coloración azul-violeta.
“Cloruro de sodio” NaCl 0.5N
Medir un volumen de 29.25gr en una probeta, luego llevar a un recipiente y agregar agua
destilada hasta completar un volumen de 1L. (¡PRECAUCION!, el reactivo es fumante,
es decir que desprende gases).
~ 26 ~
El almidón constituye un importante componente de la dieta de los seres humanos. El
proceso de digestión de este nutriente se inicia en la cavidad oral, lugar en que actúa
la alfa-amilasa salivar, enzima que tiene la propiedad de hidrolizar los enlaces alfa 1,4
del almidón y formar polisacáridos de menor peso molecular.
HIDROLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAR
Para realizar el experimento se prepararán los siguientes medios de reacción:
1 2 3
Tampón fosfato 0.1M pH 6.5 (mL) 1.0 1.0 1.0
Almidón 1% (mL) 2.0 2.0 2.0
Cloruro de sodio 0.5N (mL) - - 1.5
Agua destilada (mL) 2.0 1.5 -
Colocar los tubos de ensayo en el baño maría a 37° C durante 2 min, luego adicionar:
Solución de saliva (mL) - 0.2 0.2
Colocar nuevamente los tubos en baño maría y sacar alícuotas de 0.5 mL. de cada
uno de los tubos a los 5, 10, 15 y 20 minutos, y adicionarlos a los tubos previamente
preparados que contienen 2.0 mL de cloruro de sodio 0.5 N, de acuerdo al siguiente
esquema:
Cloruro de sodio 0.5N (mL) 2.0 2.0 2.0
Luego adicionar a cada tubo:
Solución de Lugol (gota) 1 1 1
Dejar en reposo durante 1 minuto y observar el color formado.

Durante el desarrollo del experimento se observarán modificaciones del color inicial
de los tubos como consecuencia de la acción de la alfa-amilasa salivar.
El experimento concluye cuando uno de los tubos muestre un color pardo claro.
~ 27 ~
PRÁCTICA 4
INFORME
DETERMINACIÓN DE VITAMINA C EN ALIMENTOS VEGETALES
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 28 ~
~ 29 ~
EFECTO DEL AYUNO SOBRE EL CONTENIDO DE GLUCÓGENO HEPÁTICO

EFECTO DEL AYUNO SOBRE EL CONTENIDO DE GLUCÓGENO HEPÁTICO
01 Gradilla
04 Tubos de ensayo de 13x100 mm
04 Embudos para tubos de ensayo
01 Plancha de calentamiento
01 Beaker de 250mL
03 Pipetas de 5mL
03 Propipetas
02 Lunas de reloj
01 Termometro
1mL Estándar de glucosa 5mg/dL

5mL Alcohol etílico
01 Estuche de diseccion
6mL Hidróxido de Potasio KOH 30%
01 Agua helada o hielo (colocar cuando sea solicitado por el docente)
3g Hígado de roedor en ayunas por 24h
3g Hígado de roedor alimentado Ad libitum
01 Centrifuga
01 Vortex
01 Frasco con lejía para descarte de puntas descartables
01 Papel tisue
“Hígado de rata”
Se deberán de solicitar los roedores con 3 días de anticipación a los colaboradores de veterinaria.
“Hidróxido de Potasio” KOH al 30%

En un beaker de 250mL colocar 75gr de KOH y luego agregar agua destilada hasta llenar 250mL.
Agitar hasta lograr una mezcla completa. ~ 30 ~
“Estándar de glucosa” 5mg/dL
Se debe preparar con al menos 1 día de anticipación.

En la balanza analítica pesar 0.005g de glucosa (se puede emplear azúcar normal) y luego agregar
100mL de agua destilada. Agitar y calentar. Dejar que disuelva completamente y enfriar.
~ 31 ~
El hígado es el órgano que almacena glucógeno como un elemento de
particular importancia energética, que le permite al organismo mantener la
glicemia durante los periodos en que no ingiere alimentos. A diferencia del
tejido muscular, el hígado puede degradar el glucógeno y liberar glucosa a la
sangre.
EXTRACCIÓN DE GLUCÓGENO DE HÍGADO DE RATA
PREPARACIÓN DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
Se dispondrán de 2 ratas en jaulas individuales, una de las cuales recibirá

su dieta habitual, mientras que la otra será sometida a un ayuno de 24 horas. A
ambas se les proporcionará agua "ad libitum".
EXTRACCIÓN DEL GLUCÓGENO
Se sacrificarán ambos animales previamente anestesiados con cloroformo y

se procederá a extraerles el hígado. Luego, se realizará una observación del
tamaño y color del mencionado órgano. Se pesará 0.5 g de hígado de cada animal
se colocarán en tubos de boca ancha. y se les adicionará 1 mL de KOH al
30%. Se colocará en la boca de cada tubo un embudo pequeño y se les
someterá al baño maría hirviente durante 30 minutos. Después de enfriar, se
les adicionará 3 mL de agua destilada y 5 mL de alcohol etílico. Se formará
precipitado en aquel hígado que contenga glucógeno. Se centrifugará durante 10
minutos a 3000 rpm a cuyo término se eliminará el sobrenadante. Disolver el
precipitado en 200 mL de agua destilada.
Se prepararán los siguientes medios de reacción:
1 2 3 4
Disolución rata 1.0 - - -
en ayunas (mL)
Disolución rata - 1.0 - -
normal (mL)
Estándar de - - 1.0 -
glucosa
(5mg/dL)
Agua destilada - - - 1.0
(mL)
~ 32 ~
PRÁCTICA 5
INFORME
EFECTO DEL AYUNO SOBRE EL CONTENIDO DEL GLUCÓGENO HEPÁTICO
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 33 ~
~ 34 ~
CALCULO DEL BALANCE ENERGETICO
Esta práctica no requerirá de materiales ni reactivos de laboratorio. Únicamente del Manual

de laboratorio de Bioquímica.
El docente podrá solicitar materiales adicionales, previo requerimiento anticipado.
~ 35 ~
El Balance Energético es el equilibrio que debe existir entre el Gasto Energético
diario de un individuo, de acuerdo a su metabolismo basal, edad, sexo y
actividad física, y la Ingesta Energética diaria a través de los macronutrientes
de los alimentos consumidos.
Si predomina el gasto energético sobre la ingesta energética, en un tiempo

prolongado, el individuo tiende a perder sus reservas, y como consecuencia
se adelgaza. Por otro lado, si predomina la ingesta, el exceso de energía se
acumulará en el cuerpo, en forma de triglicéridos, en el tejido adiposo,
observándose un aumento de peso.
Para realizar este balance, es necesario calcular, en forma independiente, el

Gasto Energético en las 24 horas de cualquier día rutinario, de acuerdo a la
Tasa Metabólica Basal (TMB) y la Actividad Física realizada, luego compararlo
con la Ingesta Energética que proporcionaron los alimentos consumidos el mismo
día, utilizando la Tabla de Composición Química de los Alimentos de
Mayor Consumo en el Perú, Tabla de Medidas Caseras, y los Factores de
Conversión de Peso de Alimentos Cocidos a Crudos.
OBJETIVOS:
1. Calcular las propias necesidades energéticas (Gasto Energético) del alumno.
2. Calcular la Ingesta Energética del alumno.
3. Establecer el Balance Energético.
MATERIALES:
 Calculadora electrónica de bolsillo
 Lista detallada de las actividades realizadas durante las 24 horas, de un día
rutinario (6:00 am – 6:00 am)
 Lista detallada de alimentos consumidos durante las 24 horas del mismo día.
Peso real actual
~ 36 ~
PROCEDIMIENTO:
1. Calcular la Ingesta Energética, utilizando:
 La tabla de trabajo
 Listado de alimentos consumidos en 24 horas
 Tabla de medidas caseras
 Tabla de Factores de Conversión de peso de alimentos cocidos a crudos
 Tabla de Composición Química de Alimentos de mayor consumo en el
Perú
DISPONIBLE EN:
-Tablas Auxiliares para la Formulación y Evaluación de Regímenes
Alimentarios (CENAN)
http://www.ins.gob.pe/repositorioaps/0/5/jer/doc_tec_norm/TAFE
RA_1_compressed.pdf
- Tablas Peruanas de Composición de Alimentos (CENAN)
http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/otrpubs/pdf/Tabla%20de
%20Alimentos.pdf
2. Calcular el Gasto Energético, utilizando:

 Ecuaciones para calcular la Tasa de Metabolismo Basal (TMB) de la
Tabla N°1
 Tabla de Categorías y Factores de la Actividad Física de la Tabla N°2
3. Calcular el Balance Energético:
Balance Energético = Ingesta Energética – Gasto Energético
4. Obtener la respuesta respetando el signo (+) (exceso) ó (-) (déficit)

EQULIBRIO Ingesta Energética = Gasto Energético
BALANCE (+) Ingesta Energética > Gasto Energético
BALANCE (-) Ingesta Energética < Gasto Energético
~ 37 ~
5. Calcular el Porcentaje de Adecuación de la Dieta:
% de Adecuación = (Energía ingerida / Energía requerida (*)) x 100
(*) Gasto Energético = Necesidades energéticas o energía requerida
6. Analizar el % de la Adecuación de la Dieta obtenido, según los

siguientes parámetros:
Valores normales 90 – 110%
Déficit 90%
Exceso 110%
“CÁLCULO DE LA INGESTA ENERGÉTICA”
a) En la lista de consumo de alimentos, desglosar las preparaciones de todo el

día en cada uno de sus constituyentes. En columnas ordenadas calcular
mediante regla de tres el contenido de proteínas, grasas y carbohidratos de
cada alimento respectivamente, según la cantidad que se haya consumido.
Ejemplo 1:
 Ingesta de leche fluida de vaca = 250 mL
 Leche fluida de vaca en 100 mL contiene 3.1gr de proteínas
Para calcular la cantidad de proteína que existe en 250 mL de leche fluida de
vaca:
Leche fluida de vaca en 250 mL “x”
Leche fluida de vaca en 100 mL 3.1gr de proteínas
X = 7.75gr de proteínas
~ 38 ~
Ejemplo 2:
 Ingesta de pulpa de carne vacuno = 90gr
 Pulpa de carne vacuno en 100gr contiene 21.3gr de proteínas
 Para calcular la cantidad de proteína que existe en 90gr de pulpa de
carne de vacuno:
Pulpa de carne de vacuno en 90gr “x”
Pulpa de carne de vacuno en 100gr 21.3gr de proteínas
X = 19.17gr de proteínas
La tabla de Composición química de los alimentos

indica los valores en 100 g de porción comestible
cruda (a menos que indique los valores en cocido).
b) Totalizar luego cada una de las tres columnas, y el valor obtenido en

gramos de cada macronutriente se multiplica por el factor respectivo.
Proteína x 4.0 Kcal

Grasa x 9.0 Kcal
Carbohidratos x 4.0 Kcal
c) Sumar los totales, y el resultado obtenido corresponde a la

cantidad de energía (Kilo/calorías) que aportaron los alimentos consumidos
ese día.
~ 39 ~
TABLA DE TRABAJO
Ingesta Energética =  (kcal)/d
“CÁLCULO DEL GASTO ENERGÉTICO”
G.E. = TMB x FACTOR DE ACTIVIDAD
a) Se calcula la tasa metabólica basal (TMB) o gasto en reposo, aplicando la fórmula

de la siguiente tabla:
TABLA N°1
Ecuaciones para calcular la tasa metabólica basal (TMB) a partir del peso
corporal (P).
~ 40 ~
Rango de edad (años) kcal/día
Hombres:
0 -3 60,9 P - 54
3 - 10 22,7 P + 495
10 - 18 17,5 P + 651
18 - 30 15,3 P + 679
31 - 60 11,6 P + 879
> 60 13,5 P + 487
Mujeres:
0-3 61,0 P - 51
3 - 10 22,5 P + 499
10 – 18 12,2 P + 746
18 - 30 14,7 P + 496
30 - 60 8,7 P + 829
> 60 10,5 P + 596
Fuente: Organización Mundial de la Salud (OMS). 1985.
Ejemplo 1:
La TMB para una estudiante de 19 años de edad , con 55 kg. de peso, será:
TMB = 14.7 (P) + 496

TMB = 14.7 (55) + 496
TMB = 1305 Kcal/d
b) Con la lista de actividades, se agrupan éstas por categorías, tomando en

cuenta el tiempo empleado (en minutos) y multiplicándolas por el múltiplo de
la TMB o factor de actividad (o gasto de energía promedio por actividad). Las
categorías de actividad física son las siguientes:
~ 41 ~
TABLA N °2
ACTIVIDAD FÍSICA CATEGORÍA MÚLTIPLO DE LA TMB o

FACTOR DE ACTIVIDAD
Dormir, descansar Reposo 1.0
Manejando automóvil, escribiendo
a máquina, atendiendo a clase,
trabajando en laboratorio, viendo Muy ligera 1.5
TV, cocinando, planchando,
jugando cartas, tocando un
instrumento musical
Caminando a 4 – 5km/h,
atendiendo al público, limpieza de Ligera 2.5
la casa, cuidando niños, trabajo
de carpintería y electricidad, jugar
tenis de mesa
Caminando a 5.5 – 6.5km/h,
manejando bicicleta, bailando, Moderada 5.0
trabajando en jardinería,
cargando bultos pesados
Jugando fútbol, vóley, básquet,
caminando con carga pesada Pesada 7.0
cuesta arriba, cortando árboles,
trabajo de excavación manual
* Asignar 1/3 de hora para el mantenimiento cardiovascular y

muscular. Recomendación FAO/OMS 1985.
~ 42 ~
Ejemplo:
1) Ordenar las actividades de acuerdo al tiempo empleado:

HORA ACTIVIDAD TIEMPO
06:00 a.m. a 06:15 a.m. Aseo personal 15 ‘
06:15 a.m. a 06:45 a.m. Tomar desayuno 30 ‘
06:45 a.m. a 07:00 a.m. Caminar para tomar el bus 15 ‘
07:00 a.m. a 08:00 a.m. Viajar en bus 60 ‘
08:00 a.m. a 10:00 a.m. Asistir a clase 120 ‘
etc. (Debe completar 1440 minutos).
2) Agrupar por categoría de actividad:
Categoría de actividad Tiempo Múltiplo de la TMB Factor de TMB

empleado o factor por ponderado
(Horas) actividad
En reposo 8 1,0 8,0
Muy ligera 14 1,5 21,0
Ligera 2 2,5 5,0
TOTAL 34,0
Promedio / hora 1.417
(Factor de TMB/ 24 h)
Gasto Energético 1 850,0
(1.417 x TMB)*
Gasto Energético = 1850 Kcal/d
~ 43 ~
PRÁCTICA 6
INFORME
CÁLCULO DEL BALANCE ENERGÉTICO
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 44 ~
~ 45 ~
HIDRÓLISIS ENZIMATICA DE LOS LÍPIDOS

01 Gradilla
04 Tubos de ensayo
01 Bureta de 25mL
01 Soporte universal
01 Pinza mariposa

01 Gotero de fenolftaleína
01 Gotero con 30mL de hidróxido de sodio NaOH 0.05N

90mL Solución de Pancreatina al 1%
36mL Sales biliares al 1%
30mL Aceite vegetal
36mL Buffer fosfato 0.3mM pH 7.5
“Fenolftaleína”
Pesar 1.25gr de fenolftaleína y diluir con etanol al 95% hasta un volumen de 250mL.
“Hidróxido de sodio” NaOH 0.05N

Pesar 1.9g de NaOH en la balanza analítica, luego agregar agua destilada hasta completar un
volumen de 1L. (¡PRECAUCION!, la reacción es exotérmica, es decir que desprende calor).
Es recomendable almacenar en envases de plástico para mayor duración del reactivo.
“Pancreatina” al 1%
En un beaker de 1L colocar 10gr de Pancreatina y luego agregar agua destilada hasta llenar 1L.
Agitar hasta lograr una mezcla completa.
“Sales biliares” al 1%
En un beaker de 1L colocar 10gr de Sales Biliares y luego agregar agua destilada hasta llenar 1L.
Agitar hasta lograr una mezcla completa.
“Tampón fosfato” 0.3mM pH7.5, 0.15M NaCl, 1.4 mM CaCl2
Pesar 0.438 g de ClNa y disolver con 10 mL de agua destilada en un beacker de 50 mL. En otro
beacker de 50 ml pesar 0.008 g de CaCl en 20 ml de agua destilada. En una fiola de 50 ml unir
ambos reactivos, agregar 150 µL de Tampon fosfato 0.1M pH 7.8 y enrasar con agua destilada.
Verificar el pH con un pHmetro.
~ 46 ~
“Tampón fosfato” 0.1M pH7.5
Para obtener las soluciones buffer fosfato 0.1M a pH de 7.5, se mezcla 33.5mL de Solución 1 y
66.5mL de la Solución 2. Se verifica el pH 7.5 y luego se completa a un volumen total de 200mL con
agua destilada. (Para otro pH y concentración ver el Anexo 1).
Solución 1: 0.2M de NaH2PO4

Disuelva 24g de NaH2PO4 y lleve a un volumen de 1Litro con agua destilada.
Solución 2: 0.2M de Na2HPO4

Disuelva 53.6g de Na2HPO4*7H2O y lleve a un volumen de 1Litro con agua destilada.
~ 47 ~
HIDRÓLISIS DE LOS LÍPIDOS POR LA LIPASA PANCREÁTICA
Los lípidos de la dieta son hidrolizados a nivel del yeyuno por acción de la lipasa
pancreática. En este proceso juegan un papel muy importante las sales biliares,
compuestos que tienen la propiedad de emulsionar los lípidos para una eficiente
acción de la lipasa pancreática.
Con la finalidad de mostrar experimentalmente la acción hidrolítica de esta

enzima se prepararán los siguientes medios de reacción:
B 1 2 3
Tampón fosfato 0.1M pH (mL) 2.0 2.0 2.0 -
Aceite (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0
Sales biliares al 1% (mL) 2.0 2.0 - 2.0
Agua destilada (mL) 5.0 - 2.0 2.0
Añadir I I gotas de fenolftaleína a cada uno de los tubos, luego adicionar gota
a gota una solución de NaOH 0.05N hasta que aparezca una coloración
débilmente grosella estable, luego adicionar:
Solución de pancreatina al - 5.0 5.0 5.0

1% (mL)
Volver a incubar los tubos a la misma temperatura durante 1 hora, agitándolos

cada 5 minutos.
Al finalizar el tiempode incubación adicionar nuevamente a cada tubo II

gotas de fenolftaleína y proceder a titular, utilizando una bureta, con una
solución de NaOH 0.05 N hasta que aparezca nuevamente la coloración
ligeramente grosella.
Los resultados se expresarán como miliequivalentes de ácido esteárico liberado
por acción de la lipasa pancreática.
~ 48 ~
PRÁCTICA 7
INFORME
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LOS LÍPIDOS
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 49 ~
~ 50 ~
DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS Y COLESTEROL EN SUERO
01 Gradilla
06 Tubos de ensayo
03 Pipetas de 5mL
03 Propipetas
0.24mL Suero o plasma
0.02mL Estándar de triglicéridos
36mL Reactivo de trabajo para triglicéridos
0.02mL Estándar de colesterol
36mL Reactivo de trabajo para colesterol
01 Baño maría a 37°C
~ 51 ~
DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
La determinación de triglicéridos en plasma constituye un dato muy importante en

el manejo de ciertas dislipidemias. Su incremento en el plasma constituye un
factor de riesgo positivo para aterosclerosis.
Los triglicéridos del plasma son hidrolizados por una lipoproteína lipasa (LPL) que
forma como productos glicerol y ácidos grasos. El glicerol en presencia de ATP
por acción de la glicerol quinasa es convertido en glicerol-1-fosfato, compuesto
que es convertido por la glicerol fosfato oxidasa (GPO) en dihidroxiacetona fosfato
y peróxido de hidrógeno, este compuesto en presencia de 4-aminofenazona
(4-AF), clorofenol y peroxidasa (POD) es transformado en una quinonimina de
color rojo.
LPL
 Triglicérido Ácidos grasos + Glicerol
Glicerol quinasa
 Glicerol + ATP ADP + Glicerol – 1 – fosfato
GPO
 Glicerol – 1 – fosfato + O2 Dihidroxiacetona fosdato + H2O2
POD
 2 H2O2 + 4 – AF + clorofenol Quinonimina roja
B X St
Standard (uL) - - 20
Reactivo de trabajo (mL) 2 2 2
Mezclar e incubar durante 5 minutos en baño maría a 37º C, luego leer en el

espectrofotómetro a 505 nm.
~ 52 ~
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
El colesterol es una sustancia cuyos niveles en la sangre mantienen una estrecha

relación con diversas patologías, por cuyo motivo su determinación puede
contribuir al diagnóstico de: aterosclerosis, mixedema, diabetes mellitus, nefrosis,
hipertiroidismo, etc.
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL EN SANGRE
La técnica utilizada para la determinación se fundamenta en la hidrólisis

previa de los ésteres de colesterol por la colesterol esterasa, la posterior
acción de la enzima colesterol oxidasa que formará peróxido de hidrógeno en
cantidades estequiométricas y finalmente la participación de la peroxidasa
que en presencia de reactivos químicos formará un compuesto
coloreado proporcional a la cantidad de colesterol existente en la muestra de
sangre.
Colesterol esterasa
 Esteres de colesterol + H2O Colesterol + AGNE
Colesterol oxidasa
 Colesterol + O2 Colesten – 3 – ona + H2O2
Peroxidasa
 2 H2O2 + 4 – AF + fenol Quinona coloreada + 4 H2O
Preparar el siguiente sistema:
B X St
Standard (uL) - - 20
Reactivo de trabajo 2.0 2.0 20
(mL)
Incubar durante 5 minutos en baño maría a 37º C y leer en el espectrofotómetro a

505 nm.
~ 53 ~
PRÁCTICA 8
INFORME
DETERMINACIÓN DE TGC Y COLESTEROL EN SUERO
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 54 ~
~ 55 ~
DETERMINACIÓN DE HDL Y LDL COLESTEROL EN PLASMA

01 Gradilla
06 Tubos de ensayo 13x100 mm
03 Pipetas de 5mL
03 Propipetas
2mL Suero o plasma
18mL Reactivo de trabajo para HDL
18mL Reactivo de trabajo para LDL
0.12mL Estándar de colesterol
01 Baño maría a 37°C ó cocinilla
01 Beacker de 250 mL
01 Micro-pipeta 100-1000 µL, 10-100 µL y/o de 5-50µL
01 Frasco con lejía para descarte de puntas contaminadas
01 Vortex
01 Reactivo de trabajo para colesterol
01 Papel tisue
~ 56 ~
DETERMINACIÓN DE HDL COLESTEROL
Las LDL y VLDL son precipitadas en forma selectiva con sulfato de dextrano en
presencia de iones magnesio, de tal manera que en el sobrenadante que se obtiene
después de centrifugar, quedan las HDL, donde se realiza la determinación de colesterol
que esta lipoproteína transporta.
Preparación de la muestra:
Medir en un tubo de ensayo 200µL de suero o plasma luego adicionarle 500µL del
Reactivo precipitante, agitar durante 20 segundos y dejar en reposo por 15 minutos en
baño de agua a una temperatura de 4 – 10º C. Centrifugar a 3000 rpm durante 15
minutos y proceder a preparar el siguiente sistema:
B X St
Sobrenadante (µL) - 10 -
St colesterol (µL) - - 10
Incubar durante 10 minutos a 37°C y leer en el espectrofotómetro a 505 nm.
DETERMINACIÓN DE LDL COLESTEROL
Las LDL se precipitan selectivamente con el uso de heparina, quedando en el

sobrenadante las HDL y VLDL. El colesterol que se encuentran con estas lipoproteínas se
determina enzimáticamente, correspondiendo el valor de las LDL a la diferencia entre el
colesterol total y el determinado en este sobrenadante.
Preparación de la muestra:
Medir en un tubo de ensayo 50µL de suero o plasma luego adicionarle 500µL del
Reactivo precipitante, agitar durante 20 segundos y dejar en reposo por 15 minutos en un
baño a 20 – 25º C. Centrifugar a 3000 rpm y separar inmediatamente el sobrenadante.
Preparar el siguiente esquema:
B X St
Sobrenadante (µL) - 100 -
St colesterol (µL) - - 10
Incubar durante 15 minutos a 37°C y leer en el espectrofotómetro a 505 nm.
~ 57 ~
PRÁCTICA 9
INFORME
DETERMINACIÓN DE HDL Y LDL COLESTEROL EN PLASMA
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 58 ~
~ 59 ~
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
01 Gradilla
06 Tubos de ensayo
03 Pipetas de 5mL
03 Propipetas
2mL Suero
2mL Suero estandar
1mL Estándar de proteínas
11mL Reactivo BCF
11mL Reactivo EDTA/Cu
01 Centrífuga
01 Baño María a 37°C
~ 60 ~
Las proteínas plasmáticas cumplen diversas funciones que son muy

importantes para un apropiado funcionamiento de los diversos tejidos del
organismo. Pueden cumplir funciones de transporte, catalíticas, coagulación,
etc. Su determinación cuantitativa es muy útil para el diagnóstico de algunas
patologías como: desnutrición, deshidratación, cirrosis, etc.
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS TOTAL (MÉTODO DE

BIURET):
La determinación de las proteínas totales se realiza utilizando iones cúpricos

que en medio alcalino reacciona con las proteínas formando compuestos de
coordinación de color violeta, cuyo pico de máxima absorción es de 540 nm y
su intensidad es proporcional a la concentración de proteínas.
Preparar los siguientes medios de reacción:
B X St
Agua destilada (uL) 50 - -
Suero (uL) - 50 -
Standard de proteínas (uL) - - 50
Reactivo EDTA/Cu (mL) 3.5 3.5 3.5
Incubar durante 15 minutos a 37º C y leer en el espectrofotómetro a 540 nm.
DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA:
La albúmina reacciona con el Bromo cresolsulfonftaleína a pH 3.8 formando

un compuesto coloreado que absorbe a 625 nm. Preparar el siguiente sistema:
B X St
Suero estándar (uL) - 10 -
Suero (uL) - - 10
Reactivo BCF (mL) 3.5 3.5 3.5
Colocar los tubos en una gradilla a temperatura ambiente durante 10

minutos y leer en el espectrofotómetro a 625 nm.
~ 61 ~
PRÁCTICA 10
INFORME
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 62 ~
~ 63 ~
01 Gradilla
03 Tubos de ensayo
03 Pipetas de 2mL
03 Propipetas
02 Beakers de 50mL
01 Jugo de fruta diluido (puede emplearse “Tampico”)

6mL Folin-Ciocalteu al 10%
200mL Ácido Tricloroácetico al 10%
1mL Estándar de ácido ascórbico 0.1mg/mL
01 Centrífuga
01 Baño María a 100°C o planchas de calentamiento y termómetros
“Folin-Ciocalteu” al 10%
Pesar 20gr de Folin-Ciocalteu. Luego mezclar con 200mL de agua destilada hasta su
total disolución.
“Ácido ascórbico” 0.1mg/mL

Pesar 0.01gr de ácido ascórbico en la balanza analítica. Luego mezclar con 100mL de
agua destilada hasta su total disolución.
“Ácido Tricloroacético” al 10%

Pesar 20gr de Ácido Tricloroacético. Luego mezclar con 200mL de agua destilada
hasta su total disolución
~ 64 ~
La vitamina C es un compuesto que el ser humano debe ingerir
necesariamente en su dieta habitual, debido a que no dispone de las enzimas
necesarias para sintetizarlo, como ocurre en las ratas.
DETERMINACIÓN DE VITAMINA C EN FRUTAS CÍTRICAS
La vitamina C puede determinarse cuantitativamente utilizando el reactivo

de Folin-Ciocalteu, para cuyo propósito se procederá de la siguiente manera:
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA.-
Se procederá a extraer el jugo de una fruta cítrica como el limón o la naranja

y se procederá a diluirlo al 1/2 con ácido tricloroacético al 10%, luego se
filtrará y centrifugará a 2500 rpm durante 10 minutos.
Para la determinación cuantitativa de vitamina C se procederá de la

siguiente manera:
B P St
Jugo de fruta diluido 0.1 -
(mL)
Reactivo de Folin- 0.2 0.2 0.2
Ciocalteu al 10%
(mL)
Estándar de ácido - - 0.1
ascórbico (0.1
mg/mL) (mL)
Agua destilada (mL) 1.7 1.7 1.7
Dejar en reposo durante 10 minutos y proceder a leer en el

espectrofotómetro a 750 nm. Para realizar los cálculos es necesario
considerar la dilución de la muestra problema.
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ESTABILIDAD DE LA VITAMINA

C EN FRUTAS.-
En un tubo de cultivo con tapa rosca medir 2 mL del jugo de fruta diluido y
luego colocarlo en un baño maría a 100º C. Determinar el contenido de
vitamina C de acuerdo a la técnica antes descrita a los 20 minutos y luego
a los 40 minutos de incubación, para cuyo propósito se tomarán alícuotas
de 0.1 mL.
En un papel milimetrado graficar el % del contenido de vitamina C en función

del tiempo ó el logaritmo del porcentaje de vitamina C remanente en función
del tiempo.
~ 65 ~
PRÁCTICA 11
INFORME
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS
4. DISCUCIÓN
5. CONCLUSIONES
~ 66 ~

Guia Bioquimica 2018-I

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Guia Bioquimica 2018-I

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Autores: Juan Salazar Sánchez

Álvaro Marcelo Rodríguez

© Derechos Reservados 2012

Diseño, Diagramación e Impresión

Universidad Científica del Sur

Tiraje 1500 ejemplares

Dr. Manuel Rosemberg Barrón

José Agustín Ortiz Elías

M Sc. Alejandro Fukusaki

Q.F. Juan Salazar Sánchez

aparte, no se refiere a este manual. Queda exento del compromiso, el fotocopiado

# PRÁCTICA TEMA PÁGINA

LABORATORIO DE QUÍMICA 1, 2, 3 y 4 UCSUR

El Laboratorio es un ambiente físico estratégico donde se desarrolla diferentes

INSTRUCCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

 Llegar puntual a las prácticas (tolerancia 5 minutos).

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y DE LOS EQUIPOS

b) LENTES DE SEGURIDAD Y RESPIRADORES

d) BOTIQUÍN DE PRIMEROS AUXILIOS

 Manipular con habilidad, criterio y en forma adecuada los diferentes materiales de

MATERIALES EN LA MESA DEL ALUMNO

REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES

12mL Solución de azul de metileno (1mg/dL)

MATERIALES EN LA MESA CENTRAL (DEL PROFESOR)

PROCEDIMIENTOS PARA LA PREPARACIÓN DE REACTIVOS

“Solución azul de metileno” (1mg/dl):

El paso de un haz de luz de una longitud de onda determinada a través de una

La propiedad de una sustancia para absorber radiación de una determinada

El log Io/It también se conoce como densidad óptica (D.O.) ó absorbancia de la

La concentración del estándar pude expresarse como: mg/dL, ug/dL, mEq/L,

EXPERIMENTO 1: PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ABSORCIÓN

Para elaborar una curva de absorción se preparará el siguiente sistema:

Solución de azul de metileno (10 mg/dL) 1 mL.

Luego se procederá a realizar lecturas en el espectrofotómetro a las

Graficar utilizando papel milimetrado las absorbancias en función de las longitudes

Preparar un experimento de la siguiente manera:

Con agua destilada llevar el espectrofotómetro a cero

MATERIALES EN LA MESA DEL ALUMNO

REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES

12mL Albumina a [1.3] de Absorbancia a 450nm

MATERIALES EN LA MESA CENTRAL (DEL PROFESOR)

01 Baño María con temperatura a 37°C o Cocinilla

PROCEDIMIENTOS PARA LA PREPARACIÓN DE REACTIVOS

“Buffer Acetato” 0.1M pH 3.6

Solución madre: Cocer en un beaker de 1000 ml dos huevos (15 minutos

La cinética enzimática es el estudio del comportamiento de la velocidad en

La velocidad a la que procede una reacción enzimática está controlada en

La actividad enzimática puede expresarse:

El mecanismo de reacción enzima-sustrato puede simbolizarse así:

En las siguientes prácticas estudiaremos el efecto de estos factores sobre la

La pepsina es un enzima proteolítico (proteasa ácida) segregada por las

La actividad enzimática se medirá por la desaparición del substrato

- Leer los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 en el espectrofotómetro. Considerar

Graficar en papel milimetrado:

Calcular el Km y Vmáx de la pepsina en cada una de las gráficas.

Apellidos Nombre (s) Mesa N° Fecha

MATERIALES EN LA MESA DEL ALUMNO

MATERIALES EN LA MESA CENTRAL (DEL PROFESOR)

0.02mL Suero o plasma

PROCEDIMIENTOS PARA LA PREPARACIÓN DE REACTIVOS

El personal técnico colocará en las mesas TODO el material requerido.

Determinación enzimática de ácido úrico en suero: