ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

VICERRECTORADO ACADÉMICO
DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO

ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DERECURSOS NATURALES

ESCUELA DE INGENIERIA AGRONÓMICA

GUÍA DELABORATORIO DE FITOPATOLOGÌA II.

SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO DE LOS PRINCIPALES FUNGICIDAS

USADOS EN EL CONTROL QUÌMICO.

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: CODIGO:

GRUPO No.: 2

FECHA DE REALIZACIÒN: FECHA

DE ENTREGA:

15/01/2018 23/01/2018

Riobamba – Ecuador
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I. SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO DE LOS PRINCIPALES FUNGICIDAS

USADOS EN EL CONTROL QUIMICO.

II. INTRODUCCION

Los estudiantes en esta práctica podrán preparar soluciones madre con 4 funguicidas y
adicionarlas al medio de cultivo PDA en distintas concentraciones, tomando como base
las concentraciones dobles decrecientes. Esta metodología puede ser útil para la
evaluación de la efectividad de lo funguicidas a determinados agentes patógenos en
laboratorio.

A. OBJETIVO(S):

a. GENERAL

Evaluar la susceptibilidad in vitro de los principales fungicidas usados en el control

químico de B. cinérea.

2.2 ESPECÍFÍCOS:

Conocer los aspectos más importantes de la molécula que se utilizó para la práctica.

Determinar los cálculos de volumetría, medio de cultivo y solución madre.

B. JUSTIFICACIÒN

El conocer acerca de los productos químicos para el control de enfermedades es muy

importante de igual manera el conocer como debe ser su utilización el daño que causara
al patógeno, con pruebas realizadas en campo o en el laboratorio, conjuntamente con el
cálculo de concentraciones y la formulación de soluciones madre tenderemos éxito o no
en el control de patógenos porque es de mucha importancia la realización de la práctica.

III. EQUIPOS Y MATERIALES

1. MATERIALES

Erlenmeyer de 100ml

Fungicidas

Micro pipeta
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Puntas estériles para micro pipeta

Balanza digital

Mascarillas

Guantes de latex

Papel aluminio

4 pipetas

1 peras de succión

4 frascos para muestras de orina estériles

5 jeringas hipodérmicas de 10 ml

Medio de cultivo PDA

Caja de Petri plásticas

Marcador permanente

Masking

Agua destilada

Vaso de precipitación

Botellas de vidrio con tapa roscable

Vaso de precipitación

Alcohol antiséptico

2. Equipos

Balanza de precisión digital

Agitador magnético

Autoclave

Baño María
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Cámara de flujo

Mechero de bunsen

IV. METODOLOGIA

La concentración mínima inhibidora (MIC) en microbiología es la concentración más

baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento de un organismo después de su
incubación. La concentración mínima inhibidora es importante en diagnósticos de
laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos a un agente antimicrobiano
y además para monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos.

Las concentraciones mínimas inhibidoras pueden se determinadas mediante métodos de

micro dilución en caldo, normalmente siguiendo las directrices de centros de referencia
tales como el CISI o EUCAST.

Se escoge 4 fungicidas con actividad botrycida utilizados en el cultivo de frutilla, se

trabajara con los siguientes ingredientes activos: benomil, pirymethanil, iprodione y
fluodioxinil + ciproinil.

1. Observar las características de los fungicidas su presencia e ingredientes activos.

2. Definir la dosis de campo de los fungicidas a utilizar por litro.

3. Establecer el valor correspondiente para obtener una concentración 10 veces la
dosis de campo. Para esto únicamente se reduce el volumen de un litro a 100ml,
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de este se tiene una solución madre con una concentración 10 veces la dosis de
campo.
4. Agitar el contenido de los envases que contienen fungicidas en suspensión
concentrada.
5. Con una micropipeta de 100 a 1000 micro litros y una punta estéril tomar la
cantidad establecida en el paso anterior del fungicida en suspensión y colocarla
en el frasco con 50 ml de agua destilada. Etiquetar con el nombre del ingrediente
activo.

6. En el caso de los polvos mojarles pesar el valor correspondiente sobre n segmento

de papel aluminio y colocarlo en el frasco con 50 ml de agua destilada con su
respectivo nombre.
7. Por principio de volumetría calcular el valor a tomar de la solcuon madre para que
el PDA tenga las concentraciones 4x, 2x, 1x, 0,5x la dosis de campo, en caso del
control experimental 40 ml de agua destilada. A partir del primer valor obtenido
(4x) genera valores de concentraciones dobles decrecientes.
8. En base a los valores obtenidos generar un matriz en la que conste el volumen
faltante para completar 40 ml es decir cada Erlenmeyer según su concentración
tendrá volúmenes diferentes.
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Principio de volumetría

V1C1= V2C2

DONDE

V1= VOLUMEN 1: C1= CONCENTRACION

V2= VOLUMEN 2: C2= CONCENTRACION 2

TABLA Nº1. VOLUMENES DE SOLUCION MADRE Y AGUA DESTILADA

PARA OBTENER 40 ML DE MEDIO PDA MAS FUNGICIDAS A DISTINTAS
CONCENTRACIONES

CONCENTRACION CANTIDAD DE VOLUMEN DE MEDIO

SOLUCION MADRE PDA A COMPLETAR
4X 16ml 24ml
2X 8ml 32ml
1X 4ml 36ml
0,5X 2ml 38ml
CONTROL 0ml 40ml
Elaborado por: Rivera, A. 2017

9. Añadir el volumen de agua destilada a los frascos con las concentraciones

establecidas según la tabla 1, tener en cuenta que el volumen varía según la
concentración deseada.
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10. Tapar los Erlenmeyer con papel aluminio etiquetar la concentración de cada
frasco en el papel aluminio y el ingrediente activo.

11. Agrita y disolver completamente el medio en el agua destilada con la ayuda del
agitador magnético.

12. Esterilizar a 1 atm de presión a 121ºc por 2 min.

13. Una vez finalizado el proceso de esterilización retirar el medio y colocarlo en baño
maría a 50ºC.
14. Bajo condiciones de asepsia en la base de cada caja de Petri trazar dos ejes
perpendiculares y designar una lera a cada eje y etiquetar en caca caja de Petri el
ingrediente activo, concentración y fecha.
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15. Dentro de la cámara de flujo laminar completar el volumen faltante en cada

concentración con la solución madre utilizando las jeringas estériles. Tomar en
cuenta los datos de la tabla 1.
16. Dispensar el medio en condiciones asépticas, a razón de 20ml por caja.
17. Etiquetar dos cajas como control experimental con sus respectivas fecha.
Dispensar el medio preparado a razón de 20 ml por caja.
18. Deja enfriar luego de 24 horas e invertir las cajas de Petri con los distintos
ingredientes activos.
V. RESULTADOS
Pirymethanil
DOSIS POR LITRO: 1 g
SM 100 ml (10 x): 1
SM 50 ml (10 x): 0.5
VOLUMETRÍA
C1 V1 = C2 V2
De donde:
C1 = Concentración 1. V 1 = Volumen 1.
C2 = Concentración 2.
V2= Volumen 2.
Despejando:
V1 (4 x) = C2 x V2/ C1
4x × 40 ml
V1 (4 x) = 10 𝑋
= 16ml.

V1 (2 x) = C2 x V2/ C1
2x × 40 ml
V1 (2 x) = 10 𝑋
= 8 ml.

V1 (1 x) = C2 x V2/ C1
1x × 40 ml
V1 (1 x) = = 4 ml.
10 𝑋

V1 (0.5 x) = C2 x V2/ C1
0.5x × 40 ml
V1 (0.5 x) = 10 𝑋
= 2 ml.

39 g 1000 ml
X 40 ml
x = 𝟑𝟗𝟏𝟎𝟎𝟎
𝒈 𝒙 𝟒𝟎 𝒎𝒍
𝒎𝒍
= 1,56 g
Por lo tanto en 40 ml se necesita 1,56 g de PDA
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Tabla N° 01. Volúmenes de Solución Madre y Agua destilada para obtener 40

ml de medio PDA más funguicida a distintas concentraciones.
CONCENTRACION CANTIDADES DE SOLUCIONAR VOLUMEN DE AGUA DESTILADA
MADRE A TOMAR PARA COMPLETAR 40 ml
4x 16ml 24ml
2x 8ml 32ml
1x 4ml 36ml
0,5x 2ml 38ml
control 0ml 40ml

Ficha técnica de la molecula que utilizo

VI. CONCLUCIONES
1. Se logró conocer los aspectos más importantes de la molécula para el control,
reconocimos los problemas que pueden causar a la salud provocando esterilidad
en los hombres o problemas respiratorios por ello la importancia de su manejo y
aspectos técnicos para su uso.
2. Logramos formular concentraciones, soluciones madre para obtener resultados
acerca de su efecto en los medios de cultivo y para el control del patógeno.
VII. CUESTIONARIO
1. Describir las características técnicas del fungicida con que se trabajó.
 Calibrar el equipo de aplicación antes de utilizar, Evitar deriva y
exposición a operarios y otras personas.
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 No aplicar sobre cultivos afectados por sequía, heladas o cualquier otro

estrés físico o químico.
 No aplicar con pronóstico de lluvia inminente.
 De preferencia, para una aplicación segura y eficaz, aplicar con una brisa
ligera (3 - 7 km/h) y siempre en dirección del sentido del viento.
 Evitar realizar las aplicaciones en las horas de máximo calor.
(BAYER, 2016)
2. Describa las condiciones de desarrollo de Botrytis cinérea en el cultivo de
frutilla.
Material de trasplante contaminado (estolones), estructuras invernales
(esclerocios) que sobreviven en el suelo o residuos de plantas no recogidas en
campo
Cultivos contaminados adyacentes a los campos. Las esporas del hongo son
fácilmente dispersadas por el aire, salpicaduras de agua y por actividad física-
mecánica de las prácticas culturales. Las condiciones que favorecen la
proliferación del hongo son ambientes frescos y húmedos, donde la
temperatura óptima para una producción alta de esporas va de los 15 a los 22
°C. (INTAGRI, 2010)
VIII. BIBLIOGRAFIA
1. Extraído de https://www.intagri.com/articulos/fitosanidad/manejo-de-botrytis-
cinerea-en-el-cultivo-de-fresa - Esta información es propiedad intelectual de
INTAGRI S.C., Intagri se reserva el derecho de su publicación y reproducción
total o parcial

2. BAYER. (2016). Obtenido de

http://www.cropscience.bayer.cl/upfiles/etiquetas/Scala_400_SC_(22-05-17).pdf