Objetivos

Objetivo General
 Determinar los coeficientes de rendimiento de los compuestos que
intervienen en la fermentación batch (por lotes) mediante el uso de técnicas
experimentales y teóricas.
Objetivos Específicos
 Aprender a hacer una curva de calibración DNS de manera experimental.
 Aprender a cómo hacer un medio de cultivo adecuado que permita una
posterior inoculación y fermentación respecto a los tiempos establecidos en
la práctica.
 Conocer los rendimientos para cada uno de los medios de cultivo
 Comparar estadísticamente los valores de concentración obtenidos

Marco teórico
Saccharomyces cerevisiae:
Reino: Fungi – Mycetae
División: Amastigomycota – Eumycota
Subdivisión: Ascomycotina
Es la especie de levaduras utilizadas por excelencia para la obtención de etanol a
nivel industrial debido a que es un microorganismo de fácil manipulación y
recuperación, no es exigente en cuanto a su cultivo, no presenta alto costo, tolera
altas concentraciones de etanol en la fermentación produce bajos niveles de
subproductos, es osmotolerante, capaz de utilizar altas concentraciones de azúcar,
presenta alta viabilidad celular para el reciclado y características de floculación y
sedimentación para el procesamiento posterior.

Peso Húmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada

luego de la separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica
útil para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente
queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La
cantidad de líquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de células
bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta
entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular. Para corregir
el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida en el
espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan soluciones de
polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio
intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.

Curva de calibración azúcares reductores (Tecnica DNS): El método elegido está

basado en la medida de la cantidad de azúcares reductores (glucosa + fructosa) liberados
durante la hidrólisis de la sacarosa, catalizada por la invertasa. Para ello se utilizará el reactivo 3,5-
dinitrosalicilato (DNS; este reactivo fue introducido por Summer en 1921 para la determinación de
sustancias reductoras en sangre y orina). En presencia de azúcares reductores el 3,5-
dinitrosilicato es reducido a 3,5-diaminosalicilati. Este compuesto presenta un máximo de
absorción de 530nm y, por tanto, el valor de la absorbancia a dicha longitud de onda será
proporcional a la concentración de azúcares reductores (glucosa + fructosa) presentes en el
medio.

Peso seco: La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse
en términos de peso seco por unidad de volumen, ya sea como sólidos en
suspensión totales(SST) o sólidos en suspensión volátiles (SSV). Las células se
separan del líquido bien por centrifugación bien por filtración. Se expresan en
g.m.s/mL. La principal desventaja de estas técnicas es que su determinación incluye
no sólo microorganismos activos sino microorganismos muertos, material inerte,
polímeros extracelulares y materia orgánica adsorbida. Además, no puede aplicarse
cuandolos sustratos a degradar son insolubles. Los métodos gravimétricos son
simples, pero consumen bastante tiempo y son poco reproducibles. A la vez
este método estemétodo los componentes volátiles de las células pueden perderse
en el secado y puede existir alguna degradación. También la muestra seca pude
recobrar humedaddurante el pesado, principalmente si el ambiente tiene humedad
relativa alta.