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Oxidaciones incompletas y
biotecnología microbiana
i.os ;aldehídos. las aldosa., } las celosa<, a los ácidos correspondiente-.. por
ejernplo
eldehido ghcólico ~ glicolato
L. 1diosa ~ L-xilonato
p-giucosa ~ o-gluconato
HO- E J
HC-OH El
Hb-OH H20
COOH
1
HC-OH
rr
1 o gluc0$a·OXJdasa
1 o 1
HO- CH
HO-?~ HO- c i
HC-OH
1
HC-OH
HC-OH 1
1 1
H HC-OH
HC 1
1 1
CH, OH CH,OH
CH20H
FAD FAOH, gtuconato
gluconolactona
B·o-glucosa
>-<
o, H, 0 2
cata/asa
H20 + 1/2 0 2
1.2mgZn"11
glucosa
_,, _z4
Aspergillus
~
r~ato Asperg1/lus
"~'"'
{
·~ mÍio ~ ...~~ Asperg1/lus
~ 1 ·~ terreuspH 2
zigomicetos ~ +rato + to
~ SUCC1nato oxalsucc:inato
~2-oxoglutarato~ ~
Fig. 10.2 Producción de ácidos o rgánicos por hongos.
CH2-COOH
1
HO-C-COOH
1
CH2-COOH
372 1 O. Oxidaciones incompletas y biotecnología microbiana
1 Citrato 1 - 1socitrato
y co,
2-oxoglutarato
L-glutamato
NH;
~ 40
·ª
E 30
'l!!
:>
~ 20
flg.10.3 Dependencia de la formación ~ 10
de ácido L-glutámlco en Corynebac- ·< _
,.,tum g lutamícum de la concentración o +--"""'T---..--- -,.-
de biotina del medio (de HUANG, H.T. en: o s 10 25
progr. industr. Microbio!., 5 (1964] 57). Biotina (µgil)
HO-CH
HO-CH2
"c~º
··OH
~~~.)
o o~
11-<lesoxicortosol hodrooortosona
(compuesto S de Reocnst111n) (~ eortlsol)
Penictll1u71 I rn c
/
RhtwfJUS arrh1zus
7 ~H-CH3
~C-C-CHJ
~11
efedrina OH H
- 10.5 Producción de antibióticos
t>enolpenlCllona (penlCl[ina G)
¿
Penicthna G Tetraciclina Griseofulv1na
Flg. 10.5 Prueba por estría para determinar los espectros de acción de tres an-
tibióticos. (1) Staphylococcus aureus; (2) Streptococcus; (3) Escherichia colt, (4)
Pseudomonas aeruginosa; (5) Gandida a/bicans; (6) Tricophyton rubrum. En el cen-
tro de una cápsula de Petri cubierta con agar que contenga peptona e hidrolizado de
caseína se coloca un trozo de papel de filtro embebido en 10 µg del antibiótico que
se desea determinar. Con ayuda de un asa de platino se han sembrado radialmente
por estría los organismos indicadores desde el 1 hasta el 6. Algunos organismos no
han crecido en el halo de difusión (de WALLHAUSSER, K.H., H. ScHM10T: "Sterilisation,
Desinfektion, Konservierung, Chemotherapie. Thieme, Stuttgart 1967).
378 10. Oxidaciones incompletas y biotecnología microbiana
2. Siembra en placa
i'~·~~·~ f.~~~
~
~
-me-d,i-Od,-e ,----... cultivo estufa de
muestra agua dest agua dest. cápsula de especial cultivo 6
del suelo esténl esténl Petro días a 25' e
-------
-JE
con el germen prueba el espectro bactenano
©
=
placa
cultivada
• • ::;:-.
= g Cl
16 horas
en la e_stufa
de cult<Vo
a 37ºC
r-- --+-
i r m e n pro.blema
inóc lo
u
-----~
hmp¡eza - -
coloma central
8. Determinación
de la actividad
y de la estructura quimiea
si la actividad
es superior a
1:128
---¡---
preparado punfocado
L.
BBBB~ i
1 50 1.100 1 200 1 400 1.800 1.1600
Determinación de
a) actMdad
b) compatiblhdad
BBB
l.
6i i limite de act1vtdad = último tubo
c) efectos secundarios
()-o-cH-CO-
1
CH3
Q:- OCH 3
0-rH-CO-
1
NH2
Q--rH -co-
1
COOH
Las cefal osporinas '>011 excretadas por una especie del hon ~o
Ct plwlo.1pori11m. La cefalosporina C posee un anillo 8-lac1ámico } i.:~
1
cefalosponna e
HO-CH
1
H~l+-CO-CHC~
CH;PH
cloromocetina
tetrac1chna
*)~~
estreptomicina A
CH3 CH3
actinomicona O (C .)
't
L Dab- t-Leu
/
L- Dab 0-Phe
•
L-Thr L-Dab
10.5.3 Micotoxinas
Las micotoxinas son metabolitos secundarios de hongos con acción tóxi-
ca sobre el hombre y animales. Un productor de micotoxinas es por ejem-
plo, Claviceps purpurea, el cornezuelo del centeno (apartado 5.4). Los
alcaloides que sintetiza, derivados del ácido lisérgico (ergotamina, ergo-
toxina) desempeñan un papel significativo en la terapia de enfennedades
vasculares, migrañas, y corno alucinógenos. Aunque la porción principal
del corneL.uelo del centeno (Seca/e cornutum) se produce aún actualmen-
te por infección artificial del centeno con C. purpurea, el cultivo en pro-
fundidad de otras cepas, entre ellas C. paspali, parece ser económicamen-
te interesante.
Muchos hongos. entre ellos Jos hongos de sombrerillo y los mixomicetos,
son productores de venenos muy activos y son sustancias orgánicas par-
cialmente poco investigadas desde el punto de vista químico. Mostrarían
probablemente acciones interesantes. Entre ellas se encuentran también
las toxinas de las formas venenosas de los basidiomicetos Amanita pha-
lloides (amanitatoxina), A. pantherina, A. muscaria e Inocybe patoui/lar-
dii (atropina fúngica y muscarina). La investigación de la inmensidad de
metabolitos secundarios de los hongos no ha hecho más que empezar. Las
micotoxinas han vuelto a salir a Ja luz pública cuando miles de pavos jóve-
nes murieron a causa de alimentos contaminados con aflatoxinas. Las
aflatoxinas son derivados de la cumarina y los forman algunas cepas de
Aspergillus jlavus, A. parasiticus, A. oryzae y otros hongos, Y pueden
384 1O. Oxidaciones incompletas y biotecnología microbiana
:'~vx:3
M
aflatoxina B,
10.6 Vitaminas
Actualmente las vitaminas se añaden de fonna rutinaria a los alimentos y
a los piensos, y por ello se producen en grandes cantidades. Aunque
muchas vitaminas se obtengan por vía de la síntesis química, la producción
de riboflavina, vitamina B 12 y vitamina C está condicionada todavía a los
microorganismos. La riboOavina es producida en cantidades de gramos
por litro mediante ascomicetos (Ashbya gossypii y Eremothecium ashbyii)
así como también por levaduras (Candida) y bacterias (Clostridium).
La vitamina 8 12 se sintetiza exclusivamente por microorganismos. Es
esencial para los animales. Han de tomar las vitaminas con la alimentación
o como un preparado vitamínico. La vitamina producida por las bacterias
intestinales, entre ellas E. coli, no puede ser absorbida por los animales.
Una adaptación para acceder a las vitaminas del interior intestinal se ve en
los roedores, en los que la coprofagia está muy extendida. Para la produc-
ción industrial de vitamina B 12 se emplean algunas bacterias. en cuyo
metabolismo los corrinoides desempeñan un papel decisivo, como por
ejemplo, las propionibacterias, clostridios, estreptomicetos y otras bacte-
rias metanogénicas.
Los carotenoides se utilizan como aditivos alimentarios y dan a la yema
del huevo una tonalidad amarilla (i incluso en invierno!). Se aíslan a partir
del micelio de úgomicetos (Blakesleea trispora y Choanephora circinans).
No obstante, la síntesis química compile con la biotecnología microbiana.
La inclusión de un paso de bioconversión en la síntesis de la vitamina C.
la oxidación del o-sorbitol a L-sorbosa, ya lo hemos mencionado (aparta-
do 10.1 ). Actualmente se trabaja en la construcción de una cepa de
Erwinia mediante ingeniería genética para la transformación directa de
glucosa en ácido 2-ceto-L-gulónico, que por acidificación da directamen-
te ácido ascórbico.
Los métodos habituales para el cultivo de bacterias, levaduras y otros hon-
gos se están utilizando cada vez más para la producción de células anima-
1O.7 Exopolisacáridos 385
1o.7 Exopolisacáridos
Para elevar la viscosidad de los líquidos se utilizan desde hace tiempo
limos vegetales. En su lugar han ido apareciendo varios exopolisacárid os
bacterianos (apartado 2.2.5) (Tab. 10.1 ). Como aditivo para helados, budi-
nes, cremas y para el recubrimiento hidrófilo de raíces para que manten-
gan la humedad se utilizan los alginatos. Los polisacáridos obtenidos a
partir de algas marinas van siendo sustituidos de forma creciente por pro
duetos obtenidos con la ayuda de A;otobacrer y Pseudomonas. Una ap h
cación múltiple la tienen lm. limos formados por Xa11tho111011as campes.
tris. la xantana. a partir de e\ta bacteria patógena de vegetales. Están for-
madas por cadena'> de glucm.a enlatadas por enlaces B- 1,4-glucosídicos
(igual que la celulosa) y so¡x)rtan cadenas laterales de trisacáridos. L is
xantanas se util11an como espesantes en la elaboración de producto<, ah.
mentidos y en la industria cosmética. para cmuJ<..ionar tintas de imprenta
e incluso como aditivo-. en el agua de extracción de los yacimientos oe
petróleo. Para la preparación de budine-. y \opas pobres en calorías se ut. ·
li1a el curdlán que no e-. degradado en el mtestino humano. Acerca de I.1
utili?ación del dextrano como su'>tituto de pla<,ma sanguíneo y como base
del sephadex (adsorbente) ya hemo\ in-.istido en el apartado 2.2.5.
10.8 Enzimas
La re11i11a utilitada habitualmente en la producción del q ueso duro se ha
extraído del estómago de los rumian tes y las proteasas necesarias para el
tratamiento de las pieles a parti r de excrementos pul verizados. Los proce·
sos microbianos faci litan el acceso a estos e nzimas, y han ampliado lJ
oferta de enómas utili1ables en biotecnología (Tab. 10.2). El cuajo utili
zado habitualmente en la producción de la cuajada de la leche se ha suMi-
tuido por la re11i11a producida por Mucor rouxii y otros hongos. En el curso
de la producción de alcohol hay que obtener azúcares a partir del almidón.
ahora ya no hay que partir del grano gem1inado de cereales, sino que se
añade ami/asa íúngica al almidón. Para obtener fructosa a partir de almi-
dón. que tiene mayor poder edulcorante que la sacarosa o la glucosa. s..
transforma el almidón por la cx-amilam y la g/ucoamilasa a glucosa. y ést.
en un elevado porcentaje a fructosa mediante la glucosa-isomerasa. Para
la degradación del almidón también resulta apropiada la pu/11/a11asa que
hidroli?a uniones a - 1.4-glucosídicas y a- 1.6-glucosídicas. DiYersos prepa-
rados relativamente termotolerante\ de esto'> enzimas se obtienen de baci-
los. estreptomiceto-. ) bactenm. lácticas. Las proteasas y las lipasas se uti-
lizan como adillvo-. en detergentes. También \e intenta obtener celulo'a
barata a partir de madera y obtener a1úcar a partir de paja mediante ce/11
lasas de origen microbiano (de Triclwderma 1-iride o Penicillium) para
sustrato de la producción de etanol. Lo\ en1imas indicados hasta ahora so
exoenzimas; son liberados por lo-. microorganismos y se recuperan de
medio de cultivo. Entre los entima<, aislado-. a partir de sistemas celulares.
preferentemente bacterias. y que ofrece la industria bioquímica, se
encuentran la., e11do1111c/N1sas y otros en1imas de aplicación en ingenie n ..
genética. La tecnología genética ha abierto las puertas a nuevas posibili
dades de utililación de los e n1imas microbianos e n la Biotecnología.
10.8 Enzimas 387
T•b· 10.2 Enzimas de producción mic robiana y su utilización.
10.9 Biomasa
Los microorgani<.mos se producen también en grandes cantidades para utí
l11arlos como alimento o pienso (levaduras y bacterias. hongo., comes11.
bles). material para inocular plantas (riLObios), en panadería (levadur<.1
como cultivo iniciador o '>tarter para la preparación de leches ácidas 'Y
embutidos crudos, así como para otros muchos fines. La obtención de
levadura para piensos (Ca11dida) en base a las lejías .,ulfíticas de la indu.,
tria papelera '>C remonta ya a más de 30 años. Despué., de que en las épc -
ca-, de crisis -,e produjesen proteínas de levadura-. para el consumo huma-
no, se desarrollaron en los años 70 vario~ procesos para la producción
masiva de proteína d e uniceluJares (single cell protcin, SCP ). Como sus-
trato y como organismos se probaron petróleo e hidrocarburo'> puros
( Ca11dida /ipohtica). hidrógeno + anhídrido carbónico (A/caltgenes
elllrophus). metano! (Methylomo11as). etanol y compuestos orgámcos de
alto valor que aparecen como desechos en la síntesis química. La "revolu-
dón verde" y la optimi1ación de los métodos agrícolas ha hecho innece-
sario el desarrollo posterior de los procesos más relevantes.
El interés por la biomasa se ha renovado cuando -,e supo que algunos
materiales de reserva de las bacterias, ácido poli-8-hidrox i-butírico
(PHB) es maleable y termoplástico (como el polipropileno o el polietile-
no) y puede dar película<., fibra~ y recipientes como botellas y va-,o-.. y es
biodegra dable. El PHB se almacena intracelularmente en grandes canl!-
dades por algunas bacterias en condiciones adecuada'> con azúcares como
sustrato. Alcaligenes ewmphus alcanza sin dificultad un contenido en
PI IB de más del 90% (peso/peso) del peso seco. Se han establecido las
condiciones baJO la!; cuale'>. junto al PHB. se forman también poli-[,
hidroxivalcri ánico} poli-y-h1drox i,alenánico. a'>Í como poli-B-hidroxioc-
tanoato y otro<, polihidroxialcanoatos (PIIA) por otra'> bacteria-.. Ello pe -
mi te augura r con toda seguridad un gran futuro a la producción industrial
de horno y heteropolíme ros compatibles con el medio ambiente.
Una visión ampliada puede consegu1r.,e con el e'>tudio de textos especi<>
li1ados en Biotecnología . de revistas especializada s en temas aplicados '
en los amHis1s de mercados y productos.