“Una breve historia de los receptores acoplados a proteínas G”

Nombre: Colan Torres Herbert Martin Código: 14040043

El autor narra, que la clave de su éxito fue su desarrollo de matrices de cromatografía de afinidad en las
que pudo acoplar diversos antagonistas β-adrenérgicos y luego α-adrenérgicos a soportes sólidos). La
adsorción bioespecífica y la elución de tales columnas con ligandos adrenérgicos seguidos por otros pasos
cromatográficos más convencionales finalmente condujeron a un aislamiento de preparaciones
homogéneas de cada uno de los cuatro receptores adrenérgicos conocidos, α1, α2, β1 y β2.

Esta cifra representa aproximadamente una década de trabajo de una serie de devotos estudiantes y
postdoctorados, en particular Marc Caron y Jeff Benovic, entre otros. Cada una de las moléculas
receptoras putativas aisladas es una glucoproteína de aproximadamente 60,000-65,000 daltons de peso
molecular que une ligandos alfa y β-adrenérgicos específicos con especificidad y estereoespecificidad
apropiadas que coinciden con lo que se esperaría de los experimentos farmacológicos clásicos. Sin
embargo, persistía el escepticismo en cuanto a si estas moléculas aisladas también podían realizar la
función complementaria de un receptor, es decir, la capacidad de activar procesos biológicos específicos.

En un año, y en colaboración con Lutz Birnbaumer y la fallecida Eva Neer, pudo lograr una reconstitución
completa de una adenilato ciclasa sensible a la catecolamina a partir de tres proteínas, el receptor β-
adrenérgico purificado, la proteína reguladora del nucleótido guanina (Gs) y la unidad catalítica de la
adenilato ciclasa. Estos resultados demostraron de forma concluyente que las proteínas aisladas eran de
hecho el receptor β-adrenérgico y que eran capaces de llevar a cabo ambas funciones de un verdadero
receptor.

Con proteínas receptoras altamente purificadas y validadas en mano, pudo obtener tramos cortos de
secuencia de aminoácidos a partir de fragmentos de bromuro de cianógeno del receptor adrenérgico β2
y usarlos para diseñar sondas de oligonucleótidos para clonar el ADNc y el gen del receptor β2-
adrenérgico. Este esfuerzo exitoso se realizó en colaboración con un equipo de Merck y mi laboratorio, y
presentó el primer esfuerzo de investigación exitoso de un compañero de cardiología joven que había
estado trabajando en mi laboratorio durante varios años. Su nombre era Brian Kobilka. En esta primera
secuencia clonada de un GPCR de unión a ligando, pudieron observar todas las características que ahora
se consideran canónicas para la familia (figura 3): siete dominios hidrofóbicos transmembrana aparentes,
sitios para la fosforilación reguladora en dominios citoplásmicos y secuencias consenso para la
glicosilación en el término amino.
 Dentro de un año, habían
clonado el receptor α2-
adrenérgico altamente
homólogo y en varios años
un total de ocho
receptores adrenérgicos,
tres de los cuales se
basaron en la
secuenciación de
proteínas de las moléculas
aisladas y un receptor de
serotonina. Todos
mostraron la organización
7TM conservada.

Así que en 1987 estaban

bastante convencidos de
que todos los receptores
acoplados a la proteína G
conocidos probablemente serían miembros de la superfamilia de siete receptores transmembrana. En los
años siguientes, la familia creció rápidamente, ya que muchos laboratorios clonaron los GPCR casi
invariablemente mediante técnicas de homología, como la detección de baja severidad y luego la PCR. De
hecho, posteriormente casi no se purificó ningún otro GPCR antes de su clonación. Por lo tanto, siempre
se sintieron bien acerca de la muy difícil década o más de trabajo que entró en la purificación de los cuatro
receptores adrenérgicos que proporcionaron las primeras secuencias, la Piedra Rosetta, si se quiere, sobre
la cual se podría construir una superfamilia mucho más grande.

A continuación, utilizaron varias técnicas para tratar de comprender cómo la estructura del receptor
transmembrana, única y altamente conservada, determinó las dos funciones centrales de la unión del
ligando y la activación de la proteína G. Se basaron principalmente en la mutagénesis dirigida al sitio y la
creación de los primeros receptores quiméricos, en este caso quimeras del receptor α2 y β2-adrenérgico.

Una vez más Brian tomó la iniciativa en este trabajo. Aunque estrechamente relacionados en estructura
(estos dos receptores mostraron 50% de identidad de secuencia) realizan funciones bioquímicas y
fisiológicas diametralmente opuestas con el receptor α2 que inhibe la adenilato ciclasa a través de Gi y el
receptor β2-adrenérgico estimulándolo a través de Gs. Al crear estas quimeras, pudieron demostrar que
la especificidad de acoplamiento de la proteína G y, por lo tanto, la función del receptor α2 podían
convertirse de estimulante Gi a estimulante Gs simplemente reemplazando su tercer bucle citoplásmico
por el del receptor β2-adrenérgico Estos y muchos otros estudios confirmarían que los tramos de
membrana y los bucles extracelulares eran responsables de la especificidad de unión del ligando de los
receptores, mientras que las regiones mostradas en azul aquí en el citosol eran responsables de
determinar la especificidad del acoplamiento de proteína G.

En el curso de realizar más mutagénesis, Susanna Cotecchia, una becaria del laboratorio, descubrió
casualmente, para sorpresa, que algunas mutaciones en la parte distal del tercer ciclo citoplásmico de
varios receptores adrenérgicos daban lugar a receptores mutantes constitutivamente activos. Estos son
receptores que son activos incluso en ausencia de ligando. En el momento en que conceptualizaron esto
como debido a su abrogación de ciertas interacciones intramoleculares cruciales que normalmente
mantendrían al receptor en su conformación inactiva, se muestran como R y por lo tanto imitan los
cambios conformacionales normalmente producidos por agonistas que conducen a la forma activa del
receptor capaz para acoplar a G se muestra como R *. Curiosamente, ahora se ha demostrado que una
lista creciente de enfermedades humanas se debe a tales mutaciones activadoras de diversos GPCR.
En los años siguientes, un talentoso estudiante graduado, Jeff Benovic, pudo identificar primero la novela
quinasa responsable de la fosforilación (39), purificarla hasta la homogeneidad del cerebro bovino y clonar
su ADNc. Fue una nueva cinasa independiente de cAMP que llamamos βARK, para receptor quinasa β-
adrenérgico. Ahora se conoce como receptor acoplado a la proteína G quinasa 2 o GRK2.

Al mismo tiempo, se descubrió que la rodopsina se fosforilaba mediante una nueva quinasa denominada
rodopsina quinasa, cuando se blanqueaba con luz. Del mismo modo, esto parece estar asociado con una
reducción en su función. Pudieron clonar el ADNc de la rodopsina quinasa (42) y demostrar que él y βARK
fueron los dos primeros miembros de una subfamilia de quinasas nuevas, ahora denominadas receptores
de proteínas quinasas acopladas a proteínas.

En los últimos diez años, sin embargo, ha surgido un paradigma completamente nuevo ya que nos hemos
dado cuenta de que el sistema β-arrestina-GRK es en realidad multifuncional (figura 12). Algunas de las
vías que se han demostrado en los últimos años se muestran aquí, al igual que las consecuencias
fisiológicas celulares resultantes. Los más estudiados han sido las enzimas MAP quinasas. Las β-arrestinas
también median en la endocitosis de las fosas recubiertas de clatrina al interactuar con una lista creciente
de elementos de la maquinaria endocítica (55). Por lo tanto, las β-arrestinas median tres tipos de
funciones, desensibilización, internalización del receptor y señalización.

Un agonista sesgado es un ligando que estabiliza una conformación activa particular de un receptor,
estimulando así algunas respuestas pero no otras. Siete ligandos del receptor transmembrana, por
ejemplo, pueden estar predispuestos hacia una proteína G particular o una β-arrestina. Los receptores
mutados también pueden estar sesgados.

En el modelo clásico de activación de receptores de dos estados, los receptores pueden existir como un
receptor R inactivo o un receptor activo R *, con agonistas que estabilizan la conformación activa que
promueve los efectos celulares. En este modelo, todos los efectos del receptor son una consecuencia de
la única forma R * activada del receptor. Sin embargo, la existencia de agonistas sesgados que pueden
conducir a la estimulación de la señalización mediada exclusivamente por β-arrestina o proteína G implica
que debe haber múltiples conformaciones activas del receptor.

Los ligandos también pueden estar predispuestos hacia una proteína G y dichos agentes también pueden
tener potencial terapéutico. Por ejemplo, la utilidad terapéutica de los opiáceos, los medicamentos
analgésicos más potentes disponibles, están mediados a través de la estimulación de las proteínas Gi a
través del receptor μ-opioide, mientras que los efectos secundarios angustiantes del estreñimiento,
depresión respiratoria y tolerancia dosis cada vez mayores, están todas mediadas por la señalización
mediada por β-arrestina2 y se pierden en ratones knockout β-arrestin2 (63,64). Por lo tanto, los ligandos
sesgados con proteína G para el receptor μ-opioide deberían aliviar el dolor a la vez que tienen efectos
adversos marcadamente reducidos.

Estos ejemplos de ligandos β-arrestin y predispuestos a proteína G demuestran cómo nuestra nueva
comprensión de estos dos tipos de vías de señalización, obtenidas inicialmente a nivel bioquímico, puede
potenciarse potencialmente para obtener un beneficio terapéutico.

En base a una serie de acontecimientos y en conjunto con sus más de 200 estudiantes y becarios durante
su carrera, el autor del merecido premio nobel ha tratado de demostrar científicamente la presencia
bioquímica de los RCPG, como aporte biológico a la humanidad.