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Alumno:
López Portillo Felipe de Jesús
Práctica:
“Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando
cromatografía por adsorción”.
Resultados.
Para la obtención de los valores de absorbancia se leyeron en el espectrofotómetro todas las fracciones
obtenidas a 493 nm, empleando como blanco NaOH 0.01 N, pH 12 y a 668 nm con un blanco de agua destilada.
2.5
1.5
Absorbancia
0.5
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
-0.5
Volumen de elucion (mL)
A493 nm A668 nm
Preguntas extras.
I. Especifique y defina los elementos del sistema cromatográfico para esta separación.
II. Considerando las propiedades de solubilidad de los colorantes, indique qué modificaciones haría
para invertir el orden de la elusión.
En contraposición a los métodos comunes de adsorción, en fase reversa la fase estacionaria es no polar
(hidrofóbica) y la fase móvil es polar (hidrofílica). Esta inversión en las fases implica la inversión en el orden
de salida de los componentes de la muestra, es decir, aquéllas sustancias menos polares, serán más
retenidas que las polares.2
III. Defina el termino adsorción y, empleando formulas, esquematice que fuerzas intermoleculares
participan en el proceso de separación de los solutos.
La adsorción indica una adherencia selectiva, con desorciones diferentes, para una sustancia entre la fase
sólida del adsorbente y la fase líquida del eluyente.
Imagen 1. Primera elución con agua destilada: La alúmina se encuentra con cargas negativas, por lo que es
retenida por la alúmina acida que tiene cargas positivas, el azul de metileno que tiene carga positiva eluye con
facilidad, pues las cargas similares son repelidas.
Imagen 2. Segunda elución con hidróxido de sodio: debido al pH alcalino fuerte, el exceso de aniones (a pH
de 12) desplaza por gradiente a la fluoresceína de la alúmina acida, ayudando a que la fluoresceína eluya con
mayor facilidad.
Discusión.
En la Tabla 1 se tuvo que hacer una modificación matemática ya que el blanco daba absorbancias mayores
que la muestra, por lo que hizo la corrección especificada en la misma tabla.
La habilidad de un soluto para ser adsorbido depende de su polarizabilidad (temporaria y permanente), y de su
capacidad para formar puentes hidrógeno. Los grupos más polares son los adsorbidos más fuertemente. En
general, el poder de ser adsorbido aumenta con el incremento de grupos funcionales unidos a la misma
molécula, La elección correcta de los solventes de elución, es vital para el éxito del proceso separativo.2 Por
lo tanto, es una condición general empezar el desarrollo de la columna con solventes de baja polaridad, para
luego aumentarla lentamente. Si el solvente es muy polar, será fuertemente adsorbido por los gránulos
de fase fija y el desplazamiento o desorción de los componentes adsorbidos será inmediato.2 Es por ello
que en la mezcla de los colorantes: azul de metileno (AM) y fluoresceína (FA), se empezó con el agua
destilada (pH de 5) para eludir fácilmente al azul de metileno debido a que por su polarizabilidad sus
cargas positivas repelen con facilidad a la alúmina acida por lo que eluye fácilmente, cuando se cambia
la fase móvil por hidróxido, el exceso de aniones (a pH de 12) desplaza por gradiente a la fluoresceína
que se encuentra “unida” a la alúmina acida. Así se pueden separar ambas moléculas (Imagen 1 y 2)
y observar sus perfiles de elución (Figura 1), donde la absorción máxima del AM es a 668 nm mientras
que la FA lo hace a 493 nm , sin embargo a 668 la FA también absorbe a dicha longitud de onda,
aunque, en menor proporción.
Conclusiones.
Bibliografía.
1. Scoog, D. West, D. (2015). Fundamentos de química analítica. México: Cengage Learning. Pág(s)
270-290.
2. Galagovsky, L. (2013). Química orgánica: fundamentos teórico-prácticos para el laboratorio. España:
REVERTE. Pág(s).100-110.
3. Klein, D. (2016). Química orgánica. México: Medica Panamericana. Pág(s).30-32.