DETERMINACIÓN DE FÓSFORO EN HARINA DE ARVEJA

RESUMEN

La presente práctica se realizó en los Laboratorios de Química de la Universidad Técnica Particular de Loja, con la
finalidad de determinar el fósforo presente en una muestra de harina de arveja. El fósforo se encuentra presente en
alimentos en forma de fosfatos, reaccionando con el reactivo molibdato de amonio y metavanadato de amonio lo cual
origina un compuesto de color amarillo denominado fosfomolibdovanadato de amonio el cual se mide en un
espectrofotómetro a 400 nm. La determinación de fósforo se realizó tomando 3,001 g de muestra de harina la cual
fue incinerada previamente para obtener cenizas; posteriormente fueron diluidas en10 ml de solución de HCL 1:5 y
aforadas a 100ml, de Para realizar la curva de calibrado se utilizó ocho estándares de 0.25; 0.5; 1;2.5; 5; 10; 15 y
25 ppm. Estos estándares fueron preparados a partir de una solución patrón de 1000 ppm de fósforo, se calculó el
volumen requerido para cada estándar, se agregó 5 ml de reactivo de color, se aforó a 25 ml y de igual forma se dejó
reaccionar por 10 minutos. Las muestras fueron leídas en el espectrofotómetro UV visible a una longitud de onda de
400 nm. La curva de calibrado obtuvo un coeficiente de correlación R2 = 0.9432. Finalmente se obtuvo 0.0007188,
0.0006083 y 0,0001038 ppm de fósforo para las muestras de 2, 5 y 10 ml.

Palabras clave: Fósforo, molibdato de amonio, metavanadato de amonio, coeficiente de correlación,

espectrofotómetro.

ABSTRACT

This practice was conducted in the Laboratories of Chemistry, Technical University of Loja, in order to
determine the phosphorus present in a sample of wheat flour. Phosphorus is found in foods as phosphate,
reacting with ammonium molybdate reagent and ammonium metavanadate which produces
a yellow compound named ammonium fosfomolibdovanadato which is measured in a spectrophotometer
at 400 nm. The determination of phosphorus was made on 3,001 g of flour sample which
was previously burned for ashes were later en10 ml diluted 1:5 HCL solution and volumetrica100ml. To
perform the calibration curve was used eight standards of 0.25, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 15 and 25 ppm. These
standards were prepared from a stock solution of 1000 ppm of phosphorus, calculated the required
volume for each standard was added 5 ml of color reagent was diluted to 25 ml and similarly allowed to
react for 10 minutes. Samples were read in the visible UV spectrophotometer at a wavelength
of 400 nm. The calibration curve obtained a correlation coefficient R2 = 0.9432. Finally it was 0.0007188,
0.0006083 and 0,0001038 ppm phosphorus for samples of 2, 5 and 10 ml.

Keywords: Phosphorus, ammonium molybdate, ammonium metavanadate, correlation coefficient,

spectrophotometer.

INTRODUCCIÓN
El fósforo presente en forma de fosfatos en los
Fósforo (1) alimentos, reacciona con el reactivo llamado
molibdato de amonio y metavanadato de amonio
lo cual origina un compuesto de color amarillo
denominado fosfomolibdovanadato de amonio.
La cantidad de compuesto formada es
directamente proporcional a la cantidad de
fósforo presente en la muestra. La medición de la
cantidad de fosfomolibdovanadato formado se
mide en un espectrofotómetro calibrado a una
longitud de onda de 400 nanómetros.
Espectrofotometría (2)
Medición cuantitativa de las propiedades de
reflexión o transmisión de un material en función
de la longitud de onda.
Espectrofotometría implica el uso de un
espectrofotómetro. Un espectrofotómetro es un
fotómetro que puede medir la intensidad como
una función de la longitud de onda fuente de
luz. Las características importantes de
espectrofotómetros son ancho de banda espectral
y el rango lineal de medición de la absorción o
reflexión.
Un espectrofotómetro se usa comúnmente para la
medición de la transmitancia o reflectancia de
soluciones, sólidos transparentes u opacos, tales
como vidrio pulido, o de gases. Sin embargo,
también pueden ser diseñados para medir
la difusividad en cualquiera de los rangos de luz
listadas que cubren por lo general alrededor de
200nm - 2500nm utilizando diferentes controles
y calibraciones . Dentro de estos intervalos de luz,
las calibraciones se necesitan en la máquina
utilizando estándares que varían en escriba en
función de la longitud de onda de
la determinación fotométrica.
Fig.1-Espectrofotometro UV visible
Espectrofotometría UV visible (2) (3)
Los espectrofotómetros más comunes se utilizan
en los UV y visibles las regiones del espectro, y
algunos de estos instrumentos también operan en
el cercano infrarrojo región.
La región visible de 400-700 nanómetros en la
espectrofotometría se utiliza ampliamente en
colorimetría. Los fabricantes de tintas de
impresión, empresas, proveedores de textiles, y
muchos más, necesitan los datos proporcionados a
través de la colorimetría. Se toman lecturas en la
región de cada 5-20 nanómetros a lo largo de la
región visible, y producir una reflectancia
espectral curva o una secuencia de datos para
presentaciones alternativas. Estas curvas se pueden
utilizar para probar un nuevo lote de colorante
para comprobar si tiene un partido a las
especificaciones, por ejemplo, las normas de
impresión ISO.
Tradicionales espectrofotómetros región visible no
puede detectar si un colorante o el material de
base tienen fluorescencia. Esto puede hacer que
sea difícil de manejar problemas de color si, por
ejemplo una o más de las tintas de impresión es
fluorescente. Cuando un colorante contiene
fluorescencia, un espectrofotómetro fluorescente
bi-espectralse utiliza. Hay dos configuraciones
principales para espectrofotómetros espectro
visual, D/8 (esférica) y 0/45. Los nombres se
deben a la geometría de la fuente de luz
observador, y el interior de la cámara de
medición. Los científicos utilizan este instrumento
para medir la cantidad de compuestos en una
muestra. Si el compuesto es más concentrado más
será absorbida por la muestra; dentro de los
rangos pequeños, la ley de Beer-Lambert sostiene y
la absorbancia entre las muestras varía con la
concentración lineal. En el caso de las mediciones
de impresión dos configuraciones alternativas se
utilizan comúnmente-con/sin filtro UV para
controlar mejor el efecto de abrillantadores UV
dentro de la pasta de papel.
Las muestras se preparan habitualmente
en cubetas , dependiendo de la región de interés,
que puede estar construido de vidrio , plástico ,
o de cuarzo .
1. MATERIALES Y MÉTODOS PREPARACIÓN DE REACTIVOS

PREPARACIÓN DE MATERIAL PARA  HCl 1:5

CENIZAS En un balón de aforo se colocó 16,7 ml de HCl y
Los 2 crisoles fueron colocados en la mufla a se aforó con agua destilada.
500oC durante 30 minutos, con una pinza se
colocó los crisoles en el desecador durante 15
minutos. 1 ml1 HCl
ml HCl 66ml
ml
X X 100100
mlml
X=X= 16,7
16,7 mlml

 Solución de molibdato de amonio

FIG. 2: crisoles vacíos dentro del desecador
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA
CENIZAS
Se pesó en uno de los crisoles 3,001gr de la
muestra (harina de arveja), en la ventana de la
mufla se colocó el crisol hasta quemar la muestra
teniendo en cuenta que no debía observarse la
salida de humos.
OBTENCIÓN DE CENIZAS
Se colocó en la mufla la muestra incinerada a
600oC hasta obtener cenizas permaneciendo
aproximadamente 2 a 3 horas observando que la
muestra tuviera un color blanquecino-grisáceo.
Se pesó 15g de molibdato de amonio, los cuales
fueron disueltos en agua destilada previamente
calentada, y aforada en 250ml.
 Solución de metavanadato de amonio
Se pesó 0,375g de metavanadato de amonio, los
cuales fueron disueltos en agua destilada
previamente calentada, se añadió 75 ml de HNO3
y se aforó en 250ml.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE
COLOR
Se mezcló la solución del molibdato de amonio
con la solución de metavanadato de amonio,
formándose una solución de color ligeramente
amarillenta.

Fig. 3: Incineración de muestras en la mufla

Una vez obtenidas las cenizas nuevamente se
colocaron en un desecador hasta el día en que se
realizó la práctica.
FIG.4: mezclando el reactivo de color
SOLUCIONES ESTANDARES DE FOSFORO
 Blanco de estándar
En un balón de 25ml se añadió 5ml de reactivo de
V1=C2V2/C1
color y se aforó.
V1=5ppm*25ml/1000pp
 Estándar de 0.25ppm
m
Con una micropipeta se tomó 6.25µL de la
solución patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de V1= (0.125ml)*1x103µ
reactivo de color, y se aforó en un balón de 25ml. V1= 125µl
 Estándar de 10.00ppm
V1=C2V2/C1 Con una micropipeta se tomó 250µL de la
V1=0,25ppm*25ml/1000ppm solución patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de
V1= (6.25x10-3ml)*1x103µ reactivo de color, y se aforó en un balón de 25ml.
V1= 6.25 µl
V1=C2V2/C1
 Estándar de 0.50ppm V1=10ppm*25ml/1000ppm
Con una micropipeta se tomó 12.5µL de la V1= (0.25ml)*1x103µ
solución patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de V1=250 µl
reactivo de color, y se aforó en un balón de 25ml.
 Estándar de 15.00ppm
V1=C2V2/C1 Con una micropipeta se tomó 375µL de la
V1=0,50ppm*25ml/1000ppm solución patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de
V1= (0.0125ml)*1x103µ reactivo de color, y se aforó en un balón de 25ml.
V1= 12.5 µl
V1=C2V2/C1
 Estándar de 1.00ppm V1=15ppm*25ml/1000ppm
Con una micropipeta se tomó 25µL de la solución V1= (0.375ml)*1x103µ
patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de reactivo de V1= 375 µl
color, y se aforó en un balón de 25ml.
 Estándar de 25.00ppm
V1=C2V2/C1
Con una micropipeta se tomó 625µL de la
V1=1.00ppm*25ml/1000pp
solución patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de
m
reactivo de color, y se aforó en un balón de 25ml.
V1= (0.025ml)*1x103µ
V1=25 µl
 Estándar de 2.5 ppm
Con una micropipeta se tomó 62.5 µL de la
V1=C2V2/C1
solución patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de
V1=25ppm*25ml/1000ppm
reactivo de color, y se aforó en un balón de 25ml.
V1= (0.625)*1x103µ
V1= 625 µl
V1=C2V2/C1
V1=2,5ppm*25ml/1000ppm
V1= (0.0625ml)*1x103µ
V1=62.5 µl

 Estándar de 5.00ppm
Con una micropipeta se tomó 125µL de la
solución patrón de 1000ppm, se añadió 5ml de
reactivo de color, y se aforó en un balón de 25ml. Fig. 5 Estándares preparados
 Determinación del coeficiente de la curva de
PREPARACION DE LAS CENIZAS calibración.
Concentración λ Abs Abs. real
En el crisol se colocó 10ml de la solución de HCl, (ppm) (nm)
esta solución fue aforada en un balón de 100 ml blanco 0,076
(el mismo procedimiento se realizo para el crisol 0,25 0.098 0,014
vacío, blanco de muestra. 0,5 0.123 0,052
1 0.158 0,099
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA LA
2.5 400 0.297 0,400
DETERMINACIÓN DE FOSFORO
5 0.508 0,866
10 0.893 1,145
Para el blanco de muestra, tomamos 5ml de la
15 1.753 1.677
solución en un balón de 25ml, se añadió 5ml del
25 1,947 1,871
reactivo de color y se aforó con agua destilada.
Tanto a los estándares como a las diferentes Curva de calibrado
muestras fueron recubiertas con papel aluminio, Según las absorbancias alcanzadas con los
(ya que son sensibles a la luz) y se dejaron en estándares se obtuvo la curva de calibración la
reposo por 30mminutos aproximadamente para misma que nos dio un valor de R2 = 0,9432
que reaccionen. mostrándonos la linealidad de la curva

LECTURA DE ABSORBANCIA

Curva de Calibrado
2.5
y = 0.0821x + 0.0381
2 R² = 0.9432
Absorbancia

1.5

1 Seri
Line
FIG.6: parte interna del espectrofotómetro 0.5

Se prende el equipo con 30min de anticipación 0

una vez transcurrido este tiempo y ya con los 0 10 20 30
estándares y muestras listas se puede leer la Concentración ppm
absorbancia.
Antes de leer se fijó la longitud de onda en el
equipo que fue de 400nm, posterior a ello se
Cuantificación de la concentración de fósforo en
colocó cada uno de las muestras en cubetas, éstas
harina de arveja.
se colocaron verticalmente en el
espectrofotómetro (UV- Visible) y se procedió a la
Volu Volu
lectura de cada una de las muestras, primero se men men FD Conce
W de Señal
leyó el blanco de estándares, seguido de los 8 muest
de Alícuo de
400
ntraci
aforo ta (ml) aforo ón
estándares, después el blanco de muestra y por ra (g)
origin final
nm
(ppm)
último las muestras. al (ml) (ml)
Blanc
- 25 0.078 -
o
50
DISCUSIÓN DE RESULTADOS 3 2 25 12.5 0.423 0.345
3 5 25 5 0.814 0.736
3 10 25 2.5 2.570 2.492
Porque la técnica nos indica que a 400
nanómetros el haz de luz detecta el fosforo de la
Para determinar la concentración final de fósforo muestra indica.
utilizamos la siguiente fórmula:
𝑪𝟎 ∙ 𝑭𝑫 ∙ 𝑨𝒇𝒐𝒓𝒐 ¿Qué nos indica el coeficiente de correlación en
𝒑𝒑𝒎 𝑷 = la curva de calibración?
𝑾𝒎
El coeficiente de correlación es un estadístico que
0.345 ∙ 12.5 ∙ 0.5 proporciona información sobre la relación lineal
𝑝𝑝𝑚 𝑃2 =
3000 existente entre dos variables. Básicamente, esta
información se refiere a dos características de la
𝒑𝒑𝒎 𝑷𝟐 = 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟕𝟏𝟖𝟖
relación lineal: la dirección o sentido y la
0.73 ∙ 5 ∙ 0.5 cercanía o fuerza.
𝑝𝑝𝑚 𝑃5 =
3000
¿Cuál es el efecto del reactivo de molibdato en el
𝒑𝒑𝒎 𝑷𝟓 = 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟔𝟎𝟖𝟑 resultado final?

2.49 ∙ 2.5 ∙ 0.5 El fósforo inorgánico reacciona con molibdato de

𝑝𝑝𝑚 𝑃10 =
3000
𝒑𝒑𝒎 𝑷𝟏𝟎 = 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟏𝟎𝟑𝟖
CONCLUSIONES
Se concluyó que la espectrofotometría es el
método de análisis óptico más usado en las
investigaciones químicas y biológicas. La cual
determina la radiación absorbida o transmitida de
una solución que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una
cantidad conocida de la misma sustancia.
En esta práctica se pudo cumplir positivamente
con los objetivos propuestos, los cuales fueron:
 Determinar el efecto de la cantidad de
reactivo de molibdovanadato siendo
directamente proporcional a la cantidad de
fósforo presente en la muestra
 Cuantificar la concentración de fósforo en
una harina, teniendo concentraciones
insignificantes en la harina de arveja
 Verificar la curva de calibración, teniendo una
curva lineal con un valor de R= 0.9432, la
cual nos indica que los estándares no fueron
tan bien preparados.
PREGUNTAS
¿Por qué debemos realizar las lecturas en la
longitud de onda señalada por la técnica?
amonio en un medio ácido para formar un
complejo de fosfomolibdato que absorbe a una
longitud de onda
¿Cuál es el principio de la metodología AOAC
970.39?
El principio de esta metodología es la
determinación de fósforo en frutas y productos
frutales mediante el método
MOLIBDOVANADATO
ESPECTROFOTOMÉTRICO
¿La muestra utilizada cumple con los requisitos
de las normas?
No se puede hacer comparaciones de nuestros
resultados con los datos de ninguna norma debido
a que no se encuentra registro en las normas
INEN acerca del contenido de fósforo en harinas
de arveja.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍA
(1) MARTINEZ, Juan. Práctica de determinación
de fósforo. Blog en línea, enlace permanente
http://nutricionanimalpracticas.blogspot.com
/2010/04/practica-no-12-determinacion-de-
fosforo.html
(2) Allen, D., Cooksey, C., &Tsai, B. (2010, 05
de octubre). Espectrofotometría. Obtenido de
 http://www.nist.gov/pml/div685/grp03/spec
trophotometry.cfm
(3) Schwedt, Georg. (1997). La guía esencial para
Química Analítica. (Brooks Haderlie,
trad.).Chichester, Nueva York: Wiley.(Trabajo
original publicado en 1943).
(4) Universidad Autónoma de Madrid. Química
Analítica Instrumental. En línea, enlace
disponible
http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/l
hh345a/InstrumentalLecc1.pdf