I.

INTRODUCCIÓN

El método más comúnmente utilizado para la determinación de nitrógeno

orgánico es el llamado método Kjeldahl, que se basa en una volumetría ácido-
base. El procedimiento es directo y es fácilmente adaptable al análisis rutinario
de un gran número de muestras biológicas.

En el método Kjeldahl, la muestra se descompone en caliente medio sulfúrico,

en presencia de un agente reductor catalizador (mercurio, cobre o selenio).
También suele adicionarse una sal neutra para aumentar el punto de ebullición
de la disolución de ácido sulfúrico. De esta forma que aumenta temperatura de
trabajo, con lo cual se favorece la descomposición. El tratamiento transforma el
nitrógeno de la muestra en NH4+. La posterior adición de una base fuerte libera
el NH3, que es arrastrado hasta un frasco colector por destilación en corriente de
vapor.

El frasco colector contiene un volumen medido de una disolución estándar de

ácido, de forma que una fracción de ácido es neutralizada por el NH3. El ácido es
parcialmente Al finalizar la destilación se procede a valorar el ácido no
consumido con una disolución de base patrón. El volumen de disolución básica
consumido hasta llegar al punto de equivalencia permite conocer la cantidad de
NH3, y de esta forma, la cantidad de nitrógeno en la muestra, que puede
transformarse en contenido proteico en función del tipo de muestra ya que la
mayoría de las proteínas contienen aproximadamente el mismo porcentaje de
nitrógeno.

1.1 Objetivos:
 Determinar la cantidad de nitrógeno orgánico total por el método
microkjeldahl.
 Comprender el proceso del método microkjeldahl.
 II. MARCO TEÓRICO

2.1. Digestión

2.1.1. Definición de digestión.

Es un proceso de análisis químico para determinar el contenido en nitrógeno de

una sustancia química y se engloba en la categoría de medios por digestión
húmeda. Se usa comúnmente para estimar el contenido de proteínas de los
alimentos. Fue desarrollado por el danés Johan Kjeldahl en 1883.

Por ebullición, la muestra orgánica con el ácido sulfúrico concentrado y en

presencia del respectivo catalizador, se oxida a 𝐶𝑂2 y agua; mientras que una
parte del ácido sulfúrico se reduce a 𝑆𝑂2, según la ecuación:

𝑀. 𝑂 + 𝐻2 → 𝐶𝑂2 + 𝐻2 𝑂 + 𝑆𝑂2

El nitrógeno de la muestra orgánica se transforma en amoniaco que al

combinarse con la otra parte del ácido sulfúrico forma el sulfato de amoniaco,
según la siguiente ecuación.

2𝑁𝐻3 + 𝐻2 𝑆𝑂4 → (𝑁𝐻4)2 𝑆𝑂4

2.2. Destilación

2.2.1 definición de destilación

Es la separación por arrastre con vapor del amoníaco y posterior solubilización

en una solución ácida de concentración conocida. En esta etapa se adiciona
NaOH a la disolución de amonio obtenida previamente, generándose NH 3 y
vapor de agua, que arrastra al mismo.
La solubilización posterior en la solución ácida permite la conversión de NH 3 a
catión amonio, el cual se encuentra junto con el exceso de solución ácida
añadido. El NH3 puede recogerse sobre dos medios: ácido fuerte en exceso de
concentración conocida, o bien, ácido bórico en exceso medido.
En esta operación el nitrógeno que se encuentra en forma sulfato de amonio, se
ataca con un álcali fuerte a fin de liberar al amoniaco, la reacción que se verifica
en la siguiente:

(𝑁𝐻4)2 𝑆𝑂4 + 2𝑁𝑎𝑂𝐻 → 2𝑁𝐻3 + 𝑁𝑎2 𝑆𝑂4 + 2𝐻2 𝑂

El amoniaco es arrastrado por el vapor de agua, que luego se condensa. El

condensado, hidrato de amonio, se recibe en un vaso que contiene la mezcla
indicadora (ácido bórico al 2% + indicadora) formando el borato de amonio, la
reacción es la siguiente:

𝐻3 𝐵𝑂3 + 3𝑁𝐻4 𝑂𝐻 → (𝑁𝐻4)3 𝐵𝑂3 + 3𝐻2 𝑂

2.3. Titulación

2.3.1 definición de titulación

Medición de la cantidad de ácido neutralizado por el amoníaco disuelto, lo que

indica la cantidad de Nitrógeno presente en la muestra inicial.

Según el medio de recogida en la destilación, el amonio se valora de dos formas:

 recogida sobre ácido fuerte en exceso medido: se emplea una base y el

indicador rojo metilo.
 recogida sobre ácido bórico en exceso medido: se emplea un ácido y el
indicador rojo metilo. (JULIUS, 1910)

El borato de amonio se titula con una solución estandariza de 𝐻𝐶𝑙 𝑜 𝐻3 𝑆𝑂4

0.1000 N. La reacción que se verifica es la siguiente:

(𝑁𝐻4)3 𝐵𝑂3 + 3𝐻𝐶𝑙 3𝑁𝐻2 + 𝐻3 𝐵𝑂3

II. MATERIALES
2.1 lista de materiales

- muestra hojas de palta

- Placa Petri
- espátula
- Matraz kjeldahl de
- Vaso de precipitado
- Bureta automática
- Desecador

2.2 lista de equipos

- balanza analítica
- digestora.
- Estufa
- destilador

2.3 lista de reactivos

- ácido sulfúrico CC.
- Ácido bórico 2%
- Indicador mixto (rojo metilo y verde de bromocresol)
- Hidróxido de sodio 50%
- Ácido clorhídrico 0.1000 N

III. PROCEDIMIENTO

3.1 Procedimiento de la digestión.

a. En un disco de papel cebolla pesar la muestra (hoja de

palta, 0,1039g) de debidamente secada y molida, y transferirlo
cualitativamente a un matraz kjeldahl simple de 100 ml.
 b. Agregar aproximadamente 1.0 g de mescla digestora y 2.5ml de
ácido sulfúrico concentrado.
c. Colocar el matraz conteniendo la mescla en el equipo de digestión
y dejar que transcurra la digestión. La digestión concluye cuando
la solución se torna completamente cristalina o verde transparente.
d. Dejar enfriar.
3.2 procedimiento de la destilación.

e. En un vaso de precipitados de 100, colocar 25 ml de ácido bórico

al 2 % y 3 gotas de indicador mixto (rojo de metilo – verde de
bromocresol).
f. Transferir cualitativamente la muestra digerida fría a un matraz
Kjeldahl boca esmerilada de 100 ml.
g. Colocar el matraz con la muestra en el equipo de destilación.
h. Adicionar 5 ml de solución de NaOH al 50 % que contiene
fenolftaleína.
i. Abrir la línea de vapor e iniciar la destilación.
j. Recibir la destilación en el vaso del paso. La destilación concluye
cuando cesa el paso de amoniaco y se observa el respectivo viraje.

3.3 Procedimiento de la titulación.

k. Titular la solución del paso j con una solución estandarizada de

HCL 0.0382 N.
 Diagrama de flujo para el método kjeldahl

IV. RESULTADOS

4.1 Calculo

El porcentaje de nitrógeno orgánico total se calcula mediante la siguiente

formula.

V x N x 0.014
%N= x 100
W

Donde:

%N = Porcentaje de nitrógeno.
V = Gasto del ácido clorhídrico.
N = normalidad del HCl
0.014 = peso miliequivalente gramo del nitrógeno
W = peso de la muestra.

Calculo del porcentaje de nitrógeno orgánico en la hoja de la palta.

Reemplazando datos:

4.10 x 0,0382 x 0.014

%N= x 100 N= 2.11%
0,1039
Calculo del porcentaje de humedad:
p2−p3
% humedad = x100
p2−p1

40.7655−35.9955
% humedad = x100 humedad =77.36%
40.7655−34.5999

V. CONCLUSIONES

 Para determinar el porcentaje de nitrógeno orgánico total se utilizó una

muestra de hoja de palta, lo cual se calculó por el método microkjeldahl,
logrando llegar a concluir un porcentaje de 2.11 %de nitrógeno.
 Determinamos la cantidad de humedad en la muestra hoja de palta con
un 77.36% de humedad.

 El método microkjeldahl comprende tres procedimientos que son

digestión, destilación y titulación. En esta práctica se logró realizar estos
tres procedimientos para calcular el porcentaje de nitrógeno en la hoja de
palta

VI. RECOMENDACIONES

 Tomar nota de los datos de la muestra durante el procedimiento.

 Para realizar esta práctica contar con los equipos y materiales de
laboratorio respectivos.
 Utilizar guardapolvo en la práctica de laboratorio.

VII. BIBLIOGRAFIA
- KJELDAHL, J. "Neue Methode zur Bestimmung des Stickstoffs in
organischen Körpern" (New method for the determination of nitrogen
in organic substances). 1883. Zeitschrift für analytische
Chemie. 22 (1): 366-383
- Fritz.J. S (2003) Ruiz Tagle, J (Eds.) Química analítica cuantitativa
(pp. 23-34). Ciudad de México, México: En Limusa
- Harris C.D. (1999) Quantitative Chemical Analysis. New York:
Freeman and Company.
- JULIUS B. Cohen. Practical Organic Chemistry. 1910.
- Greenfield, H. and Southgate, D.A.T. 1992. Food Composition Data. London,
Elsevier Appllied Science.

VIII. ANEXOS

IMAGEN 1. Muestra de hoja de palta secada.

IMAGEN 2. proceso de la digestión.

IMAGEN 3. Proceso de la destilación

IMAGEN 4. Titulación con HCl