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BIOPROCESOS II
INFORME PRÁCTICO 02
“Método Analítico de Determinación de Proteínas (Método Bradford)”
DOCENTE:
Ing. Rogger Romero Usquiano
ESTUDIANTES:
Agurto Nuñuvero Miguel
Azañero Vallejo José
Iparraguirre Mendoza Angel
Jaramillo Sangay Alisson
Ruiz Velasquez Carlos
Vigo Rivera Lucero
I. INTRODUCCIÓN
La cuantificación de proteínas de manera precisa es esencial para todos los
experimentos relacionados a proteínas en una multitud de temas de
investigación. Se han desarrollado diferentes métodos para cuantificar
proteínas totales, o alguna en particular en un ensayo dado. Los métodos de
cuantificación de proteínas totales incluyen métodos tradicionales tales como
la medición de la absorbancia a 280 nm, los ensayos de Bradford y ácido
bicinconínico, así como métodos alternativos como el de Lowry o ensayos
novedosos desarrollados por los proveedores comerciales. Los proveedores
comerciales típicamente proveen un kit bien diseñado y conveniente para
cada tipo de ensayo. Los métodos para cuantificar proteínas individuales
incluyen el ELISA, el Western blot y, más recientemente, la espectrometría de
masas, entre otros.
El ensayo de Bradford, originalmente descripto por la Dr. Marion Bradford en
1976, es una de los métodos más populares para la determinación de la
concentración de proteínas. Se basa en la formación de un complejo entre el
colorante azul brillante de Coomassie G-250 y las proteínas en solución. El
colorante libre existe en cuatro formas iónicas. La forma azul más aniónica se
une a proteínas y absorbe a 590 nm. La concentración de proteínas puede
ser evaluada determinando la cantidad de colorante en su forma iónica azul y
midiendo la absorbancia de la solución a 592 nm utilizando un
espectrofotómetro (Kruger N, 1994). El colorante se une principalmente a
residuos de arginina, triptófano, tirosina, histidina y fenilalanina (Olson B,
Markwell J, 2007).
II. OBJETIVOS
Determinar la cuantificación de proteínas por método de Bradford.
PRÁCTICA 03
“Método Analítico de Determinación
De Proteínas (Método Bradford)”
Agua destilada
Albumina suero de bovino
Reactivo Bradford
Pipeta micrométrica
2 vasos de precipitación
4 tubos de ensayo
1 fiola de 100ml
1 varilla de vidrio
Espectrofotómetro
PROCEDIMIENTO
Preparación de Bradford
Disolver 0.1gr de Azul de gomaci G250 en 250ml de etanol al 98% más
100ml de ácido fosfórico al 85% y con agua destilada aforar a 1L.
Curva de calibrado
IV. RESULTADOS
CONTRACIÓN DE ALBÚMINA
TABLA N°1
De la Absorbancia respecto a la concentración de Albumina
V. DISCUSIONES
PRÁCTICA 03
“Método Analítico de Determinación
De Proteínas (Método Bradford)”
VI. CONCLUSIONES
VII. RECOMENDACIONES