Entregado: Mayo 11- 2018 Plant Cell Tiss Organ Cult
Establecimiento in vivo del material in vitro
Baldovino Maria1  Gallego Karolay1  Herazo Elías1Larrotta
Maria1  Santos Angie1.
Resumen
La evaluación de la aclimatación de plantas de
condiciones in vitro a in vivo es fundamental para
garantizar su supervivencia. En este proceso intervienen
factores determinantes relacionados a las condiciones
climáticas, el tipo de sustrato utilizado y la adecuada
adaptación de las plántulas a las nuevas condiciones.
Palabras claves: In vivo  in vitro Aclimatación.
Introducción
La aclimatación es una etapa fundamental en un sistema
de micropropagación porque dependen de ella la
eficiencia del proceso y la calidad final de las plantas
producidas in vitro. Estas plantas en comparación con las
cultivadas tradicionalmente presentan un
comportamiento diferente en condiciones de invernáculo
o de campo. Las plantas que crecen in vitro presentan
condiciones muy especiales en donde la humedad relativa
es alta, y la irradiancia más baja que en cultivos
tradicionales. El uso de envases sellados con el objeto de
prevenir contaminaciones, evita la turbulencia de aire, lo
cual aumenta la capa límite, condicionando el flujo de
CO2 y el intercambio gaseoso con el medio ambiente.
 Baldovino María
Maryangi2810@gmail.com
 Gallego Karolay
krlgallego@gmail.com
 Herazo Elias
Eliashb_@hotmail.com
 María Larrotta
Marylarrotta@gmail.com
 Angie Santos
Angiesantosteran97@hotmail.com
1
Estudiantes de VII semestre de biología de la universidad de Sucre.
Además, la incorporación de glúcidos al medio de cultivo
como fuente de carbono y energía, provoca diferencias en
el potencial de agua del medio y aumenta el riesgo de
contaminación con hongos y bacterias. Por otro lado, los
medios son suplementados usualmente con reguladores
de crecimiento. Estas condiciones resultan en la
formación de plantas con morfología, anatomía y
fisiología anormal [1], en comparación con una planta en
su ambiente natural, pueden presentar alta o baja densidad
de estomas, aparato estomatal poco funcional y baja tasa
fotosintética entre otras características. Para corregir estas
anormalidades se requiere de un periodo de aclimatación
Por esta razón, es necesaria la aplicación de técnicas de
adaptación al pasar de las condiciones in vitro a ex vitro.
Luego de la transferencia de las condiciones de in vitro a
ex vitro, las plántulas deben corregir estas anormalidades
y adaptarse a nuevas condiciones para poder crecer y
desarrollarse. En invernadero, y especialmente en el
campo, factores como la irradiancia es mucho mayor y la
humedad del aire mucho más baja que dentro de los
envases de vidrio. Muchas plantas mueren durante este
período. Por lo tanto, después del pasaje a condiciones ex
vitro, las plantas usualmente necesitan un período de
aclimatización con una gradual reducción en la humedad
del aire. En la aclimatización se tiene en cuenta humedad,
irradiancia, temperatura, concentración de CO2 y flujo de
aire. Durante la aclimatización pueden diferenciarse dos
períodos: un período de adaptación con poco crecimiento
de los brotes y baja formación de raíces, seguido de un
período de rápido crecimiento de raíces y parte aérea [2].
Debido a que el pasaje a condiciones ex vitro es un
problema en muchos sistemas de micropropagación, el
objetivo de este trabajo práctico fue aclimatar las
vitroplantas de Dioscorea rotundata y evaluar su
desarrollo en estas nuevas condiciones.
Materiales y métodos
El presente trabajo, se realizó en las instalaciones del
laboratorio y el invernadero de cultivo de tejidos vegetales
de la Facultad de Educación y Ciencias Biológicas,
Universidad De Sucre, en donde inicialmente se llevó a
cabo una pre-aclimatación de las plántulas en el
laboratorio antes de trasplantarlas a condiciones in vivo,
la cual fue realizada por parte de los asistentes de
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laboratorio, quienes ajustaron condiciones relacionadas a

la iluminación, y la temperatura.

Se sometieron al proceso de aclimatación 9 plantas

enraizadas in vitro de Dioscorea rotundata y se llevó a
cabo el siguiente procedimiento:
o Inicialmente con sumo cuidado las plantas fueron
extraídas del frasco.
o Se realizó un lavado de las raíces de la planta con
agua corriente, eliminando cualquier resto de Imagen 1. Plantas de Dioscorea rotundata obtenidas in
medio de cultivo y se procedió a depositar vitro para posterior aclimatación.
posteriormente las plántulas en frascos de agua
con la finalidad de mantenerlas hidratadas.
o Posteriormente fueron trasladadas hasta el
invernadero donde se efectuó el trasplante a
recipientes plásticos separados por secciones. Las
plántulas fueron regadas y tapadas con un
recipiente de plástico.
o Se llevó a cabo la toma de datos, que fue realizaba
cada 8 días con la finalidad de evaluar el
desarrollo de las plantas en el proceso de
aclimatación

El tipo de sustrato empleado en el proceso de aclimatación

fue arena, y las condiciones ambientales al momento de
realizar el trasplante se representan en siguiente tabla:

Condiciones ambientales

Humedad relativa 75%

Temperatura 30.7 ℃
Imagen 2. Plantas sometidas a condiciones in vivo.
Irradiación 205 µmol m-2 s-1
Fotoperiodo 12 h luz El resultado que se obtuvo de la exposición de las
plántulas de Dioscorea rotundata a condiciones in vivo
Tabla 1. Condiciones ambientales al momento de arrojo una mortalidad que abarcó todos los especímenes
realizar el proceso de aclimatación de las plántulas. estudiados, hechos que pueden evidenciarse en la Imagen
2, la cual ostenta la marchites de cada una de las plantas.

Resultados y Discusión La supervivencia de las plantas in vitro, durante el período

de adaptación, depende fundamentalmente de las
peculiaridades fisiológicas, estructurales y anatómicas
que las plántulas presentan producto del desarrollo in
vitro. La aclimatación de plantas provenientes de cultivo
de tejidos vegetales es una etapa muy importante,

2

considerada como la fase crítica, ya que las plantas no
pueden tolerar el cambio de las condiciones ambientales
del tubo de ensayo a las de invernadero o vivero, donde
no se presentan las condiciones adecuadas, como: un
ambiente estéril, elevada humedad relativa y un medio
rico en nutrientes [3,4].
Es fundamental que las plántulas in vitro sean de buena
calidad, porque de ello depende el porcentaje de
supervivencia in vivo. Para esto, se deben seleccionar las
plántulas que presenten un buen desarrollo [5]. Según
Hartmann & Kester (1995), Durante la aclimatación son
esenciales varias condiciones ambientales. Una de ellas es
mantener la humedad relativa durante 2 a 3 semanas para
proteger la planta de la desecación y permitir el
crecimiento de raíces y brotes. Otro es el sustrato
utilizado, el cual debe ser estéril y bien drenando, para que
permita que las raíces se desarrollen con rapidez. Otro
requerimiento es la protección contra diversos
organismos patógenos empleando fungicidas preventivos,
hasta que la planta logre resistencia. Todo ello implica
que las plantas deben adaptarse, de una condición
heterótrofa (en donde la fuente de carbono es agregada al
medio de cultivo), a una nutrición autótrofa. El fracaso en
la aclimatación se debe a que las plántulas mueren por
pérdida excesiva de agua o por el ataque de
microorganismos.
Durante las primeras dos semanas después del trasplante,
es necesario controlar adecuadamente los factores
ambientales y prácticamente se requiere simular las
condiciones del ambiente in vitro hasta que las plantas se
adapten a las nuevas condiciones, para evitar el exceso de
transpiración de las jóvenes plantas, hasta que éstas
logren un adecuado desarrollo de sus estomas y cutícula,
es necesario mantener una alta humedad relativa [6,7,8]
El control de la intensidad de la luz en esta fase es también
importante ya que las plantas provienen de un ambiente
con intensidad baja, por lo tanto ésta se debe regular para
evitar la fotoinhibición del aparato fotosintético. Para
atenuar el efecto de la luz durante las dos primeras
semanas, se emplean mallas plásticas de diferentes
porcentajes de sombra, generalmente entre 30-70 % en
dependencia de las necesidades de los cultivos [9].
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En lo referente al porcentaje de plántulas aclimatadas se
obtuvieron resultados desfavorables. No se logró una
aclimatación, lo cual es indicador que las plántulas fueron
incapaces de superar los cambios del lugar in vitro
(condición heterótrofa) a las condiciones naturales [10].
La vigorosidad de una vitroplanta aclimatada va en
relación al sustrato empleado, lo cual se ve reflejado en el
desarrollo radical, el cual se ve expresado en la presencia
de raíces normales y en el porcentaje de plantas
enraizadas (Domínguez & Donayre, 2006). Lo cual no fue
posible observar en las plántulas, ya que se presentó por
el contrario un fenómeno de desecación que bien puede
atribuirse a las condiciones del sustrato el cual fue arena,
las condiciones climáticas o a la falta de intervención
humana en cuanto al riego constante de las plantas.
Conclusiones
La aclimatación de las plantas fue ineficiente debido a que
las vitroplantas de Dioscorea Alata sometidas a este
proceso murieron con el paso de los días, deduciendo con
ello que las condiciones ambientales predominantes
durante la adaptación a las condiciones ex vitro fueron
desfavorables para su supervivencia.
Cuestionario
1) ¿Cuál es una de las principales razones por las cuales
el establecimiento in vivo sea tan importante?
Respuesta: El establecimiento in vivo es importante ya
que el mayor porcentaje de pérdidas de plantas
producidas in vitro ocurren en su fase de transferencia al
suelo cuando deben adaptarse a las nuevas condiciones
ambientales. Casi todos los esfuerzos investigativos del
cultivo de tejidos se perderían si las plantas que se
regeneran murieran cuando se intenta desarrollarlas en un
ambiente que en un comienzo les resulta desfavorable
[11].
3

2) Diga cuál sería para usted el sustrato y condiciones
ambientales que garanticen la supervivencia de las
plántulas.
Respuesta: Uno de los sustratos más utilizados por los
agricultores tradicionales es el humus de lombriz o
lombricompuesto. Las propiedades físicas, químicas y
microbiológicas del lombricompuesto varían
considerablemente según el alimento con que se nutren
las lombrices, pero por lo general el lombricompuesto
presenta entre 25-55 % de materias orgánicas y nutrientes
esenciales: N, P, K, Ca, Mg, Fe, Cu, Zn Y Mo. Por otra
parte, el N y P orgánicos se transforman fácilmente en
formas más asimilables. Si se incorpora el
lombricompuesto a suelos deficientes en bacterias como
Azotobacter sp., Azospirillum sp. Se facilita una mejor
fijación del N atmosférico. Por tanto, utilizaría este
sustrato acompañado de tierra negra y arena para diluir las
concentraciones del humus de lombriz.
3) Explique cómo aceleraría el proceso de multiplicación
de las plántulas in vivo use como ejemplo cualquier
especie de propagación vegetativa.
Respuesta: En nuestro país se han realizado estudios con
respecto a los efectos del uso de humus de lombriz, como
componente del sustrato para el proceso de aclimatación
y establecimiento in vivo. Y uno de los efectos que se ha
evidenciado es la multiplicación de estas plántulas y del
número final de estas. Un ejemplo de estos trabajos
realizados es el de aclimatación de plantas
micropropagadas de caña de azúcar utilizando el humus
de lombriz realizado por Díaz, l. Et al. En el año 2004
donde se determinó que el uso de humus de lombriz,
como componente del sustrato utilizado en invernáculo,
en la aclimatación de plantas micropropagadas de caña de
azúcar, favoreció el crecimiento en longitud de las raíces
y número final de planta.
4) Haga recomendaciones que crea conveniente.
Cantidad de agua a regar:
Respuesta: Utilizar un sustrato nutritivo y adecuado para
el establecimiento de los ejemplares.
5) Evaluar porcentaje de sobrevivencia.
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Respuesta: Porcentaje de sobrevivencia= individuos
vivos / individuos totales *100
%S= (0/9)*100= 0 (No sobrevivió ninguna plántula).
Bibliografía
[1] Pospíšilová et al. 1999, "Acclimatization of
micropropagated plants to ex vitro conditions". Biología
Plantarum, 42(4); 481-497.
[2] Van Huylenbroeck, J.M., De Riek, J.: Sugar and starch
metabolism during ex vitro rooting and acclimatization of
micropropagated Spathiphyllum "Petite" plantlets. - Plant
Sci. 111: 19-25, 1995.
[3] Sandoval, J.; G. Brenes & L. Pérez. 1991. Micro
propagación del “plátano” y “banano” (Musa AAB,
AAA) en el CATIE. Edit. Bib. Orton IICA / CATIE:
Costa Rica.
[4] García, M.; R. Quintero & A. López. 2004.
Biotecnología alimentaria. Edit. LIMUSA S.A: México.
[5] Sánchez, A.; D. Saavedra & H. Mauricio.2012.
Aclimatación y endurecimiento de materiales de palma de
aceite obtenidos mediante técnicas de cultivo de tejidos
vegetales. Rev. Palmas, 33(4): 41:52.
[6] Ziv, M.1991 “Vitrification: morphological and
physiological disorders of in vitro plant. En:
Debergh, P.C., Zimmerman, R.H. 1991.
Micropropagation: Technology and application”.
Editorial Dordrecht, Kluwer Academic. pp. 49 - 69.
[7] Haggman, H.; Jokela A.; Krajnakova J.; Kauppi A.;
Niemi K.; Aronen T. 1999 “Somatic embryogenesis of
Scots pine: cold treatment and characteristics of
explants affecting induction”. Journal of Experimental
Botany 50: 1769-1778.
[8] Sánchez, O.2000 “Micropropagación de algunas
leñosas nativas”. Editorial Trama. Universidad de
Concepción, Chile. 322 p.
[9] Agramonte, D.; F. Jiménez M. A.y Dita A. 1998
Aclimatización en Propagación y Mejora Genética de
Plantas por Biotecnología. Editorial Instituto de
Biotecnología de las Plantas. Santa Clara, Cuba. 400 pp.
[10] Osuna, P. & C. Saucedo. 2010. Propagación in vitro
de “vid” variedad Globo Rojo. Reportes técnicos de
investigación. Universidad Autónoma de Ciudad de
Juárez.
[11] Domínguez, G. & M. Donayre. 2006. Aclimatación
de Uncaria tomentosa (Willd.) DC. Producida in vitro.
Rev. Ecología Aplicada, 5(1): 67-7.
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