INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE SISTEMAS DE CONTROL DE

CALIDAD

Práctica
CONTROL DE CALIDAD EN LA COLORACIÓN
DE LOS FROTIS
TINCIÓN DE WRIGHT/TINCION DE GIEMSA

01/06/18

INTRODUCCIÓN

Para el estudio satisfactorio del frotis sanguíneos, es necesario colorearlos. En la mayoría

de los laboratorios los colorantes más empleados para la tinción hematológica se basan
en el de Romanowsky constituido fundamentalmente con la mezcla de eosina (ácido) y
azul de metileno (básico). Además se han incorporado el empleo de derivados por
oxidación del azul de metileno que se conoce con el nombre de azures (A, B, C). Son los
azures los responsables de la coloración púrpura o roja de ciertas estructuras. Tanto la
eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH de las
diferentes estructuras celulares, de forma que las que tienen carácter básico fijan la
eosina mientras que las que poseen propiedades ácidas fijan principalmente el azul de
metileno. Esto explica que las estructuras basófilas se tiñan de color azul mientras que
los competente acidófilas adquieren un color rosado. La diferente afinidad de ciertas
granulaciones citoplasmáticas por dichos colorantes permite clasificar a los leucocitos
polimorfonucleares.

TINCIÓN DE WRIGHT

Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es
una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de
metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El
amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y
favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares. La tinción de
Wright. Es de gran trascendencia clínica ya que gracias a ella es capaz de identificarse
diversas estructuras en una célula así como la morfología y en su caso patología celular
no solo de las células del sistema inmunológico sino de todas aquellas que componen la
sangre ya sea en un paciente sano o con un estado patológico.

OBJETIVOS
Conocer la importancia y el efecto que tiene sobre las células un colorante mal preparado.

FUNDAMENTO
Los colorantes ácidos se unen con los componentes básicos de las células
(citoplasma).inversamente , los colorantes básicos son atraídos por los compuestos
ácidos de las células y se combinan con ellos (ácidos nucleicos y núcleo proteinas ), por
lo que se denomina basófilo ,la eosina es un colorante acido , por lo tanto se puede usar
indistintamente los términos “eosinófilo y “acidófilo” para describir las propiedades
tintóreas de los componentes celulares .algunas estructuras se tiñen por una
combinación de ambos y se denominan neutrófilos .La coloración de los núcleos celulares
, esta basada en la interacción molecular entre eosina y un complejo azul B-DNA.

METODOLOGIA

Preparar extensiones de sangre total con

anticoagulante, marcar c/u frotis sobre la
película de sangre.
Colocar en frotis sobre un puente de
tinción con la película hacia arriba y dejar
secar.

Sumergir en metanol durante 1 minuto ,

después colocarle colorante Wright
durante 5 minutos.

Agregar el buffer de fosfatos

correspondiente (pH 6.4,6.7 y 7.5) sobre
el colorante.

Homogenizar sobre la superficie del frotis

, soplando con suavidad hasta formar
capa metálica .

Lavar el portaobjetos con agua destilada

, hasta que tenga un color rosado .
BITACORA DE RESULTADOS Fecha:01/06/18
Control de calidad en tinciones de células

Metodología utilizada :Tinción de Wright.

pH de los regulares utilizados : 6.4,6.7 y 7.5

Célula de referencia :Monocito

Características que debe tener la célula de referencia :

 Células de mayor tamaño un diámetro de 12 a 15 µm.

 Con cromatina nuclear es laxa.
 El citoplasma presentarán una tonalidad azul grisácea
 Gránulo rojizos bastante finos y sus vacuolas características.
 Presenta un núcleo en general arriñonado, lobulado.
 El núcleo guarda una proporción de 2:1 en área con respecto al citoplasma
lo rodea.

Observación de las células a diferentes pH (40x y 100x )

Figura 2 . Tinción de Wright a pH de 6.4, eritrocitos

rojizos , Monocitos plasma azul grisáceo.
Figura 2 .Tinción de Wright a pH de 6.8, eritrocitos
morados , monocito violeta , Neutrófilo segmentado
violeta claro .

Figura 3.Tinción de Wright a pH de 7.4, eritrocitos rosa a

pardusco,monocito con plasma azul grisáceo y esoinofilo
gránulos rojo a pardo rojizo .
Características de una buena tinción :

 Extendido del frotis uniforme con cabeza , cuerpo y cola.

 Fijarse adecuadamente la muestra.
 Colocar sobre toda la muestra el colorante con abundancia .
 Dejar actuar el colorante y los soluciones buffer el tiempo adecuado para la
coloración .
 El colorante no tenga partículas extrañas .
 Lavar con agua destilada.
 Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado.
 El citoplasma de los monocitos presentarán una tonalidad azul grisácea con
gránulo rojizos bastante finos y sus vacuolas características.
 El citoplasma de los linfocitos presentará varias tonalidades azules. Los núcleos
de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color púrpura oscuro.
 Los núcleos de los monocitos de color púrpura algo más claros (lila).
 Los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso.
 Los gránulos de los basófilos púrpura azulado muy oscuro.
 Los gránulos de los neutrófilos se aprecian de color lila, bastante finos.
 Las plaquetas toman coloración violeta o púrpura.
Identificación de Acciones correctivas Acciones preventivas
puntos críticos del
proceso
 Gota de sangre
pequeña  Limpiar y
 Un solo desengrasar los
movimiento portabjetos
uniforme y firme  Utilizar tubo lila
 Colocar el con
Frotis sanguíneo portaobjetos anticuagulante ,
guía a 45 º . sangre entera

Usar mucha fuerza al

momento de realizar el
extendido sanguíneo No utilizar mucha Practicar
fuerza
Portaobjetos sucio o Desengrasarlo o Tener el material limpio
graso limpiarlo y completo antes de
utilizarlo
No correr el extendido Hacerlo despacio Practicar cuantas veces
sanguíneo derecho sea necesario.
El ángulo del Hacerlo a un ángulo de Antes de correr el
portaobjetos incorrecto 45 grados extendido sanguíneo
fijarse en el ángulo
correcto
Al soplar sobre la capa No soplar con mucha
metálica fuerza porque se cae el Soplar suavemente
colorante además de la
saliva que cae sobre el
extendido
Tiempos de los Fijarse en los tiempos Traer cronómetro
colorantes de cada colorante
 DISCUSIÓN

De acuerdo a los resultados que se muestran en la figura 1 a pH de 6.4 se observa que

el citoplasma y el núcleo del monocito tienen coloración grisácea, notándose también a
su vez que los eritrocitos tienen una coloración rosa a rojiza, debido al pH utilizado las
célula de referencia es decir el monocito no se puede observar adecuadamente por lo
cual no es una correcta tinción, ya que altera la coloración de cada célula ; de acuerdo
a la figura 2 con pH de 6.8, los eritrocitos se observan muy intensos de una coloración
violeta , monocitos su citoplasma como su núcleo son de color grisáceo ocasionando
una difícil identificación , los eritrocitos se encuentras muy apilados casi no se logra
distinguir unos de otros , debido a que los eritrocitos con este pH toman una coloración
muy intensa y no se logra percibir adecuadamente , la tinción no es la adecuada a ese
buffer de fosfatos; en pH de 7.4 se observan mejor las células sanguíneas se logra
diferenciar el núcleo del citoplasma con sus característicos colores, donde
efectivamente en la literatura nos dice como debe verse la célula de referencia como lo
es el monocito su citoplasma presenta una tonalidad azul grisácea con gránulo rojizos
bastante finos, los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado,los núcleos de los
monocitos de color púrpura algo más claros (lila),los gránulos de los eosinófilos son de
color rojo-anaranjado intenso, los gránulos de los basófilos púrpura azulado muy oscuro.
los gránulos de los neutrófilos se aprecian de color lila, bastante finos; pudiendo ser
mejor identificadas al pH de buffer de fosfatos de 7.4 , ya que nos define y nos muestra
mejor las características tintoriales de cada una de las células, provocando que no hay
un menor error de confundir a las células ,la importancia de realizar una buena tinción
es que podemos confundirlas con patologías de diferente índole y por lo tanto un
diagnostico incorrecto con un tratamiento innecesario para un paciente por eso es muy
importante saber realizar estas técnicas así como sus fundamentos en este caso para
la tinción de Wright, los resultados indicados son orientativos ya que la intensidad y la
tonalidad del color varían con el pH usado en la tinción. Pero al realizar una tinción
debemos tener los cuidados necesarios desde la etapa pre-analítica, es de que se toma
la muestra asi como el procesamiento al realizar los frotis que deben ser elaborados
adecuadamente para poder ver la distribución uniforme de las células de la muestra en
la etapa analítica así como en la etapa final donde se emiten los resultados, etapa
postanalitica.
 CONCLUSIONES

 Se realizó la coloración de Wright, para poder estudiar y conocer

satisfactoriamente las células sanguíneas.
 Conoció la importancia y efecto que tiene sobre las células un buffer de fosfatos
a diferentes pH
 El mejor pH al cual se observaron mejor las células fue 7.4.
 Las tinciones utilizadas en el laboratorio permiten el diagnóstico oportuno y
sugerente de los agentes infecciosos, por lo que juegan un papel importante en
la decisión de una patología.

BIBLIOGRAFIA

 Rodak B. Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. 2 ed.

Rondinone S, trad. Buenos Aires: Médica Panamericana, 2004. 884p.
 Pérez JR., Fernández J. Manual de prácticas de laboratorio de hematología.
3 ed. Guatemala: Universidad de San Carlos, 1997. 102p.
 MIALE, Jhon B. (1985) “HEMATOLOGÍA MEDICINA DE LABORATORIO”.
8a ed. Reveté Company. 8a ed. Madrid, España.
 Pregunta extra

pH adecuado para realizar la tinción de Wright

pH: 7.4

Resultados
 Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado.

 El citoplasma de los monocitos presentarán una tonalidad azul grisácea con gránulo

rojizos bastante finos y sus vacuolas características.

 El citoplasma de los linfocitos presentará varias tonalidades azules.

 Los núcleos de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color púrpura oscuro.

 Los núcleos de los monocitos de color púrpura algo más claros (lila).

 Los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso.

 Los gránulos de los basófilos púrpura azulado muy oscuro.

Los gránulos de los neutrófilos se aprecian de color lila, bastante finos.

 Las plaquetas toman coloración violeta o púrpura.