Reparación del ADN

La reparación del ADN es un conjunto de procesos por los cuales una célula identifica y corrige
daños hechos a las moléculas de ADN que codifican el genoma. En las células humanas, tanto
las actividades metabólicas como los factores ambientales, como los rayos UV o la radiactividad,
pueden causar daños al ADN, provocando hasta un millón de lesiones moleculares por célula por
día.1 Muchas de estas lesiones causan daños estructurales a la molécula de ADN, y pueden alterar
o eliminar la capacidad de la célula de transcribir el gen que codifica el ADN afectado. Otras
lesiones producen mutaciones potencialmente nocivas en el genoma de la célula, lo que afecta la
supervivencia de sus «células hijas» a la hora de la mitosis. Por consiguiente, el proceso de
reparación del ADN es constantemente activo, respondiendo a daños a la estructura del ADN.23

La velocidad de la reparación del ADN depende de muchos factores, como el tipo de célula, su
edad, y el ambiente extracelular. Una célula que haya acumulado una gran cantidad de daños en el
ADN, o que no pueda reparar eficazmente los daños producidos en su ADN, puede entrar en uno
de tres estados posibles:

1. Un estado irreversible de inactividad, llamado senescencia.

2. Suicidio celular, llamado apoptosis o muerte celular programada.

3. Carcinogénesis, o formación de cáncer.

La capacidad de reparación del ADN es vital para la integridad de su genoma, y por tanto, de su
funcionamiento normal y el del organismo. En el caso de muchos de los genes que se había
demostrado que influían en la longevidad, más tarde se ha revelado que tienen un papel en la
reparación y protección del ADN.4 La incapacidad de corregir lesiones moleculares en las células
que forman gametos pueden introducir mutaciones en el genoma de sus descendientes,
influyendo en el ritmo de la evolución.

Índice

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 1Daño del ADN

o 1.1Causas de los daños

o 1.2Tipos de daño
 o 1.3Daños al ADN nuclear y al ADN mitocondrial

o 1.4Envejecimiento y apoptosis

o 1.5Daños en el ADN y mutaciones

 2Mecanismos de reparación del ADN

o 2.1Daños a una única cadena

o 2.2Daños a cadena doble

 3Fuentes

o 3.1Referencias

o 3.2Bibliografía

 4Enlaces externos

Daño del ADN[editar]

Los daños al ADN, que se deben a factores ambientales y a los procesos metabólicos habituales
dentro de la célula, tienen lugar a un ritmo de entre mil y un millón de lesiones moleculares por
célula por día.1 Aunque esto sólo representa un 0,000165% de las aproximadamente seis mil
millones de bases (tres mil millones de pares de bases) del genoma humano, las lesiones no
reparadas en genes críticos (como los genes supresores de tumores) pueden impedir que una
célula lleve a cabo su función y aumentar de manera significativa la posibilidad de que se forme
un tumor.

La inmensa mayoría de los daños al ADN afectan a la estructura primaria de la doble hélice, es
decir, la química de las bases mismas es modificada. Estas modificaciones pueden a su vez destruir
la estructura normal helicoidal de las moléculas, introduciendo nuevos enlaces químicos o aductos
voluminosos que no caben en la hélice doble estándar. A diferencia de las proteínas y el ARN, el
ADN suele carecer de estructura terciaria, por lo que no suele haber daños o perturbaciones a este
nivel. Sin embargo, el ADN tiene unas superhélices envueltas alrededor de proteínas
"empaquetadoras" llamadas histonas (en las eucariotas), y ambas estructuras son vulnerables a
los efectos de los daños al ADN.

Causas de los daños[editar]

Los daños al ADN se pueden subdividir en dos tipos principales:

1. Los daños endógenos, como ataques por parte de especies reactivas

del oxígeno producidas a partir de subproductos metabólicos normales (mutación
espontánea), especialmente en el proceso de desaminación oxidativa;

2. Los daños exógenos causados por agentes externos, tales como:

1. Radiación ultravioleta del sol [UV 200-300nm] u otras frecuencias de radiación, incluyendo
los rayos X y los rayos gamma.5

2. Radiación ionizante.6
 3. Hidrólisis o disrupción térmica.

4. Algunas toxinas vegetales.

5. Mutágenos artificiales, especialmente compuestos aromáticos que actúan como agentes

intercalantes del ADN.

6. Quimioterapia y radioterapia como tratamiento contra el cáncer.

7. Virus que se integran en el genoma.7

La replicación de ADN dañado antes de que la célula se divida puede provocar la incorporación de
bases erróneas ante las dañadas. Las células hijas que heredan estas bases erróneas llevan
mutaciones en los que la secuencia de ADN original es irrecuperable (excepto en el raro caso de
una reversión de la mutación, o bien más frecuentemente a través de la recombinación genética a
pesar de ser igualmente raro).

Tipos de daño[editar]

Hay cuatro tipos principales de daños al ADN debido a procesos celulares endógenos:

1. Oxidación de las bases (por ejemplo, 8-oxo-7 0.8-dihidroguanina (8-oxoG)) y generación de

interrupciones de la cadena de ADN por parte de especies reactivas del oxígeno.

2. Alquilación de bases (normalmente metilación), como la formación de 7-metilguanina, 1-

metiladenina, O6-metilguanina

3. Hidrólisis de bases, como desaminación, depurinación y depirimidinación.

4. Malfuncionamiento de bases, debido a errores en la replicación del ADN, en que se inserta

una base de ADN errónea en una cadena de ADN en formación, se inserta una base que no
es necesaria insertar, o no se inserta una de necesaria.

Los daños causados por agentes exógenos son de muchos tipos.8 Algunos ejemplos son:

1. La luz UV-B debido a entrecruzamientos con bases adyacentes de citosina y timina,

crean dímeros de pirimidina. Esto recibe el nombre de daño directo al ADN.

2. La luz UV-A provoca la formación de «radicales libres», especialmente si hay crema

solar que ha penetrado en la piel. Esto recibe el nombre de daño indirecto al ADN.

3. La radiación ionizante, como la que causa la desintegración radiactiva o la de los rayos

cósmicos, provoca roturas en las cadenas de ADN.

4. La disrupción térmica a temperaturas elevadas aumenta la velocidad de

la despurinización (pérdida de bases de purina del «tronco» del ADN) y las roturas de
cadenas sencillas. Por ejemplo, se observa despurinización hidrolítica en los
bacteria termófilas, que viven en aguas termalesa 85 a 250 ° C.910 En estas especies, la
velocidad de despurinización (300 residuos de purina por genoma por generación) es
demasiado alta como para que se repare mediante los mecanismos habituales de
reparación, de manera que no se puede descartar la posibilidad de una respuesta
adaptativa.
 5. Productos químicos industriales, como el cloruro de vinilo o el agua oxigenada, así como
compuestos químicos ambientales como los hidrocarburos policíclicos que se encuentran
en el humo, el hollín y el alquitrán, provocan una gran diversidad de aductos-etenobases
de ADN, bases oxidadas, fosfotriésteros alquilados, y entrecruzamiento del ADN, por citar
sólo algunos efectos.

Los daños por radiación UV, la alquilación/metilación, los daños por rayos X y los daños oxidativos
son ejemplos de daños inducidos. Los daños espontáneos incluyen la pérdida de una base, la
desaminación, plegamientos de los anillos de azúcar, y los desplazamientos de tautómeros.11

Daños al ADN nuclear y al ADN mitocondrial[editar]

En las células humanas, y las células eucariotas en general, el ADN se encuentra en dos puntos de
la célula: en el núcleo y en las mitocondrias. El ADN nuclear(ADNn) existe en forma
de cromatina durante las fases no replicadoras del ciclo celular, y es condensado en estructuras
agregadas denominadas cromosomasdurante la división celular. En ambos estados, el ADN es
altamente compacto y se enrolla alrededor de proteínas en forma de perla, llamadas histonas.
Cuando una célula necesita expresar la información genética codificada en su ADNn, se desenrrolla
la región cromosómica correspondiente, expresan sus genes, y luego la región vuelve a ser
condensada en su forma de reposo. El ADN mitocondrial (ADNmt) se encuentra dentro de las
mitocondrias (un tipo de orgánulos), existe en múltiples copias, y está estrechamente asociado
con una serie de proteínas para formar un complejo llamado nucleoide. Dentro de las
mitocondrias, las especies reactivas del oxígeno (ERE) y los radicales libres, subproductos de la
producción constante de adenosín trifosfato (ATP) mediante la fosforilación oxidativa, crean un
medio altamente oxidativo que se sabe que daña la ADNmt. Una enzima clave a la hora de
compensar la toxicidad de estas especies es la superóxido dismutasa, que está presente tanto en
las mitocondrias como en el citoplasma de las células eucariotas.

Envejecimiento y apoptosis[editar]

El envejecimiento, un estado irreversible en el que la célula ya no se divide (mitosis), es una

respuesta protectora en el acortamiento de los extremos de los cromosomas (telómeros). Los
telómeros son largas regiones de ADN no codificantes repetitivas, que delimitan los cromosomas y
que se degradan parcialmente cada vez que una célula se divide (límite de Hayflick).12 En cambio,
la quietud es un estado reversible de latencia que no tiene relación con los daños en el genoma
(ciclo celular). El envejecimiento de las células puede representar una alternativa funcional a
la apoptosis en que la presencia física de una célula es necesaria para el organismo,13 que sirve
como mecanismo de «último recurso» para evitar que una célula con el ADN dañado se replique
anormalmente en la ausencia de comunicación celular pro-crecimiento. La división celular
incontrolada puede provocar la formación de un tumor (cáncer), que es potencialmente letal para
el organismo. Por tanto, la inducción del envejecimiento y la apoptosis es considerada parte de la
estrategia de protección contra el cáncer.

Daños en el ADN y mutaciones[editar]

Es importante distinguir entre los daños en el ADN y las mutaciones, los dos tipos principales de
errores en el ADN.14151617 Los daños en el ADN y las mutaciones son fundamentalmente diferentes.
Estos daños son en último término anormalidades químicas en la estructura del ADN, como
roturas de cadena sencilla y cadena doble, residuos de 8-hidroxideoxiguanosina, y aductos
de hidrocarburos aromáticos policíclicos. Determinadas proteínas pueden reconocer estas
alteraciones en el ADN, de manera que los pueden reparar si hay disponible información
redundante para ser copiada, a partir de la secuencia intacta de la cadena de ADN
complementaria que no ha sufrido esta alteración. Si una célula no repara daños en su ADN,
puede quedar parada la expresión de un gen.18

En contraste a los daños en el ADN, una mutación es un cambio en la secuencia de bases del ADN,
es decir que no se produce ningún cambio que pueda ser reconocido por las proteínas encargadas
de la corrección de estas alteraciones, ya que su composición química y estructural es «normal».
Las mutaciones provenientes de los errores de síntesis no pueden ser reconocida por
las enzimas una vez que el cambio de bases está presente en ambas cadenas del ADN, de manera
que las mutaciones resultan indetectables en la corrección y no son reparadas. Las mutaciones son
replicadas durante la división celular.19

A nivel celular, las mutaciones pueden provocar cambios en el metabolismo y la proliferación de

estas células.20 En el conjunto de células de un organismo, el número de células mutantes
aumentará o disminuirá según los efectos de la mutación en la capacidad de la célula para
sobrevivir y reproducirse. Aunque son claramente diferentes los unos de los otros, los daños en el
ADN y las mutaciones están relacionados, pues los daños en el ADN provocan a menudo errores
de síntesis del ADN durante la replicación o la reparación, y estos errores son una causa
importante de mutaciones.

Teniendo en cuenta las propiedades de los daños en el ADN y las mutaciones, se puede ver que los
daños en el ADN son un problema especial en células que no se dividen o que lo hacen
lentamente, pues los daños no reparados tienden a acumularse con el tiempo. Por otra parte, en
las células que se dividen rápidamente, los daños en el ADN no reparados que no matan la célula
evitando su replicación suelen provocar errores durante la replicación y, por tanto, mutaciones.21

La gran mayoría de mutaciones que no tienen un efecto neutro son deletéreas para la
supervivencia de una célula. Así pues, en una población de células de un tejido con células que se
replican, las células mutantes tienden a desaparecer. Sin embargo, las pocas mutaciones que
ofrecen una ventaja para la proliferación celular tienden a extenderse de manera clónica a
expensas de las células vecinas. Esta ventaja para la célula es una desventaja para el organismo en
general, pues estas células mutantes proliferan libremente escapando al control del ciclo celular,
son las células cancerosas. Aquellos tipos celulares que se dividen más frecuentemente tienden a
acumular más fácilmente las mutaciones, ya que una vez ocurridas las mutaciones tardan estas
células poco tiempo en replicar el ADN y por tanto la mutación incorporará poco tiempo con la
copia inicial de la cadena complementaria. Así pues una vez dividida una de las dos células
resultantes de la división habrá «fijado» la variante mutante, siendo más difícil que ocurra la
corrección. Así pues, los daños en el ADN en células que se dividen frecuentemente son una causa
importante de cáncer,22 pues dan pie a mutaciones. En cambio, los daños en el ADN en células que
se dividen poco son probablemente una causa importante del envejecimiento.23

Mecanismos de reparación del ADN[editar]

Las células no pueden funcionar si los daños en el ADN corrompen la integridad y accesibilidad de
información esencial en el genoma (pero las células permanecen aparentemente funcionales
cuando faltan o están dañados genes "no esenciales"). Según el tipo de daños que ha sufrido la
estructura de doble hélice del ADN, han evolucionado una variedad de estrategias de reparación
que restauran la información perdida. Si es posible, las células utilizan la cadena de ADN
complementaria (si no ha sido modificada) o la cromátida hermana como "plantilla" para restaurar
la información original. Si no hay ninguna plantilla disponible, las células utilizan como último
recurso un sistema de recuperación propenso a los errores conocido como síntesis de translesión.

Los daños al ADN alteran la configuración espacial de la hélice, su topología, y la célula es capaz de
detectar estas alteraciones. Una vez que se detectan los daños, unas moléculas específicas
reparadoras del ADN se adhieren al punto dañado o cerca de él, induciendo a otras moléculas a
adherirse y formar un complejo que permite que tenga lugar la reparación. Los tipos de moléculas
implicados y el mecanismo de reparación que se utiliza depende del tipo de daños que haya
sufrido el ADN y de la fase del ciclo celular en que se encuentre la célula.

Daños a una única cadena[editar]

Cuando sólo una de las dos cadenas de la doble hélice tiene un defecto, la otra puede ser utilizada
como plantilla para dirigir la corrección de la cadena dañada. Para reparar daños a una de las
moléculas pareadas de ADN, existen varios mecanismos de reparación de escisiones, que eliminan
el nucleótido dañado y lo sustituyen con un nucleótido intacto complementario al que se
encuentra en la cadena de ADN no dañada.

 Reparación sobre la marcha, es el principal sistema de corrección de daños. Lo realizan las

propias ADN Pol I y ADN Pol III (o sus equivalentes en eucariotas) con su actividad
exonucleasa 3' → 5' para corregir un nucleótido equivocado que hayan colocado. Esta
incorrección es detectada porque el emparejamiento incorrecto causa una distorsión de la
doble hélice que las ADN Polimerasas pueden detectar. Sin embargo, la reparación solo
puede realizarse si aún no se han puesto más nucleótidos, una vez colocado aunque sea
uno más, éste actúa como barrera de no retorno.

 Reparación directa, no requiere eliminación de nucleótidos o bases nitrogenadas, sino que

se emplean enzimas para reparar directamente alteraciones nucleotídicas. Los principales
enzimas empleados son la fotoliasa (separa los dímeros de timinas formados por radiación
UV, mediante el mecanismo de fotorreactivación) y la metiltransferasa (retira grupos
metilo añadidos al ADN).

 Reparación por escisión de base (BER), que repara daños a un único nucleótido causados
por oxidación, alquilación, hidrólisis o desaminación. Una glicosidasa escinde la base
nitrogenada del nucleótido dañado, generando un sitio apurínico o apirimidínico. El
esqueleto pentosa-fosfato residual es eliminado por una AP endonucleasa y finalmente es
sustituido por el nucleótido adecuado por la actividad secuencial de ADN
polimerasa y ADN ligasa.

 Reparación por escisión de nucleótido (NER), que repara daños que afecten cadenas más
largas, de entre dos y treinta bases. Este proceso reconoce cambios grandes que
distorsionan la hélice, como dímeros de timina, así como roturas de cadena única
 (reparados con enzimas como la UvrABC endonucleasa. Una forma especializada de NER,
conocida como reparación acoplada a transcripción (TCR) desarrolla enzimas de alta
prioridad en genes que se están transcribiendo activamente.

 Reparación de malapareamiento o reparación por mismatch (MMR). Todas las

reparaciones anteriores se realizan antes de terminar la replicación. Este sistema se realiza
cuando la replicación ya ha concluido, y corrige errores de nucleótidos mal apareados
(pero normales, es decir, no dañados). Para ello debe reconocer qué hebra es la correcta,
lo que en procariotas ocurre porque el ADN suele tener metiladas sus bases, pero tras la
replicación la hebra nueva no se metila hasta comprobar que no tenga errores, por lo que
la maquinaria de reparación supone que si hay un error tras la replicación, se habrá
producido en la hebra nueva (la no metilada). Una vez metiladas, o no hay corrección
posible, o ésta puede causar errores. Por ejemplo, en cualquier emparejamiento erróneo
de GT y CT, se retira preferentemente la timina, porque es probable que sea resultado de
la desaminación de la citosina. Este sistema de reconocimiento por metilación solo
funciona en procariotas, se ignora cuál es el mecanismo empleado en eucariotas para
distinguir la hebra recién formada de la hebra madre.

Estos métodos mencionados hasta ahora reparar el ADN de forma fidedigna, recuperando el
genotipo original. Pero cuando los daños son excesivos, se producen los siguientes tipos de
reparación, que ya son propensos a errores: no recuperan el genotipo original, se trata de
soluciones de emergencia cuando está en juego la supervivencia celular.

 Respuesta SOS, que es un rellenado de emergencia que se pone en marcha cuando se

acumulan daños que distorsionan la doble hélice (como regiones de ADN monocatenario,
por pérdidas de nucleótidos en la cadena complementaria), atascando la maquinaria
replicativa. En procariotas esto desencadena el sistema RecA, una proteasa que elimina
proteínas represoras de polimerasas de bypass, capaces de sobreponerse a la distorsión
de la hélice y rellenar los huecos con nucleótidos al azar. En eucariotas las polimerasas de
bypass son constitutivas, están presentes en todo momento en el citoplasma, pero solo se
reclutan cuando se acumulan daños, mediante una regulación por ubiquitinación de la
abrazadera.

 Proteína p53, que más que un sistema de reparación, induce la apoptosis celular cuando
los daños no pueden ser reparados ni siquiera por la respuesta SOS, para impedir que se
desarrollen tumores.

Daños a cadena doble[editar]

Las roturas de cadena doble, en el que ambas cadenas de la doble hélice quedan rotas, son
especialmente peligrosos para la célula, ya que pueden provocar problemas en el genoma. Existen
dos mecanismos que reparan estas roturas: la unión de extremos no homólogos (NHEJ del
inglés Non-homologous DNA End Joining) y la reparación recombinativa (también conocida como
reparación asistida por plantilla o reparación de recombinación homóloga).

En el NHEJ el ADN ligasa IV, un ADN ligasa especializada que forma un complejo con el
cofactor XRCC4, une directamente los dos extremos.24 Para asegurarse de una reparación precisa,
el NHEJ se basa en cortas secuencias homólogas llamadas microhomologías, presentes en las colas
monocatenarias de los extremos de ADN que deben ser unidos. Si estas secuencias son
compatibles, la reparación suele ser correcta.25262728 El NHEJ también puede causar mutaciones
durante la reparación. La pérdida de bases nitrogenadas en el lugar de rotura puede provocar
deleciones y la unión de translocaciones de forma terminal no correspondientes. El NHEJ es
especialmente importante antes de que la célula haya replicado su ADN, pues no hay ninguna
plantilla que permita la reparación por recombinación homóloga. Hay rutas de NHEJ «de
seguridad» en las eucariotas superiores.29 Además de su papel como «cuidador» del genoma, el
NHEJ es necesario para unir roturas de la cadena doble con extremos de horquilla, causados
durante la recombinación V (D) J, el proceso que genera la diversidad de los receptores de
los linfocitos B y los linfocitos T en el sistema inmunitario de los vertebrados.30

La reparación recombinante requiere la presencia de una secuencia idéntica o casi idéntica que
sea utilizada como plantilla para reparar la rotura. La maquinaria enzimática responsable de este
proceso es casi idéntica a la maquinaria responsable del cruce cromosómico durante la meiosis.
Esta ruta permite que un cromosoma dañado sea reparado utilizando una cromátida hermana
(disponible en G2 después de la replicación del ADN) o un cromosoma homólogo como plantilla.
Las roturas de cadena doble causados por los intentos de la maquinaria replicante de sintetizar a
través de una rotura de cadena única o una lesión no reparada provocan un colapso de la horquilla
de replicación y son generalmente reparados por recombinación.

Las topoisomerasas provocan roturas tanto de una única cadena como de la cadena doble cuando
cambian el estado de superenrollamiento del ADN, lo que es especialmente habitual en regiones
situadas cerca de una horquilla de replicación abierta. Estos roturas no son consideradas como
daños en el ADN, ya que son un intermedio natural del mecanismo bioquímico de las
topoisomerasas y son inmediatamente reparados por las enzimas que los han creado.

Un grupo de científicos franceses bombardearon Deinococcus radiodurans para estudiar el

mecanismo de reparación de roturas de la cadena doble de ADN en este organismo. Al menos dos
copias del genoma, con roturas aleatorias del ADN, pueden formar fragmentos de ADN por medio
de apareamiento. Entonces, los fragmentos que se solapan parcialmente son utilizados para
sintetizar las regiones homólogas mediante un bucle-D en movimiento que puede continuar la
extensión hasta que encuentran cadenas correspondientes complementarias. En el último paso se
produce un cruce por medio de una recombinación homólogade recargo dependiente.31
Daño en el DNA

La función de la reparación del DNA es el mantenimiento de la información genética intacta La

reparación del DNA está muy relacionada con la replicación puesto que en la mayor parte de los
procesos de reparación se da algo de replicación y con la recombinación, puesto que la
recombinación es una de las vías de reparación. El DNA está expuesto a multitud de agentes que
pueden producirle daños.

¿Cómo se produce el Daño en el DNA?

1) Errores en la replicación: la seguridad con que una secuencia de DNA se copia durante la
replicación depende de la fidelidad de la polimerasa en la selección correcta del dNTP para
insertarlo en la cadena complementaria que se sintetiza a partir del DNA parental. Los errores en
la replicación se incrementan si el balance de los 4 dNTP en la célula del DNA precursor se
desordena, si un dNTP se encuentra en exceso se puede alterar la normalidad de la polimerasa
e incorporará este nucleótido en lugar del correcto.

2) Daños espontáneos: a 37 °C miles de bases se pierden espontáneamente, dejando sitios

apurínicos y apirímidínicos incapaces de determinar la inserción correcta de las bases en la cadena
complementaria.

3) Daños endógenos: la mayor parte de estos cambios se producen por la generación de radicales
librescomo subproductos de la respiración aerobia normal. Estos radicales que son moléculas o
fragmentos moleculares con electrones sin aparear son capaces de acelerar la ruptura de las
cadenas del DNA.

4) Daños exógenos:

a) Radiaciones ionizantes: los rayos X y γ, provocan ruptura de simple cadena, ruptura de doble
cadena, bases dañadas por ionización directa y generan radicales libres.

b) Radiaciones ultravioleta (UV): es el agente que daña el DNA más estudiado, causa la formación
de enlaces intracadenas (dimerización de pirimidinas), en orden de abundancia T·T, C·T y C·C. La
figura siguiente muestra dos tipos de dímero de timina:
c) Agentes alguilantes: Etil Metano Sulfonato (EMS), N-metil-N’-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG):
d) Acido nitroso: provoca desaminación de bases.

e) Agentes voluminosos: forman una lesión voluminosa. Ej.: Benzopireno, Mitomicina C.

f) Agentes que forman enlaces covalentes intercadenas: detienen la replicación.

Daños en el DNA

Cambios de 1 base: afectan la secuencia, pero no la estructura total del DNA. Ellos no afectan la
transcripción o replicación, cuando las cadenas del DNA dúplex se separan. Así estos cambios
ejercen su daño sobre futuras generaciones a través de las consecuencias del cambio en la
secuencia del DNA.

Distorsiones estructurales: ellas causan un impedimento físico a la replicación y transcripción. Un

ejemplo muy estudiado es la formación de dímeros de pirimidinas. Otros ejemplos son la
introducción de enlaces covalentes entre bases de cadenas opuestas y la adición de aductos.
En todos estos casos el daño permanece en el DNA y continúa causando problemas estructurales
y/o induce mutaciones, hasta que es eliminado. Los daños se han de reparar, de lo contrario
aparecen mutaciones que eventualmente pueden ser letales, de ahí que existan muchos
mecanismos de reparación. Algunos de estos mecanismos son específicos de lesión: la lesión más
estudiada es la formación de dímeros de pirimidina (mas frecuentemente timina) causados por
radiación ultravioleta. Lo normal es que un mecanismo de reparación repare multitud de lesiones
y, en cualquier caso, los mecanismos de reparación son redundantes: una misma lesión puede ser
reparada por varios mecanismos de reparación; esto constituye un mecanismo de seguridad: si
existe un fallo o mutación en un mecanismo de reparación pueden actuar otros. Mecanismos de
reparación no funcionales producen abundantes mutaciones: los desarrollos tumorales se
producen por la acumulación de mutaciones que pueden provenir de diferentes deficiencias en los
sistemas de reparación.

Mecanismos de reparación

En líneas generales los mecanismos de reparación eucarióticos son similares a los mecanismos de
reparación de E. coli(que es donde mejor se han estudiado), aunque en eucarioticos hay muchas
más proteínas implicadas.

Los mecanismos de reparación pueden clasificarse como (ver Tabla 25-5 Lehninger):

1) Reparación directa o “in situ”

2) Reparación por escisión

Reparación por escisión de bases BER (Base Excision Repair) ó reparación de parches muy cortos
(VSP)

Reparación por escisión de nucleótidos NER (Nucleotide Excision Repair) ó reparación de parches
cortos (SP)

3) Reparación de desapareamiento de bases (Mitsmach Repair) ó reparación de parches muy

largos (VLP)

4) Reparación inducida:

Respuesta SOS.

Reparación inducida en células eucarióticas

Reparación directa

Es aquella en la que se revierte la lesión. Ejemplo: la reparación de dímero de timina producidos

por luz ultravioleta entre los 200-300 nm, mediante la enzima fotoliasa. La fotoliasa reconoce la
distorsión en el DNA causada por el dímero, dos timinas adyacentes en una misma banda de DNA
unidas covalentemente por un anillo de tipo ciclobutano, que detienen la maquinaria de
replicación y la transcripción. La luz ultravioleta (200-500 nm) activa dicha enzima, encausando así
la rotura del anillo ciclobutano y a continuación se libera. Las figuras siguientes representan el
modelo de la estructura de la fotoliasa de E. coli y el mecanismo de esta enzima:
La mayor parte de los dímeros de timina se reparan por mecanismos de escisión, que inducen la
eliminación de las zonas donde se encuentran. Además de los dímeros de timina, algunas bases
modificadas se reparan por este mecanismo, ej: O6 metil guanina se repara por una
metiltransferasa que elimina el metilo, que se transfiere al enzima quedando inactivada. Las
figuras siguientes representan la aparición de guanina metilada y el mecanismo por el cual se
repara este error:
Mecanismos de escisión

Son aquellos mecanismos de reparación en los que se elimina la zona en la que se encuentra la
lesión. Hay dos tipos de mecanismos de reparación por escisión:

1) BER: Reparación por escisión de bases: la base que se encuentra modificada se escinde.
Ejemplo: oxidación de citosinas que se convierten en deoxiuracilos. La N-uracil glicosidasa rompe
el enlace glicosídico que une la base con el azúcar, originádose así un hueco en el DNA: sitio
apirimidínico si le falta una pirimidina o apurínico si la base que faltara fuera una purina. Existen
AP endonucleasas que reconocen el DNA al que le falta una base y producen un corte; una
exonucleasa degrada el DNA a partir de este corte y deja una zona que es reparada por la DNA
polimerasa y sellada por la ligasa. A veces, la AP endonucleasa corta la cadena con la base
modificada. En cada célula humana se generan diariamente unos 10000 sitios AP que son
reparados por una máquina proteica, el reparosoma, formado por cuatro proteínas que actúan
concertadamente: la UDG (Uracil-DNA glicosilasa, que elimina el uracilo), HAP1 (AP endonucleasa
humana, que corta la cadena azúcar-fosfato), la polimerasa β (que introduce el nucletido que
faltaba) y la ligasa (que sella el corte).

2) NER: Reparacin por escisión de nucleótidos, se corta la cadena de azúcar - fosfato. Los genes
implicados, en el caso de E. coli, son Uvr (A, B, C, D). Los mutantes en genes Uvr son muy sensibles
a la luz ultravioleta, por tanto, los genes Uvr confieren resistencia a UV. Las figuras siguientes
muestran el mecanismo:
2 UvrA rastrean el DNA hasta encontrar una distorsión estructural (por ejemplo un dímero de
timina). UvrB queda unido en la zona lesionada, UvrA es eliminado y se recluta UvrC, que produce
dos cortes endonucleotídicos a ambos lados de la lesión, unos 5 nts en dirección 3' y unos 8 nt 5'.
UvrD que es una helicasa (también llamada helicasa II) desplaza el oligo que incluye la distorsión
(aproximadamente 14 nucletidos). La DNA polimerasa I rellena el hueco a partir del extremo 3' OH
libre y la ligasa lo sella. (Ver también la figura 14.28 Genes VII y otra representación alternativa del
mecanismo).

En organismos eucarióticos también se da este mecanismo. Los pacientes de xeroderma

pigmentosa son extremadamente sensibles a la luz solar (sufren quemaduras abundantes en su
piel, desarrollan melanomas, etc., por esto suelen vivir muy poco). Tienen mutaciones en genes
implicados en vías de reparacin por escisión de nucleótidos. Hay 7 genes implicados: XP A, XP B, XP
C, XP D, XP E, XP F y XP G. Si encontramos una lesión en el DNA, por ejemplo de dímeros de timina,
la XP A reconoce dicha lesión, entonces se introduce una helicasa TFII y se va abriendo el DNA en
la zona adyacente a la lesión. XP G y XP F van cortando y eliminando la zona de la lesión. Se libera
el oligo (23-24 nts) y RFC coloca la pinza PCNA para que la DNA polimerasa ε rellene el hueco y la
ligasa selle el nick (en esencia es lo mismo que ocurre en E. coli).

Sistemas eucarióticos responsables del mecanismo de

reparación por escisión de nucleótidos (NER)

Reparacion de desapareamiento de bases (Mismatch Repair)

Los errores que comete la DNA polimerasa dan lugar a desapareamientos de bases, así si a una G
por error se le enfrenta una A, aunque son bases normales, no lo es su apareamiento, (mismatch:
bases desapareadas). En condiciones normales la actividad exonucleasa asociada a la polimerasa
evita los desapareamientos, pero si no lo hace hay que eliminarlo antes de que la banda se
replique, ya que si no, la mutación quedaría fijada. En E. coli existe un grupo de genes
llamados Mut, implicados en la eliminacin de estos desapareamientos (si hay mutantes en estos
genes Mut se produce una tasa de mutación más elevada de lo normal). El sistema de E. coli usa
un reparisoma formado por las siguientes proteínas:
Pasos en el mecanismo de reparación del sistema de Mut:

1. Unión de Mut S al error: Mut S recluta al menos otros 2 polipéptidos Mut H y Mut L.El
ensamblaje del complejo activa la endonucleasa latente de Mut H, la cual entonces inicia el
proceso de escisión introduciendo una mella en la cadena nuevamente sintetizada, del lado 5' del
todavía no metilado GATC. El reconocimiento se lleva a cabo por las secuencias GATC que no están
metiladas en la banda de nueva síntesis, ya que la metilasa Dam aún no ha actuado sobre ellas,
recordemos que la actuación de la metilasa Dam tarda unos minutos, este es el tiempo que
permite reconocer la base errónea (ver Fig. 14.29Genes VII).
2. La degradación de la cadena conteniendo el nucleótido mal incorporado comienza en esta
mella y continúa hacia y después de las bases mal apareadas.Este proceso es mediado por Exo VII,
si la mella se encuentra del lado 5' del error o Exo I, si la mella se encuentra del lado 3' del error.

3. La región de simple cadena expuesta es protegida del error por SSB.

4. El hueco es llenado por Pol III y sellado por DNA ligasa.

Se asume que eventos similares tienen lugar durante la corrección de errores en levaduras y
humanos, excepto que la discriminación de las cadenas no es dictada por metilación, En su lugar
discontinuidades en la cadena nuevamente sintetizada pueden estar implicadas en el proceso.

En organismos eucariotas se han encontrado que cánceres colorrectales (HNPCC, hereditary

nonpolyposis colon cancer) están asociados (al menos un 90% de ellos) a mutaciones en genes
parecidos a los Mut L y Mut S, estos últimos reconocen las mutaciones, lo que indica que es un
mecanismo muy conservado. No se han encontrado homólogos a Mut H, y parece que no se
necesita, ya que el mecanismo de reconocimiento se basa en la interacción del homólogo de Mut
S con PCNA unido al último cebador en la horquilla de replicación.

En ocasiones el sistema reparador no tiene una forma intríseca de distinguir la base salvaje de la
mutada y es esta una forma en que se fijan las mutaciones. Existen sin embargo otras formas de
dirigir la restauración de la secuencia salvaje. Por ejemplo para casos tales como la desaminación
de 5-metil citosina a timina, hay un sistema especial para restablecer la propia secuencia. La
desaminación genera un par G-T, y el sistema que actúa sobre tal par tiene un sesgo para
corregilos a G-C (más que a A-T). Se ha observado que el sistema Mut L, S traslada siempre T de los
dos apareamientos incorrectos G-T y C-T.

Otra actividad reparadora identificada por mut Y, reemplaza la A en los errores C-A y G-A. Este
sistema funciona por el traslado directo de la base del DNA (reparación por escisión de bases).

Es interesante el hecho de que la DNA pol tiene la tendencia a introducir equivocadamente A y la

desaminación de 5-metil C es frecuente (conduce a C → U → T/G). Es decir el residuo de G codifica
frecuentemente la información correcta y parece que las funciones de la glicosilasa han
evolucionado de acuerdo con los errores celulares intrínsecos de la replicación y la reparación del
DNA.

Ejemplos de genes mutadores, relacionados

con la replicación o reparación del DNA

Reparación inducida

Ante una cantidad masiva de daños en el DNA, se disparan, como respuesta, mecanismos de
emergencia que se caracterizan por tener niveles superiores de proteínas implicadas en
reparación y recombinación. El ejemplo típico es larespuesta SOS, si la cantidad de lesiones que
hay en E. coli es muy superior a lo normal, se induce la respuesta SOS.

En los casos de reparación vistos hasta ahora, los daños estaban en una sola de las dos bandas,
con lo que bastaba replicar la complementaria, pero si tenemos mutaciones masivas, se puede
replicar la zona antes de que dé tiempo a reparar la lesión. Por ejemplo cómo se reparan los
dímeros de timina una vez que la horquilla ha pasado? Ahora la zona dañada está en la banda
molde. Hay dos maneras de hacerlo:

1) Por recombinación, suministrando el molde correcto de un DNA homólogo:

2) Por replicación errónea (error-prone). La polimerasa copia un molde defectuoso a costa de
introducir errores.

A nivel molecular la respuesta SOS consiste en la inducción de la expresión de una serie de genes.
Todos estos genes (la mayor parte de ellos implicados en reparación), se encuentran reprimidos
por la proteína lex A, forman lo que se llama un operón. Lex A se autorregula, es decir, reprime su
propia expresión, (cuando decimos que la expresión está reprimida, no es que no haya nada, hay
un estado basal, al dispararse la expresión no es de nada a todo sino de "poco" a todo). El
represor lex A se proteoliza debido a la presencia de Rec A activado (se activa uniéndose a banda
simple), por lo tanto con muchos daños en el DNA tenemos varias zonas de banda simple a las que
se une Rec A. El represor lex A se proteoliza por lo que se induce la expresión de todos esos genes
incluido el propio lex A. Una vez reparados los daños, Rec A se inactiva y lex A reprime los genes
del operón. Es un sistema reversible, que puede representarse por el siguiente esquema:

En la respuesta SOS se induce la expresión de una serie de genes (ver Tabla 25.6 Lehninger):
  Uvr (reparación por escisión de nucleótidos).

 RecA, proteína con un papel fundamental en recombinación, puede suministrar un molde

a la zona dañada para que pueda ser reparada por los mecanismos convencionales

 UmuD/C, que hace que la DNA polimerasa replique moldes dañados a costa de introducir
mutaciones. Rec A activa, rompe proteolíticamente, además de lex A, a Umu D generando
la forma activa de la proteína. El conjunto de Umu C y Umu D hace perder fidelidad a la
DNA polimerasa III (que estaba parada como consecuencia de la existencia de daños en el
DNA) y que copie la cadena molde aunque está dañada, dándose una replicación errónea y
en definitiva, generando mutaciones.

 El gen sfi A está implicado en división celular, hace que se pare la división celular y se
producen filamentos de células.

Otro efecto de la respuesta SOS es la inducción de lisógenos de λ, en donde el DNA de λ está

integrado en el DNA bacteriano; para el mantenimiento de la lisogenia se requiere el represor del
fago λ. En la respuesta SOS, Rec A activado degrada (además de lexA y Umu D) el represor del
fago λ y como consecuencia se induce el estado lítico, la célula lisa y se liberan los fagos. ¿Qué
significado fisiológico tiene esto? Cuando el genoma bacteriano está dañado y la supervivencia de
la bacteria está en peligro, se induce el ciclo lítico y el fago "busca otra bacteria".

En células eucariotas, cuando hay un gran número de lesiones en el DNA, aumentan los niveles y
se activa la proteínap53, factor de transcripción que activa la expresión de p21. p21 bloquea la
ciclina G1 / cdk y por lo tanto se para el ciclo celular en G1, de esta manera se impide la replicación
del DNA, dando tiempo para que se reparen los errores (p21 además interacciona con PCNA y
frena la replicación en fase S). p53 activa mecanismos de reparación y también induce apoptosis.
La apoptosis, muerte celular programada o suicidio celular, es un proceso controlado
genéticamente y es fisiológicamente distinto al proceso necrótico. En la apoptosis la célula se
deshidrata, se redondea, el núcleo se condensa, se parten los cromosomas, y se degrada en
vesículas que son engullidas por los macrófagos (ocurre sin inflamación, no como en necrosis).

La apoptosis es un proceso totalmente normal que se da en:

» Células con gran cantidad de lesiones en el DNA; antes de seguir dividiéndose y acumulando
mutaciones que podrían llevar a procesos tumorales, la célula se suicida.

» El desarrollo (por ejemplo: las células que forman la cola de los renacuajos, células nerviosas
sobrantes, etc.)

» En el proceso de selección de repertorio de los linfocitos.

p53, por tanto, actúa por diversos mecanismos protegiendo el DNA de daños e impidiendo la
proliferación de células defectuosas, se le ha llamado por eso "el ángel guardián del genoma". Es
un gen supresor de tumores (el 50% de los tumores tienen p53 mutado). Ratones knock-out en
p53 nacen normales pero desarrollan tumores a las pocas semanas, a los 6 meses la mayoría han
muerto. En ratones knock-out en p53 no se induce apoptosis.