TRANS ISOMÉTRICOS AISLADOS TRANSMETRÍA ÚNICA:

PROCEDIMIENTO DE ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA DE REFLEXIÓN

TOTAL ATENUADA HORIZONTAL
DEFINICION
En la mayoría de las grasas y aceites vegetales naturales, los constituyentes insaturados solo contienen enlaces dobles
aislados, es decir, no conjugados, en la configuración cis. Estos enlaces cis pueden isomerizarse a la configuración trans
durante los procedimientos de extracción y procesamiento, debido a la oxidación, la conversión durante el calentamiento
y / o la hidrogenación parcial. Las grasas animales y marinas pueden contener cantidades mensurables de isómeros trans
de origen natural. Los enlaces trans aislados en acidos grasos de cadena larga, los ésteres metílicos de ácidos grasos
(FAMEs), los jabones y los triglicéridos (TAG) se pueden medir mediante espectroscopía infrarroja. Una banda de
absorción con un máximo de alrededor de 966 cm-1 (10.3 um) a partir de una deformación C-H alrededor de un doble
enlace trans. Se muestra en los espectros de todos los compuestos que contienen un grupo trans aislado. Esta banda no se
observa en los espectros de los correspondientes compuestos cis y saturados. La medición de la intensidad de esta banda
de absorción bajo condiciones analíticas controladas es la base de un método cuantitativo para la determinación de
contenido trans aislado.
Se requiere un espectrómetro infrarrojo de Fourier transformada capaz de operar a una resolución de 4 cm-1, equipado con
un delegado TGS o DTGS, y una celda infrarroja de reflexión total atenuada horizontal de rebote único (SBHATR).

ALCANCE
Este método es aplicable a la determinación precisa de dobles enlaces trans aislados en aceites naturales o procesados y
con niveles trans iguales o superiores al 0,8%.Los datos limitados sugieren que el límite inferior de cuantificación puede
ser mayor para sistemas complejos, como matrices biológicas y productos alimenticios comerciales.No es aplicable a las
grasas y aceites que contienen grandes cantidades (más de aproximadamente 0,5%) de insaturación conjugada.
Tal como el aceite de tung ; que contienen grupos funcionales que modifican la intensidad de la deformación C-H sobre el
doble enlace trans, tal como aceite de ricino que contiene grupos hidroxi; o en general, a cualquier material que contenga
contaminantes que tengan grupos funcionales que den lugar a bandas de absorción específicas suficientemente cerca como
para interferir con la banda de 966 cm-1 de la deformación CH del doble enlace trans aislado .Para determinaciones de
materiales con niveles trans por debajo de aproximadamente 0,8%, se recomienda la cromatografía de gases.
Este método no requiere pesaje ni dilución cuantitativa de las muestras de prueba TAG o FAME en ningún disolvente.

APARATO
1.- Espectrómetro de infrarrojo de Fourier (FTIR) es capaz de
realizar mediciones a una resolución de 4cm-1 en el rango espectral
que cubre 1050-900 cm-1.Las capacidades de manejo de datos del
instrumento deberían permitir la conversión de los espectros a la
absorbancia. Expansión de escala de los ejes x e y. Lectura de
números de onda al 1cm-1 más cercano e integración del área debajo
de la banda de absorción a 966 cm-1.El espectrómetro FTIR debe
estar equipado con detectores TGS para la linealidad.
2.- Celda infrarroja de reflexión total atenuada horizontal (SB-HATR)
de un solo rebote con un cristal de seleniuro de zinc.
REACTIVOS
1.- Patrones primarios: trielaidina (TE) y trioleína (TO), o metil
elaidato (ME) y metil oleato (MO) con una pureza del 99% (ver
Notas numeradas 1).
PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES:
1.- Estándares de Calibración Trans: pesan exactamente al
0.0001g más cercano, (0.3-x) gr de TO, o MO, y x gr de TE o ME.
en un vaso de precipitados. Donde x es igual a 0.0015 y 0.1500g
para preparar 0.5. 1. 3. 5. 10. 20. 30. 40, y 50% estándares de
calibración trans, respectivamente.

3.- Balanza analítica capaz de pesar 0.3g con una precisión de ±
0.0001g.
4.- Cuatro calentadores flexibles aislados (una pulgada cuadrada,
unidad de 28 voltios que consiste en un elemento de lámina grabado
de 0.0005 "de espesor) conectado a un transformador de potencia
(25.2 voltios 2 amp) capaz de mantener una temperatura constante
de alrededor de 68 ° C.
CALIBRACIÓN (Ver notas numeradas, 2)
1.- Para cada TE / OT cercano o ME / ME, mezcla estándar,
calcule el porcentaje exacto de trans como TE por TAG total, o
ME por FAME total. Analice cada mezcla y determine el área
integrada bajo la banda de absorción a 966 cm-1 como esta
descrito en las secciones Procedimiento y Cálculos a
continuación.
2.- Usando un análisis de regreso de primer orden. Determinar la
pendiente y la intersección de la línea que mejor se ajusta a la gráfica
del área de la banda trans para todas las mezclas transcontinentales
(eje y) como una función de % trans expresada como porcentaje de
ME en MO. o TE en TO (eje x).

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
1.-El sólido rápido se debe fundir en un baño de vapor mezclado
antes del muestreo. Las muestras que parezcan eluidas debido a la
presencia de agua deberán tratarse con sulfato de sodio anhidro y
filtrarse antes de extraer la muestra de prueba para su análisis.
Figura 1. Se observaron espectros de absorción FTIR (1050-900
2.- Si en lugar de etiquetas de agua, la determinación debe llevarse cm) para varias muestras de prueba de aceite vegetal hidrogenado
a cabo en FAMEs. convertir 0,3 g de la muestra de prueba en ésteres esterificado puro que oscilaban entre aproximadamente 0,8 y
de metilo usando AOCS Meihod Ce 2-66, método AOAC 969.33. u 39,2% trans.
otro procedimiento apropiado.

PROCEDIMIENTO Calcule el% trans para las muestras de prueba adicionadas

(estándares de precisión) O muestras de prueba desconocidas,
1.- configure los parámetros de operación del espectrómetro FTIR conectando el valor del área integrada de la banda trans en la
de acuerdo con las recomendaciones del fabricante para usar una siguiente ecuación.
celda SB-HATR con los siguientes parámetros: 64-scan. Resolución
4cm-1. apodización triangular, y un rango de 1050-900 cm-1. Las
condiciones empleadas deben ser idénticas para las muestras de
prueba y las normas de calibración (ver Notas numeradas. 3). Para ( 𝐴𝑟𝑒𝑎 − 𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜)
%𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠 𝑐𝑜𝑛 𝑀𝐸 =
las muestras de prueba TAG, caliente la celda SB-HATR a 68 ° C. 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒

2.- Usar una pipeta desechable, use aproximadamente 50 𝜇𝐿 (sin

pesar) del material de referencia limpio del material de fondo; para
mezclas sandard de calibración TE / TO o ME / MO, use TO o MO
respectivamente. Como material de fondo de referencia para las
muestras de prueba enriquecidas (estándares de precisión), utilice el
material no enriquecido para medir la relevancia como espectro de
haz único de fondo. Para muestras de prueba desconocidas, use la
referencia apropiada como fondo (vea Notas numeradas. 4) Coloque
el material de referencia en la superficie de muestreo de ZnSe
horizontal de la SB. Celda HATR (ver Notas numeradas. 5). Recoge
y guarda el espectro de haz único para usar como fondo. Limpie el
cristal de ZnSe limpiando el analito TAG o FAME con un papel tisú
desechable, sin pelusas (vea Notas numeradas, 6). coloque la
muestra de prueba clara (sin agitación) en el cristal de ZnSe
horizontal. Recoge y guarda el espectro de haz único de las muestras
de prueba. Relacione el espectro de haz único de muestra con el del
fondo y conviértalo en absorbancia. Ahorre espectro de absorción.
CÁLCULOS
Con el espectro de la escala de muestra expandida en la región de
1050 a 900 cm-1, integre (electrónicamente) el área en la banda de
966 cm-1 entre los límites de 945 cm-1 y 990 cm-1 (consulte la figura
1 y las notas nubered, 7)
Calcule la ecuación de regresión lineal para el área frente a la
gráfica% trans de las mezclas patrón de calibración trans.
Usar la pendiente y la intersección generadas para las mezclas trans
estándar.
NOTAS NUMERADAS
1. Estándares primarios están disponibles en nu-check-prep.Inc ..
PO Box 295 Elystan MN 56028
2. una vez que se ha establecido una curva de calibración, debe
verificarse periódicamente hasta que no se haya modificado.
3. no se lee
4. no se lee
5. la muestra debe cubrir completamente la superficie horizontal del
cristal ZnSe
6. Colecta un espectro de haz único de 16 escaneos después de
limpiar el ZnSe crytal. La ausencia de una banda de carbonilo de
éster metílico de ácidos grasos cerca de 1740 cm es el mejor
indicador de que la célula está limpia. Limpie el cristal de ZnSe con
la siguiente muestra de prueba para analizar con el fin de minimizar
la contaminación
7. con una resolución de 4 cm, los puntos mínimos observados de la
banda de 966 cm no siempre coinciden con estos límites de
integración (nominalmente a 945 y 990 cm) particularmente a
niveles trans por debajo del 5% donde las interferencias matriciales
serían mayores. Estos mínimos, que suelen ser de hasta 4 cm de los
puntos nominales, se pueden utilizar para dibujar la línea de fondo,
esto es porque no se hace ninguna distinción entre los puntos
nominales y mínimos a la resolución de 4 cm utilizada.
REFERENCIAS
1. Mossoba, M.,M.P Yuraweez and R.E.McDonald,J.Am. Oil
Chem Soc. 73; 1003 (1996).
2. Ali L.H. G. Angyal. C.M. Weaver. J.I. Rader, and M.M
Mossoba. J. Am. Oil Chem Soc. 73; 1699 (1996).
3. Adam, M.M. Chew, S. Wasserman, A.McCollum,
R.E.McDONALD, and M.M.Mossoba, J.Am. Oil Chem
Soc.75;353(1998)
Apéndice 1
Resumen de resultados estadísticos, determinado por el AOAC,
programa informático AOACBUBR, para 2 estudios SB-HATR
colaborativos limitados (laboratorios cada uno) coordinados por
Magdi M. Mossoba (FDA, Washington DC) y Michael Adam
(Lipton, Baltimore, MD) .
El estudio FAME informa datos de 6 incógnitas (serie FAME) para
los que se realizaron mediciones duplicadas.
El estudio TAG informa los datos de 5 pares de incógnitas ciegas
duplicadas (series TAG) y seis pares de estándares de precisión
duplicados a ciegas que se dispararon con cantidades conocidas de
grasas trans (serie spk); estas cantidades conocidas se conocen como
VERDADERO (determinado gravimétrico).
La FAME desconocida consistía en cinco aceites de soya
parcialmente hidrogenados y un aceite de soja desodorírez
blanqueado refinado mezclado con un aceite de maíz hidrogenado.
El material de referencia fue la mezcla de referencia, AOCSNo.1,
que consistía en ésteres metílicos de palmítico (6.0%), esteárico
(3.0%), oleico (35.0%), linoleico (50.0%), linolénico (3.0%) y
araquídico (3.0%) ácidos grasos.TAG desconocido consistía en
aceite de soja mezclado con una mezcla industrial: el material de
referencia utilizado fue ultradeguminado aceite de soja de
expelición blanqueado (Owensbore Grain Co .. Owensbore, KY)
Los estándares de exactitud de "Spk" consistían en aceite de soja
desodorizado blanqueado refinado enriquecido con trielaidina; el
material de referencia de referencia fue el aceite de soja
desodorizado blanqueado y refinado (Lipton)

TAG 1 TAG 2 TAG 3 TAG 4 TAG 5

𝑥̅ 25.35 3.63 1.95 39.12 8.85
Sr 0.16 0.17 0.26 0.59 0.31
SR 1.10 0.47 0.37 00.63 0.88
RSDT 0.65 4.76 10.26 1.52 3.45
RSDR 4.34 13.02 18.97 1.62 9.08
r 0.46 0.48 0.72 1.66 0.85
R 3.08 1.33 1.03 1.77 2.25

spk 1 spk 2 spk 3 spk 4 spk 5 spk 6

TRUE 0.52 1.10 4.15 40.69 11.00 23.20
𝑥̅ 0.53 1.00 4.08 40.31 10.99 23.70
Sr 0.09 0.08 0.09 1.20 0.40 1.51
SR 0.09 0.16 0.24 1.34 0.59 1.51
RSDT 17.24 8.45 2.11 2.99 3.67 6.36
RSDR 17.33 15.58 5.99 3.31 5.42 6.36
r 0.25 0.24 0.24 3.37 1.13 4.22
R 0.26 0.44 0.68 3.74 1.67 4.22

FAME 1 FAME 3 FAME 4 FAME 5 FAME 6 FAME 7

𝑥̅ 16.59 3.41 8.68 12.71 23.78 39.08
Sr 0.13 0.13 0.14 0.08 0.19 0.07
SR 0.20 0.63 0.23 0.19 0.33 0.35
RSDr 0.79 3.73 1.66 0.61 0.82 0.18
RSDR 1.23 18.46 2.66 1.49 1.40 0.90
r 0.37 0.36 0.40 0.22 0.55 0.20
R 0.57 1.76 0.65 0.53 0.93 0.99

Abreviaturas: 𝑥̅ la media general de los valores de laboratorio; Sr Desviación estándar de la repetibilidad ; SR desviación
estándar de reproducibilidad; RSDr desviación estándar relativa de la repetibilidad; RSDR desviación estándar relativa de la
repetibilidad; r valor de repetibilidad = 2.8 Sr ; R valor de reproducibilidad = 2.8 SR
 VALOR CALCULADO DE YODO
DEFINICIÓN
Este método determina el valor de yodo para los aceites comestibles directamente de las composiciones de ácidos grasos
(ver Notas 1 y 2)
ALCANCE
Aplicable a los triglicéridos y ácidos grasos libres y sus productos hidrogenados (ver Notas 3)
APARATO
1.- Cromatógrafo de gases: para proporcionar composición
de ácidos grasos por metodología validada aceptada. por
ejemplo, Método oficial AOCS ce 1-62, Método oficial
AOCS ce 1c-89, etc.
PROCEDIMIENTO
1.- proceder como se indica en el método validado
aceptado de elección.
2.- determinar la campición de ácidos grasos del aceite o
de la mezcla de ácidos grasos.
CÁLCULOS (ver Notas, 4)
1.- triglicéridos. valor de yodo = (% ácido hexadecenoico
x 0.950) + (ácido octadecenoico% x 0.860) + (ácido
octadecadienoico en porcentaje x 1.732) + (ácido
octadecatrienoico en% x 2.616) + (% ácido eicosenoico x
0.785) + (% ácido docosenoico x 0.723) .
2.- Ácidos grasos libres, índice de yodo = (%
hexadecenoita ácido x 0.9976) + (% ácido octadecenoico x
0.8986) + (% ácido octadecadienoico x 1.810) + (% ácido
octadecatrienoico x 2.735) + (% ácido eicosenoico x
0.8175) + (% de ácido docosenoico x 0,7497).
NOTAS
1. Aunque este procedimiento proporciona un valor de yodo, no
pretende ser un método rápido, sino que brinda dos resultados
de un análisis
2. en 1994, el Comité de Métodos Uniformes de AOCS revisó
los errores en los cálculos y concluyó que no era necesario
realizar cambios en ese momento.
3. Para los aceites con un contenido insaponificable superior al
0,5% (por ejemplo, aceite de pescado) el cálculo tiende a ser
bajo.
4. el cálculo tiende a ser bajo para materiales con bajo índice de
yodo.
5. IV calculado basado en la composición de ácidos grasos de
GC o materiales lípidos no triglicéridos tales como ésteres
parciales de glicerol, ésteres parciales de sorbitol / sorbiteno /
éster de isosórbido. el éster parcial de polioxietilen sorbitol /
sorbitan / isosrbide o glicerol, etc. proporcionará el cálculo IV
de solo los ácidos grasos utilizados para preparar los ésteres
parciales. Para obtian la IV real de ésteres parciales con
diluyentes de poliol no ácidos, se debe utilizar el método Wijs
IV clorado. Valores IV de ésteres parciales Los métodos Wijs
son más bajos que los obtenidos por GC debido al efecto de
dilución del material de poliol.