Archivos de Zootecnia

ISSN: 0004-0592
pa1gocag@lucano.uco.es
Universidad de Córdoba
España

Gutiérrez, A.J.; Cosme, R.W.; Jiménez, C.J.A.; Ramírez, G.J.A.

Agua de coco, suero fetal bovino, Aloe vera y sus combinaciones para criopreservar semen ovino
Archivos de Zootecnia, vol. 55, núm. 209, 2006, pp. 101-104
Universidad de Córdoba
Córdoba, España

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 NOTA BREVE

AGUA DE COCO, SUERO FETAL BOVINO, ALOE VERA Y SUS

COMBINACIONES PARA CRIOPRESERVAR SEMEN OVINO

COCONUT MILK, BOVINE FETAL SERUM, ALOE VERA AND THEIR COMBINATIONS
FOR CRYOPRESERVATION OF OVINE SEMEN

Gutiérrez, A.J.1, R.W. Cosme1, C.J.A. Jiménez1 y G.J.A. Ramírez1

1
Facultad de Zootecnia. UACH. Apdo. Postal 4-28. C.P. 31031, Chihuahua, Chih. México.
Correo electrónico: jagual2208@hotmail.com

PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS

Congelamiento. Espermatozoides vivos. Motili- Freezing. Live spermatozoa. Progressive motility.

dad progresiva. Blackbelly. Blackbelly.

RESUMEN

Se evaluó agua de coco (AC), (Cocus
nucifera) y su combinación con suero fetal bo-
vino (SFB) o aloe vera (AV), ( Aloe barbadensis)
para preservar semen ovino. El diluyente base
fue 50 p.100 AC y 50 p.100 citrato de sodio (2,9
p.100), con 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 p.100 de
SFB o AV. Se utilizó un ovino Blackbelly. Con un
modelo de regresión múltiple con intercepto cero,
se evaluaron motilidad progresiva (MP) y esper-
mas vivos (EV), en cinco etapas: al diluir el semen
a 35ºC, finalizado el equilibramiento, concluida la
congelación, y a las 48 h y 90 d poscongelamiento.
La mayoría de las combinaciones tuvieron valo-
res iguales o superiores al testigo con 40 p.100
de MP a 90 d poscongelamiento aunque las
combinaciones 10-70 SFB y 40-40 AV fueron
mejores con 60 p.100 de MP. En conclusión las
diferentes combinaciones de AC con SFB o AV,
fueron apropiadas para la preservación de se-
men ovino, salvo las combinaciones en donde se
excedía el 50 p.100 de AV.
milk added with bovine fetal serum (SFB) or aloe
vera (AV), (Aloe barbadensis) for Blackbelly
ram semen cryopreservation. Base diluent was
50 percent coconut milk (AC) and 50 percent
sodium citrate (2.9 percent) added with either 10,
20, 30, 40, 50, 60, and 70 percent SFB or AV. The
progressive motility (MP) and live sperm (EV)
were evaluated at semen dilution, equilibrium
time, immediately after freezing and 48 h and 90
d after freezing. Multiple regression model was
used for data analysis. Most treatments were
equal or showed higher values than control (40
percent MP) at 90 d postfreezing, however,
extenders 10-70 SFB and 40-40 AV were the
best diluents with 60 percent of MP. In conclusion,
different combinations of AC with SFB or AV,
gave appropiate results for ram semen dilution
and preservation, but if AV is higher than 50
percent showed detrimental effects.
INTRODUCCIÓN

SUMMARY El procesamiento de semen permi-

te utilizar recursos genéticos a largo
The objective was to evaluate the coconut plazo. En ovinos este método es limita-

Arch. Zootec. 55 (209): 101-104. 2006.

 GUTIÉRREZ, COSME, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ

do por una reducción de la población bajo los criterios mínimos de referen-

de células móviles, posdesconge-
lamiento (Watson, 2000). Los objeti-
vos fueron evaluar AC y diferentes
combinaciones con SFB o AV, para la
criopreservación de semen ovino a lar-
go plazo así como encontrar los mejo-
res niveles de estos extensores semi-
nales, para conservar el potencial ge-
nético de un buen semental.
MATERIAL Y MÉTODOS
El estudio se realizó en Chihuahua,
México. Como fuente de células es-
permáticas, se utilizó un ovino
Blackbelly adulto. Se recolectaron 15
eyaculaciones (una por tratamiento),
cia: 1) Volumen ≥1.0 ml; 2) MP ≥80
p.100; 3) EV ≥85 p.100; 4) Células
anormales ≤15 p.100 y 5) pH entre 6.5
y 7.5. Se emplearon diluyentes con 50
p.100 de AC y 50 p.100 de citrato de
sodio al 2,9 p.100 en combinación con
SFB o AV, éstos en concentraciones
de 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 p.100,
además de 14 p.100 yema de huevo
(YH) y 7 p.100 de glicerol. Se proba-
ron 14 diluyentes y un testigo (80-0),
los cuales contenían 1 mg/ml de es-
treptomicina y 1000 UI/ml de penicili-
na. Se usó D-fructosa a razón de 1, 2
y 2,5 g/100 ml para el testigo, SFB y
AV respectivamente. El pH de los
diluyentes se mantuvo entre 6,5 y 7,5.
El AC, SFB y el gel de AV se deben

Tabla I. Porcentajes de motilidad progresiva y espermatozoides vivos en cinco períodos de

evaluación. (Percentages of progressive motility and live sperm in five periods of evaluation).

Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)

Tratamiento Combinación T0 TE TC 48 h 90 d T0 T.E TC 48 h 90 d

1 80-0 (testigo) 80 50 40 40 40 80 60 40 40 40
2 70-10 SFB 80 70 40 40 40 85 75 40 40 40
3 60-20 SFB 90 60 55 55 50 90 85 55 55 50
4 50-30 SFB 85 80 45 45 40 85 80 45 45 40
5 40-40 SFB 80 75 50 50 40 85 75 50 50 40
6 30-50 SFB 90 70 60 60 50 90 85 60 60 50
7 20-60 SFB 90 70 50 50 50 90 70 50 50 50
8 10-70 SFB 90 80 70 70 60 90 80 70 70 70
9 70-10 AV 80 60 40 40 40 80 80 50 50 40
10 60-20 AV 85 80 50 50 50 85 80 60 60 60
11 50-30 AV 85 60 50 50 50 85 60 50 50 50
12 40-40 AV 85 85 60 60 60 85 85 70 70 60
13 30-50 AV 85 60 50 50 50 85 60 50 50 50
14 20-60 AV 85 80 30 30 30 85 80 30 30 30
15 10-70 AV 90 60 20 20 20 90 85 20 20 20

T0= (semen más diluyente A a 35ºC), TE (finalizado el tiempo de equilibramiento), TC (concluido el proceso
de congelamiento), 48 h (48 h poscongelamiento) y 90 d (90 d poscongelamiento).

Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 102.

 CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN CON AGUA DE COCO, SUERO FETAL O A. VERA

filtrar con papel del número 42 para su
uso. El semen se recolectó con vagina
artificial con un tubo graduado en
décimas de ml (Evans y Maxwell,
1990). Se evaluó macroscópicamente
(volumen y color). La muestra se colo-
có en baño María a 35°C y de ahí con
un microscopio de luz (Leica con mo-
nitor Sony), se evaluaron MP y EV con
aumentos de 400 y 100 diámetros, res-
pectivamente (Ax et al., 2002). Se
realizó una dilución fija de 1:9
(semen:diluyente) para obtener una
concentración aproximada de 120 mi-
llones de espermatozoides por pajilla
de 0,5 ml (Nunes y Fernández, 2001).
El diluyente se dividió en dos fraccio-
nes, A y B, a la fracción B se le añadió
14 p.100 v/v de glicerol. El semen se
mezcló con la fracción A y ambas
fracciones se enfriaron de 35ºC a 5ºC
en 120 min. A 5ºC se añadió al semen
el diluyente B en cuatro porciones (10,
20, 30 y 40 p.100), con 15 min entre
cada adición y con 3 h de equilibrio.
Las pajillas se congelaron en nitrógeno
líquido, bajando la temperatura a -120ºC
por 12 min y posteriormente a -196ºC.
Se descongelaron tres pajillas por tra-
tamiento en agua a 37ºC durante 30 s
y se evaluaron inmediatamente. Con
un modelo de regresión múltiple con
intercepto cero (SAS Institute, 2001)
se evaluaron las variables MP y EV al
diluir el semen a 35ºC, finalizado el
equilibramiento; concluido el proceso

Tabla II. Modelos ajustados al porcentaje de motilidad progresiva y espermas vivos en los
cinco tiempos de evaluación. (Fitted models for percentage of progressive motility and live sperm
in five periods of evaluation).

Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)

Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(SFB) Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(SFB)

Parámetros estimados Parámetros estimados
β1 β2 R2 β1 β2 R2
Tiempo SFB
T0 0,808333 + 0,917857 0,9984 0,829167 + 0,919643 0,9993
TE 0,595833 + 0,819643 0,9900 0,716667 + 0,821429 0,9912
TC 0,395833 + 0,662500 0,9875 0,395833 + 0,662500 0,9875
48h 0,395833 + 0,662500 0,9875 0,395833 + 0,662500 0,9875
90d 0,383333 + 0,564286 0,9901 0,366667 + 0,614286 0,9815

Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(AV) Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(AV)

Parámetros estimados Parámetros estimados
β1 β2 R2 β1 β2 R2
Tiempo SFB
T0 0,804167 + 0,894643 0,9997 0,804167 + 0,894643 0,9997
TE 0,612500 + 0,741071 0,9719 0,679167 + 0,812500 0,9815
TC 0,500000 + 0,328571 0,9386 0,566667 + 0,328571 0,9251
48h 0,500000 + 0,328571 0,9386 0,566667 + 0,328571 0,9251
90d 0,500000 + 0,328571 0,9386 0,525000 + 0,325000 0,9326

Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 103.

 GUTIÉRREZ, COSME, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ
de congelamiento, y a las 48 h y 90 d
poscongelamiento.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La tabla I muestra los resultados
para MP y EV en diferentes periodos
de la evaluación. La tabla II muestra
los modelos ajustados para dichas va-
riables, se puede observar que en casi
todos los tiempos ß2 es superior a ß1
excepto para el diluyente AV del TC
(concluido el proceso de conge-
lamiento), en adelante esta diferencia
se puede atribuir a que al utilizar nive-
les altos del diluyente AV se obtuvie-
ron MP y EV bajos, no cumpliendo con
los estándares para semen desconge-
lado (Giles, 1993). En estas combina-
ciones AC-AV al ser mayor ß1 que ß2,
nos indica que el ingrediente que ma-
BIBLIOGRAFÍA
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Recibido: 24-6-05. Aceptado13-7-05.
Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 104.
yor favoreció la MP y EV fue el AC.
A los 90 d poscongelamiento la
combinación 40-40 AV fue la mejor
con 60 p.100 de MP, dichos resultados
son mayores a los reportados por Ro-
dríguez (1988) con un diluyente con
base en AV (40 p.100 AV, 54 p.100 de
citrato de sodio al 3 p.100) donde en-
contró 49,5 p.100 de MP al descon-
gelamiento. Al comparar el mejor tra-
tamiento, 10-70 SFB (60 p.100 MP),
concuerda con lo encontrado por Ma-
drid (2004) el cual combinó SFB al 30
p.100, 10 p.100 YH y 60 p.100 de
citrato de sodio al 2,9 p.100, obtenien-
do MP de 65 p.100.
En conclusión utilizar más de 50
p.100 de gel de AV es nocivo para la
criopreservación de células espermá-
ticas, ya que las motilidades son infe-
riores a las requeridas para semen
congelado.
ovino a largo plazo. Tesis de maestría. Facul-
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