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Archivos de Zootecnia

ISSN: 0004-0592
pa1gocag@lucano.uco.es
Universidad de Córdoba
España

Gutiérrez, A.J.; Cosme, R.W.; Jiménez, C.J.A.; Ramírez, G.J.A.


Agua de coco, suero fetal bovino, Aloe vera y sus combinaciones para criopreservar semen ovino
Archivos de Zootecnia, vol. 55, núm. 209, 2006, pp. 101-104
Universidad de Córdoba
Córdoba, España

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=49520912

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NOTA BREVE

AGUA DE COCO, SUERO FETAL BOVINO, ALOE VERA Y SUS


COMBINACIONES PARA CRIOPRESERVAR SEMEN OVINO

COCONUT MILK, BOVINE FETAL SERUM, ALOE VERA AND THEIR COMBINATIONS
FOR CRYOPRESERVATION OF OVINE SEMEN

Gutiérrez, A.J.1, R.W. Cosme1, C.J.A. Jiménez1 y G.J.A. Ramírez1

1
Facultad de Zootecnia. UACH. Apdo. Postal 4-28. C.P. 31031, Chihuahua, Chih. México.
Correo electrónico: jagual2208@hotmail.com

PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS

Congelamiento. Espermatozoides vivos. Motili- Freezing. Live spermatozoa. Progressive motility.


dad progresiva. Blackbelly. Blackbelly.

RESUMEN

Se evaluó agua de coco (AC), (Cocus milk added with bovine fetal serum (SFB) or aloe
nucifera) y su combinación con suero fetal bo- vera (AV), (Aloe barbadensis) for Blackbelly
vino (SFB) o aloe vera (AV), ( Aloe barbadensis) ram semen cryopreservation. Base diluent was
para preservar semen ovino. El diluyente base 50 percent coconut milk (AC) and 50 percent
fue 50 p.100 AC y 50 p.100 citrato de sodio (2,9 sodium citrate (2.9 percent) added with either 10,
p.100), con 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 p.100 de 20, 30, 40, 50, 60, and 70 percent SFB or AV. The
SFB o AV. Se utilizó un ovino Blackbelly. Con un progressive motility (MP) and live sperm (EV)
modelo de regresión múltiple con intercepto cero, were evaluated at semen dilution, equilibrium
se evaluaron motilidad progresiva (MP) y esper- time, immediately after freezing and 48 h and 90
mas vivos (EV), en cinco etapas: al diluir el semen d after freezing. Multiple regression model was
a 35ºC, finalizado el equilibramiento, concluida la used for data analysis. Most treatments were
congelación, y a las 48 h y 90 d poscongelamiento. equal or showed higher values than control (40
La mayoría de las combinaciones tuvieron valo- percent MP) at 90 d postfreezing, however,
res iguales o superiores al testigo con 40 p.100 extenders 10-70 SFB and 40-40 AV were the
de MP a 90 d poscongelamiento aunque las best diluents with 60 percent of MP. In conclusion,
combinaciones 10-70 SFB y 40-40 AV fueron different combinations of AC with SFB or AV,
mejores con 60 p.100 de MP. En conclusión las gave appropiate results for ram semen dilution
diferentes combinaciones de AC con SFB o AV, and preservation, but if AV is higher than 50
fueron apropiadas para la preservación de se- percent showed detrimental effects.
men ovino, salvo las combinaciones en donde se
excedía el 50 p.100 de AV.
INTRODUCCIÓN

SUMMARY El procesamiento de semen permi-


te utilizar recursos genéticos a largo
The objective was to evaluate the coconut plazo. En ovinos este método es limita-

Arch. Zootec. 55 (209): 101-104. 2006.


GUTIÉRREZ, COSME, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ

do por una reducción de la población bajo los criterios mínimos de referen-


de células móviles, posdesconge- cia: 1) Volumen ≥1.0 ml; 2) MP ≥80
lamiento (Watson, 2000). Los objeti- p.100; 3) EV ≥85 p.100; 4) Células
vos fueron evaluar AC y diferentes anormales ≤15 p.100 y 5) pH entre 6.5
combinaciones con SFB o AV, para la y 7.5. Se emplearon diluyentes con 50
criopreservación de semen ovino a lar- p.100 de AC y 50 p.100 de citrato de
go plazo así como encontrar los mejo- sodio al 2,9 p.100 en combinación con
res niveles de estos extensores semi- SFB o AV, éstos en concentraciones
nales, para conservar el potencial ge- de 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 p.100,
nético de un buen semental. además de 14 p.100 yema de huevo
(YH) y 7 p.100 de glicerol. Se proba-
ron 14 diluyentes y un testigo (80-0),
MATERIAL Y MÉTODOS los cuales contenían 1 mg/ml de es-
treptomicina y 1000 UI/ml de penicili-
El estudio se realizó en Chihuahua, na. Se usó D-fructosa a razón de 1, 2
México. Como fuente de células es- y 2,5 g/100 ml para el testigo, SFB y
permáticas, se utilizó un ovino AV respectivamente. El pH de los
Blackbelly adulto. Se recolectaron 15 diluyentes se mantuvo entre 6,5 y 7,5.
eyaculaciones (una por tratamiento), El AC, SFB y el gel de AV se deben

Tabla I. Porcentajes de motilidad progresiva y espermatozoides vivos en cinco períodos de


evaluación. (Percentages of progressive motility and live sperm in five periods of evaluation).

Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)


Tratamiento Combinación T0 TE TC 48 h 90 d T0 T.E TC 48 h 90 d

1 80-0 (testigo) 80 50 40 40 40 80 60 40 40 40
2 70-10 SFB 80 70 40 40 40 85 75 40 40 40
3 60-20 SFB 90 60 55 55 50 90 85 55 55 50
4 50-30 SFB 85 80 45 45 40 85 80 45 45 40
5 40-40 SFB 80 75 50 50 40 85 75 50 50 40
6 30-50 SFB 90 70 60 60 50 90 85 60 60 50
7 20-60 SFB 90 70 50 50 50 90 70 50 50 50
8 10-70 SFB 90 80 70 70 60 90 80 70 70 70
9 70-10 AV 80 60 40 40 40 80 80 50 50 40
10 60-20 AV 85 80 50 50 50 85 80 60 60 60
11 50-30 AV 85 60 50 50 50 85 60 50 50 50
12 40-40 AV 85 85 60 60 60 85 85 70 70 60
13 30-50 AV 85 60 50 50 50 85 60 50 50 50
14 20-60 AV 85 80 30 30 30 85 80 30 30 30
15 10-70 AV 90 60 20 20 20 90 85 20 20 20

T0= (semen más diluyente A a 35ºC), TE (finalizado el tiempo de equilibramiento), TC (concluido el proceso
de congelamiento), 48 h (48 h poscongelamiento) y 90 d (90 d poscongelamiento).

Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 102.


CRIOPRESERVACIÓN DE SEMEN CON AGUA DE COCO, SUERO FETAL O A. VERA

filtrar con papel del número 42 para su 14 p.100 v/v de glicerol. El semen se
uso. El semen se recolectó con vagina mezcló con la fracción A y ambas
artificial con un tubo graduado en fracciones se enfriaron de 35ºC a 5ºC
décimas de ml (Evans y Maxwell, en 120 min. A 5ºC se añadió al semen
1990). Se evaluó macroscópicamente el diluyente B en cuatro porciones (10,
(volumen y color). La muestra se colo- 20, 30 y 40 p.100), con 15 min entre
có en baño María a 35°C y de ahí con cada adición y con 3 h de equilibrio.
un microscopio de luz (Leica con mo- Las pajillas se congelaron en nitrógeno
nitor Sony), se evaluaron MP y EV con líquido, bajando la temperatura a -120ºC
aumentos de 400 y 100 diámetros, res- por 12 min y posteriormente a -196ºC.
pectivamente (Ax et al., 2002). Se Se descongelaron tres pajillas por tra-
realizó una dilución fija de 1:9 tamiento en agua a 37ºC durante 30 s
(semen:diluyente) para obtener una y se evaluaron inmediatamente. Con
concentración aproximada de 120 mi- un modelo de regresión múltiple con
llones de espermatozoides por pajilla intercepto cero (SAS Institute, 2001)
de 0,5 ml (Nunes y Fernández, 2001). se evaluaron las variables MP y EV al
El diluyente se dividió en dos fraccio- diluir el semen a 35ºC, finalizado el
nes, A y B, a la fracción B se le añadió equilibramiento; concluido el proceso

Tabla II. Modelos ajustados al porcentaje de motilidad progresiva y espermas vivos en los
cinco tiempos de evaluación. (Fitted models for percentage of progressive motility and live sperm
in five periods of evaluation).

Motilidad progresiva (p.100) Espermas vivos (p.100)

Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(SFB) Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(SFB)


Parámetros estimados Parámetros estimados
β1 β2 R2 β1 β2 R2
Tiempo SFB
T0 0,808333 + 0,917857 0,9984 0,829167 + 0,919643 0,9993
TE 0,595833 + 0,819643 0,9900 0,716667 + 0,821429 0,9912
TC 0,395833 + 0,662500 0,9875 0,395833 + 0,662500 0,9875
48h 0,395833 + 0,662500 0,9875 0,395833 + 0,662500 0,9875
90d 0,383333 + 0,564286 0,9901 0,366667 + 0,614286 0,9815

Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(AV) Modelo: Y=β 1(AC)+β 2(AV)


Parámetros estimados Parámetros estimados
β1 β2 R2 β1 β2 R2
Tiempo SFB
T0 0,804167 + 0,894643 0,9997 0,804167 + 0,894643 0,9997
TE 0,612500 + 0,741071 0,9719 0,679167 + 0,812500 0,9815
TC 0,500000 + 0,328571 0,9386 0,566667 + 0,328571 0,9251
48h 0,500000 + 0,328571 0,9386 0,566667 + 0,328571 0,9251
90d 0,500000 + 0,328571 0,9386 0,525000 + 0,325000 0,9326

Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 103.


GUTIÉRREZ, COSME, JIMÉNEZ Y RAMÍREZ

de congelamiento, y a las 48 h y 90 d yor favoreció la MP y EV fue el AC.


poscongelamiento. A los 90 d poscongelamiento la
combinación 40-40 AV fue la mejor
con 60 p.100 de MP, dichos resultados
RESULTADOS Y DISCUSIÓN son mayores a los reportados por Ro-
dríguez (1988) con un diluyente con
La tabla I muestra los resultados base en AV (40 p.100 AV, 54 p.100 de
para MP y EV en diferentes periodos citrato de sodio al 3 p.100) donde en-
de la evaluación. La tabla II muestra contró 49,5 p.100 de MP al descon-
los modelos ajustados para dichas va- gelamiento. Al comparar el mejor tra-
riables, se puede observar que en casi tamiento, 10-70 SFB (60 p.100 MP),
todos los tiempos ß2 es superior a ß1 concuerda con lo encontrado por Ma-
excepto para el diluyente AV del TC drid (2004) el cual combinó SFB al 30
(concluido el proceso de conge- p.100, 10 p.100 YH y 60 p.100 de
lamiento), en adelante esta diferencia citrato de sodio al 2,9 p.100, obtenien-
se puede atribuir a que al utilizar nive- do MP de 65 p.100.
les altos del diluyente AV se obtuvie- En conclusión utilizar más de 50
ron MP y EV bajos, no cumpliendo con p.100 de gel de AV es nocivo para la
los estándares para semen desconge- criopreservación de células espermá-
lado (Giles, 1993). En estas combina- ticas, ya que las motilidades son infe-
ciones AC-AV al ser mayor ß1 que ß2, riores a las requeridas para semen
nos indica que el ingrediente que ma- congelado.

BIBLIOGRAFÍA

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cionales para la criopreservación de semen Sci., 60: 481-492.

Recibido: 24-6-05. Aceptado13-7-05.

Archivos de zootecnia vol. 55, núm. 209, p. 104.