CUANTIFICACIÓN DE CIANURO DE HIDRÓGENO, COMO TÓXICO VOLÁTIL,

A PARTIR DE GLUCÓSIDOS CIANOGÉNICOS

OBJETIVO ACADÉMICO
Que el alumno determine la cantidad de cianuro de hidrógeno liberado a partir de glucósidos
cianogénicos presentes en muestras que forman parte de la dieta de humanos y animales, y
relacione la concentración con su potencial toxicológico.

PROBLEMA
Que el alumno cuantifique la concentración de cianuro de hidrógeno presente en una serie
de 2 muestras de semillas o plantas, y concluya cuál de estas muestras presentan riesgo de
toxicidad para el humano, en base a la cantidad de HCN que está presente en el consumo de
100 g de muestra.

REACTIVOS
Reactivo de Guignard * Ácido clorhídrico * (HCl)
Cianuro de potasio * (KCN) Cloroformo (CHCl3)
Carbonato de sodio (Na2CO3) Ácido pícrico
* VER APÉNDICE II

EQUIPO
Espectrofotómetro Termómetro
Estufa
MATERIAL POR EQUIPO
Tubos de ensaye 20 x150 con tapón de
3 Tijeras 1
hule
Cajas Petri 1 Pinzas 1
Mortero con pistilo 1 Navaja (traer por equipo) 1
Tiras de papel filtro cualitativo Matraz Erlenmeyer de 250 mL con
(filtración rápida) de 2 x 10 cm 3 tapón de hule 3
Pipeta volumétrica de 25 mL 1 Pipeta graduada de 1 mL 1
Probeta de 50 mL 1 Embudo de cola corta 3
 Hielo (proporcionado por
Vaso de precipitado de 100 mL 3
laboratorista)

MATERIAL PARA LA CURVA

Matraces Erlenmeyer de 250mL con tapón de hule 6
Matraces volumétricos de 25 mL 6
Pipeta graduada de 1 mL 1
Tubos de ensaye 20 x 150 con tapón de hule. 6
Papel filtro (tiras de 2 x 10 cm) 6
NOTA: El profesor proporcionará las celdas para las lecturas

MATERIAL DE ESTUDIO
Traer por equipo aproximadamente 1g de una de las siguientes semillas: durazno, manzana
roja, ciruela pasa, lima, capulín, cerezas, mamey.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Cada equipo trabajará con 2 muestras problema de semillas según la lista mencionada, una
de las cuales será proporcionada por el profesor.

NOTA: La solución patrón de cianuro de potasio, el ácido clorhídrico 0.5N y el agua

destilada deben de estar en baño de hielo antes de realizar la parte experimental.

PREPARACIÓN DE LA TIRA REACTIVA

1. Cortar 2 tiras de papel filtro de 2 x 10 cm. El equipo que prepare curva patrón de HCN
deberá preparar 6 tiras adicionales.
2. Sumergir las tiras de papel filtro en el reactivo de Guignard y escurrirlas, colocándolas
para su secado sobre una caja Petri.
3. Introducir las tiras en una estufa que se encuentre estable a una temperatura entre 50-55oC,
dejándolas aproximadamente 10 min cuidando que estén humedecidas.
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS

NOTA: Antes de comenzar a triturar y pesar su muestra deberán tener todos los reactivos
necesarios dentro del matraz, así como lista la tira reactiva, tanto para su muestra como
para la curva patrón.

A cada una de las muestras se le realizará el siguiente procedimiento:

1. Medir 25 mL de agua destilada con pipeta volumétrica y agregarlos a un matraz
Erlenmeyer de 250 mL, colocar el matraz en baño de hielo.
2. Adicionar al matraz del inciso anterior 1mL de solución de HCl 0.5N y dos gotas de
CHCl3.
3. Poner con cuidado la tira reactiva de papel en el matraz como se indica en la figura 1
4. Tapar inmediatamente cada uno de los matraces Erlenmeyer con su tapón.
5. Pesar la cantidad de cada muestra de acuerdo al siguiente cuadro y colocarla en el mortero
con la ayuda de las pinzas de disección y navaja cortarla más rápido posible.

Tabla 1. Pesos recomendados para la determinación de cianuro en semillas o

almendra
Semilla o almendra Peso en mg
Manzana 250
Durazno 200
Perón 150
Capulín y cereza 30
Mamey 200

6. Colocar rápidamente la muestra fragmentada en el matraz Erlenmeyer de 250 mL y

tapar inmediatamente.
7. Introducir simultáneamente en la estufa a 40ºC los matraces con las muestras problema y
los correspondientes de la curva estándar de HCN durante 1 hr. Agitar suavemente de
manera oscilatoria cada 15 minutos.
 TAPON DE HULE

PAPEL FILTRO
(TIRA REACTIVA)

MUESTRA

FIGURA 1. Preparación de la muestra en el matraz y colocación de la tira

reactiva.

PREPARACIÓN DE LA CURVA PATRÓN DE ÁCIDO CIANHÍDRICO

La curva patrón de HCN se prepara colocando en matraces volumétricos de 25 mL los

volúmenes de la solución patrón de KCN indicados en la siguiente tabla y llevando al aforo
con agua destilada:

Tabla 2. Curva patrón de HCN

Alícuota de la solución Concentración de HCN
patrón de KCN (mL) (g/mL)
0.0 Blanco
0.1 0.4
0.2 0.8
0.3 1.2
0.4 1.6
0.5 2

1. Colocar con cuidado la tira reactiva en el matraz como se indica en la figura 1 y agregar a
cada matraz 1 mL de la solución de HCl 0.5 N y dos gotas de CHCl3, cuidando de no
 mojar la tira. Tapar inmediatamente cada uno de los matraces Erlenmeyer con su tapón
después de concluir este procedimiento.
2. Una vez preparadas las soluciones de la curva patrón, pasarlas inmediatamente a matraces
Erlenmeyer de 250 mL, debidamente etiquetados y colocarlos en baño de hielo.
3. Introducir simultáneamente en la estufa a 40ºC los matraces con las muestras problema y
con los correspondientes de la curva estándar de HCN durante 1 h.

TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS PROBLEMA, CURVA PATRÓN Y

BLANCO
1. Transcurrido el tiempo de incubación, los matraces se sacan de la estufa y se dejan enfriar.
Decantar el contenido del matraz y colocar el residuo líquido en un contenedor etiquetado
como R1. El material vegetal se deja secar en la campana sobre papel periódico para ser
desechado posteriormente.
2. Introducir en un tubo de ensaye la tira reactiva positiva (procedente de muestra problema,
curva estándar ó blanco) adicionar al tubo 20 mL de agua destilada, tapar el tubo y agitar
vigorosamente. Filtrar la solución con papel filtro para eliminar residuos de la tira de
papel. Colocar las tiras en una bolsa de plástico etiquetada como R3.
3. Determinar la absorbancia de la muestra y de la curva patrón en el espectrofotómetro a
520 nm, utilizando como blanco el primer punto de la curva.
4. Después de haber realizado la lectura y una vez obtenido resultados, la mezcla se coloca
en un contenedor etiquetado como R2.
 CUESTIONARIO
1. Reporte en la siguiente tabla los valores de absorbancia obtenidos, e indique los valores
de la regresión lineal.

Tabla 1. Absorbancias de la curva patrón

HCN
Absorbancia
[μg/mL]
0.4
0.8
1.2
1.6
2
Pendiente (m)
Ordenada al origen (b)
Coeficiente de correlación lineal (r)

2. Interpole sus valores de absorbancia en la curva y calcule la concentración de HCN en

mg/100g de muestra, indicando el procedimiento realizado para esta determinación.
3. Reporte los resultados obtenidos en su grupo y llene la siguiente tabla:
Tabla 2. Resultados grupales
Material Concentración de mg HCN/100 g Riesgo de
Equipo
vegetal HCN (µg/mL) de muestra toxicidad*

10

* alto ≥ 10 mg/100g de muestra; bajo < 10 mg/100g de muestra

4. Indique cuáles muestras representan un riesgo potencial en caso de consumo.

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5. ¿Cómo podría eliminar la presencia de glucósidos cianogénicos de sus muestras?
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6. Proponga un método para extraer tóxicos volátiles a partir de una muestra.

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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519526.
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Eyjolfsson, R. (1970). Recent Advances in chemistry of cyanogenic glucosides. Fortschritte
der Chemie Organischer Naturstoffe 28, 74108.
Fabre, R. Y Truhaht, R. Tratado de toxicología. Vol. I. Paraninfo, S.A., Madrid, 1976, pp
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Francisco, I.A. y Pimenta-Pinotti M.H. (2000). Cyanogenic Glycosides in Plants. Brazilian
Archives of Biology and Technology 43, 487492.
Harborne, J.B. Cyanogenic glucosides and their function. En: Phytochemical ecology.
Academic Press, London, 1972, 104123.
Linder, E. Toxicología de los alimentos. Ed. Acribia, Zaragoza, 1978, pp 15-19.
Lucas, B. Sotelo, A. (1984). A simplified test for the quantitation of cianogenic glucosides
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Speijers, G.J. y Egmoad, H.P. Natural Toxins III. Inherent Plant Toxins. En: International
Food Safety Handbook: Science, International Regulation, and Control. Younes, M.,
Fishbein, L., Miller, S., (Eds.). Marcel Dekker, Inc, New York, 1999, pp 368380.
Vetter, J. (2000). Plant cyanogenic glycosides. Toxicon 38, 1136.
 APÉNDICE I: CONOCIMIENTOS PREVIOS

1. Estructura de un glucósido cianogénico.

2. Hidrólisis enzimática de un glucósido cianogénico.
3. Importancia toxicológica de los glucósidos cianogénicos.
4. Reacción de Guignard para la detección de HCN.
5. Importancia que tiene durante la práctica que la trituración de la muestra se realice
rápidamente y sea colocada en baño de hielo.
6. Razón por la cual la tira reactiva no debe tocar la solución en que se encuentra la muestra.
7. Razón por la cual se da una reacción positiva sin que la tira reactiva esté en contacto con
la muestra.
8. Razón por la cual es necesario colocar las soluciones de cianuro de potasio y el HCl 0.5N
empleadas en la preparación de la curva patrón en baño de hielo.
9. Propósito de agregar HCl y CHCl3 a la muestra y a la curva patrón.
10. Propósito de calentar la muestra a 40C en la estufa.
 APÉNDICE II: PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

Reactivo de Guignard
Colocar 2.5 g de ácido pícrico en un matraz Erlenmeyer de 250mL y disolver con 200mL de
agua destilada. Enseguida agregar 12.5 g de carbonato de sodio (Na2CO3) y agitar
cuidadosamente para disolverlo. Llevar la solución a un volumen de 500 mL con agua
destilada.
NOTA: Manejar con cuidado el ácido pícrico, ya que esta sustancia es cancerígena y se
absorbe fácilmente por la piel.

Solución patrón de cianuro de potasio.(KCN)

Se pesa exactamente 12.05 mg de KCN transferir la pesada cuidadosamente a un matraz
aforado de 50mL, disolver y aforar con agua destilada.
NOTA: A pesar de que la concentración utilizada de KCN en este guión es de
aproximadamente 0.24 mg/mL y esta concentración está por debajo de la DL50 en ratones,
no deberá descuidar las medidas de seguridad para su trabajo.

Solución Ácido clorhídrico 0.5 N. (HCl)

Medir 42.5 mL de HCl concentrado (densidad: 36.46g/100mL) y vaciar a un matraz
volumétrico de 1000 mL que contiene aproximadamente 500mL de agua destilada, aforar
enseguida con agua destilada.

APÉNDICE III: DISPOSICIÓN DE RESIDUOS

R1: Solución acuosa de HCl (0.5 N), KCl, KCN.

R2: Solución de ácido pícrico, Na2CO3, restos de isopurpurina.
R3: Tiras de papel filtro impregnadas con ácido pícrico.