LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA

“Universidad Nacional del

Callao”

INFORME Nº 04
TEMA:
IDENTIFICACION DE ESCHERICHIA COLI

DOCENTE:
Ing. Herrera Sánchez Sonia
ALUMNOS:
 Jacinto Bazan Peter
 García Sarmiento Oscar
 Quiroz Burgos Melissa
 Sáenz Rosales Liz
 Vértiz Del Aguila Carolina

[Escriba aquí]
06 de Mayo de 2015, Bellavista - Callao
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Facultad de ingeniería química

ÍNDICE

Introducción……………………………………………………………………………………..3

Objetivos…………………………………………………………………………………..........4

Fundamento teórico………………………………………………………………………….5

 Los hongos…………………………………………………………………………….5
 Utilización alimentaria y farmacéutica………………………………….5
 Morfologías…………………………………………………………………………..5
 Habitad…………………………………………………………………………………6
 Alimentación…………………………………………………………………………6
 Reproducción………………………………………………………………………..6
 Variación ambiental………………………………………………………………7

Materiales y Reactivos………………………………………………………………………8

Procedimiento experimental…………………………………………………………….9

 Preparación de la solución salina…………………………………………..9

 Preparación del agar……………………………………………………………..9
 Preparación de la muestra…………………………………………………….9
 Proceso de lectura…………………………………………………………………11

Conclusiones…………………………………………………………………………………….13

Recomendaciones…………………………………………………………………………….13

Bibliografía……………………………………………………………………………………….14

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I. INTRODUCCIÓN

La familia Enterobacteriaceae está formada por más de 20 géneros bacterianos,

aproximadamente 120 especies y miles de serotipos (combinación del antígeno
somático y el flagelar). Las bacterias de esta familia, son anaerobias facultativas. La
mayor parte son de vida libre, algunas son comensales de animales vertebrados e
invertebrados. Sin embargo, también pueden ser patógenos causantes de enfermedad.

Escherichia coli es la especie bacteriana más común de la microbiota intestinal; se

presenta como un comensal del intestino humano pocas horas después del
nacimiento. Es raro encontrar cepas comensales asociadas a enfermedad. Empero,
existen varios patotipos de E. coli implicados en un amplio espectro de enfermedades
agrupados en tres síndromes clínicos. (Iguchi et al., 2009).

Escherichia coli y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del
proceso digestivo, además de ser responsables de producir vitaminas B y K. El tamaño
promedio de los bacilos es de 0.5 µ de ancho por 3 µ de largo, cuando se utiliza la
tinción de Gram se tiñen de rojo (gramnegativas). Algunas especies son móviles (por
flagelos perítricos), no esporuladas, fermenta la glucosa y la lactosa son catalasa
positivos, oxidasa negativos y reduce nitratos a nitritos. El género Escherichiaincluye
siete especies (E. adecarboxylata, E. alberti, E. blattae, E. fergusonii, E. hermannii, E.
vulneris y E. coli).

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II. OBJETIVOS

 Realizar adecuadamente mediante el método de cuenta en placa, el número de

Escherichia coli viables presentes en productos alimenticios destinados al
consumo humano.

 Evaluar la calidad microbiológica de un alimento, que sea factible de estar

contaminado con estos microorganismos

 Comprender el fundamento de todas las etapas del método de detección y

cuantificación de Escherichia coli en alimentos.

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III. MARCO TEÓRICO

ESCHERICHIA COLI

La Escherichia coli (E. coli) es una bacteria común que se encuentra en los intestinos de
los animales y las personas. Existen muchas cepas de E. coli, y la mayoría resultan
inofensivas, sin embargo, existe una variedad peligrosa, la E. coliO157:H7, que produce
una poderosa toxina (Shiga) que puede originar graves enfermedades, como el
Síndrome Urémico Hemolítico, que puede desencadenar un fallo renal.

CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA
 Reino: Bacteria
 Filo: Proteobacteria

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 Clase: Gammaproteobacteria
 Orden: Enterobacteria
 Género: Escherichia
 Especie: E. Coli ( E. freundi)

 Nombre binomial : Escherichia Coli

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES

 Bacilo Gram negativo
 No forma esporas
 Móviles (flagelos perítricos)
 Miden 0.5 𝜇 de ancho y 3 𝜇 de largo.
 Catalasa positivos
 Oxidasa negativos
 Reducen nitratos a nitritos
 Producen vitamina B y K.

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES

- No exigente
- Fermenta glucosa y lactosa con producción de gas.
- Es anaerobio facultativo.

ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
- Atígeno capsular (Antígeno “K”)
- Antígeno somático ( Antígeno “O”)
- Antígeno flagelar (Antígno “H”)
- Antígenos menores como proteínas de membrana externa y fimbrias.

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ESCHERICHIA COLI- PATÓGENO ENTÉRICO

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ESCHERICHIA COLI Y LA ENFERMEDAD DIARREICA

La diarrea aguda es una enfermedad intestinal generalmente infecciosa y autolimitada,

se caracteriza por presentar evacuaciones líquidas o de consistencia disminuida, en
número mayor a tres en 24 horas y con evolución menor de dos semanas. Diarrea
persistente se define como el paso de evacuaciones semilíquidas por más de dos
semanas, en tanto que la diarrea crónica se establece a las cuatro semanas.

La enfermedad diarreica grave (EDA), es uno de los problemas de salud pública de

mayor importancia en el mundo. De acuerdo con estudios efectuados por la
Organización Mundial de la Salud (OMS) y el fondo de las naciones unidas para la
infancia (UNICEF), las EDA son un problema de salud de la población infantil,
principalmente en los países en desarrollo donde se producen anualmente entre 5 a 6
millones de muertes, constituyendo la segunda causa global de mortalidad infantil.

E. coli es responsable de aproximadamente 630 millones de casos de diarrea en el

mundo y entre 5 a 6 millones de muertes al año, afectando principalmente a la
población infantil de países en desarrollo. Además se ha reportado su participación en
cerca del 50% de las UTI intrahospitalarias y en el 90% de las infecciones de este tipo
en pacientes ambulatorios.

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DIAGNÓSTICO
- Coprocultivos (Medios de cultivos generales o selectivos).

Medio Nutritivo, Mueller Hinton o EMB.

- Pruebas bioquímicas
- Tipificación serológica
- Técnicas de recombinación genética
- Técnica de reacción en cadena de la polimerasa.

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IV. MATERIALES Y REACTIVOS

Placa Petri Agua destilada

Probeta Mechero

Cuenta colonias Termómetro

Incubadora Balanza analítica

Muestra(leche asada) y solución salina Medio de cultivo (Agar sabouraud

glucosado)

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN SALINA

Preparar en un recipiente usando sal común o de mesa la solución al 0.8% en

porcentaje en peso.
2. PREPARACIÓN DEL AGAR

Para la preparación del medio, utilizaremos el agar sabouraud glucosado. A asta

solución se calienta en baño maría hasta que alcance una temperatura adecuada entre
45°C a 60°C

3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Recogemos 10 ml o 10 gr de muestra problema, en nuestro caso escogimos leche asad

De la solución salina antes preparada recogemos con una pipeta 90ml de esta solución,
puesto que la relación de concentración de la muestra debe ser de 0.1 y/o de 0.01

Ahora tendremos que mezclar los 90 ml de la solución con los 10gr de la muestra
problema. Una vez realizado disolver hasta donde más se pueda; en caso de quedar
partículas sólidas solo trabajar con la solución.

Separamos el medio en un matraz aproximadamente 20ml del agar y lo mantenemos

entre la temperatura de 40ºC como mínimo para producir grumos de esta y 60ºC como
máximo para no quemar los microorganismo que estén ahí presente

Sacamos 1 ml de toda esta muestra y la colocamos en la placa de vidrio ya esterilizada

con 15 o 20 ml de solución del medio, hasta homogeneizar

Dejar cerca de un mechero y tapar la placa, antes de guárdalo en la incubadora volver

a cambiar de tapa y darle vuelta

Ponemos la placa en la incubadora y esperamos

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4. PROCESO DE LECTURA
Después de dos días aproximadamente retirar la placa de la incubadora y llevarla al
dispositivo para poder leerlo con una fuerte luz.
Cada punto observado en la placa en un moho que se puede contabilizar dentro de la
muestra

De esto obtenemos 1 punto contable que como la concentración estaba en 0.01;

entonces la cantidad de microorganismos presente es de 1x102

RESULTADOS
COLOR UFC (unidades formadoras NUMERO DE HONGOS
de colonias) (UFC/g)
transparente 1 (uno) 102

FECHA DE MUESTREO 24 de abril del 2015

TIEMPO DE INCUBACION 48 horas

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VI. CONCLUSIONES

 Se evaluó la calidad microbiológica de la leche asada, y se obtuvo que se

encontraba en el rango permisible (m=10 y M=100; NTS N° 071); por lo que
las UFC (unidades formadoras de colonia) fue solamente una.

 El color de la colonia formada estuvo de un color claro por lo que se podría

concluir que lo que se formo fue levadura y no moho. Ya que los mohos
poseen colores más oscuros que este.

 De acuerdo a la UFC encontrada, el alimento analizado estaba en óptimas

condiciones para su consumo.

VII. RECOMENDACIONES

 Al trabajar con el agar este debe estar totalmente disuelto ya que al poseer
grumos puede afectar los resultados.

 Al momento del sembrado tener presente que el agar debe estar a una
temperatura de 40 a 55 °C porque de lo contrario se afectaría al
microorganismo que se está tratando de identificar.

 Mantenga solo el material requerido sobre la mesa de trabajo, los frascos

de reactivos deben permanecer en el estante de madera.

 Se debe trabajar en completo orden, para así evitar accidentes en el

laboratorio.

 Tomar en cuenta las recomendaciones del profesor, las medidas que se

deben de usar de los reactivos o tomar en cuenta lo que está en la guía de
laboratorio.

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VIII. REFERENCIAS

 Frazier W. & Westhoff D. (1994) Microbiología de los Alimentos. 4ª ed. Acribia,

España.

 Pierson M. & Smoot L. (2001) Indicator Microorganisms and Microbiological

Criteria. In: Food Microbiology. Fundamentals and Frontiers. 2nd ed. Doyle M.
Beuchat L. & Montville T. (Eds.) ASM Press. USA.

 http://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/escherichia-coli-i.pdf

 http://www.bvsops.org.uy/pdf/coli.pdf

 http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/escherichia-
coli.html

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